BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ QUỐC PHÒNG HỌC VIỆN QUÂN Y BÙI HUỲNH HẢI ĐĂNG NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ CAO LỎNG TỪ BÀI THUỐC “DẠ DÀY HĐ” KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SỸ ĐẠI HỌC HÀ NỘI 2022 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ[.]
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ QUỐC PHÒNG HỌC VIỆN QUÂN Y BÙI HUỲNH HẢI ĐĂNG NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ CAO LỎNG TỪ BÀI THUỐC “DẠ DÀY HĐ” KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SỸ ĐẠI HỌC HÀ NỘI - 2022 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ QUỐC PHÒNG HỌC VIỆN QUÂN Y BÙI HUỲNH HẢI ĐĂNG NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ CAO LỎNG TỪ BÀI THUỐC “DẠ DÀY HĐ” KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SỸ ĐẠI HỌC Cán hướng dẫn: TS Nguyễn Trọng Điệp HÀ NỘI - 2022 LỜI CẢM ƠN Để hồn thành khóa luận tốt nghiệp kết thúc khóa học mình, em xin gửi lời cảm ơn đến Ban Giám đốc Học viện Quân Y, Viện Đào tạo Dược, Hệ Quản lý Học viên Dân tạo môi trường điều kiện, hỗ trợ em suốt trình học tập, rèn luyện Em xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành đến thầy TS Nguyễn Trọng Điệp thầy cô khác mơn Bào chế nhiệt tình hướng dẫn tận tình bảo, trực tiếp giải đáp thắc mắc, khó khăn, truyền đạt kinh nghiệm quý báu tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ em suốt thời gian vừa qua Em xin chân thành cảm ơn sâu sắc đến thầy PGS.TS Vũ Bình Dương thầy, anh Trung tâm nghiên cứu sản xuất thuốc Học viện Quân y tạo điều kiện thuận lợi cho em tiếp cận sử dụng máy móc, thiết bị, hóa chất hướng dẫn em suốt thời gian làm thực nghiệm Em xin trân trọng cảm ơn PGS.TS Trịnh Nam Trung - Viện trưởng Viện Đào tạo Dược toàn thể cán giảng viên, kĩ thuật viên Bộ môn trực thuộc Viện Đào tạo Dược, Học viện Quân y tận tình quan tâm, giúp đỡ tạo điều kiện cho em trình học tập thực Khố luận Cuối em xin gửi lời cảm ơn đến gia đình, bạn bè ủng hộ động viên em suốt q trình hồn thành khóa luận tốt nghiệp Hà Nội, ngày 03 tháng 07 năm 2022 Học viên Bùi Huỳnh Hải Đăng MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN MỤC LỤC DANH MỤC BẢNG DANH MỤC HÌNH DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC PHỤ LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 TỔNG QUAN VỀ PHƯƠNG THUỐC “DẠ DÀY HĐ” 1.1.1 Nguồn gốc thuốc 1.2.2 Công thức thuốc “Dạ dày HĐ” 1.2.3 Các vị thuốc phương thuốc “Dạ dày HĐ” 1.2 TỔNG QUAN VỀ CÁC PHƯƠNG PHÁP CHIẾT XUẤT DƯỢC LIỆU 16 1.2.1 Một số khái niệm 16 1.2.2 Một số phương pháp chiết xuất ứng dụng nghiên cứu bào chế thuốc từ dược liệu y học cổ truyền 17 1.2.3 Một số yếu tố ảnh hưởng đến chiết xuất dược liệu 18 1.3 TỔNG QUAN VỀ CAO LỎNG 20 1.3.2 Định nghĩa 20 1.3.3 Kỹ thuật bào chế 20 1.3.4 Một số tiêu chất lượng cao lỏng 21 1.4 MỘT SỐ NGHIÊN CỨU VỀ CHIẾT XUẤT VÀ BÀO CHẾ CAO LỎNG 21 CHƯƠNG – NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 24 2.1 NGUYÊN VẬT LIỆU, THIẾT BỊ 24 2.1.1 Nguyên vật liệu 24 2.1.2 Thiết bị 25 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 25 2.2.1 Xây dựng thẩm định phương pháp định lượng số chất đánh dấu từ thuốc “Dạ dày HĐ” 25 2.2.2 Xây dựng quy trình bào chế cao lỏng từ thuốc “Dạ dày HĐ” 28 2.2.3 Phương pháp xử lý số liệu 32 CHƯƠNG – KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 33 3.1 KẾT QUẢ XÂY DỰNG VÀ THẨM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG