[Kl-Hup] Đánh Giá Khả Năng Kháng Vi Sinh Vật Của Tinh Dầu Trầu Không.pdf

BỘ YTẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI ĐỎ THỊ HUYỀN THƯƠNG ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG KHÁNG VI SINH VẬT CỦA TINH DẦU TRẦU KHÔNG KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC sĩ HÀ NỘI 2022 BỘ YTẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI ĐỎ THỊ HUYỀ[.]

BỘ YTẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI ĐỎ THỊ HUYỀN THƯƠNG ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG KHÁNG VI SINH VẬT CỦA TINH DẦU TRẦU KHƠNG KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC sĩ HÀ NỘI - 2022 BỘ YTẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI ĐỎ THỊ HUYỀN THƯƠNG 1701558 ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG KHÁNG VI SINH VẬT CỦA TINH DẦU TRẦU KHƠNG KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP Dược sĩ Người hướng dẫn: X TS Nguyễn Khắc Tiệp HVCH Nguyễn Thị cẩm Vân Nơi thực hiện: Bộ môn Công nghiệp duọc HÀ NỘI - 2022 LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, em xin bày tỏ kính trọng gừi lời cảm ơn sâu sắc tới TS Nguyễn Khắc Tiệp, người thầy tận tình hướng dẫn, giúp đờ, quan tâm động viên em suốt trình nghiên cứu khoa học thực đề tài khóa luận Em xin gửi lời cảm ơn đến PGS.TS Đàm Thanh Xuân, ThS Lê Ngọc Khánh, HVCH Nguyễn Thị cấm Vân người cô, người thầy, người chị quan tâm, giúp đờ, động viên, tận tình bảo đế em có hướng đắn hon suốt thời gian qua Em xin chân thành cảm ơn thầy cô giáo, anh chị kỹ thuật viên môn Công nghiệp Dược - trường Đại học Dược Hà Nội giúp đỡ tạo nhiều điều kiện thuận lợi để em hồn thành khóa luận Em xin cảm ơn Ban giám hiệu, thầy cô giáo trường Đại học Dược Hà Nội, suốt năm học đại học truyền đạt cho em kiến thức vô quý báu để em tự tin tháng ngày tới Em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến Công ty CP tinh dầu thiên nhiên Hà Nội tài trợ nguyên liệu tinh dầu cho đề tài Em xin cảm ơn bạn Trần Thị Minh Thu, Hoàng Thị Ánh Nhật người bạn em thực nghiên cứu phòng thí nghiệm Cơng nghệ Vi sinh ln đồng hành, hỗ trợ, tận tình giúp đờ động viên tinh thần em nhiều suốt khoảng thời gian nghiên cứu khoa học thực đề tài Và cuối cùng, em xin gửi lời cảm ơn tới gia đình, người ln hậu phương vừng chắc, động lực tinh thần, ủng hộ em bước đường Nghiên cứu tài trợ đề tài cấp Trường Đại học Dược Hà Nội theo định 798/QĐ-DHN năm 2021 Tên đề tài: "Nghiên cứu tạo biofilm Staphylococcus aureus đĩa 96 giếng, ứng dụng sàng lọc khả diệt biofilm số dược liệu Việt Nam", định số 798/QĐ-DHN (xem phụ lục 2) Hà Nội, ngày 27 tháng năm 2022 Sinh viên Đỗ Thị Huyền Thương MỤC LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tinh dầu 1.1.1 Đại cương tinh dầu 1.1.2 Tinh dầu có tác dụng kháng khuẩn 1.1.3 Tinh dầu đối tượng vi khuẩn dai dẳng 1.1.4 Tác dụng hiệp đồng tinh dầu kháng sinh 1.2 Tinh dầu trầu không hoạt tính kháng khuẩn tinh dầu trầu khơng.10 1.2.1 Ví trí, phân loại 10 1.2.2 Đặc điểm trầu không 10 1.2.3 Tình hình nghiên cứu hoạt tính kháng vi sinh vật tinh dầu trầu không 12 CHƯƠNG NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỦƯ 14 2.1 Nguyên liệu, thiết bị 14 2.1.1 Nguyên liệu chủng giống 14 2.1.2 Thiết bị, dụng cụ 14 2.1.3 Môi trường sử dụng 15 2.2 Nội dung nghiên cún 16 2.2.1 Đánh giá khả diệt vi sinh vật tinh dầu trầu không 16 2.2.2 Đánh giá khả diệt vi khuẩn tồn dai dẳng tinh dầu trầu không 16 2.2.3 Đánh giá khả tạo tác dụng hiệp đồng với kháng sinh tinh dầu trầu không 16 2.3 Phuong pháp nghiên cứu 16 2.3.1 Chuân bị môi trường hoạt hóa chủng 16 2.3.2 Phưong pháp đánh giá khả diệt vi sinh vật tinh dầu trầu không 17 2.3.3 Phưong pháp xác định hoạt tính diệt vi khuẩn tồn dạng dai dẳng 19 2.3.4 Phương pháp xác định tác dụng hiệp đồng tinh dầu kháng sinh 20 2.3.5 Phương pháp xác định số lượng vi sinh vật phương pháp cấy đếm đĩa thạch 22 CHƯƠNG KẾT QUẢ 23 3.1 Khả diệt vi sinh vật tinh dầu trầu không 23 3.1.1 MIC, MBC tinh dầu 23 3.1.2 Khả diệt khuẩn theo nồng độ tinh dầu trầu không 23 3.2 Khả diệt vi khuẩn tồn dai dẳng 25 3.2.1 Khả diệt vi khuẩn dai dẳng 25 3.2.2 Khả diệt khuẩn biofilm 26 3.3 Khả hiệp đồng tác dụng với số loại kháng sinh 27 3.3.1 Nhóm Betalactam với s aureus ATCC 33591 MRSA 27 3.3.2 Một