Phân tích hoạt chất sinh học và khả năng kháng oxy hóa của dịch trích cây trâm ổi (Lantana camara)

Nghiên cứu Phân tích hoạt chất sinh học và khả năng kháng oxy hóa của dịch trích cây trâm ổi (Lantana camara) phân tích một số hợp chất có hoạt tính sinh học và khả năng kháng oxy hóa của cao chiết lá cây trâm ổi. Kết quả nghiên cứu là tiền đề cho quá trình sản xuất các sản phẩm có khả năng hỗ trợ và điều trị bệnh. Mời các bạn cùng tham khảo!

TẠP CHÍ KHOA HỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC TRÀ VINH, SỐ 40, THÁNG 12 NĂM 2020 DOI: 10.35382/18594816.1.40.2020.618 PHÂN TÍCH HOẠT CHẤT SINH HỌC VÀ KHẢ NĂNG KHÁNG OXY HÓA CỦA DỊCH TRÍCH CÂY TRÂM ỔI (Lantana camara) Nguyễn Phạm Tuấn1 , Bằng Hồng Lam2 , Nguyễn Thị Bảo Trân3 , Nguyễn Phạm Tú4 ANALYSIS OF BIOACTIVE COMPOUNDS AND ANTIOXIDANT ACTIVITY OF Lantana camara LEAVES EXTRACT Nguyen Tam Tuan1 , Bang Hong Lam2 , Nguyen Thi Bao Tran3 , Nguyen Pham Tu4 Tóm tắt – Nghiên cứu phân tích số hợp chất có hoạt tính sinh học khả kháng oxy hóa cao chiết trâm ổi Kết nghiên cứu tiền đề cho trình sản xuất sản phẩm có khả hỗ trợ điều trị bệnh Cao trâm ổi chiết xuất theo phương pháp ngâm dầm với dung môi (nước, ethanol 80o , methanol) kết hợp với sóng siêu âm Khả kháng oxy hóa xác định phương pháp DPPH; hàm lượng phenolic, flavonoid, polysaccharide tannin xác định phương pháp quang phổ Kết cho thấy, độ ẩm trâm ổi đạt 67,8% hiệu suất trích cao trâm ổi khoảng 4,29% – 6,13% Cao chiết trâm ổi có diện hợp chất sinh học alkaloid, flavonoid, steroid, saponin, tannin phenol Hàm lượng phenolic, flavonoid, polysaccharide tannin cao chiết trâm ổi 251,52 mg gallic acid/g, 41,58 mg quercetin/g cao, 11,06 mg GE/g cao 34,44 mg tannic acid/g cao Cao chiết trâm ổi có khả kháng oxy hóa thử nghiệm phương pháp DPPH với giá trị IC50 cao chiết dung môi nước, ethanol 800, methanol 100% 259,11 µg/mg, 150,29 µg/mg, 75,43 µg/mg Kết nghiên cứu cho thấy, nguyên liệu trâm ổi chứa nhiều hoạt chất có hoạt tính sinh học có khả kháng oxy hóa nguồn nguyên liệu tiềm cho nghiên cứu ứng dụng Từ khóa: trâm ổi, DPPH, flavonoid, kháng oxy hóa, polysaccharide, phenolic Abstract – The study was conducted to analyze some of the bioactive compounds and the antioxidant capacity of Lantana camara leaves extract This research was a prerequisite for the production of products with capability of supporting and treating diseases L camara leaves extract was extracted by combining the immersion method with different solvents (water, ethanol 80o and methanol) and ultrasound Oxidation resistance was tested by DPPH method and the con- 1,4 Trung tâm Công nghệ Sinh học tỉnh An Giang Đại học An Giang, Đại học Quốc gia Thành phố Hồ Chí Minh Ngày nhận bài: 06/9/2020; Ngày nhận kết bình duyệt: 03/12/2020; Ngày chấp nhận đăng: 25/12/2020 Email: ngphamtuan1983@gmail.com An Giang Biotechnology center An Giang University, Viet Nam National University Ho Chi Minh City Received date: 06th September 2020; Revised date: 03rd December 2020; Accepted date: 25th December 2020 2,3 Trường 70 TẠP CHÍ KHOA HỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC TRÀ VINH, SỐ 40, THÁNG 12 NĂM 2020 công nghiệp thực phẩm mĩ phẩm Tuy nhiên, chất gây tác dụng phụ sử dụng liên tục thời gian dài Do đó, người ta hướng tới sử dụng chất chống oxy hố có nguồn gốc tự nhiên để thay chất tổng hợp Chất chống oxy hố tự nhiên tìm thấy thực vật, động vật, tảo [1] Cây trâm ổi (Lantana camara L.) loại có nguồn gốc từ châu Phi châu Mĩ Cây trâm ổi trồng làm cảnh nhiều quốc gia xem dược liệu quan trọng giới Cây trâm ổi sử dụng thảo dược dân gian để điều trị số bệnh chống viêm, kháng khuẩn chống oxy hóa Cây trâm ổi có khả hỗ trợ điều trị bệnh có chứa hợp chất có hoạt tính sinh