MỘT SỐ CHẤT ĐÁNH DẤU TỪ BÀI THUỐC “DẠ DÀY HĐ” 33 3.1.1 Kết định lượng flavonoid tổng phương pháp quang phổ hấp thụ UV – Vis 33 3.1.2 Kết xây dựng thẩm định quy trình định lượng ampelopsin phương pháp HPLC 34 3.2 KẾT QUẢ XÂY DỰNG QUY TRÌNH BÀO CHẾ CAO LỎNG TỪ BÀI THUỐC “DẠ DÀY HĐ” 38 3.2.1 Kết đánh giá số tiêu chất lượng thuốc 38 3.2.2 Kết khảo sát thông số quy trình bào chế dịch chiết 40 3.2.3 Xây dựng quy trình điều chế cao lỏng quy mô 5kg dược liệu/mẻ 49 3.3 KẾT QUẢ ĐÁNH GIÁ MỘT SỐ CHỈ TIÊU CHẤT LƯỢNG CỦA CAO LỎNG “DẠ DÀY HĐ” 54 3.3.1 Hình thức cảm quan, độ hòa tan 54 3.3.2 Tỷ trọng 54 3.3.3 Hàm ẩm 55 3.3.4 Định tính 55 3.3.5 Định lượng 58 KẾT LUẬN 60 KIẾN NGHỊ 61 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC BẢNG Bảng Tên bảng Trang 1.1 Thành phần thuốc “Dạ dày HĐ” 2.1 Các nguyên liệu, hóa chất sử dụng nghiên cứu 24 2.2 Khảo sát thơng số quy trình định lượng ampelopsin 27 2.3 Công thức dược liệu bào chế cao lỏng 29 2.4 Khảo sát quy trình bào chế dịch chiết 29 3.1 Khảo sát thời gian phản ứng dung dịch chuẩn 7,62 μg/ml, n=3 33 3.2 Khảo sát thời gian phản ứng dung dịch thử, n=3 33 3.3 Độ hấp thụ dung dịch quercetin chuẩn MeOH, n=3 33 3.4 Kết xác định tỷ lệ diện tích peak/nhiễu đường số bước sóng khảo sát 34 3.5 Kết khảo sát hệ dung môi pha động 35 3.6 Kết khảo sát tốc độ dòng 35 3.7 Tính tương thích hệ thống phương pháp định lượng ampelopsin 36 3.8 Khoảng tuyến tính phương pháp định lượng ampelopsin 37 3.9 Độ phương pháp định lượng ampelopsin 37 3.10 Độ lặp lại phương pháp định lượng ampelopsin 38 3.11 Hàm ẩm thuốc “Dạ Dày HĐ” 38 3.12 Hàm lượng flavonoid toàn phần thuốc “Dạ Dày HĐ” 39 3.13 Hàm lượng ampelopsin thuốc “Dạ Dày HĐ” 39 3.14 Hàm lượng tinh dầu thuốc “Dạ Dày HĐ” 40 3.15 Ảnh hưởng phương pháp chiết xuất đến hàm lượng hiệu suất chiết flavonoid từ thuốc, n=3 40 3.16 Ảnh hưởng phương pháp chiết xuất đến hàm lượng hiệu suất chiết ampelopsin từ thuốc, n=3 41 3.17 Ảnh hưởng loại dung môi đến chiết xuất flavonoid từ thuốc “Dạ dày HĐ”, n=3 42 3.18 Ảnh hưởng loại dung môi chiết đến hàm lượng hiệu suất chiết ampelopsin từ thuốc “Dạ dày HĐ”, n=3 43 3.19 Ảnh hưởng tỷ lệ dung môi đến chiết xuất flavonoid từ thuốc “Dạ dày HĐ”, n=3 44 3.20 Ảnh hưởng tỷ lệ DM/DL đến chiết xuất ampelopsin từ thuốc “Dạ dày HĐ”, n=3 45 3.21 Ảnh hưởng nhiệt độ đến chiết xuất flavonoid từ thuốc “Dạ dày HĐ”, n=3 47 3.22 Ảnh hưởng nhiệt độ đến chiết xuất ampelopsin từ thuốc “Dạ dày HĐ”, n=3 47 3.23 Ảnh hưởng thời gian đến chiết xuất flavonoid từ thuốc “Dạ dày HĐ”, n=3 48 3.24 Ảnh hưởng thời gian chiết đến chiết xuất ampelopsin từ thuốc “Dạ dày HĐ”, n=3 48 3.25 Nguyên liệu, dung môi cho mẻ chiết 5kg thuốc 49 3.26 Thơng số qui trình chiết xuất, cô đặc 50 3.27 Kết đánh giá hiệu suất chiết, cô cao, loại tạp từ thuốc “Dạ dày HĐ” 53 3.28 Tỷ trọng cao lỏng “Dạ dày HĐ” 54 3.29 Hàm lượng chất rắn cao lỏng “Dạ dày HĐ” 55 3.30 Giá trị Rf vết sắc ký đồ định tính sắc ký lớp mỏng 57 3.31 Hàm lượng flavonoid toàn phần cao lỏng “Dạ dày HĐ” 58 3.32 Hàm lượng ampelopsin cao lỏng “Dạ dày HĐ” 58 DANH MỤC HÌNH Hình Tên hình Trang 1.1 Cây thuốc vị thuốc khơi 1.2 Ô tặc cốt 1.3 Cây thuốc vị thuốc Mộc hương 1.4 Cây hương phụ vị thuốc hương phụ 1.5 Cây thuốc vị thuốc Sa nhân 11 1.6 Cây thuốc vị thuốc chè dây 13 1.7 Ampelopsin đồng phân quang học [50] 14 3.1 Đồ thị biểu diễn mối tương quan nồng độ mật độ quang quercetin MeOH 34 3.2 Đồ thị tương quan tuyến tính diện tích peak nồng độ ampelopsin 37 3.3 Hiệu suất chiết flavonoid toàn phần ampelopsin hai phương pháp chiết xuất 41 3.4 Ảnh hưởng loại dung môi đến chiết xuất flavonoid từ thuốc “Dạ dày HĐ” 42 3.5 Ảnh hưởng loại dung môi đến chiết xuất ampelopsin từ thuốc “Dạ dày HĐ” 43 3.6 Ảnh hưởng tỷ lệ dung môi đến chiết xuất flavonoid từ thuốc “Dạ dày HĐ” 45 3.7 Ảnh hưởng tỷ lệ dung môi đến chiết xuất ampelopsin từ thuốc “Dạ dày HĐ” 45 3.8 Sơ đồ giai đoạn bào chế cao lỏng từ thuốc “Dạ dày HĐ” 51 3.9 Sắc ký đồ định tính phương pháp HPLC 56 3.10 Sắc ký đồ định tính sắc ký lớp mỏng: (a) Lá khôi, (b) Chè dây, (c) Mộc hương 57 DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT Phần viết đầy đủ STT Phần viết tắt AP DĐVN V DL Dược liệu DM Dung môi EtOH HP HPLC ICH MeOH 10 TFL 11 UV – Vis Ultraviolet - Visible (Tử ngoại - khả kiến) 12 VLDDTT Viêm loét dày tá tràng 13 YHCT Ampelopsin Dược điển Việt Nam V Ethanol Helicobacter pylori High Perfomance Liquid Chromatography (Sắc ký lỏng hiệu nâng cao) International Conference Harmonization on Methanol Flavonoid toàn phần Y học Cổ truyền DANH MỤC CÁC PHỤ LỤC PL1 Hình ảnh sắc ký đồ hệ dung mơi pha động PL2 Hình ảnh sắc ký đồ thẩm định độ đặc hiệu thấp Vì vậy, sắc ký đồ cao lỏng không xuất vết so với dược liệu Hương phụ, Sa nhân 3.3.5 Định lượng Bảng 3.31 Hàm lượng flavonoid toàn phần cao lỏng “Dạ dày HĐ” Mẫu Mẻ Mẻ Mẻ Khối lượng cao (g) Hệ số pha loãng Hàm ẩm cao (%) Độ hấp thụ 1,0132 2500 83,60 1,0112 2500 1,0145 Hàm lượng flavonoid (mg/g) Giá trị Trung bình 0,2169 64,45 65,13 83,60 0,2185 65,06 2500 83,60 0,2219 65,87 1,0121 2500 83,27 0,2185 63,71 1,0269 2500 83,27 0,2214 63,64 1,0305 2500 83,27 0,2301 65,94 1,0321 2500 83,44 0,2359 68,23 1,0286 2500 83,44 0,2294 66,56 1,0291 2500 83,44 0,2309 66,97 64,43 67,25 65,60 ± 1,47 2,24 𝐗 ± SD RSD (%) Bảng 3.32 Hàm lượng ampelopsin cao lỏng “Dạ dày HĐ” Mẫu Mẻ Mẻ Hàm lượng Diện tích ampelopsin (mg/g) peak Trung (µAU*s) Giá trị bình Khối lượng cao (g) Hệ số pha loãng Hàm ẩm cao (%) 1,0132 250 83,60 18624157 310,28 1,0112 250 83,60 18037262 301,30 1,0145 250 83,60 18241364 303,64 1,0121 250 83,27 17542143 287,16 1,0269 250 83,27 18383262 296,30 1,0305 250 83,27 18957364 304,30 58 305,07 295,92 Mẻ 1,0321 250 83,44 19624157 317,52 1,0286 250 83,44 18673262 303,47 1,0291 250 83,44 19257364 312,61 311,20 𝐗 ± SD 304,07 ± 7,69 RSD (%) 2,53 Kết bảng 3.31 3.32 cho thấy hàm lượng flavonoid toàn phần cao lỏng 65,60 ± 1,47 mg/g hàm lượng ampelopsin cao lỏng 304,07 ± 7,69 mg/g 59 KẾT LUẬN Qua trình nghiên cứu, đề tài rút số kết luận sau: Đã xây dựng quy trình bào chế cao lỏng từ thuốc “Dạ dày HĐ” - Đã xây dựng, thẩm định phương pháp định lượng flavonoid toàn phần ampelopsin thuốc Đã đánh giá số tiêu thuốc - Đã khảo sát ảnh hưởng số yếu tố ảnh hưởng đến hàm lượng hiệu suất chiết xuất thuốc “Dạ dày HĐ” Từ đó, lựa chọn thơng số quy trình chiết xuất sau: Dùng phương pháp chiết hồi lưu, dung môi ethanol 50%, tỉ lệ dung môi/dược liệu (ml/g) 10/1, chiết nhiệt độ sôi - Đã xây dựng quy trình bào chế cao lỏng “Dạ dày HĐ” quy mô kg/mẻ thiết bị chiết xuất đa tuần hoàn dung mơi Quy trình bào chế có hiệu suất cao (tính theo flavonoid tồn phần 70,36 ± 2,13 % ampelopsin 66,37 ± 2,03 % Đã đánh giá số tiêu chất lượng cao lỏng bào chế - Cao 1:1 chất lỏng sánh, màu vàng nâu, vị đắng chát, đồng khơng có váng, cặn bã dược liệu hay vật lạ Cao tan hoàn