Phân tích hoạt chất sinh học và khả năng kháng oxy hóa của dịch trích cây dây cóc (Tinospora crispa Miers)

Nghiên cứu Phân tích hoạt chất sinh học và khả năng kháng oxy hóa của dịch trích cây dây cóc (Tinospora crispa Miers) được thực hiện nhằm phân tích hợp chất có hoạt tính sinh học và khả năng kháng oxy hóa của cao chiết thân cây dây cóc. Mời các bạn cùng tham khảo!

TẠP CHÍ KHOA HỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC TRÀ VINH, SỐ 40, THÁNG 12 NĂM 2020 DOI: 10.35382/18594816.1.40.2020.617 PHÂN TÍCH HOẠT CHẤT SINH HỌC VÀ KHẢ NĂNG KHÁNG OXY HÓA CỦA DỊCH TRÍCH CÂY DÂY CĨC (Tinospora crispa Miers) Nguyễn Phạm Tuấn1 , Bằng Hồng Lam2 , Nguyễn Thị Bảo Trân3 , Nguyễn Phạm Tú4 BIOACTIVE COMPOUNDS ANALYSIS AND ANTIOXIDANT ACTIVITIES OF Tinospora crispa MIERS STEM EXTRACT Nguyen Pham Tuan1 , Bang Hong Lam2 , Nguyen Thi Bao Tran3 , Nguyen Pham Tu4 Tóm tắt – Nghiên cứu thực nhằm phân tích hợp chất có hoạt tính sinh học khả kháng oxy hóa cao chiết thân dây cóc Kết nghiên cứu tiền đề cho q trình sản xuất sản phẩm có khả hỗ trợ điều trị bệnh Cao chiết thân dây cóc thực theo phương pháp ngâm dầm với dung môi (nước, ethanol 80o , methanol) kết hợp với sóng siêu âm Khả kháng oxy hóa tiến hành phương pháp DPPH hàm lượng phenolic, flavonoid, polysaccharide, tannin xác định phương pháp quang phổ Kết cho thấy, độ ẩm thân dây cóc đạt 61,09% hiệu suất trích cao thân dây cóc khoảng 3,69% – 6,95% Cao chiết thân dây cóc có diện hợp chất sinh học alkaloid, saponin, flavonoid, steroid, tannin phenol Hàm lượng phenolic, flavonoid, polysaccharide tannin thân dây cóc 318,91 mg gallic acid/g, 36,71 mg quercetin/g cao khô, 10,38 mg GE/g cao khô 38,42 mg tannic acid/g cao khơ Cao chiết thân dây cóc có khả kháng oxy hóa phương pháp DPPH với giá trị IC50 nước, ethanol 80o , methanol 113,69 µg/mg, 89,12 µg/mg, 62,19 µg/mg Nghiên cứu cho thấy, thân dây cóc chứa nhiều hoạt chất có hoạt tính sinh học có khả kháng oxy hóa Đây nguồn nguyên liệu tiềm cho nghiên cứu ứng dụng Từ khóa: dây cóc, flavonoid, kháng oxy hóa, phenolic, polysaccharide Abstract – The study was conducted to analyze some of the bioactive compounds and the antioxidant capacity of Tinospora crispa stem extract Tinospora crispa stem extract is a prerequisite for the production of products capable of supporting and treating diseases Tinospora crispa stem extract is made by immersion method with solvents (water, ethanol 80o and methanol) 1,4 Trung tâm Công nghệ Sinh học tỉnh An Giang Đại học An Giang, Đại học Quốc gia Thành phố Hồ Chí Minh Ngày nhận bài: 06/9/2020; Ngày nhận kết bình duyệt: 16/10/2020; Ngày chấp nhận đăng: 25/12/2020 Email: ngphamtuan1983@gmail.com 1,4 An Giang Biotechnology center 2,3 An Giang University, Viet Nam National University Ho Chi Minh City Received date: 06th September 2020; Revised date: 16th October 2020; Accepted date: 25th December 2020 2,3 Trường 58 TẠP CHÍ KHOA HỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC TRÀ VINH, SỐ 40, THÁNG 12 NĂM 2020 có nguồn gốc tự nhiên quan tâm nghiên cứu chất chống oxy hóa tổng hợp khơng cịn an tồn [2] Chất chống oxy hóa đóng vai trị quan trọng việc bảo vệ tế bào chống lại tổn thương phản ứng oxy hóa làm giảm tác dụng phụ gốc tự chức sinh lí bình thường người Các hợp chất phenolic chất chống oxy hóa, hoạt động chất khử gốc tự khả khử làm giảm nhóm hydroxyl [3] Hoạt động chống oxy hóa phenolic chủ yếu tính oxy hóa khử cho phép chúng hoạt động chất khử, chất khử hydro chất khử oxy nhóm đơn Dây cóc (Tinospora crispa) dây leo thân quấn, dài tới – m sử dụng để hỗ trợ điều trị bệnh theo kinh nghiệm dân gian Thân dây cóc sử dụng để điều trị bệnh khác tiểu đường, tăng huyết áp, kích thích thèm ăn xem