BỘ YTẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI vũ THỊ HỒNG HẠNH NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ VÀ Cơ CHÉ GIẢI PHÓNG DƯỢC CHẤT TỪ VI CẦU LEUPROLID ACETAT ĐÔNG KHÔ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC sĩ• • • HÀ NỘI 2022 BỘ YTẾ TRƯỜNG ĐẠI[.]
BỘ YTẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI vũ THỊ HỒNG HẠNH NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ VÀ Cơ CHÉ GIẢI PHĨNG DƯỢC CHẤT TỪ VI CẦU LEUPROLID ACETAT ĐƠNG KHƠ KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC sĩ • • • HÀ NỘI - 2022 BỘ YTẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI vũ THỊ HỒNG HẠNH Mã sinh viên: 1701174 NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ VÀ Cơ CHÉ GIẢI PHÓNG DƯỢC CHẤT TỪ VI CẦU LEUPROLID ACETAT ĐƠNG KHƠ KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC sĩ Người hướng dẫn: PGS.TS Trần Thị Hải Yến ThS Bùi Thị Thương Nơi thực hiện: Bộ môn Bào Chế HÀ NỘI - 2022 LỜI CẢM ƠN Đầu tiên, em xin gửi lời cảm ơn chân thành bày tỏ lịng kính trọng đến: PGS.TS Trần Thị Hải Yến Là người tận tâm dẫn, hết lòng giúp đỡ, quan tâm tạo điều kiện cho em thực khóa luận Em xin bày tỏ lòng biết ơn đến ThS Bùi Thị Thu’O’ng - người quan tâm hỗ trợ em trình làm đề tài Em xin gửi lời cảm ơn đến tồn thể thầy cơ, anh chị kĩ thuật viên môn Bào chế, mơn Hóa phân tích, mơn Cơng nghiệp Dược, mơn Vật lý Hóa lý nhiệt tình giúp đỡ, hướng dẫn em suốt thời gian thực khóa luận Em xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến thầy cô Ban Giám hiệu nhà trường, phòng ban cán nhân viên trường Đại học Dược Hà Nội, người tạo điều kiện cho em học tập tiếp thu kiến thức suổt năm qua Cuối cùng, em cảm ơn gia đình - nguồn động lực to lớn để em cố gắng học tập nghiên cứu Em xin chân thành cảm ơn bạn bè, tập thể sinh viên đà đồng hành, động viên em suốt q trình thực khóa luận Hà Nội, ngày 27 tháng năm 2022 Sinh viên khóa 72 Vũ Thị Hồng Hạnh MỤC LỤC DANH MỤC KÍ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẲT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, sơ ĐỊ, ĐỊ THỊ ĐẬT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỐNG QUAN 1.1 Tổng quan Leuprolid acetat 1.1.1 Công thức hóa học 1.1.2 Tính chất vật lý, hóa học 1.1.3 ứng dụng điều trị 1.2 Tổng quan vi cầu PLGA 1.2.1 VicầuPGLA-LA 1.2.2 Phương pháp bào chế vi cầu PLGA nhũ hóa kép kết hợp bốc dung môi 1.2.3 Tổng quan đông khô vi cầu PLGA 1.2.4 Tổng quan chế giải phóng dược chất từ vi cầu PGLA 1.2.5 Một số yếu tố ảnh hưởng đến khả giải phóng dược chat in vitro 1.2.6 Đánh giá chê giải phóng dược chât in-vitro từ vi câu giải phóng kéo dài điều kiện cấp tốc 11 CHƯƠNG NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CÚƯ .13 2.1 Nguyên vật liệu, thiết bị sử dụng 13 2.1.1 Nguyên vật liệu 13 2.1.2 Thiết bị 13 2.2 Nội dung nghiên cứu 14 2.2.1 Bào chế vi cầu PLGA - LA phương pháp nhũ hóa kép kết họp bốc dung môi 14 2.2.2 Khảo sát số yếu tố công thức ảnh hưởng đến đặc tính vi cầu PLGA - LA đông khô 14 2.2.3 Nghiên cứu chế giải phóng dược chất từ vi cầu PLGA - LA 14 2.3 Phương pháp nghiên cứu 14 2.3.1 Phương pháp bào chế vi cầu PLGA-LA 14 2.3.2 Phương pháp đánh giá số đặc tính vi cầu đơng khơ PLGA-LA 17 2.3.3 Phương pháp đánh giá giải phóng dược chất in vitro điều kiện dài hạn 18 2.3.4 Phương pháp đánh giá giải phóng dược chất in vitro điều kiện cấp tốc 20 2.3.5 Phương pháp xử lý số liệu 21 CHƯƠNG THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 22 3.1 Khảo sát ảnh hưởng tá dược đông khô đến vi cầu PLGA - LA đông khô 22 3.1.1 Điều kiện thơng số quy trình đông khô 22 3.1.2 Ảnh hưởng tá dược đông khô đến vi cầu đông khô PLGA-LA 22 3.1.3 Ành hưởng nồng độ D- manitol vi cầu đông khô PLGA- LA 23 3.2 Khảo sát ảnh hưởng loại polyme PLGA đến khả giải phóng dược chất tù’ vi cầu PLGA - LA 24 3.2.1 Kết giải phóng in vitro cùa vi cầu PLGA - LA điều kiện dài hạn 24 3.2.2 Kết giải phóng in vitro vi cầu PLGA - LA điều kiện cấp tốc 28 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 