toàn EtOH 50% - Định tính sắc ký lỏng hiệu cao: Sắc ký đồ mẫu thử xuất peak ampelopsin có thời gian lưu tương ứng với thời gian lưu peak sắc ký đồ dung dịch ampelopsin chuẩn, với thời gian sắc ký đồ mẫu trắng khơng xuất peak Định tính sắc ký lớp mỏng: Các vết sắc ký đồ cao lỏng có màu giá trị Rf với vết sắc ký đồ dược liệu Lá khôi, Chè dây, Mộc hương - Cao 1:1 có tỷ trọng 25oC 1,058 ± 0,005 g/ml, hàm lượng chất rắn 83,44 ± 0,17 % Hàm lượng flavonoid toàn phần 65,60 ± 1,47 mg/g ampelopsin 304,07 ± 7,69 mg/g 60 KIẾN NGHỊ Từ kết nghiên cứu, đề tài rút số kiến nghị sau: Nâng cấp quy mô bào chế cao lỏng lên quy mô lớn Bào chế cao khô từ cao lỏng thuốc “Dạ dày HĐ” 61 TÀI LIỆU THAM KHẢO Snowden F M (2008) Emerging and reemerging diseases: a historical perspective Immunol Rev 225 (1): 9-26 DOI: 10.1111/j.1600065X.2008.00677.x Lanas A., Chan F K L (2017) Peptic ulcer disease Lancet 390 (10094): 613-624 DOI: 10.1016/s0140-6736(16)32404-7 Uchida T., Kanada R., Tsukamoto Y et al (2007) Immunohistochemical diagnosis of the cagA-gene genotype of Helicobacter pylori with anti-East Asian CagA-specific antibody Cancer Sci 98 (4): 521-528 DOI: 10.1111/j.1349-7006.2007.00415.x Yamaoka Y (2010) Mechanisms of disease: Helicobacter pylori virulence factors Nat Rev Gastroenterol Hepatol (11): 629-641 DOI: 10.1038/nrgastro.2010.154 Narayanan M., Reddy K M., Marsicano E (2018) Peptic Ulcer Disease and Helicobacter pylori infection Mo Med 115 (3): 219-224 https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6140150/pdf/ms115_p02 19.pdf Ardalani H., Hadipanah A., Sahebkar A (2020) Medicinal Plants in the Treatment of Peptic Ulcer Disease: A Review Mini Rev Med Chem 20 (8): 662-702 DOI: 10.2174/1389557520666191227151939 Kuna L., Jakab J., Smolic R et al (2019) Peptic Ulcer Disease: A Brief Review of Conventional Therapy and Herbal Treatment Options J Clin Med (2) DOI: 10.3390/jcm8020179 Nguyễn Anh Chiến (2020) Đánh giá tác dụng viên “Dạ dày HĐ” bệnh nhân trào ngược dày thực quản Luận văn Thạc sĩ y học, Đại học Y Hà Nội Trần Phương Thủy (2019) Đánh giá độc tính tác dụng điều trị viên “Dạ dày HĐ” bệnh nhân viêm dày mạn tính Helicobacter Pylori âm tính Luận văn Thạc sĩ y học, Đại Học Y Hà Nội 10 Luong Thi My Ngan, Pham Phuong Dung, Nguyen Vang Thi Yen Nhi et al (2017) Antibacterial activity of ethanolic extracts of some Vietnamese medicinal plants against Helicobacter pylori AIP Conference Proceedings 62 1878 DOI: 10.1063/1.5000198 11 Vũ Nam, Hoàng Bảo Châu, Nguyễn Khánh Trạch (1995) Góp phần nghiên cứu tác dụng chè dây điều trị loét hành tá tràng Luận án Phó Tiến sĩ khoa học Y dược 12 Phạm Bá Tuyến (2014) Nghiên cứu tác dụng chế phẩm HPmax điều trị loét hành tá tràng có Helicobacter pylori Luận văn Tiến sĩ Y học, Trường Đại học y Hà Nội 13 Đỗ Tất Lợi (2004) Những thuốc vị thuốc Việt Nam NXB Y học 14 Huỳnh Văn Biết, Nguyễn Thị Ngọc Phương, Nguyễn Thị Thanh Nga cộng (2020) Phân tích thành phần hóa thực vật xác định khả chống oxy hóa kháng khuẩn dịch chiết từ Khôi nhung (Ardisia silvestris Pitard) Tạp chí Nơng nghiệp Phát triển 19 (4) DOI: 10.52997/jad.4.04.2020 15 Nguyen Hoang Anh, Ripperger H., Schmidt J et al (1996) Resorcinol Derivatives from Two Ardisia Species Planta Med 62 (5): 479-480 DOI: 10.1055/s-2006-957947 16 Phạm Thị Vân Anh, Vũ Văn Điền, Nguyễn Trần Giáng Hương cộng (2000) Một số kết bước đầu nghiên cứu hoá học tác dụng sinh học