chất chống kí sinh trùng người động vật ni [4] Dây cóc người dân sử dụng theo kinh nghiệm dân gian từ lâu Tuy nhiên, việc nghiên cứu công bố xác định hoạt chất có hoạt tính sinh học khả kháng oxy hóa thân dây cóc chưa quan tâm rộng rãi Vì vậy, nghiên cứu thực nhằm: (i) phân tích hàm lượng phenolic, flavonoid, polysaccharide, tannin; (ii) khả kháng oxy hóa cao chiết thân dây cóc (iii) góp phần tạo nguồn nguyên liệu cho q trình sản xuất sản phẩm có khả hỗ trợ điều trị bệnh and combined with ultrasound Antioxidant activities were tested using DPPH methods and phenolic, flavonoid, polysaccharide, tannin content were determined by the spectrophotometer method The results showed that the moisture content was 61.09% and high extraction efficiency of Tinospora crispa stem were between 3.69% and 6.95% respectively The extract of Tinospora crispa stem contains the presence of biological compounds such as alkaloids, flavonoids, saponin, steroids, tannins and phenols The phenolic, flavonoid, polysaccharide and tannin content of Tinospora crispa stem were 318.91 mg gallic acid/g dry; 36.71 mg quercetin/g dry; 10.38 mg GE/g dry and 38.42 mg tannic acid/g dry respectively Tinospora crispa stem has antioxidant ability by DPPH method with IC50 value of water, ethanol 80o and methanol 113.69 µg/mg; 89.12 µg/mg; 62.19 µg/mg, respectively Thus, the Tinospora crispa stem extract had bioactive compounds and antioxidant activities, is a potential source of raw materials for research and applications Keywords: antioxidant, flavonoid, phenolic, polysaccharide, Tinospora crispa I PHẦN A: LĨNH VỰC THỰC VẬT – SINH HÓA ĐẶT VẤN ĐỀ Cây thảo dược sử dụng nguồn dược liệu hỗ trợ, điều trị bệnh truyền từ hệ sang hệ khác Các sản phẩm tự nhiên có thuốc sử dụng làm nguồn dược liệu y học cổ truyền Một số thảo dược chứng minh có hiệu hỗ trợ điều trị bệnh theo phương pháp khoa học [1] Trong năm gần đây, việc sử dụng chất chống oxy hóa II TỔNG QUAN NGHIÊN CỨU Chất kháng oxy hoá chất giúp ngăn chặn phản ứng oxy hoá gốc tự xảy tế bào Gốc tự nguyên 59 TẠP CHÍ KHOA HỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC TRÀ VINH, SỐ 40, THÁNG 12 NĂM 2020 nhân gây bệnh tiểu đường, đục thuỷ tinh thể, Alzheimer, bệnh tim mạch ung thư [5] Chất kháng oxy hoá tổng hợp từ hai nguồn: nhân tạo tự nhiên Các chất kháng oxy hoá nhân tạo BHA BHT thường sử dụng công nghiệp thực phẩm mĩ phẩm Tuy nhiên, chất gây tác dụng phụ sử dụng thời gian dài Do đó, người ta hướng tới sử dụng chất kháng oxy hố có nguồn gốc tự nhiên khơng có tác dụng phụ để thay chất tổng hợp Chất kháng oxy hoá tự nhiên tìm thấy thực vật, động vật, tảo III PHẦN A: LĨNH VỰC THỰC VẬT – SINH HÓA lọc li tâm với tốc độ 5.000 vòng/phút 20 phút, thu phần dịch bỏ phần cặn Phần dịch tiến hành cô quay chân không để đuổi dung môi máy cô quay chân không nhiệt độ 50o C, đông khô máy đông khô thu cao khô bảo quản nhiệt độ -20o C, sau tiến hành thí nghiệm 2) Định tính số hợp chất sinh học có cao chiết thân dây cóc: Tiến hành xác định số hợp chất cao chiết thân dây cóc theo Yadav [6] alkaloid, flavonoid, steroid, saponin, terpenoid, tanin phenol 3) Phân tích hàm lượng flavonoid tổng cao chiết thân dây cóc: Hàm lượng flavonoid tổng tiến hành theo mô tả Pieme [7]: lấy 10 mg quercetin hòa tan mL ethanol 80%, sau pha lỗng nồng độ 25 – 400 µg/mL Hút 0,1 mL quercetin, thêm vào 0,3 mL nước cất, 0,03 mL NaNO2 5% Ủ 05 phút 25o C, thêm 0,03 mL AlCl3 10% Ủ thêm 05 phút, sau cho thêm 0,2 mL NaOH mM Thêm nước cất để tổng thể tích mL Đo bước sóng 510 nm Tiến hành tương tự với cao chiết thân dây cóc Hàm lượng flavonoid tổng xác định theo công thức: C = c ∗V /m C: hàm lượng flavonoid tổng (mg quercetin/g chiết xuất), c: giá trị x từ đường chuẩn với quercetin (mg/mL), V: thể tích dịch chiết (mL), m: khối lượng cao chiết có V (g) 4) Phân tích hàm lượng phenolic tổng cao chiết thân dây cóc: Hàm lượng phenolic tổng xác định theo mô tả Yadav and Agarwala [8]: chuẩn bị dung dịch gallic acid chuẩn (nồng độ – 100 µg/mL) Lần lượt cho mL dung dịch gallic acid vào 2,5 mL thuốc thử FolinCiocalteu 10% để phản ứng 05 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU A Vật liệu nghiên cứu Mẫu thân dây cóc tiến hành thu thập nhà lưới Trung tâm Công nghệ Sinh học tỉnh An Giang Hóa chất thiết bị gồm máy đo quang phổ (Human, Hàn Quốc), máy đông khô (Christ, Đức), máy cô quay chân không (Eyala, Nhật Bản), quercetin, gallic acid, glucose (Sigma, Mỹ), hóa chất thiết bị cần thiết khác B Phương pháp nghiên cứu 1) Phương pháp tạo cao chiết thân dây cóc: Thân dây cóc tươi thu từ nhà lưới rửa đông khô máy đông khô chân khơng Sau đó, mẫu thân dây cóc nghiền thành bột mịn, 200 g bột thân dây cóc ngâm dầm với loại dung môi khác (ethanol 80o , methanol nước) với tỉ lệ dung môi nguyên liệu : 10 (w/v), đánh sóng siêu âm nhiệt độ 50o C 12 để yên tối 36 Sau 72 giờ, hỗn hợp tiến hành 60 TẠP CHÍ KHOA HỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC TRÀ VINH, SỐ 40, THÁNG 12 NĂM 2020 phút; sau đó, thêm tiếp vào mL dung dịch Na2 CO3 2% Sau 45 phút phản ứng nhiệt độ phòng, độ hấp thụ xác định máy đo quang phổ bước sóng 765 nm Tương tự, mẫu cao chiết thực tương tự Hàm lượng phenolic tổng tính theo cơng thức: P = a ×V /m P: hàm lượng phenolic tổng (mg gallic acid/g cao chiết), a: giá trị x từ đường chuẩn với gallic acid (µg/mL), V: thể tích dung dịch cao chiết (mL), m: khối lượng cao chiết có thể tích V (g) 5) Phân tích hàm lượng polysaccharide tổng cao chiết thân dây cóc: Hàm lượng polysachcharide cao chiết thân dây cóc xác định dựa theo Dubois [9] Hàm lượng polysaccharide tính tốn dựa đường chuẩn glucose Sử dụng glucose làm chất chuẩn đối chiếu (0, 0,2, 0,4, 0,6 0,8 mg/mL) Phản ứng tiến hành cách cho mL dung dịch glucose thêm mL dung phenol 5% Sau đó, thêm vào hỗn hợp mL dung dịch H2 SO4 đậm đặc, phản ứng 10 phút tiến hành đo độ hấp thu bước sóng λ = 490 nm Tiến hành tương tự mẫu cao chiết thân dây cóc PHẦN A: LĨNH VỰC THỰC VẬT – SINH HĨA độ phòng 30 phút Tiến hành đo độ hấp thu bước sóng λ = 700 nm Hàm lượng tannin tính theo cơng thức: P = a ×V /m P: hàm lượng phenolic tổng (mg tannic acid acid/g cao chiết), a: giá trị x từ đường chuẩn với tannic acid (µg/mL) V: thể tích dung dịch cao chiết (mL); m: khối lượng cao chiết có thể tích V (g) 1) Phân tích khả kháng oxy hóa phương pháp DPPH: Phương pháp khảo sát khả ức chế gốc tự DPPH cao chiết thân dây cóc thực theo phương pháp Shekhar and Anju [11] hiệu chỉnh sau: mL cao chiết nồng độ khác phản ứng với mL dung dịch DPPH 0,1 M Hỗn hợp phản ứng điều kiện nhiệt độ phòng 30 phút điều kiện tối để tránh tượng oxy hố Sau đó, hỗn hợp đo độ hấp thụ quang phổ bước sóng λ = 517 nm Khả ức chế gốc tự DPPH cao chiết thân dây cóc xác định theo cơng thức sau: AA% = (Ao − A1 /Ao ) × 100 Trong đó, AA%: phần trăm ức chế gốc tự DPPH Ao : độ hấp thụ quang phổ mẫu đối chứng, A1 : độ hấp thụ quang phổ mẫu cao chiết Vitamin C chất chuẩn thực tương tự mẫu cao chiết C Phân tích hàm lượng tannin cao chiết thân dây cóc Hàm lượng tannin cao chiết thân dây cóc xác định dựa theo phương pháp Kavitha and Indira [10] có hiệu chỉnh Sử dụng tannic acid làm chất chuẩn đối chiếu (0, 20, 40, 60, 80 100 µg/mL) Phản ứng tiến hành cách cho 0,1 mL dung dịch tannic acid bổ sung thêm 7,5 mL nước cất 0,5 mL thuốc thử Folin-Ciocalteu, thêm mL dung dịch Na2 CO3 35% bổ sung thêm nước cất đủ 10 mL, để phản ứng nhiệt D Phương pháp thống kê Các số liệu xử lí phần