Phương pháp elisa đối với nền mẫu thủy hải sản

TRUNG TAM DICH VU PHAN TICH THI NGHIEM THANH PHO HO CHi MINH (CASE) TAP HUAN TAP HUAN LY THUYET VA THUC HANH PHAN TICH NHANH CHLORAMPHENICOL BANG PHUONG PHAP ELISA DOI VOI NEN MAU THUY HAI SAN NAM 2019 Văn phịng Cơng nhận Chất lượng (oO ( oe d " Dox LV Vụ” Bl = Va tâm Ain | eV rei Dl T Pee hi aly ‘ ia ⁄) + J F; i „ — bu lang biturip Laat viễn TRUNG TAM DICH VU PHAN aeTÍCH ti An, Đen Fn) | Cc ASE NGHIEM THANH PHO HO CHi MINHˆ of, Ding k er v PHÂN TÍCH NHANH : ` gan CHLORAMPHENICOLBANG {| ƠNG PHÁP ELISA TRÊN THUY | |) HAISAN pia i ? , ẼN VĂN HÙNG - PHÒNG NGHIÊN CỨU TRIÊN KHAI i ` THANG 5/2019 a js CASE GIOI THIEU VE BLISA TONG QUAN PHUONG PHAP l ĐỊNH NGHĨA VẺ KHÁNG NGUYÊN, KHÁNG THẺ PHAN LOAI PHƯƠNG PHÁP ELISA } CÁC YEU TO ANH HUONG TRONG J : PHAN TICH| QUY TRINH PHAN TÍCH MẪU THUỶ HAI SAN ‘AC VAN DE THUONG GAP TRONG PHAN TICH ELISA mee ?-2/ ~ | | Văn phịng Cơng nhận Ch â t lượng Văn phịng Cơng nhận Chất lượng Văn phịng Công nhận Chất lượng lỚI THIỆU VẺ Những PHƯƠNG PHÁ ELISA - ẩŸ$ CASE ưu1 điểm khuyết điểm PHẾ HP pee: > Dễ thực > Tốc độ nhanh >» Chi phi thap : : > Độ nhạy độ đặc cao § > Ảnh hưởng mẫu môi trường lớn dẫn đến dương tính giả, âm tính giả viv KYTHUATRHAN TICHELISA $3 CASE ELISA (nam Linked Immunosorbent assay): dua trén| | - kết hợp đặc hiệu kháng nguyên kháng thể, | — kháng thể gắn với mot enzyme Khi thém chất thích hợp vào phản ứng, ezyme thuỷ phân chất thành chất có màu Tính đặc hiệu phản ứng kháng nguyên kháng thể hình thành màu Dựa vào cường độ biết nồng độ kháng nguyên Van phong Công nhận Chất lượng thể chất tao mau Quá trình f qua hai bước: $% Phản ứng miễn d h hoe “có đu te “ Phan tmg hoá học: h : oxy nguyên tử từ : làm thay đổi màu FEerum/SnmplE cantshiinr primary antibodies is added rete Wha iter plete nia they mete | wey TLaval ~ AN oe | ntl ih aneee performing PAE (Chromogen) is added : Steps for YM : Mee t:ól@ 8/840) 6.Substrate (or the entyme: win le 7, Emyme reacts with the substrate, producing colar color Intensity of the color correlates with the levelof antigen: ELISA Văn phịng Cơng nhận Chất lượng _ 1, Load student samples - (unknowns) In triplicate into - wells of the microplate strips “all wells Incubate for minutes E Add enzyme-linked | secondary antibody to all wells Incubate for minutes Rinse _ Add enzyme substrate to all wells Incubate for minutes - Rinse Văn phịng Cơng nhận Chất lượng Văn phịng Cơng nhận Chất lượng ANTIBODY CLASSIFICATION Disulfide _ bond - Joining chain Joining chain Secretory protein ifs CASE Kháng nguyên phân tử kích thích đáp ứng miễn dịch thể, đặc biệt sản xuất kháng thê Kháng nguyên protein hay 0olysaccharide, có thé loại phân tử khác, mang phân tử hapten nhỏ gắn với protein chuyên chở ( chất mang) Văn phịng Cơng