42 TÃI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC Tên viết tắt DANH MỤC KÍ HIỆU VÀ CHỮ VIÉT TẮT rwi A._ -» X_ Ten đay đu DCM Dicloromethan DĐVN Dược điển Việt Nam DMSO Dimethyl sulfoxyd EE% Hiệu suất vi cầu hóa % Entrapment Efficiency % EMA Cơ quan y tế Châu Âu EP Dược điển Châu Âu FSH Hormon kích thích nang trứng phát triển (Follicle-stimulating hormone) GnRH Hormon giải phóng gonadotropin Gonadotropin releasing hormon HPLC Sắc ký lỏng hiệu cao (High-performance liquid chromatography) kl/kl Khối lượng/khối lượng kl/tt Khối lượng/thể tích KLPT Khối lượng phân tử KTTP Kích thước tiểu phân LA Leuprolid acetat LCit% Hàm lượng phần trăm dược chất vi cầu lý thuyết LCtt% LH Hàm lượng phần trăm dược chất vi cầu thực tế Hormon làm noàn trưởng thành (Luteinizing hormone) N/D Nước/Dầu N/D/N Nước/Dầu/Nước NSX Nhà sản xuất PBS Đệm salin phosphat Phosphate buffer salỉn PGA Acid polyglycolic PLA Acid polylactic PLGA Poly acid lactic-co-glycolic PLGA-LA Vi cầu PLGA chứa dược chất leuprolid acetat PVA Alcol polyvinylic SEM Kính hiển vi điện tử quét (Scanning Electron Microscope) TKHH Tinh khiết hóa học tt/tt Thể tích/thể tích DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1 Nguyên vật liệu sử dụng nghiên cứu 13 Bảng 2.2 Trang thiết bị sử dụng nghiên cứu 13 Bảng 2.3 Công thức bào chế vi cầu PLGA - GA 15 Bảng 3.1 Ảnh hưởng tá dược đông khô đến vi cầu đông khô PLGA - LA 22 Bảng 3.2 Thành phần PLGA công thức bào chế vi cầu 24 Bảng 3.3 Thành phần PLGA công thức bào chế vi cầu 28 Bảng 3.4 Thành phần PLGA công thức bào chế vi cầu 34 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, so ĐỊ, ĐỊ THỊ Hình 1.1 Cơng thức phân tử Leuprolid acetat Hình 1.2 Phương pháp nhũ hóa kép kết họp bốc dung môi Hình 1.3 Cơ chế giải phóng thuốc vi cầu PLGA Hình 1.4 Dược chất khuếch tán qua hệ thống lỗ xốp Hình 1.5 Polyme bị hịa tan mơi trường thử giải phóng Hình 1.6 Polyme bị ăn mịn Hình 1.7 Các yếu tố ảnh hưởng đến khả giải phóng dược chất từ vi cầu Hình 1.8 Các yếu tố ảnh hưởng đến khả giải phóng dược chấtcủa polyme 10 Hình 1.9 Ảnh hưởng tỷ lệ acid lactic/acid glycolic đến độ tan polyme 10 Hình 2.1 Sơ đồ bào chế vi cầu PLGA - LA đông khô 16 Hình 3.1 Ảnh hưởng nồng độ D-manitol tới KTTP vi cầu PLGA-LA 23 Hình 3.2 Đồ thị giải phóng điều kiện dài hạn mẫu M5 M7 24 Hình 3.3 Hình ảnh chụp SEM mẫu vi cầu M5 M7 phóng to 10 000 lần thời điểm lấy mẫu thử giải phóng điều kiện dài hạn 27 Hình 3.4 Ảnh hưởng tỷ lệ polyme đến KTTP hàm lượng dược chất 29 Hình 3.5 Đồ thị giải phóng dược chất mẫu M4, M5 M6 29 Hình 3.6 Hình ảnh chụp SEM mẫu vi cầu M4 M5 phóng to 3000 lần thời điểm lấy mẫu thử giải phóng điều kiện cấp tốc 31 Hình 3.7 Hình ảnh chụp SEM mẫu vi cầu M4 M5 phóng to 10000 thời điểm lấy mẫu thử giải phóng điều kiện cấp tốc 32 Hình 3.8 Anh hưởng phối hợp polyme đến KTTP hàm lượng dược chất 34 Hình 3.9 Đồ thị giải phóng dược chất mẫu M7, M8 M9 35 Hình 3.10 Hình ảnh chụp SEM mẫu vi cầu M8 phóng to 3000 lần 10000 lần thời điểm lấy mẫu thử giải phóng điều kiện cấp tốc 37 Hình 3.11 Cơ chế giải phóng dược chất qua hệ thống kênh, lỗ xốp 37 Hình 3.12 Hình ảnh chụp SEM mẫu vi cầu M9 phóng to 3000 lằn 10000 lần thời điểm lấy mẫu thử giải phóng điều kiện cấp tốc 39 Hình 3.13 Sự thủy phân polyme PLGA mơi trường thử giải phóng 40 Hình 3.14 Hình ảnh chụp SEM mặt cắt ngang mẫu M9 sau 4h thử giải phóng 41 ĐẶT VÁN ĐỀ Leuprolid nonapeptid tổng họp có tác dụng tương tự với hormon giải phóng gonadotropin (GnRH) có tự nhiên, sử dụng để điều trị rối loạn liên quan đến hormon giới tính bao gồm: ung thư tuyến tiền liệt, lạc nội mạc tử cung, u xơ tử cung dậy sớm phụ thuộc hormon [27], [51].Thòi gian bán thải LA ngắn nên dạng thuốc tiêm giải phóng cần sử dụng hàng ngày Trong đó, thời gian điều trị bệnh liên quan đến hormon thường kéo dài từ vài tháng đến vài năm Điều dẫn đến bất tiện cho bệnh nhân làm giảm hiệu trình điều trị Vì vậy, bào chế dạng thuốc tiêm giải phóng kéo dài chứa LA nạp vi cầu polyme