khôi (ARDISIA SYLVESTRIS PITARD) Thông tin Y dược 6: 25-28 17 Kobayashi H., de Mejía E (2005) The genus Ardisia: a novel source of health-promoting compounds and phytopharmaceuticals Journal of Ethnopharmacology 96 (3): 347–354 DOI: 10.1016/j.jep.2004.09.037 18 Christophe Wiart (2006) Medicinal Plants of the Asia-Pacific: Drugs for the Future? World Scientific Publishing Company, 235-236 19 Nguyễn Tuất cộng (2009) Nghiên cứu so sánh tác dụng thuốc BV khôi số thể bệnh dày Tóm tắt cơng trình Nghiên cứu khoa học Viện YHCT Việt Nam 20 Huang C.Y., Lai W Y., Sun M F et al (2015) Prescription patterns of traditional Chinese medicine for peptic ulcer disease in Taiwan: A nationwide population-based study Journal of Ethnopharmacology 176: 311-320 DOI: 10.1016/j.jep.2015.11.002 21 Chen W J., Livneh H., Hsieh M H et al (2019) Association of use of 63 Chinese herbal medicines and the risk of fracture in patients with osteoporosis: a population-based cohort study Osteoporosis International 30 (4): 807–815 DOI: 10.1007/s00198-018-4789-x 22 Ravinder S., Chahal K K, Singla N (2017) Chemical composition and pharmacological activities of Saussurea lappa: A review Journal of Pharmacognosy and Phytochemistry (4): 1298-1308 https://www.phytojournal.com/archives/2017/vol6issue4/PartS/6-3-32604.pdf 23 Hassan R., Masoodi M H (2019) Saussurea lappa: A Comprehensive Review on its Pharmacological Activity and Phytochemistry Current Traditional Medicine 6: 13-23 DOI: 10.2174/2215083805666190626144909 24 Lai S T., Zhang T., Wang H Q et al (2022) Two new sesquiterpene dimers isolated from the roots of Saussurea lappa (Yunmuxiang) Journal of Asian Natural Products Research 24 (5): 490-495 DOI: 10.1080/10286020.2021.2025049 25 Zahara K., Tabassum S., Sabir S et al (2014) A review of therapeutic potential of Saussurea lappa-An endangered plant from Himalaya Asian Pacific Journal of Tropical Medicine (1): 60-69 DOI: 10.1016/S19957645(14)60204-2 26 Yang X., Zhang X., Yang S P et al (2016) Evaluation of Aucklandia lappa Decne extracts as antiulcer activity in animals Pak J Pharm Sci 29 (5): 1695-1701 https://www.researchgate.net/profile/Bin-Chen 17/publication/309251349_Evaluation_of_Aucklandia_lappa_Decne_extr acts_as_antiulcer_activity_in_animals/links/5cca769f4585156cd7c1b6df/ Evaluation-of-Aucklandia-lappa-Decne-extracts-as-antiulcer-activity-inanimals.pdf 27 Negi S (2013) Antidiarrheal activity of methanol extract and major essential oil contents of Saussurea lappa Clarke African Journal of Pharmacy and Pharmacology (8): 474-477 DOI: 10.5897/AJPP2012.1532 28 Chen H C., Chou C K., Lee S D et al (1995) Active compounds from Saussurea lappa Clarks that suppress hepatitis B virus surface antigen gene 64 expression in human hepatoma cells Antiviral Res 27: 99-109 DOI: 10.1016/0166-3542(94)00083-k 29 Li Y., Xu C., Zhang Q et al (2005) In vitro anti-Helicobacter pylori action of 30 Chinese herbal medicines used to treat ulcer diseases Journal of Ethnopharmacology 98 (3): 329-333 DOI: 10.1016/j.jep.2005.01.020 30 Rao K S., Babu G V., Ramnareddy Y V (2007) Acylated flavone glycosides from the roots of Saussurea lappa and their antifungal activity Molecules 12 (3): 328-344 DOI: 10.3390/12030328 31 Vũ Văn Điền (1994) Nghiên cứu dược liệu hương phụ vườn (Cyperus rotundus L.) hương phụ biển (Cyperus stoloniferus Retz.) số tỉnh miền Bắc Việt Nam Luận văn