số kháng sinh vi sinh vật khác 31 BÀN LUẬN 32 KẾT LUẬN VÃ KIẾN NGHỊ 37 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẲT ATCC American Type Culture Ngân hàng chủng chuân Hoa Kỳ Collection BLEO Betle leaf essential oil Tinh dầu trầu không CCEO Cinnamomum cassia essential oil Tinh dầu quế CFU Colony Forming Unit Đơn vị hình thành khuẩn lạc CLSI Clinical Laboratory Standard Viện Tiêu chuẩn lâm sàng xét Institute nghiệm DMSO Dimethyl sulfoxide FIC (index) Fractional Inhibitory Chỉ số nồng độ ức chế riêng phần Concentration (index) GEO Ginger essential oil Kháng sinh KS MBC Tinh dầu gừng Minimum Bactericidal Nồng độ diệt khuẩn tối thiểu Concentration MHB Mueller Hinton broth Môi trường Mueller Hinton lỏng MIC Minimum Inhibitory Nồng độ ức chế tối thiểu Concentration MRSA MSSA Methicillin-resistant Staphylococcus aureus kháng Staphylococcus aureus methicillin Methicillin-susceptible Staphylococcus aureus nhạy cảm Staphylococcus aureus với methicillin MXF Moxifloxacin PBS Phosphate-Buffered Saline Dung dịch đệm phosphate pH 7.4 SDA Sabouraud Dextrose Agar Môi trường thạch Sabouraud dextrose Tinh dầu TD TNG Tryptic soy-Glucose-NaCl Môi trường Tryptic soy-Glucose- NaCl TSA vsv Tryptic Soy Agar Môi trường thạch Tryptic Soy Vi sinh vât DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Đối tượng nghiên cứu 14 Bảng 2.2 Các dụng cụ, thiết bị sử dụng nghiên cứu 14 Bảng 2.3 Các hóa chất dùng nghiên cứu 15 Bảng 2.4 Mô tả xếp thí nghiệm xác định MIC 18 Bảng 2.5 Mô tả xếp thí nghiệm tương tác tinh dầu - kháng sinh thông qua thử nghiệm checkerboard 21 Bảng 3.1 Giá trị MIC, MBC tinh dầu trầu không (pl/ml & %) chủng vsv 23 Bảng 3.2 Ket thí nghiệm checkerboard tinh dầu trầu khơng meropenem 28 Bảng 3.3 Giá trị FIC FIC index kết hợp tinh dầu trầu không với số kháng sinh vi sinh vật 31 Bảng 4.1 So sánh giá trị MIC tinh dầu trầu không (kết nghiên cứu nghiên cứu này) với số tinh dầu phổ biến chủng vi sinh vật 33 DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Hình ảnh trầu khơng {Piper betỉe L.) 10 Hình 3.1 Đáp ứng tinh dầu trầu không với chủng vi sinh vật nồng độ khác 24 Hình 3.2 Tác dụng diệt vi khuấn dai dắng theo thời gian sử dụng kháng sinh có khơng kết hợp tinh dầu trầu không 25 Hình 3.3 Tác dụng diệt vi khuân dai dăng sau 24 sử dụng kháng sinh có khơng kết họp tinh dầu trầu khơng 25 Hình 3.4 Kết diệt khuấn biofilm kháng sinh moxifloxacin có khơng kết họp với tinh dầu trầu không 27 Hình 3.5 Đường cong nồng độ - đáp ứng meropenem sử dụng đon phối hợp với tinh dầu trầu không thời điểm 24 29 Hình 3.6 Đường cong nồng độ - đáp ứng ceftriaxone sử dụng phối hợp với tinh dầu trầu không thời điểm 24 30 ĐẬT VẤN ĐỀ Kháng kháng sinh mối đe dọa nghiêm trọng việc điều trị hiệu loạt bệnh nhiễm trùng vi khuẩn, nấm gây Việc lạm dụng kháng sinh góp phần vào gia tăng tỉ lệ loại nấm, vi khuấn kháng thuốc Với gia tăng vi sinh vật (VSV) kháng thuốc thiếu loại kháng sinh đưa thị trường, việc cần phải tìm chiến lược để đối phó với trình trạng vơ cấp thiết Trước đây, việc sàng lọc sản phẩm tự nhiên chưa quan tâm Tuy nhiên, việc sử dụng loại thuốc thảo dược toàn giới trở nên phố biến, khai thác sản phẩm tự nhiên để làm thuốc xu hướng nở rộ Các sản phẩm chiết xuất hay tinh dầu từ phận khác thực vật khám phá rộng rãi nhiều nghiên cứu khả điều chỉnh tính kháng thuốc vsv Những nghiên cứu cung cấp phưong hướng khả thi tưong lai việc đảo ngược khả kháng thuốc vsv [74] Trầu không {Piper betle L.) trồng phổ biến quen thuộc nhiều tỉnh thành khắp nước biết đến từ lâu qua phong tục nhai trầu Ngoài ra, trầu không coi vị thuốc hay sử dụng y học cổ truyền Bên cạnh thành phần nghiên cứu nhiều trầu khơng tinh dầu trầu khơng năm gần quan tâm Nhiều nghiên cứu chứng minh tinh dầu từ trầu khơng có nhiều hoạt tính sinh học nối bật kháng khuẩn, kháng nấm, chống oxy hóa, kích thích thần kinh trung ương, kháng acetylcholinesterase, kháng p~ glucuronidase, chống viêm, làm lành vết thương cho thấy khả ứng dụng đầy hứa hẹn tinh dầu nồng nghiệp, y học công nghiệp dược phẩm [24], [64] Nhằm ứng dụng hoạt tính sinh học tinh dầu trầu khơng, đặc biệt hoạt tính kháng vi sinh vật để điều trị số bệnh liên quan đến nhiễm khuẩn, lựa chọn thực đề tài “Đánh giá khả kháng vi sinh vật tinh