phân hủy sinh học (PLGA) vô cần thiết để đảm bảo tuân thủ điều trị bệnh nhân Tuy nhiên, việc sản xuất vi cầu thường gặp nhiều khó khăn phức tạp quy trình bào chế Đánh giá khả giải phóng từ vi cầu giải phóng kéo dài đóng vai trị quan trọng nghiên cứu phát triển cơng thức thuốc Trong nghiên cứu trước môn Bào chế trường Đại học Dược Hà Nội vi cầu PLGA-LA, vi cầu PLGA chứa leuprolid acetat bào chế có hiệu suất vi cầu hóa 50% bước đầu đánh giá đặc tính giải phóng kéo dài vi cầu PLGA-LA [1], [2] Tuy nhiên, nghiên cứu chưa đánh giá ảnh hưởng yếu tố thuộc công thức bào chế đến khả chế giải phóng dược chất từ vi cầu Vì vậy, chúng tơi tiến hành đề tài “Nghiên cứu bào chế CO’ chế giải phóng dưọc chất từ vi cầu leuprolid acetat đông khô” với mục tiêu sau: Khảo sát số yếu tố cơng thức ảnh hưởng đến đặc tính vi cầu PLGA - LA đông khô Nghiên cứu chế giải phóng dược chất từ vi cầu PLGA - LA đơng khơ CHƯƠNG TƠNG QUAN Tổng quan Leuprolid acetat 1.1 1.1.1 Cơng thức hóa học Hình 1.1 Công thức phân tử Leuprolid acetat - Công thức phân tử: C59H84N16O12.C2H4O2 - Khối lượng phân tử: 1269,45 g/mol - Danh pháp IUPAC: 5-oxo-L-prolyl-L-histidyl-L-tryptophyl-L-seryl-L-tyrosyl-D- leucyl-L-leucyl-L-arginyl-N-ethyl-L-prolinamid acetat Công thức viết tắt: pGlu*-His2-Trp3-Ser4-Tyr5-Leu6-Leu7-Arg8-Pro9- NHEt.CH3COOH - Tên chung quốc tế: leuprolid acetat 1.1.2 Tính chất vật lý, hóa học 1.1.2.1 Tính chất vật lý - Cảm quan: dạng bột kết tinh màu trắng đến vàng, dễ hút ẩm [38] - Độ tan: tan tốt nước acid acetic, DMSO (ở 25°c độ tan lOOmg/mL), tan tự methanol, tan ethanol 1.1.2.2 - Tính chất hóa học Độ pH dung dịch chứa 0,10 g muối leuprolid acetat 10 ml nước có pH nằm khoảng từ 5,5 đến 7,5 - Leuprolid acetat dễ dàng bị thủy phân môi trường kiềm mạnh acid mạnh [51] 1.1.3 ứng dụng điều trị 1.1.3.1 Tác dụng dược lý Leuprolid định nghĩa chất chủ vận có hiệu lực lớn hormone tự nhiên GnRH, có khả ức chế tiết gonadotropin dùng liên tục với liều điều trị Nguyên nhân LA có cấu trúc tương tự chất chủ vận LH-RH nên lực mạnh mẽ với thụ thể tuyến yên Đồng thời, cấu trúc LA có axit amin D, a) Giai đoạn I: tốc độ giải phóng ban đầu cao, mật độ lỗ xốp bề mặt tăng lên; b) Giai đoạn II: tốc độ giải phóng tiếp tục tăng dần tăng hệ số khuếch tán peptid mạng lưới nước, lượng dược chất tiếp xúc với lỗ xốp khuếch tán từ lỗ xốp bên vi cầu nhiều hơn; c) Giai đoạn III: độ xốp bề mặt giảm đi, tốc độ giải phóng giảm dần tiến gần đến Cấu trúc kiểu "skin" hình thành mật độ tăng dần bề mặt vi cầu khiến giai đoạn burst release dừng lại Đối với giai đoạn giải phóng ạt mẫu M8, nhận thấy giả định phù hợp Từ giả thuyết trên, Wang cộng đồng thời giải thích nguyên nhân pha lag giai đoạn sau cấu trúc “skin”, pha lag sè kết thúc vi cầu có tượng nứt vờ [491 Cách giải thích tương thích với kết nghiên cứu trước đó, pha lag dừng lại polyme bắt đầu bị xói mịn khối lượng phân tử polyme giảm xuống giá trị tới hạn (khoảng 20 kDa) [41] Ờ độ phóng đại 3000, thời điểm 7h thấy mẫu bắt đầu hình thành mảng kết tụ - tình trạng tương tự gặp mẵu M4 M5 gây pha lag trình bày Đến thời điểm 24h, mẫu bắt đầu có tượng vỡ thành mảnh nhỏ, polyme bị ăn mòn tồn giúp dược chất giải phóng ạt thời điểm sau [52] Như qua phân tích chế giải phóng mẫu M4, M5 M8 nhờ hình ảnh chụp SEM, thấy mẫu gặp tình trạng xuất pha lag Đây tượng cần khắc phục để trình giải phóng diễn liên tục IOP 1.0kV 9.2mm x3.00k SE(UL) 06/23/2022 IOP 1.0kV 9.2mm xlO.Ok SE(UL) 06/23/2022 10.0pm 38 ' 's.OOpm' lh Ih 4h I 4h 7h 7h Hình 3.12 Hình ảnh chụp SEM mẫu vi cầu M9 phóng to 3000 lần 10000 lần thòi điếm lấy mẫu thử giải phóng điều kiện cắp tốc Ờ mẫu M9 sử dụng 100% polyme PLGA (75:25) 4-15 kDA, nhận thấy vi cầu thời điểm ban đầu đà khắc phục nhược điểm mẫu trước đó: vi cầu có hệ thống lỗ xốp phân bố khắp bề mặt, độ phóng đại 10000 lần cịn thấy rải rác lỗ xốp lòng vi cầu Ochi cộng báo cáo kết tương tự vi cầu 39 nạp leuprolid acetat cho thấy loại polyme ảnh hưởng đến cấu trúc bề mặt vi cầu, cụ thể sử