học flavonoid, anthocyanin, alkaloids, flavon, isoflavone, coumarin, lignans, isocatechin, catechin, tannin, saponin triterpenoids Ngoài ra, tinh dầu từ trâm ổi sử dụng chất chống oxy hóa, có khả kháng viêm kháng khuẩn [3] Việc sử dụng thuốc có hàm lượng chất chống oxy hóa cao xem phương pháp trị liệu hiệu cho tổn thương gan mơ hình động vật thực nghiệm người Bên cạnh đó, chế độ ăn ảnh hưởng nhiều đến sức khỏe Một số nghiên cứu cho thấy, hợp chất chống oxy hóa có nguồn gốc từ thực vật thuộc loại hợp chất phenol, flavonoid, tannin, vitamin carotenoids [2] Nghiên cứu thực nhằm phân tích hàm lượng phenolic, flavonoid, polysaccharide, tannin khả kháng oxy hóa cao chiết trâm ổi góp phần tạo nguồn nguyên liệu cho q trình sản xuất sản phẩm có khả hỗ trợ điều trị bệnh tent of phenolic, flavonoid, polysaccharide, tannin were determined by the spectrophotometer method The results showed that the moisture content was 67.8% and extraction efficiency of L.camara leaves ranged from 4.29% to 6.13% The extract of L camara leaves contained biological compounds such as alkaloids, saponin, flavonoids, steroids, tannins and phenols The phenolic, flavonoid, polysaccharide and tannin content of L camara leaves per g of dry weight were 251.52 mg gallic acid/g; 41.58 mg quercetin/g; 11.06 mg GE/g and 34.44 mg tannic acid/g, respectively L.camara leaves has antioxidant ability by DPPH method with IC50 value of water, ethanol 800 and methanol 259.11 µg/mg; 150.29 µg/mg; 75.43 µg/mg, respectively The results indicated that L camara leaves contains many anti-oxidative bioactive ingredients, which were potential materials for further research and applications Keywords: antioxidant, DPPH, flavonoid, Lantana camara, phenolic, polysaccharide I PHẦN A: LĨNH VỰC THỰC VẬT – SINH HÓA MỞ ĐẦU Gốc tự nguồn gốc lão hóa bệnh tật Gốc tự sinh tích lũy thể theo độ tuổi trình chuyển hóa tự nhiên từ mơi trường Chất kháng oxy hóa chất có khả ngăn chặn phản ứng oxy hoá gốc tự xảy tế bào Chất quan tâm, nghiên cứu nhà khoa học ngồi nước Chất kháng oxy hố tổng hợp từ hai nguồn: nhân tạo tự nhiên Các chất chống oxy hoá nhân tạo, BHA BHT, thường sử dụng 71 TẠP CHÍ KHOA HỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC TRÀ VINH, SỐ 40, THÁNG 12 NĂM 2020 II loại dung môi khác (ethanol 80o , methanol 100% nước) với tỉ lệ dung môi nguyên liệu : 10 (w/v) đánh sóng siêu âm nhiệt độ 50o C 12 để yên tối 36 Sau 72 giờ, hỗn hợp tiến hành lọc li tâm với tốc độ 5.000 vòng/phút 20 phút, thu phần dịch bỏ phần cặn Phần dịch tiến hành cô quay chân không để đuổi dung môi máy cô quay chân không nhiệt độ 50o C Dịch lọc sau cô quay chân không đông khô máy đông khô thu cao khô bảo quản nhiệt độ -20o C tiến hành thí nghiệm 2) Định tính số hợp chất sinh học có cao chiết trâm ổi: Chúng ta tiến hành xác định số hợp chất cao chiết trâm ổi theo Yadav [4], Pieme [5], Yadav and Agarwala [6], Dubois [7], Kavitha and Indira [8] alkaloid, flavonoid, saponin, steroid,terpenoid, tanin phenol Phân tích hàm lượng flavonoid tổng cao chiết trâm ổi Hàm lượng flavonoid tổng tiến hành theo mô tả Pieme [5]: lấy 10 mg quercetin hòa tan mL ethanol 80%, sau pha lỗng nồng độ 25 – 400 µg/mL Hút 0,1 mL quercetin, thêm vào 0,3 mL nước cất, 0,03 mL NaNO2 5% Ủ 05 phút 25o C, thêm 0,03 mL AlCl3 10% Ủ thêm 05 phút, sau cho thêm 0,2 mL NaOH mM Thêm nước cất để tổng thể tích mL Đo bước sóng 510 nm Tiến hành tương tự với cao chiết trâm ổi Hàm lượng flavonoid tổng xác định theo công thức: C = c ∗V /m C: hàm lượng flavonoid tổng (mg quercetin/g chiết xuất), c: giá trị x từ đường chuẩn với quercetin (mg/mL), V: thể tích dịch chiết (mL), m: khối lượng cao chiết có V (g) TỔNG QUAN TÀI LIỆU Chất kháng oxy hoá chất giúp ngăn chặn