'''' ■ Ỉ ÍỌC VIÊN QUÂNY TRUNG TÂM ĐÀO TẠO NGHĨÊN cứu Dược PHÂN TÍCH ĐỘC CHÍT (DỪNG CHO ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC) NHÀ XUẤT BẨN QUÂN ĐỘI NHÂN DẦN HÀ NỘI 20Ị3 BẹNễtỌC @ỐP tílíỉĨN, pnễsìm NỘ3 ®ỔNG TOỂìfi E>|NM ®ifc T[.]
' ■ Ỉ-ÍỌC VIÊN QUÂNY TRUNG TÂM ĐÀO TẠO - NGHĨÊN cứu Dược PHÂN TÍCH ĐỘC CHÍT (DỪNG CHO ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC) NHÀ XUẤT BẨN QUÂN ĐỘI NHÂN DẦN HÀ NỘI - 20Ị3 BẹNễtỌC @ỐP tílíỉĨN, pnễsìm NỘ3 ®ỔNG TOỂìfi E>|NM ®ifc TỈĨÌNH "PHỀM ĨÍ€M ®Ộí: fflir Trung tướng, GS.TS NGUYỄN TIẾN BÌNH ■ ' Chủ tịch Giám đốc Học viện Quân y Đại tá, GS.TS HOÀNG VẢN LƯƠNG Phó Giám đốc Học viên Quân y Phó Chố tịạh PGS.TS; THÁI PHAN QUỲNH NHƯ Phản biỘỊi Nguyên Trưởng phịng Hóa lý Viện Kiểm nghiệm Trung ương ©ạ/X^GS.TS.ỊĨỒNGCƠNGMỈNH • ■ / Giám đốc Trung tâm Phịng chống Nhiễm độc ■ Phổn biệạ Học viên Quân y PGS.TS.NGUỴẺN HẢX NAM ủy viên Chủ nhiệm Bộ mơn Hóa dược • Đại học Dược Hà Nội Đại tá, PGS.TS NGUYỄN VĂN MINH ủy viên Nguyên Chỉ huy trường Trùng tâm ĐT - NC Dược Học viộạQuâny Đại tá, PGS.TS NGUYỄN TÙNG LĨNH ■ Tnrởng phòng Khoa hộc Quan - Học viện Quân y Ị Ị : * 'ị 355.7 < - 144-2013 QĐNỌ-2Ợ13 Thư ký ■ ■ • • ,_ , , ; Đổng chủ biền: Đọi tá, PGS.TS NGUYỄN MINH CHÍNH Chỉ huy trưởng Trung tâm Đào tạo - Nghiên cứu Dược Học viện Quân y TS NGUYỄN TIẾN VŨNG ■ Phó Viện trưởng Viên Pháp y Quốc gia Tham gia biên soạn; Đại tá, PGS.TS NGUYÊN MINH CHÍNH • Clủ huy trưởng Trung tâm Đào tạo - Nghiên cứu Dược Học viên Quân y TS NGUYỄN TIẾN VŨNG Phó Viên trường Viên Pháp y Quốc gia Thiến tá, TS TRỊNH NAM TRUNG Giàng viôn Trung tam Đào tạo - Nghiên cứu Dược Học viên Quan y ■ LỜI GIỚI THIỆU PhAn tích độc chất'là mơn học ứng ủụng hóa học (hóa phân tích, hóa vơ cơ, hóa hữu hóa dược), sinh học (hóa sinh, học dược liệu học) y học (dộc chất lìọc dược lý học), có nhiệm vự xfty dựng ứng dụng phương phdp phAn tích chất dộc phục vụ cho cơiig tác phịng bệnh, điều trị tư pháp ' Giổo trình “Phân tích độc chất” dược biên soạn dựa kiến thức lánh điển, cẠp nhạt tham khảo giáo trình, tài liệu nước, kết hợp với thực tiễn giảng dạy nghiên cứu độc chất, nhằm cung cấp cho học viên đại học Dược kiến thức vẩ phxtơng pháp phân tích chất độc mẫu thử Giáo trình cịn tài liệu tham khảo hữu ích cho người thực cơng tác hóa pháp độc giả quan tâm đến lĩnh vực Học viện Quân y đánh giá cao cổ gắng tác già hợp tác có liiêii cỉia Phịng Đào tạo, Phịng KHQS, Phịng Thơng tin KHQS Xưởng ỉn trình xuất bàn giáo trình Xin trân trọng giới thiêu bạn đọc! GIÁM DỐC HỌC 'VIỆN QUÂN Y Trung tướng, GS.TS Nguyễn Tiến Bình LỜI NĨI ĐẦÚ Để đáp ứng u CỂU dạy học chuyên ngành Dược ngày tốt hơn, phù hợp với mục tiẽu, chương trình đào tạo Học viện Quân y, Trung tâm Đào tạo Nghiên cửu Dược biên soạn giáo trình "Phân tích độc chất”, BỐ cục giáo trình gồm bảy chương: Chương 1: Đại cương chất dộc phan tích độc