dụng polyme 75:25, độ xốp vi cầu tăng dần sử dụng tăng dần lượng polyme PTL thấp [36] Theo nghiên cứu Wang cộng sự, dùng lượng lớn PLGA KLPT thấp dẫn đến tính ưa nước vi cầu cao hơn, nước thấm vào làm cho polyme bị nứt bắt đầu tạo lỗ rỗng ngoại vi lõi [50] Các lỗ kết nối với tạo thành kênh dẫn bề mặt bên ngồi [18] Sau Ih thử giải phóng, mẫu vi cầu có mật độ lỗ xốp dày đặc lên, dược chất theo khuếch tán ngồi Theo Gu cộng sự, hình thành lổ xốp lõi lỗ xốp ngoại vi có nghĩa q trình tự xúc tác cho phân hủy PLGA xảy trung tâm hạt xung quanh hạt [17] Hiện tượng tự xúc tác biết nguyên nhân suy thối khơng đồng bên cốt PLGA, tức suy giảm nhanh trung tâm cốt PLGA so với bề mặt [28] H H HO H PLGA D,L-lactic acid Glycolic acid Hình 3.13 Sự thủy phân polyme PLGA mơi trưịng thử giải phóng Đen thời điểm 4h, quan sát độ phóng đại 10000 lần thấy vi cầu bị ăn mịn rõ rệt Do suy thối PLGA KLPT thấp tạo oligomer có tính axit, điều làm tăng tốc độ ăn mòn vi cầu [50] Các oligomer tác động đến chế giải phóng dược chất theo số cách: (i) Chúng có tính acid, dần tích tụ lại, làm giảm pH mơi trường, xúc tác q trình thủy phân polyme (ii) Chúng làm dẻo polyme, làm tăng tốc độ hấp thụ nước giảm khả chống vận chuyên polyme (iii) Chúng làm tăng áp suất tham thấu bên cốt polyme, tăng hấp thụ nước Hình 3.14 chụp SEM mặt cắt mẫu vi cầu M9 sau 4h thử giải phóng cho thấy lỗ xốp hình thành lịng vi cầu tạo hệ thống kênh đưa dược chất ngồi Có thể thấy kích thước lỗ xốp lịng vi cầu lớn hẳn so với ngoại vi Điều Wang cộng giải thích sản phấm thủy phân có tính axid tích tụ lõi ăn mòn cốt polyme làm tăng kích thước mật độ lỗ xốp lịng vi cầu Trái lại, sản phẩm nằm lỗ xốp ngoại vi khơng gây ảnh hưởng đến kích thước lỗ xốp chúng nhanh chóng khuếch tán ngồi mơi trường [50] 40 iop 1.0kV 9.2mm x1O.dk SE(UL) 06/23/2022 5.00pm Hình 3.14 Hình ảnh chụp SEM mặt cắt ngang mẫu M9 sau 4h thử giải phóng Sau 7h thử giải phóng, vi cầu khơng cịn giữ hình dạng cầu mà đà vỡ thành mảnh lớn, dược chất theo giải phóng với tốc độ ốn định Khác với mẫu trước đó, đến thời điểm 7h, độ phóng đại 3000 thấy vi cầu khơng bị kết tụ Đồ thị giải phóng cho thấy mẫu M9 giải phóng liên tục theo mơ hình hai pha, không xuất pha lag Luan cộng thêm số thành phần vào công thức bào chế, làm tăng mật độ độ xốp bề mặt bên vi cầu thời điểm ban đầu, dẫn đến pha lag biến [31] Kết nghiên cứu phù hợp với mẫu vi cầu M9 Thời điểm sau 30h thử giải phóng, polyme bị ăn mịn tồn bộ, hồn tồn khơng cịn thấy hình dạng vi cầu Theo mô tả Gu cộng sự, chuỗi PLGA bị đứt thủy phân để làm giảm “cồng kềnh” đại phân tử khiến vi hạt phồng lên, kết thể tích polyme sè tăng lên mức độ [17] Các chuỗi PLGA bị thủy phân đạt đến trọng lượng phân tử tới hạn, không đủ để cản trở trương nở vi cầu, áp suất thẩm thấu tăng dẫn đến giải phóng tồn lượng thuốc lại 41 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN Đề tài đà đạt số kết sau: Đã khảo sát ảnh hưởng yếu tố công thức đến vi cầu PLGA - LA đông khô - Vi cầu sau bào chế phương pháp nhũ hóa kép kết họp bốc dung môi, phối hợp tá dược tạo khung dung dịch D-manitol nồng độ 1,25% (kl/tt),được tiến hành đông khô với thông số: tiền đông -70 °C giờ, sau đơng khơ -50 °C 24 giờ, áp suất 0,04 mmbar - Loại polyme PLGA có ảnh hưởng đến khả giải phóng dược chất từ vi cầu: J Với vi cầu PLGA - LA sử dụng phần lớn polyme PLGA (50:50), dược chất giải phóng theo mơ hình giải phóng pha: pha giải phóng ạt ban đầu (burst release) - pha giải phóng ổn định trì hỗn giải phóng (pha lag) - pha giải phóng nhanh J Với vi cầu PLGA - LA sử dụng phần lớn polyme PLGA (75:25), dược chất giải phóng theo mơ hình giải phóng pha: pha giải phóng ạt ban đầu (burst release) - pha giải phóng ổn định Đã đánh giá chế giải phóng dược chất - Với mồ hình giải phóng pha: J Pha giải phóng ạt ban đầu giải phóng chủ yếu nhờ chế khuếch tán qua hệ thống kênh, lỗ xốp J Pha lag tượng vi cầu bị kết tụ thành đám, đồng thời độ xốp vi cầu giảm dần theo thời gian J Pha giải phóng nhanh vi