Mục tiêu của nghiên cứu này nhằm đánh giá một phần hoạt động kháng oxy hóa, kháng khuẩn, kháng nấm của lá bình bát nước (Annona glabra L.). Hai nghiệm thức cao chiết lá bình bát nước được ly trích lần lượt trong hai dung môi ethanol và methanol.
HUAF JOURNAL OF AGRICULTURAL SCIENCE & TECHNOLOGY ISSN 2588-1256 Vol 3(3) – 2019:1412-1422 KHẢO SÁT MỘT SỐ HỢP CHẤT CÓ KHẢ NĂNG KHÁNG OXY HÓA, KHÁNG KHUẨN VÀ KHÁNG NẤM CỦA CAO CHIẾT LÁ BÌNH BÁT NƯỚC (Annona glabra L.) Lương Phong Dũ*, Đỗ Thị Phương Dung, Nguyễn Đức Độ * TÓM TẮT Lương Phong Dũ Mục tiêu nghiên cứu nhằm đánh giá phần hoạt động kháng oxy hóa, kháng khuẩn, kháng nấm bình bát nước (Annona glabra L.) Hai nghiệm thức cao chiết bình bát nước ly trích hai dung môi ethanol methanol Kết cho thấy hàm lượng phenol tổng lớn nghiệm thức methanol (LM) nhỏ nghiệm thức lá- ethanol (LE) với giá trị 37,8 31,8 mg GAE/g chiết xuất Khả kháng oxy hóa nghiệm thức cao chiết đánh giá qua khả khử gốc tự DPPH (2,2- Diphenyl-1-picrylhydrazyl) H2O2 (hydrogen peroxide) Cao chiết methanol với giá trị IC50 59,03 μg/mL; 139,27 μg/mL cho khả kháng oxy hóa mạnh yếu cao chiết ethanol với giá trị IC50 131,47 μg/mL; 156,45 μg/mL so sánh dựa IC50 vitamin C Hiệu kháng hai dòng vi khuẩn B subtilis, E coli cao methanol ethanol tốt, vượt trội so với đối chứng dương ampicillin mg/mL Ngoài ra, hai nghiệm thức cao thể hiệu ức chế dòng nấm C albicans qua phương pháp khảo sát khuếch tán giếng thạch Tác giả liên hệ: Email: dum0517016@gstudent.ctu.edu.vn Viện nghiên cứu phát triển CNSH, trường Đại học Cần Thơ Nhận bài: 21/12/2018 Chấp nhận bài: 12/2/2019 Từ khóa: Cao chiết bình bát nước (Annona glabra L.), Kháng khuẩn, Kháng nấm, Kháng oxy hóa, Hàm lượng phenol tổng MỞ ĐẦU Sự thay đổi liên tục khả đề kháng mầm bệnh dược phẩm ngày tăng, dẫn đến nhu cầu tìm kiếm chiết xuất chế kháng khuẩn, kháng nấm tăng lên (Oluwatuyi, 2004) Trong năm gần đây, nhiều loại thuốc phân tích tổng hợp thông qua phương pháp phân tử phương pháp hóa học Tuy nhiên, nguồn nguyên vật liệu từ thực vật chứng tỏ nguồn vô giá (Iqbal cs., 2008) chứa nhiều nhóm hợp chất thứ cấp polyphenol, flavonoid, saponin, tannin với đa dạng cấu trúc hóa học nên có khả kháng vi sinh vật theo nhiều chế khác (Arancibia-Avila cs., 2008) 1412 Bình bát nước (Annona glabra L.) loài thuộc họ Annonaceae nghiên cứu rộng rãi thập kỷ qua, với tiềm trị liệu cao chứa nhiều hợp chất có khả kháng oxy hóa, kháng nấm kháng khuẩn (Padmaja cs., 1995), kháng giun, kháng viêm (Moghadamtousi cs., 2015) Ngoài số loài thuộc chi Annona chứng minh có khả diệt ký sinh trùng, tiêu chảy (Pimenta cs., 2003), sốt rét (Siebra cs., 2009), kháng lại tác nhân gây độc tế bào loãng xương (Hamid cs., 2012) Tuy nhiên, nghiên cứu bình bát nước Việt Nam chưa có nhiều cơng bố Vì vậy, nghiên cứu nhằm xác định nhóm hợp chất thực vật có bình bát nước, hàm lượng phenol tổng, khả kháng oxy hóa, kháng khuẩn Lương Phong Dũ cs TẠP CHÍ KHOA HỌC & CƠNG NGHỆ NÔNG NGHIỆP kháng nấm hai loại cao chiết từ methanol ethanol NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Vật liệu, hóa chất Vật liệu: Lá bình bát nước (Annona glabra L.) thu hái từ phường Hưng Phú, quận Cái Răng, thành phố Cần Thơ Hóa chất: Các hóa chất cần thiết cho nghiên cứu bao gồm: Ethanol (EtOH, Việt Nam), Methanol (MeOH, Việt Nam), hexane (Việt Nam), ethyl acetate (Việt Nam), acetone (Việt Nam), Na2SO4 khan (Trung Quốc), FeCl3.6H2O (Trung Quốc), H2SO4 đđ (Trung Quốc), acid gallic (Trung Quốc), thuốc thử Folin-Ciocalteu (Đức), Na2CO3 (Trung Quốc), H2O2 30% (Trung Quốc), vitamin C