chất, Chương 2: Phân lộp vằ xác định chất độc vô ' Chương 3: Phương pháp chung phân lạp xác định chất độc hữu Chương 4: Chất độc hữu phân lập phương pháp cất Chương 5: Chất độc hữu phân lập môi trường acid Chương 6: Chất độc hữu phan lập-ố môi trường kiềm Chương 7: Hóa chất bàu vệ thực vật • Sau phíỉn đại cương chất độc phân tích độc chất, nhóm chất dộc chủ, yếu (được phân loại theo phương pháp phân lập) lẫn lượt giới thiệu với cấc nội dung phương pháp phân lập chất độc khôi mâu thử, phương pháp định tính vh định lượng cha't dộc (vỉl cííc sàn phẩm chuyển hóa cùa nó), ốch nhạn định kết q kiểm nghiệm số thồng tin độc tírrìi cách xỉr trì ngộ dộc Độc giả tham khảo thơng tin bổ trợ trình bày phần Phụ lục Trong trình biên soạn giáo trình khó tránh khỏi thiếu sót Ra't mong nhận dược ý kiến đóng góp quỷ báu bạn đọc để giáo trình dược hồn thiện lần tái sau Các tác giả MỤC LỤC , -• • LỜI giới tllílệu Trang ' Lời nói đầu , ■ Chương lỉ Đại cương VỂ chất độc phftn tích độc chất 11 Đại cương chất độc 12 Đại cương phan tích độc chít 22 Chương 2: Phân lập xác định chất độc vô 35 Chất độc lúm loại 35 Anion độc Acid vằ kiềm vô Phospho 58 65 , 68 Chương 3: Phương pháp chung phân lập xác định chất độc hữu 71 Phương phốp phân lạp chất dộc hữu 71 Phương pháp xác dịnh.chất dộc httu • Chương 4: Chất độc hữu phân lập phương pháp cất • Chương 5: Chất độc hữu phân lập môi trường acid Barbiturat ' Thuốc ngủ không thuộc dẫn xuất barbiturat 115 ■ Dãn xuất phenylpyrazol Glycosid tim 131 135 Acid httu dẫn xuất 141 ■ Dãn xuất nitrophenol • 144 ■ Chương 6; Chất độc hữu phân lập môi trường kiềm ■ 148 ■ Dãn xuất phenothiazin Dãn xuất benzodiazepin Dibenzoazepin chất tương tự 115 124 127 Lacton Alcaloid 95 95 97 ■ Phương pháp chung Một số chất dộc bay -81 148 174 ■ 180 184 Dãn xuất carbamat ■ 193 Chất ức chê' enzym monoamino oxidase 196 Dẫn xuất.quinolin 199 Chấtmattíy ' 203 Chương 7: Hóa chất bảo vệ thực vật Đạicươug ị ■ 220 220 Thuốc trừ sâuịphospho hOu 223 Thuốc trừ sâuịcarbamat 234 « Thuốc trừ sâu clo hũu 235 ị Chất diệt co kích thích-tăng trưởng 233 Phụ Dục: i ! ■ Phụ lục 1: Quy trình giám định hóa pháp 242 • 242 Phụ lục 2: Phân tích thăm dị chất độc mẫu vạt trường 246 Phụ lục 3: Nghiệm pháp Reinsch 243 Phụ lục 4: ỉ^ựơng pháp AAS 250 Phụ lục 5: Xác định arsen bầng phương pháp Marsh Grỉbier 254 ■ Phụ lục 6: Cácphản ứng tạo màu dùng phân tích dộc chất 256 Phụ lục 7: Cácịhệ TLC dùng phân tích độc chất 260 Phụ lục 8: Thuốc thử hiên màu TLC Phụ lục 9: Các ịhẹ HPLC dùng phân tích độc chất 262 264 Phụ lục 10: Các hệ GC dùng phần tích độc chất Phụ lục 11: pổẽ hệ GC dùng phân tích chất dộc bay ' 269 272 Phụ lục 12: Xác định chất có tính acid bầng cách chiết cặp ỉoh với (chất màu base ; Phụ lục 13: ỳ£c định base bầng cách chiết cặp ion với chất màu acid ' 273 274 Phụ lục 14: Phản úng tạo màu xác định chất bảo vệ thực