mềm Excel phần mềm Statghraphics 16.0 Kiểm tra khác biệt giá trị trung bình theo phép thử Duncan LSD 61 TẠP CHÍ KHOA HỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC TRÀ VINH, SỐ 40, THÁNG 12 NĂM 2020 IV PHẦN A: LĨNH VỰC THỰC VẬT – SINH HĨA Bảng 1: Kết phân tích KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN độ ẩm, hiệu suất trích cao thân dây cóc A Phương pháp tạo cao chiết thân dây cóc Để đánh giá hiệu phương pháp trích cao trích, thơng thường dựa hiệu suất trích cao Hiệu suất trích cao phản ánh tối ưu việc kết hợp điều kiện khác phương pháp li trích Quy trình trích cao chiết thân dây cóc thực với nguyên liệu ban đầu 200 gram (khô) Độ ẩm thân dây cóc 61,09% (Bảng 1) Hiệu suất trích li cao chiết có khác biệt dung môi sử dụng nghiên cứu Hiệu suất chiết cao nước đạt 3,95% Trong đó, hiệu suất chiết cao ethanol, methanol đạt 5,88% 6,95% Quá trình tạo cao chiết từ loại dung môi khác cho hiệu suất trích li khác dung mơi ethanol 80% sử dụng cho q trình li trích, nguyên nhân sử dụng nước làm loại dung mơi để li trích mẫu trích nhiễm nhiều tạp chất acid hữu cơ, đường protein tan nước ảnh hưởng tới q trình định tính hay định lượng hợp chất thiên nhiên Ngoài ra, sử dụng cồn tuyệt đối giảm hiệu suất chiết cao ethanol khó thấm vào mẫu Vì vậy, việc sử dụng ethanol 80% làm dung môi tạo mơi trường tối ưu cho việc li trích, tăng tiếp xúc mẫu dung mơi, tăng hiệu suất trích li bảo quản mẫu khỏi vi sinh vật [12] Trong đó, dung mơi methanol dung mơi có khả hịa tan nhiều hoạt chất có hoạt tính sinh học sử dụng nhiều trình li trích hợp chất có hoạt tính sinh học từ thực vật nên hiệu suất trích cao đạt cao B Định tính số hợp chất sinh học có cao chiết thân dây cóc Kết định tính cao chiết thân dây cóc phương pháp hóa học cho thấy, cao chiết thân dây cóc có chứa hợp chất alkaloid, flavonoid, saponin, steroid, terpenoid, tannin phenol (Bảng 2) Kết tương tự nghiên cứu Sensen [13], Harwoko and Warsinah [14] Cả hai cơng trình cho rằng, dịch trích thân dây cóc có chứa hợp chất có hoạt tính sinh học alkaloid, flavonoid, saponin, steroid, terpenoid, tannin phenol Bảng 2: Kết phân tích định tính hợp chất sinh học cao chiết thân dây cóc (Ghi chú: "++": dương tính; "-": âm tính) 62 TẠP CHÍ KHOA HỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC TRÀ VINH, SỐ 40, THÁNG 12 NĂM 2020 PHẦN A: LĨNH VỰC THỰC VẬT – SINH HĨA gốc trồng phương pháp trích li có hỗ trợ sóng siêu âm C Phân tích hàm lượng phenolic tổng cao chiết thân dây cóc Những hợp chất phenolic nhóm lớn, chúng có tác dụng chống ung thư, kháng viêm, kháng khuẩn, kháng oxy hóa, bảo vệ tim mạch; đồng thời, giúp tiêu thụ tốt thức ăn [15] Hàm lượng phenolic tổng phân tích phương pháp quang phổ đường chuẩn y = 0,0049x + 0,0127 với hệ số R2 = 0,9985 (Hình 1a) Hàm lượng phenolic tổng có khác biệt loại dung mơi trích li tạo cao chiết thân dây cóc (Bảng 3) Hàm lượng phenolic thể thấp cao chiết thân dây cóc nước hàm lượng phenolic đạt 183,17 mg gallic acid/g cao chiết, kế đến, hàm lượng phenolic cao chiết thân dây cóc ethanol hàm lượng phenolic đạt 283,21 mg gallic acid/g cao chiết cao hàm lượng phenolic thể cao chiết thân dây cóc methanol hàm lượng phenolic đạt 318,91 mg gallic acid/g cao chiết (Bảng 3) Kết nghiên cứu cho thấy, cao chiết thân dây cóc methanol cho hàm lượng phenolic đạt cao methanol dung mơi thích hợp việc chiết xuất hợp chất phenolic khả ức chế phản ứng enzyme polyphenol oxyase gây q trình oxy hóa phenolic dễ dàng bay so với nước [16] Kết nghiên cứu cao nghiên cứu Heida [17] Heida [17] cho rằng, hàm lượng phenolic cao chiết thân dây cóc đạt cao với hàm lượng 64,67 mg gallic acid/g cao chiết tiến hành trích li dung mơi methanol thân dây cóc thu thập Malaysia