phản ứng oxy hoá gốc tự xảy tế bào Gốc tự nguyên nhân gây bệnh tiểu đường, đục thuỷ tinh thể, Alzheimer, bệnh tim mạch ung thư [2] Chất kháng oxy hố tự nhiên tìm thấy thực vật, động vật, tảo Xu hướng giới Việt Nam tìm hợp chất thiên nhiên có khả kháng kháng oxy hóa, hợp chất thiên nhiên có ưu điểm gây tác dụng phụ hợp chất hóa học tổng hợp Việt Nam có nhiều loại dược liệu chứa hợp chất thiên nhiên có hoạt tính kháng oxy hóa, kháng khuẩn cao flavonoid có mơ, phenol flavonoid, đặc biệt quercetin ổi diếp cá, aloin có lô hội, taxol từ thông đỏ [3] III PHẦN A: LĨNH VỰC THỰC VẬT – SINH HÓA PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU A Vật liệu nghiên cứu Mẫu trâm ổi tiến hành thu thập nhà lưới Trung tâm Công nghệ Sinh học tỉnh An Giang Hóa chất thiết bị gồm máy đo quang phổ (Human, Hàn Quốc), máy đông khô (Christ, Đức), máy cô quay chân không (Eyala, Nhật Bản), quercetin, gallic acid, glucose (Sigma, Mỹ), hóa chất thiết bị cần thiết khác B Phương pháp nghiên cứu 1) Phương pháp tạo cao chiết trâm ổi: Lá trâm ổi tươi thu từ nhà lưới rửa đông khơ máy đơng khơ chân khơng Sau đó, mẫu trâm ổi nghiền thành bột mịn, 200 g bột trâm ổi ngâm dầm với 72 TẠP CHÍ KHOA HỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC TRÀ VINH, SỐ 40, THÁNG 12 NĂM 2020 Phân tích hàm lượng phenolic tổng cao chiết trâm ổi Hàm lượng phenolic tổng xác định theo mô tả Yadav and Agarwala [6]: chuẩn bị dung dịch gallic acid chuẩn (nồng độ – 100 µg/mL) Lần lượt cho mL dung dịch gallic acid vào 2,5 mL thuốc thử Folin-Ciocalteu 10% để phản ứng 05 phút; sau đó, thêm tiếp vào mL dung dịch Na2 CO3 2% Sau 45 phút phản ứng nhiệt độ phòng, độ hấp thụ xác định máy đo quang phổ bước sóng 765 nm Tương tự, mẫu cao chiết thực tương tự Hàm lượng phenolic tổng tính theo cơng thức: P = a ×V /m P: hàm lượng phenolic tổng (mg gallic acid/g cao chiết), a: giá trị x từ đường chuẩn với gallic acid (µg/mL), V: thể tích dung dịch cao chiết (mL), m: khối lượng cao chiết có thể tích V (g) Phân tích hàm lượng polysaccharide tổng cao chiết trâm ổi Hàm lượng polysachcharide cao chiết trâm ổi xác định dựa theo Dubois [7] Sử dụng glucose làm chất chuẩn đối chiếu (0, 0,2, 0,4, 0,6 0,8 mg/mL) Phản ứng tiến hành cách cho mL dung dịch glucose thêm mL dung phenol 5% Sau đó, thêm vào hỗn hợp mL dung dịch H2 SO4 đậm đặc, phản ứng mười phút tiến hành đo độ hấp thu bước sóng λ = 490 nm Chúng ta tiến hành tương tự mẫu cao chiết trâm ổi Hàm lượng polysaccharide tính tốn dựa đường chuẩn glucose Phân tích hàm lượng tannin cao chiết trâm ổi Hàm lượng tannin cao chiết trâm ổi xác định dựa theo phương pháp Kavitha and Indira [8]; đồng thời, chúng tơi có hiệu chỉnh cho phù hợp PHẦN A: LĨNH VỰC THỰC VẬT – SINH HĨA Chúng tơi sử dụng tannic acid làm chất chuẩn đối chiếu (0, 20, 40, 60, 80 100 µg/mL) Phản ứng tiến hành cách cho 0,1 mL dung dịch tannic acid bổ sung thêm 7,5 mL nước cất 0,5 mL thuốc thử Folin-Ciocalteu, thêm mL dung dịch Na2 CO3 35% bổ sung thêm nước cất đủ 10 mL, để phản ứng nhiệt độ phòng 30 phút Tiến hành đo độ hấp thu bước sóng λ = 700 nm Hàm lượng tannin tính theo cơng thức: P = a ×V /m P: hàm lượng phenolic tổng (mg tannic acid acid/g cao chiết), a: giá trị x từ đường chuẩn với tannic acid (µg/mL) V: thể tích dung dịch cao chiết (mL), m: khối lượng cao chiết có thể tích V (g) Phân tích khả kháng oxy hóa phương pháp DPPH Khảo sát khả ức chế gốc tự DPPH cao chiết trâm ổi thực theo phương pháp Shekhar and Anju [9], có hiệu chỉnh sau: mL cao chiết nồng độ khác phản ứng với mL dung dịch DPPH 0,1 M Để hỗn hợp phản ứng điều kiện nhiệt độ phòng 30 phút điều kiện tối để tránh tượng oxy hố Sau đó, hỗn hợp đo độ hấp thụ quang phổ bước sóng λ = 517 nm Khả ức chế gốc tự DPPH cao chiết trâm ổi