ISSN 2588-1256 Tập 3(3) – 2019:1412-1421 (Trung Quốc) số hóa chất có phịng cơng nghệ Enzyme 2.2 Điều chế cao Nguyên liệu xay nhuyễn với dung môi (EtOH MeOH) tỉ lệ 1:5 Kết hợp sử dụng sóng siêu âm Sau đó, mẫu lọc để lấy phần dịch trích quay chân khơng đến bay hết dung môi, tiếp tục sấy mẫu 40oC để loại bỏ hoàn toàn ẩm độ, sau thu cao chiết đem trữ đơng -20oC Hai loại cao chiết (gọi nghiệm thức) từ bình bát nước ethanol (LE) methanol (LM) sử dụng cho phân tích sau 2.3 Phương pháp phân tích 2.3.1 Khảo sát thành phần hợp chất thực vật (HCTV) Sự diện hợp chất thực vật xác định dựa theo mô tả Bảng Bảng Các loại thuốc thử dùng để xác định HCTV diện cao chiết bình bát nước HCTV khảo sát Thuốc thử Hiện tượng sau phản ứng Phenol, tannin FeCl3 5%, nước cất Màu xanh đen Flavonoid Pb (OAc)4 10% Màu vàng Coumarine NaOH 10% Màu vàng Alkaloid Thuốc thử Wagner Tủa màu vàng Quinone H2SO4 đđ Đổi màu Saponin Nước cất, dầu olive Nhũ tương Streroid Chloroform, H2SO4 đđ Màu đỏ, xanh Nguồn: Yadav cs (2011) 2.3.2 Khảo sát hàm lượng phenol tổng (TPC) Khảo sát hàm lượng phenol tổng theo mô tả Yadav Agarwala (2011) có hiệu chỉnh Tiến hành ghi nhận kết độ hấp thụ mẫu bước sóng 765 nm 2.3.3 Khảo sát khả kháng oxy hóa 2.3.3.1 Khả khử gốc tự DPPH (2,2- Diphenyl-1-picrylhydrazyl) Khảo sát khả khử gốc tự DPPH hai nghiệm thức LE LM thực theo phương pháp Blois cs (1958) Dãy nồng độ hai nghiệm thức (20 đến 140 µg/mL) vitamin C (2, 4, 6, 8, 10, 12 µg/mL) chuẩn bị cách hòa tan với dung môi http://tapchi.huaf.edu.vn/ methanol Tại nồng độ, mL dung dịch sử dụng để gây phản ứng với mL DPPH 0,1 mM Mẫu trắng thực chứa methanol DPPH Sau 30 phút ủ tối, mẫu tiến hành đo độ hấp thụ quang phổ bước sóng 517 nm Phần trăm ức chế gốc tự tính theo cơng thức: Tỷ lệ ức chế gốc tự do: DPPH (%) = [(Ao – A)/Ao] x 100% Trong đó: Ao: Độ hấp thụ mẫu đối chứng (không chứa cao chiết) A: Độ hấp thụ mẫu có chứa cao chiết vitamin C 1413 HUAF JOURNAL OF AGRICULTURAL SCIENCE & TECHNOLOGY Từ phương trình đường chuẩn xây dựng ta suy giá trị IC50 2.3.3.2 Khả khử gốc tự hydrogen peroxide Khảo sát khả khử gốc tự hydrogen peroxide hai nghiệm thức cao chiết thực theo phương pháp Rahate cs (2016) có hiệu chỉnh Dãy nồng độ nghiệm thức cao chiết (20, 40, 60, 80, 100, 120, 140 µg/mL) dãy nồng độ vitamin C (2, 4, 6, 8, 10, 12 µg/mL), kèm theo mẫu đối chứng nồng độ (chuẩn bị tương tự mẫu không bổ sung H2O2) Tại nồng độ, mL dung dịch (Cao chiết vitamin C hòa tan dung dịch đệm phosphate) sử dụng để gây phản ứng với mL dung dịch H2O2 mM Sau 30 phút ủ tối, mẫu tiến hành đo độ hấp thụ quang phổ bước sóng 230 nm Phần trăm ức chế gốc tự tính theo cơng thức: Phần trăm ức chế gốc hydrogen peroxide (%): [(Ao – A)/Ao] x 100% Trong đó: Ao: Độ hấp thụ mẫu đối chứng (không chứa cao chiết) A: Độ hấp thụ mẫu có chứa cao chiết vitamin C Từ phương trình đường chuẩn xây dựng ta suy giá trị IC50 2.3.4 Khảo sát khả kháng khuẩn, kháng nấm a Chuẩn bị đĩa thạch nuôi cấy ISSN 2588-1256 Vol 3(3) – 2019:1412-1422 Môi trường sử dụng để nuôi cấy vi khuẩn nấm môi trường LB (Luria-Bertani) bổ sung Agar PDA (Potato Dextrose Agar) Môi trường trải chủng vi khuẩn B subtilis, C albicans, E.coli (mật số 106 tế bào/mL) sau để nguội làm Đĩa tiếp tục tạo giếng đường kính mm, sau bơm nghiệm thức cao Thao tác thực tủ cấy vơ trùng b Khảo sát hoạt tính kháng khuẩn, kháng nấm Bơm 20 mL dung dịch nghiệm thức cao (300 mg/mL) vào giếng đĩa thạch với đối chứng dương ampicillin (5 mg/mL), nystatin (4 mg/mL) đối chứng âm DMSO (Dimethyl sulfoxide) Kết theo dõi sau 24 ni ủ 37oC cách đo đường