Sự khác biệt hàm lượng phenolic so với nghiên cứu Heida [17] khác nguồn D Phân tích hàm lượng flavonoid tổng cao chiết thân dây cóc Flavonoid chất có cấu tạo với khung stilben khung flavonoid Flavonoid biết chất có tác dụng hạ đường huyết phục hồi tế bào β tuyến tụy, chống viêm, kháng khuẩn, kháng virus, chống dị ứng, bệnh thối hóa thần kinh, kháng oxy hóa Các hợp chất thực vật thuộc nhóm flavonoid có có khả kháng viêm kháng oxy hóa tốt [18] Hàm lượng flavonoid tổng phân tích phương pháp quang phổ đường chuẩn y = 0,0054x + 0,0185 với hệ số R2 = 0,9992 (Hình 2a) Hàm lượng flavonoid tổng cao chiết thân dây cóc từ dung mơi khác cho hàm lượng khác (Bảng 3) Cụ thể, hàm lượng flavonoid tổng thể cao cao chiết thân dây cóc methanol hàm lượng flavonoid tổng đạt 36,71 mg quercetin/g cao chiết; kế đến, cao chiết thân dây cóc ethanol hàm lượng flavonoid tổng đạt 26,89 mg quercetin/g cao chiết thấp nhất, cao chiết thân dây cóc nước hàm lượng flavonoid tổng đạt 13,91 mg quercetin/g cao chiết Kết nghiên cứu thấp nghiên cứu Zulkhairi [19] Zulkhairi [19] cho rằng, cao chiết nước thân dây cóc thu thập Malaysia có hàm lượng flavonoid tổng đạt 29 mg quercetin/g cao chiết Các hợp chất phenolic polyphenolic tạo thành lớp chất chống oxy hóa tự nhiên có thực vật, thực phẩm đồ uống Các kết nghiên cứu mối tương quan tổng 63 TẠP CHÍ KHOA HỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC TRÀ VINH, SỐ 40, THÁNG 12 NĂM 2020 PHẦN A: LĨNH VỰC THỰC VẬT – SINH HĨA Hình 1: Đường chuẩn gallic acid (a) đường chuẩn tannin acid (b) Bảng 3: Kết phân tích hàm lượng phổ đường chuẩn y = 1,0415x + 0,0068 với hệ số R2 = 0,989 (Hình 2b) Hàm lượng polysaccharide tổng cao chiết thân dây cóc từ dung môi khác cho hàm lượng khác (Bảng 3) Cụ thể, hàm lượng polysaccharide tổng thể cao cao chiết thân dây cóc methanol hàm lượng polysaccharide tổng đạt 10,38 mg GE/g cao chiết, kế đến, cao chiết thân dây cóc ethanol hàm lượng polysaccharide tổng đạt 7,61 mg GE/g cao chiết thấp nhất, cao chiết thân dây cóc nước hàm lượng polysaccharide tổng đạt 3,95 mg GE/g cao chiết phenolic tổng, flavonoid tổng, polysaccharide tannin tổng cao chiết thân dây cóc (Ghi chú: Kết ± với độ lệch chuẩn giá trị Các mẫu tự theo sau giá trị hàng khác khác biệt có ý nghĩa thống kê mức 5%.) F Phân tích hàm lượng tannin cao chiết thân dây cóc hàm lượng phenol hoạt tính chống oxy hóa ngun liệu thực vật [20] Tannin: đặc trưng vị đắng chát, đó, dịch chiết từ có tannin ln có vị khơng dễ chịu Ngồi ra, hợp chất tannin có khả kháng E coli vi khuẩn Gram dương gây hại đường tiêu hóa Đây đặc tính bật tannin Tannin có nhiều đặc tính sinh học cao hiệu chống oxy hóa, kháng khuẩn, kháng virus, chống gây đột biến, chống đái tháo đường có vai trị quan trọng việc ngăn ngừa bệnh mãn E Phân tích hàm lượng polysaccharide tổng cao chiết thân dây cóc Những nhóm hợp chất polysaccharide có tác dụng chống ung thư, giảm đường máu, ngăn ngừa thối hóa tế bào, thiết lập hệ thống miễn dịch, giải độc thể [21] Hàm lượng polysaccharide tổng phân tích phương pháp quang 64 TẠP CHÍ KHOA HỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC TRÀ VINH, SỐ 40, THÁNG 12 NĂM 2020 PHẦN A: LĨNH VỰC THỰC VẬT – SINH HĨA Hình 2: Đường chuẩn quercetin (a) đường chuẩn glucose (b) vàng phụ thuộc vào số electron nhận [23] tính [22] Hàm lượng tannin tổng phân tích phương pháp quang phổ đường chuẩn y = 0,0128x + 0,0122 với hệ số R2 = 0,9899 (Hình 1b) Hàm lượng tannin tổng có khác biệt loại dung mơi tiến hành trích li tạo cao chiết thân dây cóc (Bảng 3) Hàm lượng tannin thể thấp cao chiết thân dây cóc nước hàm lượng tannin đạt 18,50 mg tannic acid/g cao khô; kế đến, hàm lượng tannin cao chiết thân dây cóc ethanol hàm lượng tannin đạt 