cầu nứt vỡ thành mảng nhỏ, polyme bị ăn mịn tồn gây giải phóng lượng dược chất cịn lại - Với mồ hình giải phóng pha: J Pha giải phóng ạt ban đầu giải phóng chủ yếu nhờ chế khuếch tán qua hệ thống kênh, lỗ xốp J Pha giải phóng ổn định vi cầu bị vỡ thành mảnh lớn, polyme bị ăn mòn gây giải phóng dược chất với tốc độ ốn định KIẾN NGHỊ - Do điều kiện nghiên cứu có hạn, nhóm kiến nghị tiếp tục nghiên cứu chuấn hóa quy trình bào chế để mẫu vi cầu giải phóng cấp tốc đạt tiêu chuẩn vi cầu đối chiếu 42 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu Tiếng Việt Nguyễn Thị Phương Liên (2021), Nghiên cứu đánh giả khả giải phóng kéo dài in vitro vi cầu ỉeuprolid acetat, Khóa luận tốt nghiệp dược sĩ, Trường Đại • học • Dược • Hà Nội • Nguyên Thị Ngọc Minh (2021), Tiêp tục nghiên cứu bào chê đảnh giá vi câu leuprolid acetat giải phóng kéo dài, Khóa luận tốt nghiệp dược sĩ, Trường Đại học • Dược • Hà Nội • Mai Văn Tân (2021), Hồn thiện quy trình bào chế vi cầu leuprolỉd acetat đơng khơ, Khóa luận tốt nghiệp dược sì, Trường Đại học Dược Hà Nội Tài liệu Tiếng Việt Alexis F., Venkatraman s s., Rath s K., et al (2004), "In vitro study of release mechanisms of paclitaxel and rapamycin from drug-incorporated biodegradable stent matrices", Journal of controlled release, 98(1), pp 67-74 Ansary R H., Awang M B., Rahman M M (2014), "Biodegradable poly (D, Llactic-co-glycolic acid)-based micro/nanoparticles for sustained release of protein drugs-A review", Tropical Journal of Pharmaceutical Research, 13(7), pp 1179-1190 Avgoustakis K (2005), "Polylactic-co-glycolic acid (PLGA)", Encyclopedia of biomaterials biomedical engineering, 1(1), pp 1-11 Azimi B., Nourpanah p., Rabiee M., et al (2014), "Poly (lactide-co-glycolide) fiber: An overview", Journal of Engineered Fibers Fabrics, 9(1), p 155892501400900107 Blasi p (2019), "Poly (lactic acid)/poly (lactic-co-glycolic acid)-based microparticles: An overview", Journal of Pharmaceutical Investigation, 49(4), pp 337-346 Busatto c., Pesoa J., Helbling I., et al (2018), "Effect of particle size, polydispersity and polymer degradation on progesterone release from PLGA microparticles: Experimental and mathematical modeling", International journal ofpharmaceutics, 536(1), pp 360-369 10 Cho s w., Song s H., Choi Y w J a o p R (2000), "Effects of solvent selection and fabrication method on the characteristics of biodegradable poly (lactide-co-glycolide) microspheres containing ovalbumin", Archives of Pharmacal Research, 23(4), pp 385-390 11 Cohen-Sela E., Chorny M., Koroukhov N., et al (2009), "A new double emulsion solvent diffusion technique for encapsulating hydrophilic molecules in PLGA nanoparticles", J Control Release, 133(2), pp 90-95 12 Fredenberg s., Wahlgren M., Reslow M., et al (2011), "The mechanisms of drug release in poly (lactic-co-glycolic acid)-based drug delivery systems—a review", International journal ofpharmaceutics, 415(1-2), pp 34-52 13 Gasmi H., Siepmann F., Hamoudi M., et al (2016), "Towards a better understanding of the different release phases from PLGA microparticles: Dexamethasone-loaded systems", International journal of pharmaceutics, 514(1), pp 189-199 14 Giteau A., Venier-Julienne M.-C., Aubert-Pouessel A., et al (2008), "How to achieve sustained and complete protein release from PLGA-based microparticles?", International journal ofpharmaceutics, 350(1-2), pp 14-26 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 Gopferich A (1997), "Polymer bulk erosion", Macromolecules, 30(9), pp 25982604 Graves R A., Pamujula s., Moiseyev R., et al (2004), "Effect of different ratios of high and low molecular weight PLGA blend on the characteristics of pentamidine microcapsules", International journal of pharmaceutics, 270(1-2), pp 251-262 Gu B., Burgess D J (2015), "Prediction of dexamethasone release from PLGA microspheres prepared with polymer blends using a design of experiment approach", International journal