thạc sỹ dược học, Trường Đại học Dược Hà Nội 32 Abo-Altemen R A., Al-Shammari A M., Shawkat M S (2019) GC-MS Analysis and Chemical Composition identification of Cyperus rotundus L from Iraq Energy Procedia 157: 1462-1474 DOI: 10.1016/j.egypro.2018.11.311 33 Zhang L L., Zhang L F., Hu Q P (2017) Chemical composition, antibacterial activity of Cyperus rotundus rhizomes essential oil against Staphylococcus aureus via membrane disruption and apoptosis pathway Food Control 80: 290-296 DOI: 10.1016/j.foodcont.2017.05.016 34 Siroua K., Ghallab Y E., Mouss R A et al (2022) Chemical composition of essential oil from invasive Moroccan Cyperus rotundus L., in vitro antimicrobial and antiradical activities, and in silico molecular docking of major compounds on drug efflux pumps South African Journal of Botany 147: 782-789 DOI: 10.1016/j.sajb.2022.03.020 35 Shamkuwar P B., Hoshamani A H., Gonjari I D (2012) Antispasmodic effect ofCyperus Rotundus L.(Cyperaceae) in diarrhoea Der Pharmacia Lettre (2): 522-524 https://www.scholarsresearchlibrary.com/articles/antispasmodic-effect-ofcyperus-rotundus-l-cyperaceae-in-diarrhoea.pdf 36 Bộ Y Tế (2018) Dược liệu học Tập NXB Y học, 215-217 37 Fu C., Zhou R S., G X Zhou (2011) GC-MS Analysis of chemical constituents of essential oil from fruits of Amomum villasum Lour growing 65 in different production regions Lishizhen Med Mater Med Res 21 (10): 2534–2536 38 An X Q., Li Z Z., Shen L G (2011) Chemical constituents of Amomum villosum Lour Nat Prod Res Development 23 (6): 1021–1024 39 Li Z Z., Pan R L., Li Z (2009) Determination of the contents of total flavonoids, Isoquercitroside and Quercitroside in Amomum villosum Science & Technology Review (5): 30-33 https://www.cabdirect.org/cabdirect/abstract/20093166626 40 Zhang T., Lu S H., Bi Q et al (2017) Volatile oil from Amomi Fructus attenuates 5-fluorouracil-induced intestinal mucositis Front Pharmacol 8: 786 DOI: 10.3389/fphar.2017.00786 41 Pai R., Ohta M., Itani R M (1998) Induction of mitogenactivated protein kinase signal transduction pathway during gastriculcer healing in rats Gastroenterol 114 (4): 706–713 DOI: 10.1016/s0016-5085(98)70584-0 42 Beckett E A., McGeough C A., Sanders K M et al (2003) Pacing of interstitial cells of Cajal in the murine gastric antrum: neurally mediated and direct stimulation J Physiol 553: 545–559 DOI: 10.1113/jphysiol.2003.050419 43 Lee Y G., Park J H., Jeon E S et al (2016) Fructus Amomi Cardamomi extract inhibits coxsackievirus-B3 induced myocarditis in a murine myocarditis model J Microbiol Biotechnol 26: 2012–2018 DOI: 10.4014/jmb.1605.05056 44 Tsurumi K., Fujimura H (1983) Effect of anti-inflammatory drugs on endotoxin-induced diarrhea in mice The Japanese J Pharmacol 33 (1): 165–173 DOI: 10.1254/jjp.33.165 45 Zhang S T., Wang Z Y., Wang T S et al (2011) Composition and antimicrobial activities of essential oil of Fructus Amomi Nat Prod Res Development 23 (3): 464–472 46 Nguyễn Thị Dịu, Nguyễn Hồng Lộc, Nguyễn Minh Trí cộng (2020) Một số đặc điểm thực vật học thành phần hóa học chè dây phân bố huyện K'Bang, tỉnh Gia Lai Hội nghị khoa học quốc gia nghiên cứu giảng dạy sinh học Việt Nam DOI: 10.15625/vap.2020.00037 47 Ying L., Xu P., Huang S et al (2011) Antioxidant activity of bioactive 66 compounds extracted from Ampelopsis grossedentata leaves by optimized supercritical carbon dioxide Journal of Medicinal