29,05 mg tannic acid/g cao khô cao hàm lượng tannin thể cao chiết thân dây cóc methanol hàm lượng tannin đạt 28,42 mg g tannic acid/g cao khô Vitamin C sử dụng chất chuẩn vitamin C chất kháng oxy hóa mạnh, có khả loại bỏ gốc tự cao Hiệu khử gốc tự vitamin C thực nồng độ khác (0 – 0,1 µg/mL) Phần trăm khử gốc tự vitamin C đạt cao nồng độ 100 µg/mL, đạt hiệu 85,27% Kế đến nồng độ 80 µg/mL với hiệu suất 71,15% thấp nồng độ 20 µg/mL, phần trăm khử gốc tự 23,28% (Bảng 4) Tiến hành vẽ đường biểu diễn thể phần trăm ức chế gốc tự do, phương trình đường chuẩn y = 0,8383x + 3,2718; suy giá trị IC50 vitamin C 55,73 µg/mL Hiệu khử gốc tự cao chiết nước thân dây cóc thực nồng độ khác (0 – 300 µg/mL) Phần trăm khử gốc tự cao chiết nước đạt cao nồng độ 300 µg/mL, đạt hiệu 86,26% Kế đến nồng độ 250 µg/mL với hiệu suất 78,25% thấp nồng độ 50 µg/mL, phần trăm khử gốc tự 29,76% (Bảng 5) Tiến hành vẽ đường biểu diễn thể phần trăm ức chế gốc tự phương trình đường chuẩn y = 0,2831x+17,815 có R2 = 0,9784; suy ra, giá trị IC50 cao chiết nước thân dây G Phân tích khả kháng oxy hóa cao chiết thân dây cóc DPPH gốc tự có chứa nguyên tử nitrogen bền trung tâm Vì vậy, nhận electron hay gốc hydrogen để hình thành phân tử nghịch từ bền Hợp chất có hoạt động kháng oxy hố mạnh khả cho hydrogen cao Gốc DPPH phản ứng với chất khử phù hợp nhận electron Từ đó, màu dung dịch DPPH bị dần từ tím sang 65 TẠP CHÍ KHOA HỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC TRÀ VINH, SỐ 40, THÁNG 12 NĂM 2020 PHẦN A: LĨNH VỰC THỰC VẬT – SINH HÓA Bảng 4: Hiệu kháng oxy hóa Bảng 5: Hiệu kháng oxy hóa phương pháp DPPH vitamin C phương pháp DPPH cao chiết thân dây cóc (Ghi chú: Nếu mẫu tự theo sau (Ghi chú: Nếu mẫu tự theo sau giá trị cột khác giá trị cột khác khác biệt có ý nghĩa thống kê mức 5%.) khác biệt có ý nghĩa thống kê mức 5%.) cóc 113,69 µg/m L Trong đó, hiệu khử gốc tự cao chiết ethanol thân dây cóc thực nồng độ khác (0 – 300 µg/mL) Phần trăm khử gốc tự cao chiết ethanol đạt cao nồng độ 300 µg/mL, đạt hiệu 94,19% Kế đến nồng độ 250 µg/mL với hiệu suất 84,07% thấp nồng độ 50 µg/mL, phần trăm khử gốc tự 37,59% (Bảng 5) Tiến hành vẽ đường biểu diễn thể phần trăm ức chế gốc tự phương trình đường chuẩn y = 0,2506x + 27,675 có R2 = 0,9707; suy ra, giá trị IC50 cao chiết ethanol thân dây cóc 89,12 µg/mL Cuối cùng, hiệu khử gốc tự cao chiết methanol thân dây cóc thực nồng độ khác (0 – 300 µg/mL) Phần trăm khử gốc tự cao chiết methanol đạt cao nồng độ 300 µg/mL, đạt hiệu 98,99% Kế đến nồng độ 250 µg/mL với hiệu suất 88,71% thấp nồng độ 50 µg/mL, phần trăm khử gốc tự 43,19% (Bảng 5) Tiến hành vẽ đường biểu diễn thể phần trăm ức chế gốc tự phương trình đường chuẩn y = 0,2128x + 36,765 có R2 = 0,9806; suy ra, giá trị IC50 cao chiết ethanol thân dây cóc 62,19 µg/mL Giá trị IC50 mà ức chế 50% gốc tự DPPH cao chiết thân dây cóc vitamin C xác định trình bày Bảng Giá trị IC50 cao chiết thân dây cóc cao 2,04, 1,60 1,12 lần so với giá trị IC50 vitamin C, điều lí giải vitamin C sản phẩm thương mại có độ tinh cao, cao chiết thân dây cóc qua q trình lọc cịn chứa nhiều tạp chất q trình li trích nên hiệu thấp Kết nghiên cứu thấp nghiên cứu Zulkhairi [20] Zulkhairi [20] cho rằng, cao chiết nước thân dây cóc thu thập Malaysia có khả 66 TẠP CHÍ KHOA HỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC TRÀ VINH, SỐ 40, THÁNG 12 NĂM 2020 Bảng 6: Giá trị IC50 vitamin C cao PHẦN A: LĨNH VỰC THỰC VẬT – SINH HÓA O− cách liên kết ion kim loại chuyển tiếp (đặc biệt sắt đồng), hình thành dạng hoạt động phản ứng gốc tự cản trở hấp thu kim loại [26] chiết thân dây cóc phương pháp DPPH V KẾT LUẬN Thân dây cóc nguồn nguyên liệu có chứa nhiều hợp chất có hoạt tính sinh học có khả