ofpharmaceutics, 495(1), pp 393-403 Han F Y., Thurecht K J., Whittaker A K., et al (2016), "Bioerodable PLGAbased microparticles for producing sustained-release drug formulations and strategies for improving drug loading", Frontiers in pharmacology, p 185 Hirota K., Doty A c., Ackermann R., et al (2016), "Characterizing release mechanisms of leuprolide acetate-loaded PLGA microspheres for IVIVC development I: in vitro evaluation", Journal of controlled release, 244, pp 302313 Iqbal M., Zafar N., Fessi H., et al (2015), "Double emulsion solvent evaporation techniques used for drug encapsulation", International journal ofpharmaceutics, 496(2), pp 173-190 Jain R A (2000), "The manufacturing techniques of various drug loaded biodegradable poly (lactide-co-glycolide)(PEGA) devices", Biomaterials, 21(23), pp 2475-2490 Janoria K G., Mitra A K (2007), "Effect of lactide/glycolide ratio on the in vitro release of ganciclovir and its lipophilic prodrug (GCV-monobutyrate) from PEGA microspheres", International journal ofpharmaceutics, 338(1 -2), pp 133141 Jennings T A (1999), Lyophilization: introduction and basic principles, CRC Press Kim T H., Park T G (2004), "Critical effect of freezing/freeze-drying on sustained release of FITC-dextran encapsulated within PEGA microspheres", International journal ofpharmaceutics, 271(1-2), pp 207-214 Klose D., Siepmann F., Elkharraz K., et al (2006), "How porosity and size affect the drug release mechanisms from PLGA-based microparticles", International journal ofpharmaceutics, 314(2), pp 198-206 Kojima R., Yoshida T., Tasaki H., et al (2015), "Release mechanisms of tacrolimus-loaded PLGA and PLA microspheres and immunosuppressive effects of the microspheres in a rat heart transplantation model", International journal ofpharmaceutics, 492(1-2), pp 20-27 Leitner J., Mayr F., Spiel A., et al (2008), "The pharmacokinetics and pharmacodynamics of a new sustained-release leuprolide acetate depot compared to market references", International journal of clinical pharmacology therapeutics, 46(8), pp 407-414 Li s., McCarthy s (1999), "Further investigations on the hydrolytic degradation of poly (DL-lactide)", Biomaterials, 20(1), pp 35-44 Lin X., Yang H., Su L., et al (2018), "Effect of size on the in vitro/in vivo drug release and degradation of exenatide-loaded PLGA microspheres", Journal of Drug Delivery Science, 45, pp 346-356 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 Liu J., Ren H., Xu Y., et al (2019), "Mechanistic Evaluation of the Opposite Effects on Initial Burst Induced by Two Similar Hydrophilic Additives From Octreotide Acetate-Loaded PLGA Microspheres", Journal of pharmaceutical sciences, 108(7), pp 2367-2376 Luan X., Bodmeier R (2006), "Modification of the tri-phasic drug release pattern of leuprolide acetate-loaded poly (lactide-co-glycolide) microparticles", European journal ofpharmaceutics biopharmaceutics, 63(2), pp 205-214 Luan X., Skupin M., Siepmann J., et al (2006), "Key parameters affecting the initial release (burst) and encapsulation efficiency of peptide-containing poly (lactide-co-glycolide) microparticles", International journal of pharmaceutics, 324(2), pp 168-175 Makadia H K., Siegel s (2011), "Poly lactic-co-glycolic acid (PLGA) as biodegradable controlled drug delivery carrier", Polymers, 3(3), pp 1377-1397 Mochizuki A., Niikawa T., Omura L, et al (2008), "Controlled release of argatroban from PLA film—Effect of hydroxylesters as additives on enhancement of drug release", Journal of applied polymer science, 108(5), pp 3353-3360 Nasr M., Awad G A., Mansour s., et al (2013), "Hydrophilic versus hydrophobic porogens for engineering of poly (lactide-co-glycolide) microparticles containing risedronate sodium", Pharmaceutical Development Technology, 18(5), pp 1078-1088 Ochi M., Wan B., Bao Q., et al (2021), "Influence of PLGA molecular weight distribution on leuprolide release from microspheres", International journal