Plants Research (17): 4373–4381 https://academicjournals.org/journal/JMPR/article-full-textpdf/0A5DFE324136 48 Gao Q., Ma R., Chen L et al (2017) Antioxidant profiling of vine tea (Ampelopsis grossedentata): Off-line coupling heart-cutting HSCCC with HPLC–DAD–QTOF-MS/MS Food Chemistry 225: 55-61 DOI: 10.1016/j.foodchem.2016.11.122 49 Phùng Thị Vinh (1995) Nghiên cứu thành phần hóa học tác dụng sinh học chè dây Ampelopsis cantoniensis planch Luận án Tiến sĩ Dược học, Học viện Quân Y 50 Carneiro R C V., Ye L., Baek N et al (2021) Vine tea (Ampelopsis grossedentata): A review of chemical composition, functional properties, and potential food applications Journal of Functional Foods 76: 104317 DOI: 10.1016/j.jff.2020.104317 51 Jia C., Li J., Zhang M et al (2021) Antioxidant properties of the extracts of vine tea (Ampelopsis grossedentata) with the different color characteristics and inhibition of rapeseed and sunflower oil oxidation LWT 136 (2) DOI: 10.1016/j.lwt.2020.110292 52 Fan B., Chen G., Chen X et al (2014) Analysis and evaluation of fatty acid in rattan tea by highly selective and sensitive HPLC-FLD-MS method coupled with precolumn fluorescent labeling Asian Journal of Chemistry 26: 103–109 DOI: 10.14233/ajchem.2014.15335 53 Đỗ Huy Bích, Đặng Quang Chung, Bùi Xuân Chương cộng (2002) Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam Tập I Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật, 423 – 425 54 Bành Văn Khừu cộng (1989) Đánh giá tác dụng đơn KG1 (Khau giằng) chè dây lên thể viêm loét dày hành tá tràng Tài liệu nghiệm thu Viện Y học dân tộc Quân đội 55 European Medicines Agency (2011) Guideline on quality of herbal medicinal products/traditional herbal medicinal products EMA/CVMP/814/00 Rev 56 European Medicines Agency (2011) Guideline on specifications: test 67 proceducres and acceptance criteria for herbal subtances, herbal preparations and herbal medicinal products/traditional herbal medicinal products EMA/CPMP/QWP/2820/00 Rev 57 European Medicines Agency (2008) Guideline on quality of combination herbal medicinal products/traditional herbal medicinal products EMEA/HMPC/CHMP/CVMP/214869/2006 58 European Medicines Agency (2014) Assessment report on Panax ginseng C.A Meyer, radix EMA/HMPC/321232/2012 59 Võ Xuân Minh, Phạm Ngọc Bùng (2013) Kỹ thuật bào chế sinh dược học dạng thuốc, tập NXB Y học, 204-222 60 Cooke M., Poole C F., Wilson I D et al (2000) Encyclopedia of separation science Academic Press, 1448-1456 61 Gupta A., Naraniwal M., Kothari V (2012) Modern extraction methods for preparation of bioactive plant extracts International Journal of Applied and Natural Sciences (1): 8-26 https://www.researchgate.net/publication/236229645_Modern_extraction _methods_for_preparation_of_bioactive_plant_extracts 62 Wang L., Weller C L (2006) Recent advances in extraction of nutraceuticals from plants Trends in Food Science & Technology 17 (6): 300-312 DOI: 10.1016/j.tifs.2005.12.004 63 Kaufmann B., Christen P (2002) Recent extraction techniques for natural products: Microwave-assisted extraction and pressurised solvent extraction Phytochemical Analysis 13 (2): 105-113 DOI: 10.1002/pca.631 64 Từ Minh Koóng, Nguyễn Văn Hân, Nguyễn Việt Hương cộng (2007) Kỹ thuật sản xuất dược phẩm tập I NXB Y học, 145-175 65 Bộ Y tế (2017) Dược điển Việt Nam V NXB Y học 66 Phạm Thùy Linh, Nguyễn Quốc Thịnh, Phạm Thị