ứng dụng nhiều lĩnh vực Hàm lượng phenolic, flavonoid, polysaccharide tannin thân dây cóc 318,91 mg gallic acid/g, 36,71 mg quercetin/g cao khô, 10,38 mg GE/g cao khô 38,42 mg tannic acid/g cao khô Cao chiết thân dây cóc có khả kháng oxy hóa phương pháp DPPH với giá trị IC50 nước, ethanol 800, methanol 113,69 µg/mg, 89,12 µg/mg, 62,19 µg/mg kháng oxy hóa phương pháp DPPH với giá trị IC50 2.500 µg/mL đạt hiệu 86,51% Trong đó, Tatang [24] cho rằng, cao chiết thân dây cóc có khả kháng oxy hóa phương pháp DPPH với giá trị IC50 33,75 µg/mL 52,29 µg/mL dung mơi ethanol phân đoạn với nước cất Trong đó, Haque [5] cho rằng, cao chiết thân dây cóc có khả kháng oxy hóa phương pháp DPPH trích li với methanol phân đoạn với petroleum ether, chloroform, carbon tetrachloride nước cho giá trị IC50 49 µg/mL, 70 µg/mL, 75 µg/mL, 30 µg/mL 70 µg/mL Cao chiết thân dây cóc có khả kháng oxy hóa phương pháp DPPH cao chiết có chứa hợp chất có hoạt tính sinh học flavonoid, alkaloid, tannin phenol Các nhóm hợp chất flavonoid hoạt động thơng qua q trình khử chelating [25] Trong đó, hợp chất phenolic thể hoạt động chống oxy hóa số chế cho nguyên tử hydro cho gốc tự do, khử phản ứng khác OH− , NO2− , ONOOH and HOCl Một số phenolic, chủ yếu diphenol polyphenol, phản ứng với LỜI CẢM ƠN Chân thành cảm ơn Trung tâm Công nghệ Sinh học tỉnh An Giang, Sở Khoa học Công nghệ tỉnh An Giang tạo điều kiện để thực nghiên cứu TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Nascimento MA, Silva AK, Franc¸a LCB, Quignard ELJ, López JA, Almeida MG Turnera ulmifolia L (Turneraceae): Preliminary study of its antioxidant activity Bioresources Technology 2006; 97:1387–1391 [2] Diplock AT Will the ‘good fairies’ please proves to us that Vitamin E lessens human degenerative of diseases Free Radical Research 1997; 27:511–532 [3] Shahidi F Antioxidants in food and food antioxidants Nahrung 2000; 44:158–163 67 TẠP CHÍ KHOA HỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC TRÀ VINH, SỐ 40, THÁNG 12 NĂM 2020 [4] Haque AM, Ashraful SM, Mohammad S American Journal of Ethnomedicine 2014; Antimicrobial, cytotoxicity and antioxidant 1(4):244–249 activity of Tinospora crispa Journal of [5] [12] Hachem, Z Saad, B Badran Techniques for the extraction of bioactive compounds from Yang X, Yan F, Huang S, Fu C Antioxidant Lebanese Urtica Dioica American Journal activities of fractions from longan pericarps of Phytomedicine and Clinical Therapeu- Food Science and Technology (Campinas) tics 2013; 6:507–513 [13] ical analysis and evaluation of purified ex- phytochemical screening of six medicinal tract of Tinospora crispa stem for in vivo an- plants used in traditional medicine Interna- tihyperuricemic effect Journal of Reports tional Journal of Pharmacy and Pharma- in Pharmaceutical Sciences 2020; 9:46–51 [14] [9] [10] Weihua Wang, Zhao Liu, and Bin Liu Borgia N, Vicky M, Jacqueline M, Jeanne Genus N Syzyguim guineense Extracts Show An- Phytochemistry, and tioxidant Activities and Beneficial Activi- Evidence-Based Complementary ties on Oxidative Stress Induced by Ferric Alternative Medicine 2016; Article ID Chloride in the Liver Homogenate Antioxi- 9232593:32 pages [15] Tinospora: Ethnopharmacology, Pharmacology and Han X, Shen T, Lou H Dietary polyphenols Yadav RNS, Agarwala M Phytochemical and their biological significance Interna- analysis of some medicinal plants Journal tional Journal of Molecular Sciences 2007; of Phytology 2011; 3(12):10–14 8:950–988 [16] Dubois M, Gilles K, Hamilton J, Rebers Yao LH, Jiang YM, Datta N, Singanusong P, Smith F Colorimetric method for deter- R, Liu X, Duan J, Raymont K, Lisle A, Y mination of sugars and related substances Xu