dầu trầu không” nhằm mục tiêu: Đánh giá khả diệt vi sinh vật tinh dầu trầu không Đánh giá khả diệt vi khuân dai dắng tinh dầu trầu không Đánh giá khả tạo tác dụng hiệp đồng với kháng sinh tinh dầu trầu không CHƯƠNG TỐNG QUAN 1.1 Tinh dầu 1.1.1 Đại cương tinh dầu 1.1.1.1 Khái niệm Thực vật tạo lượng lớn chất chuyến hóa thứ cấp biện pháp bảo vệ tự nhiên chống lại công vi sinh vật sâu bệnh, chất tạo màu, mùi hương chất thu hút thụ phấn [74] Tinh dầu hỗn họp 20-60 thành phần với nồng độ khác nhau, thường có mùi thơm, khơng tan nước, tan lipid dung môi hừu cơ, thường có tỷ trọng nhẹ nước, dễ bay nhiệt độ thường tạo từ trình trao đối chất thứ cấp loại thảo mộc [4] Tinh dầu tìm thấy với số lượng lớn túi dầu tuyến dầu quả, chủ yếu phần vỏ lớp biểu bì [38], Ngồi ra, tinh dầu cịn chiết xuất từ phận khác thực vật chồi, hoa, lá, thân, cành, hạt, quả, rễ, gỗ vỏ 1.1.1.2 Chiết xuất Tinh dầu chiết xuất từ số loại với phận khác nhiều phương pháp chiết xuất khác Phương pháp sử dụng để chiết xuất tinh dầu thường phụ thuộc vào nguyên liệu thực vật sử dụng Phương pháp chiết xuất yếu tố định chất lượng tinh dầu Quy trình chiết xuất khơng phù hợp gây hư hởng thay đối tính chất vật lý, hóa học tinh dầu, dẫn đến hoạt tính sinh học, đặc tính tự nhiên, đổi màu, mùi/hương vị [50] Các phương pháp chiết xuất tinh dầu thường sử dụng đem lại hiệu suất chiết xuất cao phương pháp cất kéo nước, chiết xuất dung môi, phương pháp ướp, phương pháp ép [4], [73] Phương pháp cất kéo nước phương pháp sử dụng rộng rãi để chiết xuất tinh dầu thực vật, phương pháp phân lập hợp chất bị phân hủy nhiệt độ cao việc chưng cất chúng theo cách mà nước đưa vào nguyên liệu thô [53] 1.1.13 Thành phần Tinh dầu tìm thấy nhiều loại thực vật khác nhau, đặc biệt loại thơm, có mùi hương vị đặc biệt, chi phối số lượng thành phần tỉ lệ chúng tinh dầu [50] Các thành phần hóa học tinh dầu bao gồm hai nhóm terpenoids (monoterpens sesquerpenes) phenylpropanoids (aldehyde, phenol, dẫn xuất metoxy, ) [4], [53] Hơn 100 thành phần với tỷ lệ khác (1% - 70%) tìm thấy loại tinh dầu [35] Trong hỗn hợp này, vài thành phần có nồng độ tương đối cao (20-70%), thành phần khác thường có dạng vết [15] Ví dụ, thành phần tinh dầu đinh hương (Syzygium aromaum ) eugenol (68,52%) a-caryophyllene (1,85%) có dạng vi lượng [27] Các thành phần khác có tinh dầu ar-turmerone (63.4%) nghệ TÃI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Nguyễn Quỳnh Chi, Nguyễn Khắc Tiệp, Nguyễn Hoàng Anh, Phạm Tuấn Anh, Lê Thị Tú Anh (2021), "Đánh giá tác dụng hiệp đồng tinh dầu nghệ với cefoxitin Staphylococcus aureus kháng methicillin (MRSA)", Nghiên cứu Dược & Thông tin thuốc, 12(3), pp 43 -51 Nguyễn Thiện Chí, Nguyễn Thị Ngọc Châm, Phạm Khánh Ngọc, Đỗ Duy Phúc, Dương Tùng Kha, Nguyễn Thị Thu Thủy (2016), "Khảo sát thành phần hóa học hoạt tính kháng vi sinh vật tinh dầu trầu không {Piper betel L.), họ hồ tiêu (Piperaceae)", Tạp chí Khoa học Trường Đại học cần Thơ, (45), pp 28-32 Phạm Thế Chính, Dương Nghĩa Bang, Phan Thanh Phương, Khiếu Thị Tâm, Phạm Thị Thắm, Lê Thị Xuân, Bùi Thị Thúy "Thành phần hóa học tinh dầu trầu {Piper betle L.) trồng Hải Dương", Trung tâm Học liệu - Đại học Thái Nguyên, 72(10), pp 48-52 Đại học Dược Hà Nội (2007), Dược liệu học, tập 2, pp 174 - 245 Đỗ Tất Lợi (2003), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Nhà xuất Y học, Hà Nội i Nguyễn Thị Lý, Trần Thị Hồng Vân (2010), "Tách tinh dầu carotenoid từ trầu {Piper betle L.)", Hội Nghị Khoa Học & Công Nghệ lần 9, Khoa Cơng nghệ Hố học, Đại học Bách Khoa, Tp Hồ Chí Minh, Việt Nam Nguyễn Đình Nga, Nguyễn Văn Thanh (2010), "Thành phần tác động kháng Candida spp tinh dầu cao chiết từ trầu khơng Việt Nam {Piper betle L Piperaceae)", Tạp chí Dược học, 410 Nguyễn Ngọc Phước, Nguyễn Đức Quỳnh Anh, Nguyễn Anh Tuấn, Nguyễn Nam Quang, Lê Văn Bảo Duy (2010), "Nghiên cứu sử dụng hợp chất từ trầu không để ức chế số vi khuẩn {Aeromonas hydrophina Vibro parahaemolyticus) gây bệnh động vật thủy sản", Tạp chí Nơng nghiệp Phát triền Nơng thôn, 16, pp 45-52 Nguyễn Khắc Tiệp, Đàm Thanh Xuân, Lê Ngọc Khánh, Bùi Thúy Luyện, Tạ Thu Lan, Trần Thị Minh Thu, Đỗ Thị Huyền Thương, Tống Xuân Quang, Lê Tú Anh (2022), "Nghiên cứu tạp biofilm s.aureus đĩa 96 giếng sàng