nhận Chất lượng iÏš CASE oo Qe > Chuyển Im Ethyl nghiệm và2 Acetate phia vào ống khô mẫu 60- 70°C khí nén nước m am - ee tan phan khơ cịn lai voi 0,5 ml đệm.chiết mẫu 1x va trộn 'Xoáy mạnh phút > St dung 100 a lớp nước bên để phân tích ring (CA iŸš CASE * Cân 2p mẫu mật ong voii 10 thị Etyl Acetate, danh xoáy mạnh phút với tốc độ tối đa v Ly tam phút nhiệt độ phòng, tốc độ: 4,000 (2025°C), ¥ Chuyén ml Etyl Acetate phia (tương ứng ol 1g mẫu ban đâu) vào ống nghiệm làm khơ 60°C cách thơi khí nén nước ấm 22 Văn phịng Cơng nhận Chất lượng 23 Van phịng Cơng nhận Chất lượng aS FE CASE > Chuyén ml Bthyl Acetat A ở¢ lớp vào ống ly tam làm khô mẫu 60-70°C nước âm | | bang nén : > Thém 0,8 mL dém chiét mau lx vào trộn với tốc độ đa phút > Su dung100 HE lớp nước bên để phân †tích 53 CASE s* Thêm 100 pl chuan Chloramphenicol Vào giếng khác (Thêm chất theo thứ tự từ Aone độ thấp đến nồng độ cao) s* Thêm 100 ul mẫu vào giếng lại ** Thêm 50 hÌ cộng hop ¢ “AP _ HRP hale tronie cach gõ nhẹ vào cạnh khuôn khoảng 10 giây + Ủ khn 60 phút nhiệt độ phịng ( 20-25%C 24 Văn phịng Cơng nhận Chất lượng đÏš CASE s* Rửa khuôn +uÐ0 can tute cs a lần với 250 Hl với x dung dịch âu rửa Sau lần rửa cuối, lật ngược khuôn đập nhẹ Ị tui mẫu ‘ na 4È kể “oho pe n4 wor! khuôn lên khăn giấy đến khô ( chúý : | thực hiệt bước sau rửa khuôn | Không để khuôn bị khô bước ) đc CASE s Thêm 100 0ụi chất TMB, phan ung lap tức xây thêm chất Tron cách đảo vi lee nhẹ khn khoảng I phút q trình ủ( ý: chất lấy khỏi lọ đựng ch ng nên đổ trở lai dé tránh nguy bị nhiễm bẩn) | | 25 Văn phịng Cơng nhận Chất lượng c Qe Sẽ CASE s* Phản ứng xảy sau thêm chất, trộn cách gõ nhẹ vào cạnh khuôn ‹% Sau ủ 15 phút nhiệt độ phòng, thém 100 ul dung dịch ngừng phản ứng enzym trước đọc khuôn 'ở 450 nn ae Oe af CASE Đường cong logarit chuẩn xây dựng độ hấp thu tương đối thu nông độ ng/ml tương ứng ` me x cua chất chuẩn D6 hap thu tương ứng (%) = Độ hấp thu chuẩn (mẫu) x 100 Độ hấp thu chuẩn 26 Văn phịng Cơng nhận Chất lượng 27 Văn phịng Cơng nhận Chất lượng 28 Văn phịng Cơng nhận Chất lượng => q Wie Ƒÿ pu ! † at m lần ƒ khơn; lạnh lu 29 Văn phịng Cơng nhận Chất lượng UOt Các nguyện đ 30 Văn phịng Cơng nhận Chất lượng 31 Văn phịng Cơng nhận Chất lượng Kiem tra hiệu chuẩn pipet da e[ có chặt trước sử dụng Kênh cua pipet hut va phan hoi the tich bang h nhi Hoá chất sử dụng trộn lấn cdc kit khác số loi, hay x kit én ng y hét han CASE Cẩn thận dán nhãn mơi hố chất để dam bảo khơng trộn lần hố chất với Kít có ngàyx hết hạn sử dụng khác tạo khoáng giá trị đọc mật độ quang khác Tuy nhiên giá trị độ hấp thu tưởng đối tốt để so sánh Văn phịng Cơng nhận Chất lượng 33 Van phong Công nhận Chất lượng Gio Aosa aA wh L ACUA dg ( & gida ‘aya wh ty A LF fet bù xa YP te theo 34 aa ae tet oe núi Joma ss ene ast