vật 275 Phụ lục 15: ỈỊdộíị số hợp chất PHC gây đặc động Vật máu nóng 277 Phụ lục 16: Hệ số tính chuyểnphospho PHC 279 Tàl liệu tham ỉdsảọ 280 Hộ HAR tĩATa HATb Cột Pha động, tốc độ dòng, detector ODS Zorbax Nước (Á) - MeOH (B) (A: B) (30:70) đêíi (0; 100) (250 X 4,6mm, 5pm) 15 phút, trì 15 phút; Iml/phút; DAD ODS Zorbax (250 X 4,6mm, 5ị.tni) MeOH; l,5ml/phút; uv (240,210, 280nm) ODS Zorbax MeOH - nước (75 : 25); l,5ml/phút; uv (240, (250 X 4,6mm, 5|j.m) 210, 280nm) RP mạch alkyl ngắn, HAV bất hoạt silanol (SCD i 00; 250 X 4,6mm) MeOH - KIỊjPO4 0,04M (pH 5,5) (50 : 50); Iml/phút; uv (237nm) Supelcosil LC-DP ACN - H3PO4 (0,025% tt/tt) - đệm triethylamin (25 : 10 : 5) (đệm triethylamin (TEA): cho 9ml I13PO,| dặc 10ml TEA vào 9001111 nước, điều chỉnh pH đến 3,4 HịPO.i loãng, bổ sung, HAX (250 X 4,6mm, 5|.im) nước dến vừa đù lít); 0,6ml/phút; DAD (229nm) HAY LiChrospher 100 RP-8 (250 X 4,0mm, 5|im) HAZ C|8 (250 X 4,0mm, 5pm) ACN - I-I3PO4 (0,025% tt/tt) - đêm triethylaniin (60 : 25 :15); 0,6mI/phút; DAD (229nm) Nước - MeOH - triethylamin điều chình pĩỉ đến 5,5 HjPO., (70 : 30 : 0,1); 0,7ml/pliút; uv (240nm) C'u silica bất hoạt (125 X ACN - KHjPO4 0.05M (pH 7,5, chứa 5001111 HBA 4,ốmm, 5pm), tiền cột C1B triethylamin) (60 : 40); 2ml/phút; FD (X„ = 255, bất hoạt (20 X 4,6mm, 5pm) \m = 315nm) C13 (250 X 6,0mm, 5|tni) ACN - đệm phosphat 50mM (pH 7,2) (43 : 57); l,7ml/phi1t; Điện hóa (điện cực làm việc: carbon thủy tinh; điện cực dối chiếu: Ag/AgCl) HBC Spherisorb ODS-] (150 X 4,6mm), 30°C • ACN - TEAP (50 : 50), đệm TEAP (triethylanioni phospliat): H]PO,| IM (65rnl H3PO,| 85% lít nước) điều chinh déh pH 2,5 triethylamin (tỳ lê khoảng 1TEA : 10P, tt/lt) Lấy 10ml dd pha lỗng với nước thành lít (dd làm việc TP.AP lOmM); l,5rnl/phút; DAD (254nm) HBD Spherisorb ODS-1 (150 X 4,6mm), 3Ũ°C Acetonitril - TEAP (20 : 80); l,0ml/phút; DAD (254nm) HBB Ĩfì7 Hệ HBE Cột Supelcosil LC-18 (250 X 4,6mm) Pha động, tốc độ dòng, đeteciloỉ- Đêm phosphat - MeOH (60 : 40) Đệm phosphat: 10ml HjPO4 lít 'nước, điều chỉnh đêhpH 6,5 NaOH.2M; ưv (309nm) Amoni acetat 0,3M nưốc (dệm HBF HBG Spherisorb ODS-1 (250 X 4,6mm, 10pm) Bondapak ClB (300 X 3,9mrn, 10pm) amoniac đến pH 8) - amonì acetat 0,3M MeOH (.100 : phút đến '5 : 95 phút 14); uv (269nm) Đệm phosphat - MeOH (70 : 30) Đệm phosphat: KH,PO4 lOmM điều clùnh đến pH H3PO4; lml/phút; uv (215nm) MeOH - nước - đệm phosphat (pH 7,25,55:25:20) HBH ODS (250 X 5mm, 5pm) Đệm.phosphat 0,lM: 14,35g NaH3PO.