kính vịng vô khuẩn (mm) Tất nghiệm thức bố trí lặp lại lần ngẫu nhiên 2.3.5 Phương pháp phân tích xử lý số liệu Kết thực nghiệm nhập liệu Microsoft Excel 2010 phân tích thống kê phần mềm Minitab version 16.2.0 (2010) Mỗi thí nghiệm bố trí ngẫu nhiên với ba lần lặp Sau dùng phương pháp phân tích phương sai (ANOVA) với kiểm định Tukey để xác định so sánh giá trị trung bình KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Định tính số hợp chất thực vật cao chiết Bảng Kết xác định nhóm HCTV diện cao chiết Nghiệm thức Phenols, tannin Flavonoid Coumarine Alkaloid Quinone Saponine Steroid LM +++ +++ +++ +++ + +++ ++ LE ++ +++ +++ ++ + +++ + (+++) Xuất nhiều kết tủa, (++) Lượng kết tủa trung bình, (+) Xuất kết tủa 1414 Lương Phong Dũ cs TẠP CHÍ KHOA HỌC & CƠNG NGHỆ NƠNG NGHIỆP Từ kết Bảng 2, hai nghiệm thức cao chiết xuất đầy đủ nhóm hợp chất thực vật như: phenol, tannin, flavonoid, alkaloid, courmarin, quinone, steroid saponin Đầu tiên, thử nghiệm phenol, tannin, alkaloid steroidsau phản ứng kết thúc, dựa vào màu sắc kết tủa xuất ống nghiệm, nghiệm thức LM cho thấy diện nhóm hợp chất thực vật nhiều so với LE Theo Zhang (2015), dung mơi khác có khác biệt độ phân cực, phân tán tính thấm sàng lọc chiết xuất hóa học thực vật ISSN 2588-1256 khác nhau, nên thành phần hợp chất thực vật khác đối tượng khác loại dung mơi ly trích Đối với thử nghiệm: flavonoid, coumarine saponinphản ứng kết thúc, dựa vào kết tủa màu sắc xác định hai nghiệm thức cao có diện đồng đềucác nhóm hợp chất Theo Ezealisiji Belema (2017), phận loài Annona muricata diện nhiều hợp chất chuyển hóa thứ cấp phenol, tannin, alkaloid, flavonoids Ở đối tượng bình bát nước, dung mơi methanol cho hiệu phân tách nhiều nhóm hợp chất so với dung môi ethanol Hàm lượng polyphenol (mg GAE/g chiết xuất) Phương trình đường chuẩn acid gallic Giá trị OD 2.0 1.5 1.0 y = 0,0145x - 0,0075 R² = 0,9996 0.5 Tập 3(3) – 2019:1412-1421 50 40 Hàm lượng phenol tổng (mg GAE/g chiết xuất) A B 30 20 10 0.0 50 100 Dãy nồng độ (µg/mL) 150 LM LE Nghiệm thức Hình Phương trình đường chuẩn gallic acid biểu đồ so sánh kết hàm lượng phenol tổng hai nghiệm thức cao chiết 3.2 Định lượng hàm lượng phenol tổng Hàm lượng phenol tổng hai nghiệm thức LM LE cao 31,83 37,83 mg GAE/g chiết xuất Nghiên cứu loài Polygonum minus (Norsyamimi Hassim cs., 2014), cao chiết methanol 70% cho hàm lượng phenol tổng (11,3±0,06 mg GAE/g chiết xuất) cao hàm lượng phenol tổng từ cao chiết ethanol 70% (8,2±0,07 mg GAE/g chiết xuất), cao chiết methanol 50% cho hàm lượng phenol tổng (10,0±0,06 mg GAE/g chiết xuất) cao hàm lượng phenol tổng từ cao chiết ethanol 50% (7,6±0,08 mg GAE/g chiết xuất), cao chiết methanol 100% cho hàm http://tapchi.huaf.edu.vn/ lượng phenol tổng (6,5± 0,07 mg GAE/g chiết xuất) cao hàm lượng phenol tổng từ cao chiết ethanol 100% (5,1 ± 0,04 mg GAE/g chiết xuất) Một nghiên cứu khác loài Leea indica, hàm lượng phenol tổng chiết xuất methanol cao (65,20±0,15 mg GAE/g), chiết xuất ethanol (60,97± 0,23 mg GAE/g) (Ghagane cs., 2017) Kết cho thấy tương đồng ly trích bình bát nước với dung mơi methanol, ngồi đa dạng nhóm hợp chất diện hàm lượng hợp chất thuộc nhóm polyphenol nhiều so với ly trích với dung môi ethanol 1415 HUAF JOURNAL OF AGRICULTURAL SCIENCE & TECHNOLOGY ISSN 2588-1256 Vol 3(3) – 2019:1412-1422 Biểu đồ giá trị phần trăm ức chế gốc tự DPPH vitamin C nghiệm thức cao chiết A 140 120 100 80 B 60 40 C 20 Phương trình đường chuẩn vitamin C 100 80 Giá trị OD IC 50 3.2.1 Khả khử gốc tự DPPH 60 40 0 vitamin C LM A y = 7,4225x - 0,1007 R² = 