Phương pháp elisa đối với nền mẫu thủy hải sản 1

TRUNG TÂM DỊCH VỤ PHÂN TÍCH THÍ NGHIỆM THÀNH PHĨ HỊ CHÍ MINH (CASE) TẬP HUẦN TAP HUAN LY THUYET VA THUC HANH PHAN TICH NHANH CHLORAMPHENICOL BANG PHUONG PHAP ELISA BOI VOI NEN MAU THUY HAI SAN NAM 2019 te a et charrette a nicl ey Dễ thực h Db > Tốc độ nhanh > a6 ae phi 2/5: may | 2gly ae a hy ELISA (Eneyms Linked Immunosorbent assay) kết hợp đặc hiệu kháng dua trén nguyên kháng ththé, kháng thể gắn với enzyme Khi thêm chất thích hợp vào phan ứng, ezyme thuỷ phân cơ| chất thành chất có ‘mau Tinh đặc hiệu phan ứng pee: khang nguyén va khang thé hình thành màu Dựa vào cường độ biết nồng độ kháng nguyên op cud, a £ iPt, „ _É2 Ö nm [p50 om mak sa - Văn phịng Cơng nhận Chất lượng làm tài đơi màu hỗn hợp cog lở J Gen ee ner al AM -Serum/Sample containing ¢ Primpry antibodies is added AnHgens coate, Xe: wey, khay muyền ve Ga dn, ab Que pie 3, Non-antigen binding antibodies are washed off the plate conjugated ‘with bi emg P ‘secondary antibody Is washed off the plate is cbehat Theiy ado” hb > 0, Steps for performing : : Substrate for the enayme {Chromogen)Is added = = i ghen | ae Enzyme reacts with the substrate; color correlates with the level of antigen, producing color color Intensity of the At iin han ELISA te: lu Văn phịng Cơng nhận Chất lượng Load student samples - (unknowns) In triplicatelnto _ wells of the microplate strips Incubate for minutes, Rinse ˆ Add primary antibody to all wells Incubate for minutes all wells Incubate for minutes c ý A= Tt 10 sulfur > , Lk oe hiv° AN Văn phịng Cơng nhận Chất lượng (antigenic (7, determinants) & «> TH Antigen binding ie ` Văn phịng Cơng nhận Chất lượng ANTIBODY CLASSIFICATION Joining chain Joining chain Ce a Secretory protein : tin: fine nguyên phan tử kích thích dáp ứng miễn dịch thể, đặc biệt sản xuất kháng thé “Kháng nguyên poe hay mot polysaccharide, nhung ciing co thé loại phân tu khac, mang cac phan tir hapten nho va gan với protein chuyên chở ( chất mang) Văn phòng Công nhận Chất lượng 3y3 CASE So ag >» Chuyển 1ml Ethyl Acetate phía vào ống _ nghiệm làm khơ mẫu 60-70°C khí nén nước âm > Hịa tan phân khơ cịn lại với 0,5 ml đệm chiết mau Ix va tron xoáy mạnh phút > Su dụng 100 HI lớp nước bên để phân tích v Cân ø mẫu mật ong với 10 mi Biyl Acetate, đánh xoáy mạnh phút với tốc độ tối đa v Ly tam phút nhiệt độ phòng, tốc độ: 4,000g (20- 25°C) : v Chuyển ml Etyl Acetate phia (tương ứng với lg mau ban đầu) vào ống nghiệm vàà làm khô 60°C bang cách khí nén nước ấm 22 Văn phịng Cơng nhận Chất lượng 23 Văn phịng Cơng nhận Chất lượng af8 CASE ae Qe > Chuyén ml Ethyl Acetat lớp vào ống ly tâm làm khô mau 60-70°C bang khí nén nước ấm > Thêm 0,8 ne đệm chiết mẫu 1x vào trộn với _ tốc độ tối đa phút.> Su dụng 00 BL lớp nước bên đểphân % Thém tích 100 pl chuén Chloramphenicol vao giếng khác (Thêm chất theo thứ tự từ néng d6 độ cao) thấp đến nồng ệ e-› %7 s%* Thêm 100 Hl mẫu vào giếng lại +# Thêm 50 Hl cộng hợp CAP_HRP trộn cách gõ nhẹ vào cạnh khuôn khoảng 10 giây s* Ủ khuôn 60 phút Re lon phat (Lop ) Bio sel nT nhiệt độ phòng ( 20-259%C | yen p98 › city lo Ty Gb), bs ly 24 Văn phòng Cơng nhận Chất lượng Văn phịng Cơng nhận Chất lượng šïcAsE _ ee *+ Phần ứng xắy sau thêm chất, trộn cách gõ nhẹ vào cạnh khuôn $* Sau ủ 15 phútở nhiệt độ phòng, thém 100 ul dung dịch ngừng phần ứng enzym trước đọc khuôn 450 nm oo Cf | is CASE Đường cong logarit chuẩn xây dựng độ hấp thu tương đối thu nồng độ ng/ml tương ứng chất chuẩn Độ hấp thu chuẩn (mẫu) x 100 Độ hấp thu tuong ting (%) = - Độ hấp thu chuẩn 26 Văn phịng Cơng nhận Chất lượng Văn phịng Cơng nhận Chất lượng 28 Văn phịng Cơng nhận Chất lượng wih v2 huon ¢ 29 Văn phịng Cơng nhận Chất lượng tất 30 Văn phịng Cơng nhận Chất lượng 31 Văn phịng Cơng nhận Chất lượng ¿ở kênh pipet hút v i thể tích h Em, area Hoa chat su dung tron lần kit khác số lot, hay kít én ngày hết hạn peels oy CASE Can than dan nhãn mơi hố chất dé dam bảo khơng trộn lần hố chất với Ki( có ngày hết hạn sử dụng khác tạo khoảng ˆ pia tr] doe mat quang khác Tuy nhien gid tri hap thu tưởng đối tốt đề so sánh, 32 Van phịng Cơng nhận Chất lượng 33 34