lọc khả diệt s aureus biofilm số mẫu dược liệu Việt Nam", Hóa học & ứng dụng, pp 277 - 281 10 Nguyễn Khắc Tiệp, Đàm Thanh Xuân, Lê Thị Tú Anh, Nguyễn Hoàng Anh, Phạm Hồng Nhung, Nguyễn Quỳnh Chi, Peyrusson Frederic, Tulkens M Paul, Van Bambeke Franẹoise (2021), "Dai dẳng kháng sinh - kiểu hình liên quan đến giảm hiệu điều trị nhiễm khuẩn lâm sàng cần quan tâm", Nghiên cứu Dược & Thông tin thuốc, 12(5), pp 1-7 Tiếng Anh 11 Adeltrudes B Caburian, Marina o Osi (2010), "Characterization and evaluation of antimicrobial activity of the essential oil from the leaves of Piper betle L.", E- International Scientific Research Journal, 2(1) 12 Amornvit p., Choonharuangdej s., et al (2014), "Lemongrass-Incorporated Tissue Conditioner Against Candida albicans Culture", J Clin Diagn Res, 8(7), pp ZC50-2 13 Apiwat Tawatsin, Preecha Asavadachanukorn, et al (2006), "Repellency of essential oils extracted from plants in Thailand against four mosquito vectors (Diptera: Culicidae) and oviposition deterrent effects against Aedes aegypti", Southeast Asian Journal of Tropical Medicine Public Health, (37), pp 915-931 14 Arambewela L., Kumaratunga K G A., et al (2005), "Studies on Piper betle of Sri Lanka", Journal of National Science Foundation Sri Lanka, 33(2), pp 133- 139 15 Bakkali F., Averbeck s., et al (2008), "Biological effects of essential oils—a review", Food Chem Toxicol, 46(2), pp 446-75 16 Canton R., Morosini M I (2011), "Emergence and spread of antibiotic resistance following exposure to antibiotics", FEMS Microbiol Rev, 35(5), pp 977-91 17 Carson c F., Hammer K A., et al (2006), "Melaleuca alternifolia (Tea Tree) oil: a review of antimicrobial and other medicinal properties", Clin Microbiol Rev, 19(1), pp 50-62 18 Chouhan s., Sharma K., et al (2017), "Antimicrobial Activity of Some Essential Oils-Present Status and Future Perspectives", Medicines (Basel), 4(3) 19 Clinical and Laboratory Standards Institute (2018), Ml00 Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing, pp 54-62 20 Daniel Buldain Andrea V Buchamer, Maria L Marchetti, Florencia Aliverti, Arnaldo Bandoni, Nora Mestorino (2018), "Combination of Cioxacillin and Essential Oil of Melaleuca armillaris as an Alternative Against Staphylococcus aureus", Front Vet Sci, 5, pp 177 21 Depi Sakinah Rusdi, Sestry Misfadhila (2020), "Review of Traditional Use, Phytochemical and Pharmacological Activity of Piper betle L.", Galore International Journal of Health Sciences and Research, 5(3) 22 Diaz Iglesias Y., Wilms T., et al (2019), "Activity of Antibiotics against Staphylococcus aureus in an In Vitro Model of Biofilms in the Context of Cystic Fibrosis: Influence of the Culture Medium", Antimicrob Agents Chemother, 63(7), pp 23 Dwivedi Vandana, Tripathi Shalini (2014), "Review study on potential activity of Piper betle", 3(4), pp 93-98 24 Ekta Singh Chauhan, Jaya Aishwarya, et al (2016), "A Review: Nutraceuticals Properties of Piper betel (Paan)", American Journal of Phytomedicine and Clinical Therapeutics 4(2), pp 28-41 25 El Atki Y., Aouam I., et al (2019), "Antibacterial activity of cinnamon essential oils and their synergistic potential with antibiotics", J Adv Pharm Technol Res, 10(2), pp 63-67 26 Essien E E., Newby J s., et al (2015), "Chemotaxonomic Characterization and in-Vitro Antimicrobial and Cytotoxic Activities of the Leaf Essential Oil of Curcuma longa Grown in Southern Nigeria", Medicines (Basel), 2(4), pp 340- 349 27 Fu Y., Zu Y., et al (2007), "Antimicrobial activity of clove and rosemary essential oils alone and in combination", Phytother Res, 21(10), pp 989-94 28 Garg s c., Jain Rajshree (1992), "Biological Activity of the Essential Oil of Piper betle L", Journal of Essential Oil Research, 4(6), pp 601-606 29 Hemaiswarya s., Doble M (2010), "Synergistic interaction of phenylpropanoids with antibiotics against bacteria", J Med Microbiol, 59(Pt 12), pp 1469-1476 30 Hernandi Sujono Samsu, Rizal Sari, Purbaya Jasmansyah, Jasmansyah (2019), "Antibacterial Activity of the Essential Oil From Betel Leaf (Piper Betle L.) Against Streptococcus Pyogenes and Staphylococcus Aureus", Jurnal Kartika Kimia, 2(1), pp 30-36 31 Himabindu Peddapalli, Narender Boggula, et al (2020), "Therapeutic Potential of Piper betle: An Amazing Nature’s Medicinal Reservoir", Chemistry Research Journal, 5(3), pp 62 -75 32 Hosseinzadeh Saleh, Jafarikukhdan Azizollah, et al (2015), "The Application of Medicinal Plants in Traditional and Modern Medicine: A Review of Thymus vulgaris", International Journal of Clinical Medicine, 6(9), pp 33 Jing Yan, Bonnie L Bassler (2019), "Surviving as a Community: Antibiotic Tolerance and Persistence in Bacterial Biofilms", Cell Host Microbe, 26(1), pp 15-21 34 Khoury M., El Beyrouthy M., et al (2019), "Hirtellina lobelii DC essential oil, its constituents, its combination with antimicrobial drugs and its mode of action", Fitoterapia, 133, pp 130-136 35 Lapinska B., Szram A., et al (2020), "An In Vitro Study on the Antimicrobial Properties of Essential Oil Modified Resin Composite against Oral Pathogens", Materials (Basel), 13(19) 36 Levison M E (2004), "Pharmacodynamics of antimicrobial drugs", Infect Dis Clin North Am, 18(3), pp 451-65 37 Madhumita Mitali, ProshantaGuh, et al (2019), "Extraction of betel leaves (Piper betle L.) essential oil and its bio-actives identification: Process optimization, GCMS analysis and anti-microbial activity", Industrial Crops & Products pp 38 Mahato Neelima, Sharma Kavita, et al (2019), "Citrus essential oils: Extraction, authentication and application in food preservation", 59(4), pp 611-625 39 Mitali Madhumita Proshanta Guha, Ahnidra Nag (2020), "Bio-actives of betel leaf (Piper betle L.): A comprehensive review on extraction, isolation, characterization, and biological activity", Phytother Res, 34(10), pp 2609-2627 40 Mitra Mohammadi Bazargani, Jens Rohloff (2015), "Antibiofilm activity of essential oils and plant extracts against Staphylococcus aureus and Escherichia coll biofilms", Food Control, 61, pp 156-164 41 Mohottalage Susantha, Tabacchi Raffaele, et al (2007), "Components from Sri Lankan Piper betle L leaf oil and their analogues showing toxicity against the housefly, Musca domestica", Flavour and Fragrance Journal (2), pp 130-138 42 Naik Mohd Irfan, Fomda Bashir Ahmad, et al (2010), "Antibacterial activity of lemongrass (Cymbopogon citratus) oil against some selected pathogenic bacterias", Asian Pacific Journal of Tropical Medicine, pp 43 Natalie Verstraeten, Jan Michiels (2016), Bacterial Persistence - Methods and Protocols 44 Nayaka Nmdmw, Sasadara M M V., et al (2021), ''Piper betle (L): Recent Review of Antibacterial and Antifungal Properties, Safety Profiles, and Commercial Applications", Molecules, 26(8) 45 Nazzaro F., Fratianni F., et al (2013), "Effect of essential oils on pathogenic bacteria", Pharmaceuticals (Basel), 6(12), pp 1451-74 46 Ni Made Dwi Mara Widyani Nayaka, Maria Malida Vernandes Sasadara, et al (2021), "Piper betle (L): Recent Review of Antibacterial and Antifungal Properties, Safety Profiles, and Commercial Applications", Molecules, 26(8) 47 Oliveira M A c., Borges A c., et al (2017), "Cymbopogon citratus essential oil: effect on polymicrobial caries-related biofilm with low cytotoxicity", Braz Oral Res, 31, pp 89 48 Orchard A., van Vuuren s (2017), "Commercial Essential Oils as Potential Antimicrobials to Treat Skin Diseases", Evid Based Complement Alternat Med, 2017 49 Panuwat Suppakul, Nutcha Sanla-Ead, et al (2006), "Antimicrobial and Antioxidant Activities of Betel Oil", Kasetsart Journal - Natural Science 40 50 Phakawat Tongnuanchan Soottawat Benjakul (2014), "Essential oils: extraction, bioactivities, and their uses for food preservation", Journal offood science 79(7), pp 1231-1249 51 Polly Soo Xi Yap, Swee Hua Erin Lim, Cai Ping Hue, Beow Chin Yiap (2013), "Combination of essential oils and antibiotics reduce antibiotic resistance in plasmid-conferred multidrug resistant bacteria", Phytomedicine, 20, pp 710-713 52 Reichling J (2020), "Anti-biofilm and Virulence Factor-Reducing Activities of Essential Oils and Oil Components as a Possible Option for Bacterial Infection Control", Planta Med, 86(8), pp 520-537 53 Richard Ansah Herman, Ellen Ayepa, et al (2019), "Essential Oils and their Applications - A Mini Review", Advances in Nutrition & Food Science, 4(4), pp 13 54 Rosato A., Vitali c., et al (2007), "Antibacterial effect of some essential oils administered alone or in combination with Norfloxacin", Phytomedicine, 14(11), pp 727-32 55 Row Li-Ching Morgan, Ho Jiau-Ching (2009), "The Antimicrobial Activity, Mosquito Larvicidal Activity, Antioxidant Property and Tyrosinase Inhibition of Piper betle", Journal of the Chinese Chemical Society, (56), pp 653-658 56 s D Cox 1, c M Mann, et al (2000), "The mode of antimicrobial action of the essential oil of Melaleuca alternifolia (tea tree oil)", Journal of Applied Microbiology, 88(1), pp 170-175 57 s Allcock E H Young, M Holmes, D Gurdasani, G Dougan, M s Sandhu, L Solomon, M E Torok (2017), "Antimicrobial resistance in human populations: challenges and opportunities", Glob Health Epidemiol Genom, 2, pp e4 58 Sara Burt (2004), "Essential oils: their antibacterial properties and potential applications in foods—a review", Int J Food Microbiol, 94(3), pp 223-53 59 Sarah Schmidt Grant, Deborah T Hung (2013), "Persistent bacterial infections, antibiotic tolerance, and the oxidative stress response", Virulence, 4(4), pp 273- 83 60 Shahverdi A R., Monsef-Esfahani H R., et al (2007), "Trans-cinnamaldehyde from Cinnamomum zeylanicum bark essential oil reduces the clindamycin resistance of Clostridium difficile in vitro", J Food Sci, 72(1), pp S055-8 61 Sienkiewicz M., Kowalczyk E., et al (2012), "Recent patents regarding essential oils and the significance of their constituents in human health and treatment", Recent Pat Antiinfect Drug Discov, 7(2), pp 133-40 62 Singh Rajinder, Shushni Muftah A.M., et al (2011), "Antibacterial and antioxidant activities of Mentha piperita L.", Arabian Journal of Chemistry, 8(3), pp 322 -328 63 Suradeep Basak, Proshanta Guha (2015), "Modelling the effect of essential oil of betel leaf {Piper betle L.) on germination, growth, and apparent lag time of Penicillium expansum on semi-synthetic media", International Journal of Food Microbiology, (215), pp 171-178 64 Swagata Karak Jayashree Acharya, Sainiara Begum, Indira Mazumdar, Rita Kundu, Bratati De (2018), "Essential oil of Piper betle L leaves: Chemical composition, anti-acetylcholinesterase, anti-p-glucuronidase and cytotoxic properties", Journal of Applied Research on Medicinal and Aromatic Plants, 10, pp 85-92 65 Swagata Karak Jayashree Acharya, Sainiara Begum, Indira Mazumdar, Rita Kundu, Bratati De (2018), "Essential oil of Piper betle L leaves: Chemical composition, antiacetylcholinesterase, anti-P-glucuronidase and cytotoxic properties", Journal of Applied Research on Medicinal and Aromatic Plants, pp 66 Takhtajan Armen (2009), "Flowering Plants", Springer Science & Business Media, pp 33 67 Tariq s., Wani s., et al (2019), "A comprehensive review of the antibacterial, antifungal and antiviral potential of essential oils and their chemical constituents against drug-resistant microbial pathogens", Microb Pathog, 134 68 Thuy Bui Thi Phuong, Hieu Le Trung, et al (2020), "Screening for Streptococcus pyogenes antibacterial and Candida albicans antifungal bioactivities of organic compounds in natural essential oils of Piper betle L., Cleistocalyx operculatus L and Ageratum conyzoides L.", Springer 69 Tullio V., Roana J., et al (2019), "Evaluation of the Antifungal Activity of Mentha X piperita (Lamiaceae) of Pancalieri (Turin, Italy) Essential Oil and Its Synergistic Interaction with Azoles", Molecules, 24(17) 70 Vasconcelos N G., Silva K E., et al (2020), "Antibacterial activity of Cinnamomum cassia L essential oil in a carbapenem- and polymyxin-resistant Klebsiella aerogenes strain", Rev Soc Bras Med Trop, 53 71 Victor Alves Carneiro, Ramaiana Soares Melo, et al (2020), "Essential Oils as an Innovative Approach against Biofilm of Multidrug-Resistant Staphylococcus aureus", Bacterial Biofilms Book 72 Wang X., Shen Y., et al (2020), "Antibacterial Activity and Mechanism of Ginger Essential Oil against Escherichia coll and Staphylococcus aureus", Molecules, 25(17) 73 Winska K., Maczka w., et al (2019), "Essential Oils as Antimicrobial Agents- Myth or Real Alternative?", Molecules, 24(11) 74 Yap p s., Yiap B c., et al (2014), "Essential oils, a new horizon in combating bacterial antibiotic