of pharmaceutics, 599, p 120450 Ogawa Y., Yamamoto M., Takada s., et al (1988), "Controlled-release of leuprolide acetate from polylactic acid or copoly (lactic/glycolic) acid microcapsules: influence of molecular weight and copolymer ratio of polymer", Chemical pharmaceutical bulletin, 36(4), pp 1502-1507 Okada H (1997), "One-and three-month release injectable microspheres of the LH-RH superagonist leuprorelin acetate", Advanced drug delivery reviews, 28(1), pp 43-70 Park K., Otte A., Sharifi F., et al (2021), "Formulation composition, manufacturing process, and characterization of poly (lactide-co-glycolide) microparticles", Journal of controlled release, 329, pp 1150-1161 Park K., Skidmore s., Hadar J., et al (2019), "Injectable, long-acting PLGA formulations: Analyzing PLGA and understanding microparticle formation", J Journal of Controlled Release, 304, pp 125-134 Pitt c (1990), "The controlled parenteral delivery of polypeptides and proteins", International journal of pharmaceutics, 59(3), pp 173-196 Prajapati V D., Jani G K., Kapadia J R J E o o D D (2015), "Current knowledge on biodegradable microspheres in drug delivery", Expert opinion on drug delivery, 12(8), pp 1283-1299 Ravivarapu H B., Burton K., Deluca p p J E J o p., et al (2000), "Polymer and microsphere blending to alter the release of a peptide from PLGA microspheres", European journal ofpharmaceutics biopharmaceutics, 50(2), pp 263-270 Sahil K., Akanksha M., Premjeet s., et al (2011), "Microsphere: A review", Int J Res Pharm Chem, 1(4), pp 1184-1198 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 Schwendeman s p., Shah R B., Bailey B A., et al (2014), "Injectable controlled release depots for large molecules", Journal of controlled release, 190, pp 240253 Shen J., Burgess D (2012), "Accelerated in-vitro release testing methods for extended-release parenteral dosage forms", Journal of Pharmacy, 64(7), pp 986996 Teutonico D., Montanari s., Ponchel G J E o o D D (2012), "Leuprolide acetate: pharmaceutical use and delivery potentials", Expert opinion on drug delivery, 9(3), pp 343-354 ưhrich K E., Cannizzaro s M., Langer R s., et al (1999), "Polymeric systems for controlled drug release", Chemical Reviews-Columbus, 99(11), pp 31813198 Wang J., Wang B M., Schwendeman s p J J o c R (2002), "Characterization of the initial burst release of a model peptide from poly (D, L-lactide-coglycolide) microspheres", Journal of controlled release, 82(2-3), pp 289-307 Wang T., Xue p., Wang A., et al (2019), "Pore change during degradation of octreotide acetate-loaded PLGA microspheres: The effect of polymer blends", European Journal of Pharmaceutical Sciences, 138, p 104990 Wilson A c., Vadakkadath Meethal s., Bowen R L., et al (2007), "Leuprolide acetate: a drug of diverse clinical applications", Expert Opinion on Investigational Drugs, 16(11), pp 1851-1863 Xiao p., Qi p., Chen J., et al (2020), "The effect of polymer blends on initial release regulation and in vitro-in vivo relationship of peptides loaded PLGAHydrogel Microspheres", International journal of pharmaceutics, 591, p 119964 Yeo Y., Park K (2004), "Control of encapsulation efficiency and initial burst in polymeric microparticle systems", Archives of Pharmacal Research, 27(1), pp 1-12 Yoo J.-W., Mitragotri s (2010), "Polymer particles that switch shape in response to a stimulus", Proceedings of the National Academy of Sciences, 107(25), pp 11205-11210 Yoo J., Won Y.