|.2H3O + l,14g Na2HPO4/lít nước; Iml/phút; UV(240nm) MeOH - HjO - đệm phosphat (pH 7,67,70:10:20) HBI ODS (250 X 5mm, 5pm) HBJ Bondex ClB (300 X 3,9mm) • MeOH: HjO (70: 30); Iml/phút; ƯV (254nm) Đệm phosphat - HBH; Iml/phút; UV (240nm) Chú thích: DAD (diode array detector - detector quang hóa) 268 Phụ lục 10: Các hệ GC dùng phân tích độc chất Hộ Cột Nhiệt độ, khí mang, detector 3% SE-30 OV-1, Chromosorb 80 - lOOmesh (được rửa acid xử lý 100 - 300"C Đổi với diều kiện dẳng bàng dimethyldicloro silan), cột thủy nhiệt, nhiệt đỏ M RI/10; N„ 45ml/phút tinh 2m X 4mm Chất mang hoàn toàn bất hoạt OA Mao quản 100%-dimethyl-PSX (X-l) 135°c phút đến 200°C, 13°/phiìt (10 - 15m X Ó,32 0,53nnn, 1,5 - 3pm) đến 312°c, 6°/phíit phíit; He 100°C phin đến 310°C, 30°/phiĩl HP1 (100%-dimethyl-PBX) mao quàn silica hợp (12m X 0,2mm, 0,33pm) phút Bộ tiẽm mẫu: 280°C, phương thức lứiõng tách; He, Iml/phút GB 90ọC 0,7 phút, lên 240"C 5% phenyl-95% dimethyl-PSX (X-5), (35°/phút), lên 290°C (8wphút), lên mao quàn (20 - 3'Om X 0,2 325°c (25°/phút), trì phút; ọ,5mm, 0,5 - Ipm) He, Iml/phút GC 3% OV-17, Chromosorb w HP 80 - 170°C phút đến 270°C, 16°/phút phút; Nj,30ml/phút 100 mesh, cột thủy tinh (2m X 3mm) GD 3% SE-30, Chromosorb G 80 120°C phút đến 260°C, 107phíit lOOmesh (dược rừa acid xử lý bang phút; Nj, 40mI/phíit Chất tham dimethyl dicloro silan), cột thủy tinh chiếu: n-ClsHw 2m X 3mm GE 2% SP-2110 1% SP-2510-DA, 120 - 250°C, 16°/phíit; N2, 50rnl/phút Chất supelcoporl 100 - 120mesh, cột thủy tham chiếu: phenytoin tinh (Im X 2mm) GF Poly A103, Chromosorb w FIP 80 200°C; 1% 60ml/phiít 100 mesh, cột thủy tinh (Im X 4mm) 3% 2,5% OV-17, Cliromosorb G 80 lOOmesh (rửa acid, xử lý 100 - 300’C; Nj,45ml/phiit GG dimethyỉdicloro silan), cột thủy linh 2m X 4mm Chất mang bất hoạt GH 3% SE-30/Gas-Chrom Q 100 - 120mesh, 100 - 320°C, 4n/phiít; Nj,30ml/phút cột thủy tinh (2m X 2mm) GI 0,3% Carbowax 20M, Carbopak c 80 - 35"c phút đến 175nc, 5°/phút tối thiểù phứt; N2, 30ml/phút lũũmesh, cột thủy tinh (2m X 2mm) 269 Hệ Cột Nhiệt độ, khí mang, detector GJ 5% OV-17, Gas-Clirom Q 80 -100 mesh, 250°C; N2,30m!/phút cột thủy tinh (1,5m X 2mm) GK 3% OV-17, Gas - Chrom Q 80 -100 mesh, 100 - 260°C, 10°/phút; Nj, 50ml/phũt; PID tách NPD Chất tham chiếu: cafein Un X ốrnm GL HP1 (methyl-PSX) mao quản silica hợp (12m X 0,2mm, 0,33f.tm) 100“C phút dến 310°C, 30°/phút phút Bộ tiêm mẫu: 280uC, không tách; He, Iml/phút 3% SP2.250, Supelcoport 80 -100 mesh, 2Ố5°C; He, 25ml/phút; NPỌ Chất tham cột thủy tinh (3,1m X 2mm) chiếu: iprindol GM HP-50 + mao quản silica hợp 250°C; He, 7ml/phđt; NPD Chất tham • (25m X 0,53mm, Ij-tm) chiêu: iprindol ' Supelcovvax GN GO GP GX GY 10 (10m X Ó,25mm, 50°C phút, đến 280°C, 27phút; 0,25|.im) He, 25cm/s SPB-5 (5%-phenyl-PSX, X-5) (30m X 75°c phút đến 200nC, 40/phtìt; 0,25mm, 0,25).im) He, 25cm/s HP1 (methyl-PSX) mao qùàn silica IOO°C phút đến 310°C, 307phút phút Bộ tiêm mẫu: 280°C, hợp (12m X 0,2mm, 0,33|.im) khơng tách; He, Iml/phút 5%-píienyl-PSX (X-5) (25m X 0,2mm, 230 - 320°C, 35u/phút (các thuốc rửa giải đẳng nhiệt); He, Iml/phtít 0;33|xm) Methyl-PSX (X-l) (25m X ọ,22mm, 130 - Wc, 40°/phút (rong phút; ạ, 0,1pm) Iml/phút Mao quàn silica hợp liên kết DB- 180^3 - 230