0,9969 20 LE B Nghiệm thức Phương trình đường chuẩn nghiệm thức LE 80 40 Giá trị OD 50 Giá trị OD 100 60 y = 0,7563x + 5,3549 R² = 0,9809 20 30 y = 0,3731x + 1,0625 R² = 0,9989 20 10 0 C 15 Dãy nồng độ vitamin C (µg/mL) Phương trình đường chuẩn nghiệm thức LM 40 10 50 100 150 Dãy nồng độ nghiệm thức LM (µg/mL) D 50 100 150 Dãy nồng độ nghiệm thức LE (µg/mL) Hình (A) Biểu đồ giá trị phần trăm ức chế gốc tự DPPH hai nghiệm thức cao chiết đối chứng dương vitamin C (B), (C), (D) Phương trình đường chuẩn LM, LE vitamin C Khả khử gốc tự DPPH hai nghiệm thức cao chiết thể thơng qua Hình (A) Giá trị IC50 thước đo dùng để so sánh khả khử gốc tự hai mẫu cao với đối chứng vitamin C Giá trị IC50 nhỏ đồng nghĩa nồng độ gốc tự bị loại 50% nhỏ mẫu khảo sát có khả khử gốc tự mạnh Khi so sánh hai nghiệm thức cao với vitamin C, khả kháng oxy hóa hai yếu nhiều so với vitamin C (6,750±0,047 µg/mL) Điều hợp lý vitamin C chất kháng oxy hóa tinh khiết cao chiết bình bát cao thơ, chứa nhiều nhóm hợp chất khác tác dụng cộng gộp lẫn gây ức chếnhau Xét nghiệm thức cao chiết, ta thấy nghiệm thức LM có khả kháng oxy hóa mạnh với giá trị IC50 59,031 ± 0,753µg/mL, nghiệm thức LE yếu với giá trị IC50 131,454± 1416 0,833µg/mL Điều phù hợp với kết định tính, nghiệm thức LM cho kết dương tính với nhóm hợp chất flavonoid, courmarin, phenol tannin Điều thể rõ thí nghiệm định lượng, hàm lượng phenol tổng nghiệm thức LM cao so với nghiệm thức LE Một chứng minh cụ thể rằng, phenol nhóm hợp chất có nguồn gốc từ thực vật có hoạt động kháng oxy hóa đáng kể (Saskai cs., 1996) Ở nghiên cứu khác, loài Leea indica ly trích dung mơi methanol, ethanol nước Kết cho thấy khả khử gốc tự DPPH mạnh nghiệm thức ly trích dung môi methanol, yếu nghiệm thức ly trích với nước Kết thể tương quan hàm lượng phenol tổng khả kháng oxy hóa Cụ thể dịch chiết từ dung mơi methanol có hàm lượng phenol tổng 65,20 mg GAE/g chiết Lương Phong Dũ cs TẠP CHÍ KHOA HỌC & CÔNG NGHỆ NÔNG NGHIỆP xuất phần trăm ức chế 57,11% Dịch chiết từ ethanol có hàm lượng phenol tổng 60,97 mg GAE/g chiết xuất phần trăm ức chế 43,87% Dịch chiết từ nước có hàm lượng phenol tổng 53,04 mg GAE/g chiết xuất phần trăm ức chế 33,76%, khả kháng oxy hóa nghiệm thức ly trích từ dung mơi methanol mạnh dung môi ethanol mạnh nước tỷ lệ thuận với hàm 3.2.2 Khả khử gốc tự hydrogen peroxide Phương trình đường chuẩn vitamin C 60 a b 50 c Giá trị OD 150 Tập 3(3) – 2019:1412-1421 lượngphenol tổng có nghiệm thức (Ghagane cs., 2017) Như vậy, thử nghiệm khử gốc tự DPPH nghiệm thức bình bát nước ly trích với dung mơi methanol cho hiệu tốt so với dung môi ethanol Biểu đồ giá trị phần trăm ức chế gốc hydrogen peroxide vitamin C nghiệm thức cao chiết 200 IC 50 ISSN 2588-1256 100 40 30 20 y = 0,2963x + 6,8471 R² = 0,9417 10 50 0 Vitamin C A LM Nghiệm thức LE B 50 100 150 Dãy nồng độ vitamin C (µg/mL) Phương trình đường chuẩn LE Phương trình đường chuẩn LM 60 60 50 40 Giá trị OD Giá trị OD 50 y = 0,2757x + 11,612 R² = 0,9082 30 40 20 20 10 10 0 C y = 0,1697x + 23,468 R² = 0,9297 30 50 100 150 200 Dãy nồng độ nghiệm thức LM (µg/mL) D 50 100 150 200 Dãy nồng độ nghiệm thức LE (µg/mL) Hình (A) Biểu đồ giá trị phần trăm ức chế gốc tự hydrogen peroxide hai nghiệm thức cao chiết đối chứng vitamin C (B), (C), (D) Phương trình đường chuẩn vitamin C, LM LE Khả khử gốc tự hydrogen peroxide hai nghiệm thức cao chiết thể thông qua Hình (A) Giá trị IC50 thước đo dùng để so sánh khả khử gốc tự hai mẫu cao với đối chứng vitamin C Giá trị IC50 nhỏ đồng nghĩa nồng độ gốc tự bị loại 50% nhỏ mẫu