Tuyết Nhung (2018) Nghiên cứu bào chế cao thuốc chiết xuất từ đơn đỏ (Excoecaria cochinchinensis Lour.) thu hái Thái Nguyên Tạp chí khoa học & công nghệ 177 (01): 33-38 http://jst.tnu.edu.vn/jst/article/view/681/pdf 67 Nguyễn Văn Thủy, Nguyễn Ngọc Quý, Phạm Văn Thịnh cộng (2020) Ảnh hưởng điều kiện chiết tách đến hàm lượng polyphenol 68 flavonoid tổng Mãng cầu xiêm (Annona muricata Linn.) Tạp chí khoa học & công nghệ 9: 52-56 https://vjol.info.vn/index.php/dhNTT/article/view/50975/41853 68 Đặng Thanh Long, Hoàng Thị Kim Hồng, Lê Lý Thùy Trâm cộng (2020) Ảnh hưởng số yếu tố lên q trình tách chiết flavonoid tồn phần từ hạt sen phương pháp siêu âm bể Hội nghị công nghệ sinh học toàn quốc 2020 https://csdlkhoahoc.hueuni.edu.vn/data/2020/11/BAI_BAO_SO_4.pdf 69 Nguyễn Thị Thu Phương, Thái Ngọc Anh, Đặng Thảo Yến Linh cộng (2021) Tối ưu hóa điều kiện chiết xuất hợp chất phenolic flavonoid từ táo mèo (Docynia indica) đơng khơ thơng qua hỗ trợ vi sóng Khoa học nông nghiệp Việt Nam 19 (6): 726-736 http://tapchi.vnua.edu.vn/wp-content/uploads/2021/06/tap-chi-so6.1.2.2021.pdf 70 Routray W., Orsat V (2012) Microwave-Assisted Extraction of Flavonoids: A Review Food Bioprocess Technol (2): 409–424 DOI: 10.1007/s11947-011-0573-z 71 Zheng L L., Wen G., Yuan M Y et al (2015) Ultrasound-Assisted Extraction of Total Flavonoids from Corn Silk and Their Antioxidant Activity Journal of Chemistry 2016: 1-5 DOI: 10.1155/2016/8768130 72 Zhang H., Xie G., Tian M et al (2016) Optimization of the UltrasonicAssisted Extraction of Bioactive Flavonoids from Ampelopsis grossedentata and Subsequent Separation and Purification of Two Flavonoid Aglycones by High-Speed Counter-Current Chromatography Molecules 21: 1096 DOI: 10.3390/molecules21081096 73 Muhammad U., Lu H., Wang J et al (2017) Optimizing the Maximum Recovery of Dihydromyricetin from Chinese Vine Tea, Ampelopsis grossedentata, Using Response Surface Methodology Molecules Molecules 22 (12): 2250 DOI: 10.3390/molecules22122250 74 Tian J., Muhammad S., Chen A et al (2019) An experimental study exploring the influencing factors for ultrasonic-assisted extraction of flavonoid compounds from leaves of Amorpha fruticosa L J For Res 30: 1735–1741 DOI: 10.1007/s11676-019-00931-y 69 75 Liu X M., Liu Y., Shan C H et al (2022) Effects of five extraction methods on total content, composition, and stability of flavonoids in jujube Food Chemistry: X 14: 100287 DOI: 10.1016/j.fochx.2022.100287 76 Chang C C., Yang M H., Wen H M et al (2002) Estimation of total flavonoid content in propolis by two complementary colometric methods Journal of Food and Drug Analysis 10 (3): 178-182 DOI: 10.38212/22246614.2748 77 Lê Thị Thu Hằng (2020) Nghiên cứu phương pháp điều chế đánh giá số tiêu chất lượng cao lỏng chè dây (Ampelopsis cantoniensis Planch.) Khóa luận tốt nghiệp dược sỹ đại học, Học viện Quân y 78 AOAC International (2007) How to meet ISO 17025 requirements for method verification USA 79 ICH (2005) Validation of Analytical Procedures: Text and methodology ICH Hamonised Tripartite Guideline 70 PHỤ LỤC Phụ lục Hình ảnh sắc ký đồ hệ dung môi pha động ACN:acid phosphoric 0,1% tỷ lệ 15:85 ACN:acid phosphoric 0,1% tỷ lệ 40:60 MeOH:acid phosphoric 0,1% tỷ lệ 22:78 71 MeOH:acid phosphoric 0,1% tỷ lệ 40:60 Phụ lục Hình ảnh sắc ký đồ thẩm định độ đặc hiệu Mẫu trắng Mẫu dung dịch chuẩn ampelopsin Mẫu dung dịch thử 72