xác định theo công thức sau: AA% = (Ao − A1 /A0 ) × 100 Trong đó, AA%: phần trăm ức chế gốc tự DPPH A0 : độ hấp thụ quang phổ mẫu đối chứng, A1 : độ hấp thụ quang phổ mẫu cao chiết Vitamin C chất chuẩn thực tương tự mẫu cao chiết 73 TẠP CHÍ KHOA HỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC TRÀ VINH, SỐ 40, THÁNG 12 NĂM 2020 sử dụng nhiều q trình li trích hợp chất có hoạt tính sinh học từ thực vật nên hiệu suất trích cao đạt cao C Phương pháp thống kê Các số liệu xử lí phần mềm Excel phần mềm Statghraphics 16.0 Sự khác biệt giá trị trung bình kiểm tra theo phép thử Duncan LSD IV PHẦN A: LĨNH VỰC THỰC VẬT – SINH HĨA B Định tính số hợp chất sinh học có cao chiết trâm ổi KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Kết định tính cao chiết trâm ổi phương pháp hóa học cho thấy, cao chiết trâm ổi có chứa hợp chất alkaloid, flavonoid, saponin, steroid, terpenoid, tannin phenol (Bảng 2) Kết tương tự nghiên cứu Akumu [11] Sushama [12] Hai tác giả cho rằng, dịch trích trâm ổi có chứa hợp chất có hoạt tính sinh học alkaloid, flavonoid, saponin, steroid, terpenoid, tannin phenol A Phương pháp tạo cao chiết trâm ổi Để đánh giá hiệu phương pháp trích cao, người ta thường dựa hiệu suất trích cao Hiệu suất trích cao phản ánh tối ưu việc kết hợp điều kiện khác phương pháp li trích Quy trình trích cao chiết trâm ổi thực với nguyên liệu ban đầu 200 gram (khô) Độ ẩm trâm ổi 64,87% (Bảng 1) Hiệu suất trích li cao chiết có khác biệt dung mơi sử dụng nghiên cứu Hiệu suất chiết cao nước đạt 4,29%, đó, hiệu suất chiết cao ethanol methanol đạt 5,71% 6,13% Quá trình tạo cao chiết từ loại dung mơi khác cho hiệu suất trích li khác (Bảng 1) Sự khác biệt yếu tố sau: (i) sử dụng nước làm loại dung mơi để li trích mẫu trích nhiễm nhiều tạp chất acid hữu cơ, đường protein tan nước ảnh hưởng tới trình định tính hay định lượng hợp chất thiên nhiên; (ii) dung môi ethanol 80% sử dụng cho trình li trích tạo mơi trường tối ưu cho việc li trích, tăng tiếp xúc mẫu dung mơi, tăng hiệu suất trích li bảo quản mẫu khỏi vi sinh vật [10] Ngoài ra, sử dụng cồn tuyệt đối giảm hiệu suất chiết cao ethanol khó thấm vào mẫu; (iii) đó, dung mơi methanol 100% dung mơi C Phân tích hàm lượng phenolic tổng cao chiết trâm ổi Những hợp chất phenolic nhóm lớn, chúng có tác dụng chống ung thư, kháng viêm, kháng khuẩn, kháng oxy hóa, bảo vệ tim mạch; đồng thời, giúp tiêu thụ tốt thức ăn [13] Hàm lượng phenolic tổng phân tích phương pháp quang phổ đường chuẩn y = 0,0049x + 0,0127 với hệ số R2 = 0,9985 (Hình 2a) Hàm lượng phenolic tổng có khác biệt loại dung mơi trích li tạo cao chiết trâm ổi (Bảng 3) Hàm lượng phenolic thấp cao chiết trâm ổi nước 205,29 mg gallic acid/g cao chiết, hàm lượng phenolic cao chiết ethanol đạt 220,88 mg gallic acid/g cao chiết Cao hàm lượng phenolic cao chiết methanol đạt 251,52 mg gallic acid/g cao chiết 74 TẠP CHÍ KHOA HỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC TRÀ VINH, SỐ 40, THÁNG 12 NĂM 2020 PHẦN A: LĨNH VỰC THỰC VẬT – SINH HÓA Bảng 1: Kết phân tích độ ẩm, hiệu suất trích cao trâm ổi Bảng 2: Phân tích định tính hợp chất sinh học cao chiết trâm ổi (Ghi chú: “+”: dương tính, “-”: âm tính) Hình 1: Đường chuẩn quercetin (a) đường chuẩn glucose (b) Hình 2: Đường chuẩn gallic acid (a) đường chuẩn tannin acid (b) 75 TẠP CHÍ KHOA HỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC TRÀ VINH, SỐ 40, THÁNG 12 NĂM 2020 Kết nghiên cứu Sanjiv [14] cho thấy, hàm lượng phenolic cao chiết bốn loại trâm ổi Ấn Độ cao với hàm lượng 232,99 mg gallic acid/g cao chiết trích li dung môi methanol Đồng thời, nghiên cứu Mortada [3] cho thấy, hàm lượng phenolic cao chiết trâm ổi đạt cao với hàm lượng 180,30 mg gallic acid/g trích li với dung