khảo sát có khả khử gốc tự mạnh So sánh nghiệm thức với cho thấy nghiệm thức LM có khả kháng oxy hóa mạnh với giá trị IC50 139,2±0,8 µg/mL, nghiệm http://tapchi.huaf.edu.vn/ thức LE yếu với giá trị IC50 156,3± 2,65 µg/mL Nếu so sánh với vitamin C (145,6±0,8 µg/mL) giá trị IC50 nghiệm thức LM thấp hơn, cho thấy cao chiết bình bát nước ly trích với dung mơi methanol có khả khử gốc hydrogen peroxide tốt hơn, giá trị nghiệm thức LE cho khác biệt không lớn so với vitamin C Điều giải thích dung mơi khác ly trích hợp chất thực vật khác với hàm lượng khác tùy thuộc 1417 HUAF JOURNAL OF AGRICULTURAL SCIENCE & TECHNOLOGY Khả kháng B subtilis nồng độ 300 mg/mL thời điểm 24h 21 a a b 16 11 LM A LE Nghiệm thức ampicillin mg/mL Vol 3(3) – 2019:1412-1422 hóa đến từ diện chất chuyển hóa thứ cấp khác, chẳng hạn loại dầu dễ bay hơi, carotenoid vitamin (Javanmardi cs., 2003) Như vậy, việc khảo sát khả khử gốc tự hydrogen peroxide cho thấy cao chiết bình bát nước ly trích dung mơi methanol cho hiệu tốt so với ethanol 3.3 Khả kháng khuẩn, kháng nấm 3.3.1 Khả kháng khuẩn Đường kính vịng vơ khuẩn (mm) Đường kính vịng vơ khuẩn (mm) vào độ phân cực nó, mà hợp chất thực vật có cơng dụng riêng Do đó, chiết xuất khác cho khả kháng oxy hóa khác (Bello cs., 2016) Ngoài ra, kết phù hợp với kết định tính, cao chiết LM ly trích nhiều nhóm hợp chất có khả kháng oxy hóa như: flavonoid, courmarin, phenol tannin Polyphenol thành phần giúp khử gốc tự nhóm hydroxyl Do đó, hàm lượng polyphenol tăng, hoạt tính kháng oxy hóa tăng (Sahavà cs., 2016) Bên cạnh đó, hoạt động kháng oxy ISSN 2588-1256 Khả kháng E coli nồng độ 300 mg/mL thời điểm 24h 21 a a 16 b 11 LM B LE Nghiệm thức ampicillin mg/mL Hình Khả kháng hai dòng vi khuẩn B subtilis (A), E coli (B) thời điểm 24 Đối với hai chủng vi khuẩn B.subtilis Hình (A), E coli Hình (B), hiệu kháng hai nghiệm thức tương đương vượt trội so với ampicillin nồng độ 5mg/mL Điều đượclý giải hai nghiệm thức tồn lượng lớn phenol, tannin, flavonoid saponin tạo thành tổ hợp đa kháng, tác động lên tế bào vi khuẩn theo nhiều cách khác Điển hình flavonoid Hợp chất có hoạt tính kháng khuẩn mạnh bao gồm chế ức chế tổng hợp nucleic acid, ức chế chức màng tế bào ức chế chuyển hóa lượng (Cushnie Lamb, 2005) Đặc biệt, flavonoid có khả ức chế mạnh E coli thông qua việc tác động vào DNA 1418 gyrase (Wu cs., 2013) Saponin thấm qua màng tế bào ty thể gây rối loạn tế bào (Carraturo cs., 2014) Trong ampicillin đơn chất kháng, gây ức chế hoạt động enzyme transpeptidase, ngăn cản trình tổng hợp thành peptidoglycan vi khuẩn Kết phù hợp với nghiên cứu ElChaghaby cs (2014) khả kháng E coli dịch ly trích mãng cầu ta (Annona squamosa L.) hai loại dung mơi ethanol methanol cho kết khơng có khác biệt, giá trị ĐKVKK 14 13 mm Từ kết định tính cịn thấy hai nghiệm thức có diện củahợp chất alkaloid, chất thuộc nhóm isoquinoline (nhóm có hoạt tính sinh Lương Phong Dũ cs TẠP CHÍ KHOA HỌC & CƠNG NGHỆ NƠNG NGHIỆP Đường kính vịng kháng nấm (mm) học mạnh), sử dụng kháng sinh Như vậy, thử nghiệm khả kháng hai dòng vi khuẩn B subtilis, E Coli cho thấy dịch ly trích bình bát nướcvới hai loại 10 Tập 3(3) – 2019:1412-1421 ISSN 2588-1256 dung môi ethanol, methanol cho kết tương đương 3.3.2 Khả kháng nấm Khả ức chế nấm Candida albicans nồng độ 300 mg/mL thời điểm 24h a b b LM LE Nghiệm thức nystatin mg/mL Hình Khả kháng nấm Candida albicans nồng độ 300 mg/mL thời điểm 24 Hiệu kháng C albicans hai loại cao chiết thấp so với kháng sinh nystatin mg/mL, phần nystatin kháng sinh diệt nấm thương mại với chế tương tác với sterol màng tế bào (Ergosterol nấm) tạo thành kênh xuyên màng, làm thay đổi tính thấm màng (Dixon Walsh, 1996) dẫn đến acid hữu cơ, nucleotide protein màng bị phá hủy (Harold Thomas, 1996) Mặt khác, vách tế bào C albicans gồm hai lớp: lớp bên giàu mannoprotein lớp bên giàu β-glucan, chitin đóng vai trị quan trọng việc bảo vệ hình thái tế bào, độ cứng tế bào, trao đổi chất, trao đổi ion, tương tác đề kháng tác nhân gây hại (Marcilla cs., 1998) nên nhóm hợp chất tác động Tuy nhiên, hợp chất flavonoid, quercetin, alkaloid, acetogenin, diterpenoid saponin hợp chất có khả ức chế nấm C albicans (Narasimharaju cs., 2015) Khả kháng C albicans hai nghiệm thức cao chiết Điều suy đoán khả kháng C albicans cao chiết không phụ thuộc vào dung môi Kết phù hợp với nghiên cứu Narasimharaju cs (2015) với cao chiết từ bột khô Annona quamosa ly trích dung mơi methanol chloroform http://tapchi.huaf.edu.vn/ Các hợp chất ly trích hai loại dung mơi cụ thể sau: dung môi methanol gồm hợp chất alkaloid, glycoside, flavonoid, tannin, phenol, saponin; dung môi chloroform gồm hợp chất glycoside, flavonoid, tannin, phenol, steroid, có nồng độ ức chế tối thiểu Candida albicans 600 µg/mL Từ đó, thấy hai dung mơi khác ly trích hợp chất giống khác nhau, nhiên hiệu ức chế C albicans cao chiết từ hai loại dung môi ethanol methanol KẾT LUẬN Lá bình bát nước (Annona glabra L.) ly trích với hai dung môi methanol ethanol xuất hầu hết hợp chất thực vật thuộc nhóm polyphenol Hàm lượng hợp chất ly trích từ dung môi methanol cho hiệu tốt so với dung mơi ethanol Nghiệm thức có diện hợp chất nhiều khả kháng oxy hóa mạnh Khả kháng khuẩn, kháng nấm hai nghiệm thức cao chiết tương đương nhau, cao ampicillin thí nghiệm kháng khuẩn thấp nystatin thí nghiệm kháng nấm Nghiên cứu tiền đề nhằm đánh giá hoạt 1419 HUAF JOURNAL OF AGRICULTURAL SCIENCE & TECHNOLOGY tính sinh học bình bát nước Cần Thơ, Việt Nam TÀI LIỆU THAM KHẢO Arancibia-Avila, P., Toledo, F., Park, Y S., Jung, S T., Kang, S G., Heo, B G., & Gorinstein, S (2008) Antioxidant properties of durian fruit as influenced by ripening LWT-food Science and Technology, 41(10), 2118-2125 Bello, A M., Babagana, K., & Lawani, C E (2016) Relative Solvent-Based Antioxidant Potentials of Baphia Nitida Leaf Extracts Journal of Biomedical Science, 1(1), 34-39 Blois, M S (1958) Antioxidant determinations by the use of a stable free radical Nature, 181(4617), 1199-1200 Carraturo, A., Raieta, K., Tedesco, I., Kim, J., & Russo, G L (2014) Antibacterial activity of phenolic compounds derived from Ginkgo biloba SarcoTestas against foodborne pathogens British Microbiology Research Journal, 4(1), 18–27 Cushnie, T T., & Lamb, A J (2005) Antimicrobial activity of flavonoids International Journal of Antimicrobial Agents, 26(5), 343-356 Dixon, D M., & Walsh, T J (1996) Medical Microbiology Galveston (TX): University of Texas Medical Branch Doughari, J H (2012) Phytochemicals: Extraction methods, basic structures and mode of action as potential chemotherapeutic agents In Phytochemicals-A global perspective of their role in nutrition and health Nigeria: Modibbo Adama University of Technology El-Chaghaby, G A., Ahmad, A F., & Ramis, E S (2014) Evaluation of the antioxidant and antibacterial properties of various solvents extracts of Annona squamosa L leaves Arabian Journal of Chemistry, 7(2), 227-233 Ezealisiji, K M., & Tamuno-Eli, B (2017) Comparative evaluation of the phenolic and antioxidant properties of the leaves, root, stem 1420 ISSN 2588-1256 Vol 3(3) – 2019:1412-1422 