HPLC analyses of flavanols and phe- Anal Chem.1956; 28:350–356 nolic acids in the fresh young shoots of Kavitha CCI, Indira G Quantitative esti- tea (Camellia sinensis) grown in Australia mation of total phenolic, flavonoids, tannin Food Chemistry 2004; 84(2):253–263 [17] and chlorophyll content of leaves of Stro- [11] Sensen Chi, Gaimei She, Dan Han, Pieme C, Joseph N, Claude N, Bruno M, dants 2014; 3(3):618–635 [8] Harwoko H, Warsinah W 2020 Phytochem- Yadav M, Chatterji S, Watal G Preliminary ceutical Sciences 2014; 6(5):539–542 [7] Bandar H, A Hijazi, H Rammal, A Phar and Biomed Sciences 2011; 13(13):1– 2014; 34(2):341–345 [6] PHẦN A: LĨNH VỰC THỰC VẬT – SINH HÓA Heida NZ, Jamaludin M, Zainal A An- bilanthes Kunthiana (Neelakurinji) Jour- tioxidant Activity of Methanol Extract nal of Medicinal Plants Studies 2016; of Tinospora crispa and Tabernaemon- 4(4):282286 tana corymbosa Sains Malaysiana 2013; Shekhar TC, Anju G Antioxidant Activ- 42(6):697–706 [18] ity by DPPH Radical Scavenging Method Harleen KS, Bimlesh K, Manoj S, Pardeep S A Review of Phytochemistry and Phar- of Ageratum conyzoides Linn Leaves 68 TẠP CHÍ KHOA HỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC TRÀ VINH, SỐ 40, THÁNG 12 NĂM 2020 [25] macology of Flavonoids International Phar- [19] JD Radical-scavenging-linked antioxidant Turkoglu, E.M Duru, I.K Mercan and K activities of extracts from black chokeberry Gezer Antioxidant and antimicrobial activ- and blueberry cultivated in Korea Food ities of Laetiporus sulphureus (Bull.) Mur- Chem 2014; 146:71–77 [26] graphic fractions obtained from root, fruit and leaf of Mengkudu (Morinda citrifolia Nutritional Composition, Antioxidant Abil- L.) Food Chem 2006; 94:169–178 ity and Flavonoid Content of Tinospora crispa stem Advances in Natural and Applied Sciences 2009; 3(1):88–94 Nguyễn Văn Bình, Phạm Thị Phương, Nguyễn Tá Lợi Nghiên cứu số yếu tố ảnh hưởng đến q trình trích ly hàm lượng polysaccharide tồn phần nấm linh chi đỏ Tạp chí Khoa học Công nghệ Đại học Thái Nguyên 2018; 180(04): 3–8 [22] Kunwar RM, Shrestha KP, Bussmann RW Traditional herbal medicine in far-west Nepal: a pharmacological appraisal Journal of Ethnobiolology and Ethnomedicine 2010; 6:35 [23] Patel RM, Patel NJ 2011 In vitro antioxidant activity of coumarin compounds by DPPH, Super oxide and nitric oxide free radical scavenging methods Journal of Advanced Pharmacy Education & Research 2011; 1:52–68 [24] Zin ZM, Hamid AA, Osman A, Saari N 2006 Antioxidative activities of chromato- Zulkhairi A, H Bahari, S Isemaail, N Amalina Ismail, Zamree Md Shah, MS Arsyad [21] Hwang SJ, Yoon WB, Lee OH, Cha SJ, Kim maceutica Sciencia 2011; 1(1):25–35 rill Food Chemistry 2007; 101:267–273 [20] PHẦN A: LĨNH VỰC THỰC VẬT – SINH HÓA Tatang I, Andayana P, Machwiyyah L, Rabbani HR The activity of radical scavenging of 2,2-diphenyl-1- pycrilhydrazil (dpph) by ethanolic extracts of Mengkudu leaves (Morinda citrifolia L.), Brotowali stem (Tinospora crispa L.), its water fraction and its hydrolized fraction Traditional Medicine Journal 2015; 20 (3):140–148 69 ... hoạt chất có hoạt tính sinh học khả kháng oxy hóa thân dây cóc chưa quan tâm rộng rãi Vì vậy, nghiên cứu thực nhằm: (i) phân tích hàm lượng phenolic, flavonoid, polysaccharide, tannin; (ii) khả. .. hydroxyl [3] Hoạt động chống oxy hóa phenolic chủ yếu tính oxy hóa khử cho phép chúng hoạt động chất khử, chất khử hydro chất khử oxy nhóm đơn Dây cóc (Tinospora crispa) dây leo thân quấn, dài tới... ứng oxy hóa làm giảm tác dụng phụ gốc tự chức sinh lí bình thường người Các hợp chất phenolic chất chống oxy hóa, hoạt động chất khử gốc tự khả khử làm giảm nhóm hydroxyl [3] Hoạt động chống oxy