mơi methanol Sự khác biệt hàm lượng phenolic so với nghiên cứu Sanjiv [14] khác nguồn gốc trồng phương pháp trích li có hỗ trợ sóng siêu âm Các phenolic acid caffeic acid rosmarinic acid báo cáo hợp chất phong phú từ phận trâm ổi trích li methanol [15], [16] PHẦN A: LĨNH VỰC THỰC VẬT – SINH HĨA ứng, điều trị bệnh thối hóa thần kinh, kháng oxy hóa [17] Flavonoid tổng cao chiết trâm ổi từ dung môi khác cho hàm lượng khác (Bảng 3) Hàm lượng flavonoid tổng phân tích phương pháp quang phổ đường chuẩn y = 0,0054x + 0,0185 với hệ số R2 = 0,9992 (Hình 1a) Cụ thể, hàm lượng flavonoid tổng cao cao chiết trâm ổi methanol (41,58 mg quercetin/g cao chiết), cao chiết trâm ổi ethanol (38,29 mg quercetin/g cao chiết) thấp cao chiết trâm ổi nước (19,25 mg quercetin/g cao chiết) Kết cao so với nghiên cứu Sanjiv [14], hàm lượng flavonoid cao chiết trâm ổi đạt cao 25,22 mg quercetin/g cao chiết trích li dung mơi methanol bốn loại trâm ổi thu thập Ấn Độ Ngược lại, theo Mortada [3], hàm lượng flavonoid cao chiết trâm ổi đạt cao 63,77 mg quercetin/g cao chiết trích li với dung mơi methanol D Phân tích hàm lượng flavonoid tổng cao chiết trâm ổi Flavonoid nhóm lớn hợp chất polyphenolic có cấu trúc benzene – γ – pyrone chúng tổng hợp thơng qua chu trình phenylpropanoid Nhiều báo cáo cho thấy rằng, q trình chuyển hóa thứ cấp hợp chất phenoilic tự nhiên bao gồm flavonoid thể hoạt tính dược lí đa dạng Các hợp chất flavonoid có nhiều ích lợi cho sức khỏe người Các nhóm chức hydroxy flavonoid có khả chống oxy hóa việc loại bỏ gốc tự kết hợp với ion kim loại Flavonoid cịn có khả tăng cường hệ enzyme, kháng khuẩn, virus, bệnh tim mạch, ung thư bệnh liên quan tới lão hóa Flavonoid biết chất có tác dụng hạ đường huyết phục hồi tế bào β tuyến tụy, chống viêm, kháng khuẩn, kháng virus, chống dị E Phân tích hàm lượng polysaccharide tổng cao chiết trâm ổi Những nhóm hợp chất polysaccharide có tác dụng chống ung thư, giảm đường máu, ngăn ngừa thối hóa tế bào, thiết lập hệ thống miễn dịch, giải độc thể [18] Hàm lượng polysaccharide tổng cao chiết trâm ổi từ dung mơi khác khác (Bảng 3) Hàm lượng polysaccharide tổng phân tích phương pháp quang phổ đường chuẩn y = 1,0415x + 0,0068 với hệ số R2 = 0,989 (Hình 1b) Cụ thể, hàm lượng polysaccharide tổng cao 76 TẠP CHÍ KHOA HỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC TRÀ VINH, SỐ 40, THÁNG 12 NĂM 2020 PHẦN A: LĨNH VỰC THỰC VẬT – SINH HĨA Bảng 3: Kết phân tích hàm lượng phenolic tổng, flavonoid tổng, polysaccharide tổng tannin cao chiết trâm ổi (Ghi chú: Số liệu trình bày dạng trung bình sai số chuẩn, thống kê mức ý nghĩa 5%.) chiết trâm ổi (Bảng 3) Hàm lượng tannin thấp cao chiết trâm ổi nước đạt 15,53 mg tannic acid/g cao khô, cao chiết trâm ổi ethanol đạt 26,01 mg tannic acid/g cao khô cao lượng tannin cao chiết methanol đạt 34,44 mg tannic acid/g cao khô cao chiết trâm ổi methanol (11,06 mg GE/g cao chiết), cao chiết trâm ổi ethanol (9,68 mg GE/g cao chiết) thấp cao chiết trâm ổi nước (4,94 mg GE/g cao chiết) F Phân tích hàm lượng tannin cao Kết cao so với nghiên cứu Vedavathi [20], hàm lượng tannin tổng trâm ổi trích li dung mơi ethanol điều kiện lạnh, nóng sóng siêu âm 4,67 mg tannic acid/g cao khô, 6,92 mg tannic acid/g cao khô 7,29 mg tannic acid/g cao khô Sự khác biệt hàm lượng tannin tổng trâm ổi do: (i) phương pháp trích cao giống cho kết khác khác biệt yếu tố giai đoạn sinh trưởng thời gian lấy mẫu thí nghiệm [21]; (ii) hợp chất có hoạt tính sinh học thực vật bậc cao vị trí khác có hàm lượng, thành phần khác Tóm lại, dung mơi methanol 100% cho hiệu chiết trâm ổi Theo Amarowicz [19], tannin khơng chất kháng oxy hố sơ cấp cách cho nguyên tử hydro hay electron, mà tannin cịn hoạt động chất oxy hố thứ cấp