bark, and root bark of Annona muricata (Annonaceae) Journal of Pharmacognosy and Phytochemistry, 6(2), 274-278 Ghagane, S C., Puranik, S I., Kumbar, V M., Nerli, R B., Jalalpure, S S., Hiremath, M B., & Aladakatti, R (2017) In vitro antioxidant and anticancer activity of Leea indica leaf extracts on human prostate cancer cell lines Integrative Medicine Research, 6(1), 7987 Hamid, R A., Foong, C P., Ahmad, Z., & Hussain, M K (2012) Antinociceptive and antiulcerogenicactivities of the ethanolic extract of Annona muricata leaf Revista Brasileira de Farmacognosia, 22(3), 630-641 Harold, C N., & Thomas, D G (1996) Medical Microbiology Galveston (TX): University of Texas Medical Branch Iqbal, E., Salim, K A., & Lim, L B (2015) Phytochemical screening, total phenolics and antioxidant activities of bark and leaf extracts of Goniothalamus velutinus (Airy Shaw) from Brunei Darussalam Journal of King Saud University - Science, 27(3), 224232 Javanmardi, J., Stushnoff, C., Locke, E., & Vivanco, J M (2003) Antioxidant activity and total phenolic content of Iranian Ocimum accessions Food chemistry, 83(4), 547-550 Kumoro, A C., Hasan, M., & Singh, H (2009) Effects of solvent properties on the Soxhlet extraction of diterpenoid lactones from Andrographis paniculata leaves Scienceasia, 35(3), 306-309 Marcilla, A., Valentin, E., Santandreu, R (1998) The cell wall structure: Developments in diagnosis and treatment of candidiasis International Microbiology, 1(2), 107-116 Moghadamtousi, S., Fadaeinasab, M., Nikzad, S., Mohan, G., Ali, H., & Kadir, H (2015) Annona muricata (Annonaceae): a review of its traditional uses, isolated acetogenins and biological activities International Journal of Molecular Sciences, 16(7), 15625-15658 Lương Phong Dũ cs TẠP CHÍ KHOA HỌC & CƠNG NGHỆ NƠNG NGHIỆP Narasimharaju, K., Nagarasanakote, V T., Nagepally, V J., Ramaiah, N., Sathyanarayana, S., & Bharat, K (2015) Antifungal and antioxidant activities of organic and aqueous extracts of Annona squamosa Linn Leaves Journal of Food and Drug Analysis, 23(4), 795-802 Hassim, N., Markom, M., Anuar, N., Dewi, K H., Baharum, S N., & Mohd, N N (2015) Antioxidant and antibacterial assays on Polygonum minus extracts: different extraction methods International Journal of Chemical Engineering Oluwatuyi, M., Kaatz, G W., & Gibbons, S (2004) Antibacterial and resistance modifying activity of Rosmarinus officinalis Phytochemistry, 65(24), 32493254 Padmaja, V., Thankamany, V., Hara, N., Fujimoto, Y., & Hisham, A (1995) Biological activities of Annona glabra Journal of ethnopharmacology, 48(1), 21-24 Pimenta, L P S., Pinto, G B., Takahashi, J A., Silva, L G F., & Boaventura, M A D (2003) Biological screening of Annonaceus Brazilian medicinal plants using Artemia salina (Brine Shrimp Test) Phytomedicine, 10, 209-212 Padma, R., Parvathy, N G., Renjith, V., Kalpana, P R., & Rahate, P (2013) Quantitative estimation of tannins, phenols, and antioxidant activity of methanolic extract of Imperata cylindrica International Journal of Research in Pharmaceutical Sciences, 4(1), 73-77 http://tapchi.huaf.edu.vn/ ISSN 2588-1256 Tập 3(3) – 2019:1412-1421 Saha, S., and Verma, R J (2016) Antioxidant activity of polyphenolic extract of Terminalia chebula Retzius fruits Journal of Taibah University for Science, 10(6), 805812 Siebra, C A., Nardin, J M., Florão, A., Rocha, F H., Bastos, D Z., Oliveira, B H., & Weffort-Santos, A M (2009) Potencial antiinflamatório de Annona glabra, Annonaceae Revista Brasileira Farmacognosia, 19(1), 