-Y (2020), "Phenomenology of the initial burst release of drugs from PLGA microparticles", Biomaterials Science Engineering, 6(11), pp 60536062 Zhang B J., Han z w., Duan K., et al (2018), "Multilayered pore-closed PLGA microsphere delivering OGP and BMP-2 in sequential release patterns for the facilitation of BMSC s osteogenic differentiation", Journal of Biomedical Materials Research, 106(1), pp 95-105 Zhao J., Wang L., Fan c., et al (2017), "Development of near zero-order release PLGA-based microspheres of a novel antipsychotic", International journal of pharmaceutics, 516(1-2), pp 32-38 Zhou J., Walker J., Ackermann R., et al (2020), "Effect of manufacturing variables and raw materials on the composition-equivalent PLGA microspheres for 1-month controlled release of leuprolide", Molecular Pharmaceutics, 17(5), pp 1502-1515 Zolnik B s., Leary p E., Burgess D (2006), "Elevated temperature accelerated release testing of PLGA microspheres", Journal of controlled release, 112(3), pp 293-300 PHỤ LỤC Phụ lục 3.1 Ẳnh hương nồng độ D-manitol đến KTTP vi cầu PLGA - LA (n=5) Nồng độ D- Mầu manỉtol MI 1.25% M2 2.5% 5% M3 Trước đông khô Dv (90) D [4,3] (pm) (pm) 20.44 10.12 ± 1.57 Span Sau đông khô Span Dv (90) D [4,3] (pm) (|im) 2.12 21.35 11.27 1.97 ±0.44 ±0,18 ±0,65 ±0,42 ±0,05 30,25 23,5 2,75 41,7 34,15 2,85 ±2,15 ±2,37 ±0,45 ±2,8 ±1,35 ±0,65 38,25 27,67 2,31 43,25 36,34 2,50 ±2,25 ±3,43 ±0,13 ± 17,05 ±3,23 ±0,12 Phụ lục 3.2 Kết thử giải phóng điều kiện dài hạn mẫu M5 M7 (n=3) % giải phóng dược chât Thịi gian (ngày) Mau M5 Mau M7 14,56±0,84 17,85±0,68 27,42±3,09 33,92±1,38 30,68±3,66 38,93±1,58 14 38,81±3,86 43,84±l,40 21 50,80±3,48 51,25±2,81 28 74,88±2,73 56,77±1,41 35 79,42±2,09 63,14±2,75 42 84,90±l,65 72,96±2,71 49 88,38±0,71 81,47±2,72 56 92,18±0,89 88,60±2,57 Phụ lục 3.3 Kích thước tiếu phân (n=5) khả nạp dược chất mẫu A Kích thước vi câu Mầu M4 D[4,3] (um) 14,88 ± 0,25 vi cầu (n=3) Dv(90) (pm) 27,19 ± 1,05 Khả nạp Span 1,230 ±0,024 Hàm lương (LCtt %) 4,70 ±0,12 Hiệu suất vi cầu hóa (EE %) 37,29 ± 1,33 M5 10,44 + 0,08 19,27 + 0,07 1,755 + 0,013 3,58 + 0,14 30,97 + 1,72 M6 15,36 + 0,79 24,75 dt 1,59 2,291 ±0,031 3,01 db0,24 32,90 + 2,01 M7 21,76+1,39 30,60+ 1,66 1,582 + 0,073 4,21+0,34 32,21+2,19 M8 28,07 + 2,12 44,05 db 1,16 1,535 + 0,08 5,42 dt0,68 44,12+1,07 M9 13,17 + 0,15 29,62 + 0,81 1,103 + 0,035 4,29 + 0,11 36,18 + 1,82 M10 18,66 + 0,11 27,84 d10,19 1,803 + 0,006 4,48 dt0,27 42,20 + 2,21 Phụ lục 3.4 Kết thử giải phóng điều kiện cấp tốc mẫu (n=3) F Thịi % dược chât giải phóng gian M4 M5 M6 M7 M8 M9 (giờ) 21,99+2,47 34,19+0,93 35,34+2,38 25,94+2,96 35,19+2,47 39,75+0,80 28,75+2,25 49,69+3,75 49,92+3,04 35,79+3,81 24 50,18+3,31 30 58,12+3,72 63,44+1,87 48,55+2,19 65,20+1,72 55,72±1,19 83,68+0,84 48 76,72+1,56 82,16+1,84 62,77+1,20 77,67+2,17 68,19+1,10 91,33+1,09 54 78,34+2,14 87,93+1,50 68,55+1,85 85,89+2,43 74,12+0,96 16,36+1,87 14,54+3,11 23,31+0,93 28,37+0,93 21,99+2,22 43,20+3,74 51,03+2,79 41,09+3,28 52,45+4,43 42,84+2,60 59,43+3,31 52,98+2,34 77,72+1,61 Phụ lục 3.5 Phần trăm LA giải phóng theo thòi gian vi cầu PLGA-LA bào chế theo công thức tối ưu vi cầu đối chiếu lucrin depot PDS 3,75 mg (n = 3) Thời gian (giờ) Giải phóng dược chất vi cầu PLGA-LA đơng khô(°/o) 21,99 + 28,75 + 41,09 + 77,72 + 2,22 2,25 3,28 1,61 Giải phóng dược chất vi cầu 11,65 + 16,91 + 52,35 + 86,63 + 91,86 + đối chiếu Lucrin depot 3,75 mg(%) 1,02 1.99 +1 00 75 xf- ị O 1,24 30 00 2,03 24 2,19 Phụ lục 3.6 Hình ảnh bột đơng khơ vi cầu Phụ lục 3.7 Hình ảnh vi câu đơng khơ sau hồn ngun Phụ lục 3.8 Hình ảnh chụp SEM vi cầu đông khô PLGA - LA sử dụng nồng độ tá dưọc đông khô D-manitol 10% (trái) 1,25% (phải) M5 M7 Ngày 28 Ngày 28 IOP OkV 8.8mm x400 SE(U) 06/01/2022 Ngày 35 100pm IOP 1,0kV 8.5mm x400 SE(U) 06/01/2022 Ngày 35 100pm Ngày 42 Ngày 42 Ngày 49 IOP 1.0kV8.6mm x3.00kSE(U) 06/01/2022 Ngày 56 11 110.0pm IOP OkV 8.8mm x3.00k SE(U) 06/01/2022 10.0pm Ngày 56 IOP 1.0kV8.8mmx3.00kSE(U) 06/01/2022 1111 110.0pm Phụ lục 3.9 Hình ảnh chụp SEM mẫu vi cầu M5 M7 lấy mẫu thủ’ giải phóng điều kiện dài hạn tù’ ngày 28 đến ngày 56 M4 MS I 30h 30h lo'opm IOP 1.0kV 8.4mm x3.00k SE(UL) 05/17/2022 IOP 1.0kV 8.4mm x3.00k SE(UL) 05/17/2022 M8 10.0pm M9 3011 IOP 1.0kV 8.4mm x3.00k SE(UL) 05/17/2022 iop 1.0kV 9.1mm x9.99k SE(UL) 06/23/2022 5.00pm 4811 Phụ lục 3.10 Hình ảnh chụp SEM mẫu vi cầu M4, M5, M8, M9 lấy mẫu thử • r s giải phóng điêu kiện câp tơc thời điêm •A • /\ Ấ Ấ > • •A