với khả chelate hoá ion kim loại Fe (II) làm chậm oxy hoá cách can thiệp vào phản ứng Fenton Ngoài ra, tannin ngăn cản oxy hố chất béo thơng qua ức chế cyclooxygenase Hàm lượng tannin tổng phân tích phương pháp quang phổ đường chuẩn y = 0,0128x + 0,0122 với hệ số R2 = 0,9899 (Hình 2b) Hàm lượng tannin tổng có khác biệt loại dung mơi tiến hành trích li tạo cao 77 TẠP CHÍ KHOA HỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC TRÀ VINH, SỐ 40, THÁNG 12 NĂM 2020 PHẦN A: LĨNH VỰC THỰC VẬT – SINH HÓA Bảng 4: Hiệu kháng oxy hóa trích li hợp chất sinh học cao chiết trâm ổi (phenolic, flavonoid, polysaccharide tannin) cho hàm lượng hoạt chất cao với hàm lượng 251,52 mg gallic acid/g cao chiết, 41,58 mg quercetin/g cao chiết, 11,06 mg GE/g cao chiết 34,44 mg tannic acid/g cao chiết phương pháp DPPH vitamin C G Phân tích khả kháng oxy hóa (Ghi chú: Số liệu trình bày cao chiết trâm ổi dạng trung bình sai số chuẩn DPPH gốc tự có chứa nguyên tử nitrogen bền trung tâm Vì vậy, nhận electron hay gốc hydrogen để hình thành phân tử nghịch từ bền Hợp chất có hoạt động kháng oxy hố mạnh khả cho hydrogen cao Gốc DPPH phản ứng với chất khử phù hợp nhận electron Từ đó, màu dung dịch DPPH bị dần từ tím sang vàng phụ thuộc vào số electron nhận [22] Vitamin C sử dụng chất chuẩn vitamin C chất kháng oxy hóa mạnh, có khả loại bỏ gốc tự cao Hiệu khử gốc tự vitamin C thực nồng độ khác (0 – 0,1 µg/mL) Phần trăm khử gốc tự vitamin C đạt cao nồng độ 100 µg/mL, đạt hiệu 85,27% Kế đến nồng độ 80 µg/mL với hiệu suất 71,15% thấp nồng độ 20 µg/mL, phần trăm khử gốc tự 23,28% (Bảng 4) Tiến hành vẽ đường biểu diễn thể phần trăm ức chế gốc tự do, phương trình đường chuẩn y = 0,8383x + 3,2718; từ đó, ta suy giá trị IC50 vitamin C 55,73 µg/mL Hiệu khử gốc tự cao chiết nước trâm ổi thực nồng độ khác (0 – 300 µg/mL) Phần thống kê mức ý nghĩa 5%.) trăm khử gốc tự cao chiết nước đạt cao nồng độ 300 µg/mL với hiệu 57,75% Kế đến nồng độ 250 µg/mL với hiệu suất 47,72% thấp nồng độ 50 µg/mL với phần trăm khử gốc tự 8,11% (Bảng 5) Chúng ta tiến hành vẽ đường biểu diễn phần trăm ức chế gốc tự phương trình đường chuẩn y = 0,1999x – 1,7973 có R2 = 0,975; từ đó, ta suy giá trị IC50 cao chiết nước trâm ổi 259,11 µg/mL Tương tự, hiệu khử gốc tự cao chiết ethanol trâm ổi thực nồng độ khác (0 – 300 µg/mL) Phần trăm khử gốc tự cao chiết ethanol đạt cao nồng độ 300 µg/mL (93,11%) Kế đến nồng độ 250 µg/mL với hiệu suất 82,71% thấp nồng độ 50 µg/mL với phần trăm khử gốc tự 22,18% (Bảng 5) Tiến hành vẽ đường biểu diễn thể phần trăm ức chế gốc tự phương trình đường chuẩn y = 0,3142x + 2,71 có R2 = 0,9786; ta suy giá trị IC50 cao chiết ethanol trâm ổi 150,50 µg/mL 78 TẠP CHÍ KHOA HỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC TRÀ VINH, SỐ 40, THÁNG 12 NĂM 2020 PHẦN A: LĨNH VỰC THỰC VẬT – SINH HÓA Bảng 5: Hiệu kháng oxy hóa phương pháp DPPH cao chiết trâm ổi (Ghi chú: Số liệu trình bày dạng trung bình sai số chuẩn thống kê mức ý nghĩa 5%.) Bảng 6: Giá trị IC50 vitamin C cao Hiệu khử gốc tự cao chiết methanol trâm ổi thực nồng độ khác (0 – 300 µg/mL) Phần trăm khử gốc tự cao chiết methanol đạt cao nồng độ 300 µg/mL với hiệu 99,13% Kế đến nồng độ 250 µg/mL với hiệu suất 87,17% thấp nồng độ 50 µg/mL với phần trăm khử gốc tự 45,18% (Bảng 5) Chúng ta tiến hành vẽ đường biểu diễn thể phần trăm ức chế gốc tự phương trình đường chuẩn y = 0,221x + 33,33 có R2 = 0,9845; ta suy giá trị IC50 cao chiết ethanol trâm ổi 75,43 µg/mL chiết trâm ổi phương pháp DPPH thể lí giải sau: vitamin C sản phẩm thương mại có độ tinh cao, cao chiết trâm ổi qua q trình lọc li trích chứa nhiều tạp chất nên hiệu thấp Nghiên cứu Sanjiv [14] thử khả kháng oxy hóa cao chiết methanol bốn loại trâm ổi thu Ấn Độ phương pháp DPPH cho giá trị IC50 33,30, 40,32, 475,33, 927,16 µg/mL Trong nghiên cứu Mortada [3], cao chiết methanol trâm ổi kiểm tra khả kháng Giá trị IC50 giá trị mà ức chế 50% gốc tự DPPH Giá trị IC50 cao chiết trâm ổi vitamin C xác định trình bày Bảng Giá trị IC50 cao chiết nước trâm ổi cao giá trị IC50 vitamin C 46,63 lần Trong đó, giá trị IC50 cao chiết ethanol 80o trâm ổi cao giá trị IC50 vitamin C 2,7 lần Cuối cùng, giá trị IC50 cao chiết methanol 100% trâm ổi cao giá trị IC50 vitamin C 1,35 lần Điều có 79 TẠP CHÍ KHOA HỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC TRÀ VINH, SỐ 40, THÁNG 12 NĂM 2020 oxy hóa phương pháp DPPH cao giá trị IC50 47,33 µg/mL Cao chiết trâm ổi có khả kháng oxy hóa phương pháp DPPH cao chiết có chứa hợp chất có hoạt tính sinh học flavonoid, alkaloid, tannin phenol Các nhóm hợp chất phenolic flavonoid hợp chất oxy hóa mạnh hợp chất phenolic flavonoid có khả hấp thụ trung hòa gốc tự khử phản ứng oxy hóa [23] PHẦN A: LĨNH VỰC THỰC VẬT – SINH HÓA LỜI CẢM ƠN Chân thành cảm ơn Trung tâm Công nghệ Sinh học tỉnh An Giang, Sở Khoa học Công nghệ An Giang tạo điều kiện để thực nghiên cứu TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Prior RL, X Wu, Schaich K Standardized methods for the determination of antioxidant capacity and phenolics in foods and dietary supplements Journal of Agricultural V and Food Chemistry 2005; 53(10):4290– KẾT LUẬN 4302 Lá trâm ổi nguồn ngun liệu chứa nhiều hợp chất có hoạt tính sinh học có khả ứng dụng nhiều lĩnh vực Hàm lượng phenolic, flavonoid, polysaccharide tannin cao chiết trâm ổi 117,15 mg gallic acid/g, 207,19 mg quercetin/g cao khô, 118,26 mg GE/g cao khô 118,26 mg tannic acid/g cao khô Cao chiết trâm ổi có khả kháng oxy hóa phương pháp DPPH với giá trị IC50 nước, ethanol 80o , methanol 100% 259,11 µg/mg, 150,29 µg/mg, 75,43 µg/mg Nghiên cứu đánh giá hiệu sinh học cao chiết trâm ổi số bệnh đái tháo đường, kháng khuẩn, kháng nấm điều kiện in vitro in vivo [2] Raghavendra M, Reddy AM, Yadav PR, Raju AS, Kumar LS Comparative studies on the in vitro antioxidant properties of methanolic leafy extracts from six edible leafy vegetables of India Asian Journal of Pharmaceutical and Clinical Research 2013; 6(3):96–99 [3] Mortada ME, Hashash MM, Afaf AA, Abdel-Hady H, Abdel-Lateef EE, Morsi EA Total phenolic and flavonoid contents and antioxidant activity of Lantana camara and Cucurbita pepo (squash) extracts as well as gc-ms analysis of Lantana camara essential oils World Journal of Pharmaceutical Research 2017; 6(1):137–153 [4] Yadav M, Chatterji S, Watal G Preliminary phytochemical screening of six medicinal plants used in traditional medicine International Journal of Pharma and Biosciences 2014; 6(5):539–542 [5] Pieme C, Joseph N, Claude N, Bruno M, Borgia N, Vicky M, Jacqueline Mi, Jeanne N Syzyguim guineense Extracts Show Antioxidant Activities and Beneficial Activities on Oxidative Stress Induced by Ferric 80 TẠP CHÍ KHOA HỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC TRÀ VINH, SỐ 40, THÁNG 12 NĂM 2020 [13] Chloride in the Liver Homogenate Antioxi- tional Journal of Molecular Sciences 2007; Yadav RNS, Agarwala M Phytochemical 8:950–988 analysis of some medicinal plants Journal [14] of Phytology 2011; 3(12):10–14 [7] nol in different varieties of Lantana camara leaves BMC Research Notes 2014; 7:560– mination of sugars and related substances 569 Analytical Chemistry 1956; 28:350–356 [15] [10] Millogo-Rasolodimby J, Nacoulma OG tion of total phenolic, flavonoids, tannin and Polyphenolic composition of Lantana ca- chlorophyll content of leaves of Strobilan- mara and Lippia chevalieri, and their antiox- thes Kunthiana (Neelakurinji) Journal of