82-88 Simn, S., Ríos, J L., Villar, A (1990) Antimicrobial activity of Annona cherimolia stem bark alkaloids Pharmazie, 45(6), 442– 443 Solomon-Wisdom, G O., Ugoh, S C., & Mohammed, B (2014) Phytochemical screening and antimicrobial activities of Annona muricata (L) leaf extract American Journal of Biological, Chemical and Pharmaceutical Sciences, 2(1), 01-07 Wu, X Z., Cheng, A X., Sun, L M., & Lou, H X (2008) Effect of plagiochin E, an antifungal macrocyclic bis (bibenzyl), on cell wall chitin synthesis in Candida albicans Acta Pharmacologica Sinica, 29(12), 1478-1485 Yadav, R N S., & Agarwala, M (2011) Phytochemical analysis of some medicinal plants Journal of phytology, 3(12), 10-14 Walnut, A A O (2015) Effects of extraction solvents on phytochemicals and antioxidant activities of walnut (Juglants regia L.) green husk extracts Qiang Zhang European Journal of Food Science and Technology, 3(5), 15-21 1421 HUAF JOURNAL OF AGRICULTURAL SCIENCE & TECHNOLOGY ISSN 2588-1256 Vol 3(3) – 2019:1412-1422 BIOCHEMICAL TESTING, ANTIOXIDANT, ANTIMICROBIAL AND ANTIFUNGAL ACTIVITIES OF THE POND APPLE (Annona glabra L.) LEAF EXTRACTS Luong Phong Du*, Do Thi Phuong Dung, Nguyen Duc Do * ABSTRACT Luong Phong Du The objective of this study was to partially evaluate on activities of antioxidant, antimicrobial and antifungal of Pond Apple (Annona glabra L.) leaves extracted from methanol and ethanol The leaf extracts were presented some phytochemicals such as phenolics, tannins, flavonoids, alkaloids, carotenoids, triterpenoids, steroids, quinones and saponins The total phenolics content was the highest in methanol leaf extract (LM) and the lowest in ethanol leaf extract (LE) with 37.828 and 31.828 mg gallic acid equivalents g-1 of extract, respectively The most effective antioxidant activity was LM, in which the IC50 value of DPPH free radical scavenging capacity was 59.03 μg/mL On the other hand, LE was the least effective with IC50 value at 131.47 μg/mL With the methods of scavenging hydrogen peroxide, LM demonstrated the highest antioxidant activity with the lowest IC50 value (139.27 μg/mL), LE (IC50 value = 156.45 μg/mL) was the lowest antioxidant efficacy In addition, the efficacy against B subtilis, C albicans, E coli was superior to the mg/mL ampicillin and μg/mL nystatin There was a correlation between the content of bioactive compounds and antioxidant, antimicrobial, antifungal activities of different solvent polarities Furthermore, these results indicated that the Pond Apple could be used in potentially dietary applications to reduce oxidative stress and human diseases Corresponding Author: Email: dum0517016@gstudent.ctu.edu.vn Biotech Research and Development Institute, Can Tho University Received: December 21st, 2018 Accepted: February 12th, 2019 Keywords: Antifungal, antimicrobial, Antioxidant, Pond Apple (Annona glabra L.) extracts, Total phenolics content 1422 Lương Phong Dũ cs ... ethanol 3.3 Khả kháng khuẩn, kháng nấm 3.3.1 Khả kháng khuẩn Đường kính vịng vơ khuẩn (mm) Đường kính vịng vơ khuẩn (mm) vào độ phân cực nó, mà hợp chất thực vật có cơng dụng riêng Do đó, chiết xuất... lượng hợp chất ly trích từ dung mơi methanol cho hiệu tốt so với dung môi ethanol Nghiệm thức có diện hợp chất nhiều khả kháng oxy hóa mạnh Khả kháng khuẩn, kháng nấm hai nghiệm thức cao chiết. .. hợp chất có khả ức chế nấm C albicans (Narasimharaju cs., 2015) Khả kháng C albicans hai nghiệm thức cao chiết Điều suy đốn khả kháng C albicans cao chiết không phụ thuộc vào dung môi Kết phù hợp