resistance", Open Microbiol J, 8, pp 6-14 75 Yassine El Atki, Imane Aouam Fatima El Kamari, Amal Taroq, Kaotar Nayme, Mohammed Timinouni, Badiaa Lyoussi, Abdelfattah Abdellaoui (2019), "Antibacterial activity of cinnamon essential oils and their synergistic potential with antibiotics", J Adv Pharm Technol Res, 10(2), pp 63-67 PHỤ LỤC Phiếu kết thử nghiệm tinh dầu trầu không Công ty CP tinh dầu thiên nhiên Hà Nội thực TỔNG CỤC TIÊU CHUẨN ĐOẠUỜNG chất lượng TRUNG TÂM KỸ THUẬT TIÊU CHUAN QUATEST3 KT3-00940BHO0/1S Tên mẫu Name ofsample Mô tả mẫu Description đo lường chất lượng QUALITY ASSURANCE & TESTING CENTER PHIEU KÊT qua thử nghiệm 04/06/2020 Page 01/02 : TINH DÀU TRÀU KHƠNG Số lơ: HNE.TK.l 10520 NSX: 11/05/2020 HSD: 11/05/2023 : Mau thử nghiệm khách hàng lấy mẫu, tên mẫu thông tin mẫu khách hàng cung cấp./ Testing sample was sampled by customer, sample name and sample information were supplied by customer Mau dạng lỏng, dựng chai thủy tinh The liquid is contained in the glass bottle Số lượng mẫu : 01 Quantity Ngày nhận mẫu : 25/05/2020 Date ofreceiving Thời gian thử nghiệm : 26/05/2020 - 04/06/2020 Testing duration Nơi gửi mẫu Customer : CÔNG TY CỎ PHÀN TINH DẤU THIÊN NHIÊN HÀ NỘI Số 9, Ngách 514/53 Thụy Khuê, Tây Hồ, Hà Nội Kết thử nghiệm : Xem trang 02/02 See page 02/02 Test result TL PHỤ TRÁCH PTN HÓA PP HEAD OF CHEMICAL TESTING LAB TL GIÁM DÓC/ pp DIRECTOR Lê Thị Ngọc Phi Cảc kết thủ nghiệm ghi phiếu lúy chí có giả trị đối vái màu đo khách hing gủi dén / Test results are validfor the namely submitted sample(s) only Không dược inch phàn phiếu kết thử nghiệm nêu khỏng có dịng ỷ Mng vân bàn cùa Trung lâm Kỳ thuột Thù Test Report shall not be reproduced, except infull, without the written permission by Quatest J N/A: không áp dụng / Not applicable Ten mâu ten khách hàng dược ghi theo yêu càu nơi gứi mẳu / Name ofsamplc(s) and customer are written as customer's request ỉ Dộ không đâm bâo mở rộng ưỏc lượng dưực lính vói k • 2, mức lin cậy 9$ % Khách hảng cỏ the liên hệ theo địa chi dể bicl them thông tin Estimated expanded uncertainty of measurement with k 2, at 95 % confidence level Please contact Ọuatcsl J al the below address forfurther information Head Office: 49 Pasteur, Disl I HCMC Vietnam ■Riling: No 7, road No I Bien Hoa I IZ Dong Nai Vietnam C5 lot, KI road, Cat Lai IZ, Dist HCMC Vietnam Lan sứa đỏi: Tel: (84-28) 3X29 4274 Tel: (84-251) 383 6212 Tel: (84-28) 3742 3160 BH12 (07/2018) Fax: (84-28) 3829 3012 Fax: (84-251)383 6298 Fax: (84-28) 3742 3174 Website: www,qyalcst3.com.vn E-mail: e-mail: tncskhftqaato&gan.yn M03/1 - ĨTTN09 KT3-00940BHO0/19 PHIẾU KẾT QUÀ THỬ NGHIỆM TEST REPORT A 04/06/2020 jPage 02/02 THUMB y 4/ KỸ THUẬT % \I fulfil CIIUAH 00 LOOHG/f Ket thừ nghiệm Test result Phương pháp thừ Test method Tên chi tiêu Characteristic 7.1 7.3 Tỷ trọng 20 °C / 20 °C Specific gravity at 20 °C / 20 °C Chi so khúc xạ 20 °C Refractive index at 20 °C Góc quay cực Ở 20°C, 7.4 Specific optical rotation at 20 c Thành phan đơn hương (*\ 12 ■ ■ ■ ■ ■ ■ ■ ■ ■ ■ ■ ■ ■ ■ ■ Si Ket thử nghiệm Test result Giới hạn phát Limit of detection TCVN 8444:2010 0,976 • TCVN 8445:2010 1,5044 OB QTTN/KT3 192:2018 3,79 OB % QTTN/KT3 022:2017 (GC/MS) Flavor composition a-Thujene a-Pinene Camphene Sabenen P-Pinene P'Myrcene a-Terpinene Cymol Limonene p-Phellandrene Eucalyptol y-Terpinene a- Terpinolen Linalool Terpinen-4-ol •• 0,52 2,85 5,30 2,36 0,26 0,48 0,92 0,32 0,33 0,76 0,23 1,26 0,28 0,51 1,47 0,62 4,29 16,45 ■ ■ Estragole Phenol, 4-(2-propenyl)- ■ Phenol, 4-(2-propenyl)-, acetate ■ ■ ■ ■ ■ a-Copaene Eugenol a-Bergamotene P-Caryophyllene a-Caryophyllene 1,64 16,97 0,67 5,64 ■ y-Muurolene 3,86 ■ ■ ■ ■ p-Selinene 5,89 a-Selinene Eugenol acetate 2-(Acetyloxy)-4-allylphenyl acetate 6,95 3,87 11,07 4,22 Ghi chú/ Notice: M Phần trăm diện tích peak hợp chất hữu bay Percent ofpeak area of evaporated organic compounds TRUNG TÂM KỸ THUẬT TIÊU CHUAN đo lường chất lượng QUALITY ASSURANCE & TESTING CENTER 0UATEST3 ** Lần sửa dồi: Head poke: 49 Pasteur Dist I HCMC Vietnam resting: No 7, road No I Bien Hoa IZ Dong Nai, Vietnam C5 lot KI road Cat Lai IZ Dist IICMC, Vietnam Tel: (84-28) 3X29 4274 lei: (84-251) 383 6212 Tel: (X4-28) 3742 3160 BH12 (07/2018) Fax: (84-28) 3829 3012 Fax: (84-251) 383 6298 Fax: (84-28) 3742 3174 Website: www.quiitcsf3.com.vn E-mail: tn-cskh@auatest3.com.vn E-mail: tn-cskh@qua1Cst3.comAll MO3/2 - TTTN09 PHỤ LỤC BỘ Y TÊ CỘNG HÒA XẢ HỌI CHỦ NGHÍA VIỆT NAM TRƯỜNG DẠ! HỌC Dược HÀ Nộ! Dộc lặp • Tự (lo - Hệnh phúc Hà Nội ngờyix tháng)ũnãm 2021 Sổ: 0-05 2.5n Time (h) 12 18 24 30 36 42 4S 54 60 66 72 7* Time (h) Hình Lượng vi sinh vật biofilm (log,, CFU/ml) (trái) vá lịng sinh khói biotilm (CV absorbance) (phái) ỏ cãc thói ứiém 6h, 24h 48h vã 72h (—), nỉ cáy thay mđi mõl truflng nudi cáy mỏi 24h nuôi cáy không thay moi mòi trưởng Giá trị p: so sanh vơi thdl điếm 24h Máu Dang đớn + Van + MXF Chưng 100,0x4.0 91,3x7,2 90,6x7,2 DL21 91.4x0,8 61,8x59,5 50.8x0,6 DL27 93.1x10,5 58.9x0,7 57.1x1,6 69.6x9.8 41.1x2,1 42,5x8.6 DL58 103.0x1.2 66.1x6,8 54,5x2.3 DL87 17,7x6.6 12.1x3,9 10.9x3,4 DL396 124,5x14.9 76.3x17.2 52,8x10,4 ỮL491 121,0x15.9 58.3x6,4 44,4-6,8 HI CT2 134.4x12.0 63.5x10.7 60,6±36 68.2x6.5 59.5x3.8 53.1x3,6 58.3x7,3 49,7x0.1 51.0x0,3 14.3x25 14,9x2.1 12.3x20 DL29 DHN10 [DHN15 Hóa học & Ong dụng ẹỹ/S f6OB)/5-2OS£ Hình Giá trị huynh quang RF cúa mâu dược liệu co náng ditl ỉ aureus biotilm ò đỉéu kiện sủ dụng đdn (A) két hạp vơi vancomycin nóng độ 20mg1 (B| vá moxilloxacin nóng dơ 1.5mg'l (C) báng só liệu cùa chung (*»), gia tri giám 25% RF so vói mâu chứng duong Sàng lọc khả diệt aureus biotìlm cua số mầu dirực liệu Việt Nam Nghiên cứu thực hiên với mẩu 'cao dươc liệu khác Việt Nam, $âng lọc tắc dung diet s aureus biotilm VƠI điéu kiên khác (i) dạng đơn, (ii) kết hơp vỡi moxiíloxacin nống độ 1,5 25% giấ tri RF (đánh giá mức độ chuyên hỏa cùa vi sinh vật sống) so VỚI máu chứng dương củng điéu kiện coi mẵu cỏ khã nâng diệt s aureus ữong biofilm Thi nghiêm thực lân độc lập Trong 300 máu chúng tỏi thực sang lọc, có 11 mâu (3,6%) có kha nâng diệt aureus biotim dang don lè hoăc két hơp vơi kháng sinh Khà diệt khuân cùa 11 máu trẽn điéu kiện thực nghiệm đưoc chung tối trinh bày Hĩnh Trong số đó, chi có mẫu có khà diet ỉ aureus biofilm dạng dơn lè Khi kết hợp với kháng sinh, gân tát máu đéu cho tháy khả nâng tàng cương tac dung dièt khuẩn cua kháng sinh vá diét đữơc 25% số aureus biotilm so vơi mẳu chưng dương cúng điéu kiện thực nghiệm IV KÉT IIẠN Nghiên cứu thiểt lập điéu kiện mói trương va ni cẫy để tao biofilm hốn chinh ổn định cùa s aureus trén đĩa 96 giếng Mở hình đă ưng dụng sáng loc máu dược liệu cố khả nâng diệt s aureus biofilm Cán cớ nhửng nghiên cứu sâu vé hóa thực vât va ché tác dụng cùa hợp chát vẻn đơi tương ví khn biofilm nhằm ừng dung váo thực tiên điỗu trị Hóa học & ứng dụng ỹỳ'/B ftí>Bl/5-30ỉĩ TÀI LIỆU THAM KHAO 111Otto M Staphylococcal Biofilms Microbiol Spectr 6,(2018) [2] Hall-Stoodlcy L Ct al Bacterial biofilms: From the natual environment to infectious diseases Nat Rev Microbiol 2.95-108 (2004) [3] Archer N K Ct al„ Staphylococcus aureus biofilms: Properties, regulation and roles in human disease Virulence vol 445-459 (2011) [4] Oliveira w F Ct al Staphylococcus aureus and Stapylococcus epidermidis infections on implants J Hosp Infect 98 111-117 (2018) [5] Hoiby N Cl al ESCM1D* guideline for the diagnosis and treatment of biofilm infections 2014 Clin Microbiol Infect 2I.SI S25 (2015) [6] Martin c et al Strategies for Antimicrobial Drug Delivery to Biofilm Curr Pharm Des 21,43-66(2014) [7] Hclainc s & Kugelberg E Bacterial persisters: Formation eradication, and experimental systems Trends in Microbiology vol 22 417-424 (2014) [8] Siala w Ct al The antifungal caspofungin increases fluoroquinolone activity against Staphylococcus aureus biofilms by inhibiting N-acctylglucosanune transferase Nat Cominun (2016) |9| Iglesias Y D et al Activity of antibiotics against staphylococcus aureus in an in vitro model of biofilms in the context of cystic fibrosis: influence of the culture medium Antimicrob Agents Chcmothcr 63 (2019) ♦ Lởi cám ơn: Nghiên cừu tài trợ đè tói cốp Trường Đợi học Dược Há Nổi, theo đinh số 798/QD-DHN nám 2021 Chúng tài cảm am cá nhàn, đơn VI đà gùi mỗu cao dược liệu cho nghiên cứu, KTV Phạm Thị Thanh Huyèn, Cóng nghiệp Dược, Trường Dai hộc Dược Hà Nội vẻ ho trợ kỹ thuỡt q trình nghiẻn cứu Phản blộn: PGS, TS PHỪNG THANH HƯƠNG