idant and antimicrobial activities I Journal Medicinal Plants Studies 2016; 4(4):282– of Phytomedicine 2012; 4:115–124 [16] the correlation with major phenolic com- ity by DPPH Radical Scavenging Method pounds, anthocyanin, and tocopherol con- of Ageratum conyzoides Linn Leaves tent in various extracts from the wild edi- American Journal of Ethnomedicine 2014; ble Boletus edulis mushroom BioMed Re- 1(4):244–249 search International 2013: 1–11 Bandar H, Hijazi A, Rammal H, Hachem [17] Harleen KS, Bimlesh K, Manoj S, Pardee S A, Saad A, Badran B Techniques for the A Review of Phytochemistry and Pharma- extraction of bioactive compounds from cology of Flavonoids Inter Pharmaceutica- Lebanese Urtica Dioica American Journal sciencia 2011; 1(1):25–35 [18] Nguyễn Văn Bình, Phạm Thị Phương, tics 2013; 6:507–513 Nguyễn Tá Lợi Nghiên cứu số yếu tố Akumu EO, Swamy A, Ngule MC, Obey ảnh hưởng đến q trình trích ly hàm lượng JK, Miyogo E Phytopharmacological eval- polysaccharide toàn phần nấm linh chi uation of Lantana camara leaves’ smoke đỏ Tạp chí Khoa học Công nghệ Đại học International Journal of Pharmacy and Bi- Thái Nguyên 2018; 180(04):3–8 ological Sciences 2014; 4(2):28–34 [12] Vamanu E, Nita S Antioxidant capacity and Shekhar TC, Anju G Antioxidant Activ- of Phytomedicine and Clinical Therapeu- [11] Bangou MJ, Almaraz-Abarca N, Zeba B, Kavitha CCI, Indira G Quantitative estima- 286 [9] Sanjiv K, Sandhir R, Ojha S 2014 Evaluation of antioxidant activity and total phe- Dubois M, Gilles K, Hamilton J, Rebers P, Smith F Colorimetric method for deter- [8] Han X, Shen T, Lou H Dietary Polyphenols and their biological significance Interna- dants 2014; 3(3):618–635 [6] PHẦN A: LĨNH VỰC THỰC VẬT – SINH HÓA [19] Amarowicz R Tannins: the new natural Sushama RR Preliminary phytochemical antioxidants? European Journal of Lipid screening of L camara, L., a major invasive Science and Technology 2007; 109(6):549– species of Kerala using different solvents 551 [20] Annals of plant Science 2017; 6(11):1794– Vedavathi T, Bhargavi K, Mythri K Estimation of flavonoid, phenolic content and free 1798 81 TẠP CHÍ KHOA HỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC TRÀ VINH, SỐ 40, THÁNG 12 NĂM 2020 radical scavenging activity of fresh unripe fruits of Lantana camara linn (verbenaceae) International Journal of Research in Pharmacology & Pharmacotherapeutics 2013; 2(1):286–294 [21] Weecharangsan W, Opanasopit P, Sukma M, Ngawhirunpat T, Sotanaphun U Antioxidative and neuroprotective activities of extracts from the fruit hulls Garcinia mangostana Linn Medicinal Principles and Practice 2006; 15:281–287 [22] Patel RM, Natvar JP In vitro antioxidant activity of coumarin compounds by DPPH, Super oxide and nitric oxide free radical scavenging methods Journal of Advanced Pharmacy Education & Research 2011; 1:52–68 [23] Nimse SB, Pal D Free radicals, natural antioxidants, and their reaction mechanisms Royal Society of Chemistry Advance 2015; 5(35):27986–28006 82 PHẦN A: LĨNH VỰC THỰC VẬT – SINH HÓA ... VẬT – SINH HÓA MỞ ĐẦU Gốc tự nguồn gốc lão hóa bệnh tật Gốc tự sinh tích lũy thể theo độ tuổi trình chuyển hóa tự nhiên từ mơi trường Chất kháng oxy hóa chất có khả ngăn chặn phản ứng oxy hoá... THỰC VẬT – SINH HĨA B Định tính số hợp chất sinh học có cao chiết trâm ổi KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Kết định tính cao chiết trâm ổi phương pháp hóa học cho thấy, cao chiết trâm ổi có chứa hợp chất alkaloid,... HỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC TRÀ VINH, SỐ 40, THÁNG 12 NĂM 2020 PHẦN A: LĨNH VỰC THỰC VẬT – SINH HÓA Bảng 1: Kết phân tích độ ẩm, hiệu suất trích cao trâm ổi Bảng 2: Phân tích định tính hợp chất sinh học