Nghiên cứu thu nhận chế phẩm phytoestrogen từ phôi đậu tương

Nghiên cứu thu nhận chế phẩm phytoestrogen từ phôi đậu tương.Nghiên cứu thu nhận chế phẩm phytoestrogen từ phôi đậu tương.Nghiên cứu thu nhận chế phẩm phytoestrogen từ phôi đậu tương.Nghiên cứu thu nhận chế phẩm phytoestrogen từ phôi đậu tương.Nghiên cứu thu nhận chế phẩm phytoestrogen từ phôi đậu tương.Nghiên cứu thu nhận chế phẩm phytoestrogen từ phôi đậu tương.Nghiên cứu thu nhận chế phẩm phytoestrogen từ phôi đậu tương.Nghiên cứu thu nhận chế phẩm phytoestrogen từ phôi đậu tương.Nghiên cứu thu nhận chế phẩm phytoestrogen từ phôi đậu tương.Nghiên cứu thu nhận chế phẩm phytoestrogen từ phôi đậu tương.Nghiên cứu thu nhận chế phẩm phytoestrogen từ phôi đậu tương.Nghiên cứu thu nhận chế phẩm phytoestrogen từ phôi đậu tương.Nghiên cứu thu nhận chế phẩm phytoestrogen từ phôi đậu tương.Nghiên cứu thu nhận chế phẩm phytoestrogen từ phôi đậu tương.Nghiên cứu thu nhận chế phẩm phytoestrogen từ phôi đậu tương.Nghiên cứu thu nhận chế phẩm phytoestrogen từ phôi đậu tương.Nghiên cứu thu nhận chế phẩm phytoestrogen từ phôi đậu tương.Nghiên cứu thu nhận chế phẩm phytoestrogen từ phôi đậu tương.Nghiên cứu thu nhận chế phẩm phytoestrogen từ phôi đậu tương.Nghiên cứu thu nhận chế phẩm phytoestrogen từ phôi đậu tương.Nghiên cứu thu nhận chế phẩm phytoestrogen từ phôi đậu tương.Nghiên cứu thu nhận chế phẩm phytoestrogen từ phôi đậu tương.Nghiên cứu thu nhận chế phẩm phytoestrogen từ phôi đậu tương.Nghiên cứu thu nhận chế phẩm phytoestrogen từ phôi đậu tương.

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI Lê Minh Châu NGHIÊN CỨU THU NHẬN CHẾ PHẨM PHYTOESTROGEN TỪ PHÔI ĐẬU TƯƠNG LUẬN ÁN TIẾN SĨ CÔNG NGHỆ SINH HỌC Hà Nội – 2023 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI Lê Minh Châu NGHIÊN CỨU THU NHẬN CHẾ PHẨM PHYTOESTROGEN TỪ PHƠI ĐẬU TƯƠNG Ngành: Cơng nghệ Sinh học Mã số: 9420201 LUẬN ÁN TIẾN SĨ CÔNG NGHỆ SINH HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS TS ĐỖ THỊ HOA VIÊN PGS TS HỒ PHÚ HÀ Hà Nội - 2023 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan số liệu kết nghiên cứu luận án trung thực chưa tác giả khác công bố Tôi xin cam đoan giúp đỡ việc hoàn thành luận án cảm ơn thông tin luận án ghi rõ nguồn gốc Tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm số liệu luận án Hà Nội, ngày tháng năm 2023 Nghiên cứu sinh Lê Minh Châu Tập thể giáo viên hướng dẫn PGS.TS Đỗ Thị Hoa Viên PGS.TS Hồ Phú Hà i LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành luận án Tiến sỹ này, bên cạnh cố gắng nỗ lực thân, nhận giúp đỡ lớn nhiều thầy, cô giáo, tập thể Tôi xin bày tỏ lòng cảm ơn chân thành sâu sắc đến PGS.TS – Đỗ Thị Hoa Viên – Bộ môn Công nghệ Sinh học PGS.TS – Hồ Phú Hà – Bộ môn Công nghệ Thực phẩm – Viện Công nghệ Sinh học Công nghệ Thực phẩm – Đại học Bách Khoa Hà Nội, người tận tình hướng dẫn, định hướng, đào tạo giúp đỡ suốt q trình nghiên cứu hồn thành luận án Tôi xin chân thành cảm ơn tới thầy cô giáo, cán Bộ môn Công nghệ Sinh học – Viện Công nghệ Sinh học Công nghệ Thực phẩm – Đại học Bách Khoa Hà Nội tận tình giúp đỡ, bảo động viên tơi suốt q trình học tập nghiên cứu Tơi xin gửi lời cảm ơn tới cán bộ, công nhân viên khoa Hóa Thực phẩm – Viện Dinh dưỡng Quốc gia, phịng Thử nghiệm sinh học – Viện Cơng nghệ sinh học – Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam giúp đỡ thực nghiên cứu Tơi xin chân thành cảm ơn anh chị em đồng nghiệp Khoa Công nghệ Thực phẩm – Trường Đại học Kinh tế - Kỹ thuật Công nghiệp nơi công tác giảng dạy tạo điều kiện thuận lợi cho học tập thực Luận án Cuối xin gửi tới gia đình bạn bè – người thân nguồn động viên, giúp đỡ trình học tập nghiên cứu lời cảm ơn chân thành Hà Nội, ngày tháng năm 2023 Nghiên cứu sinh Lê Minh Châu ii MỤC LỤC DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT vi DANH MỤC CÁC BẢNG ix DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ xi MỞ ĐẦU Chương 1: TỔNG QUAN 1.1 Cây đậu tương phôi đậu tương 1.1.1 Tình hình sản xuất tiêu thụ đậu tương Việt Nam 1.1.2 Thành phần hóa học phôi đậu tương 1.1.3 Thành phần chất có hoạt tính sinh học phôi đậu tương 1.2 Phytoestrogen 1.2.1 Tổng quan phytoestrogen 1.2.2 Phytoestrogen phôi đậu tương 12 1.2.3 Khả dụng sinh học phytoestrogen đậu tương 14 1.2.4 Lợi ích phytoestrogen aglycone đậu tương chất chuyển hóa chúng với sức khỏe người 16 1.2.5 Tính an tồn phytoestrogen đậu tương 19 1.3 Các phương pháp chiết xuất phytoestrogen 21 1.3.1 Các phương pháp truyền thống 21 1.3.2 Các phương pháp đại 22 1.3.3 Phương pháp chiết xuất phytoestrogen phôi đậu tương 26 1.4 Sự chuyển hóa phytoestrogen glucoside đậu tương thành aglycone 28 1.4.1 Sự chuyển hóa phytoestrogen glucoside enzyme 29 1.4.2 Sự chuyển hóa phytoestrogen glucoside vi sinh vật 33 1.5 Phương pháp tinh phytoestrogen aglycone 35 1.6 Các sản phẩm có chứa phytoestrogen từ đậu tương 36 Chương 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 38 2.1 Vật liệu 38 2.1.1 Phôi đậu tương 38 2.1.2 Hóa chất 38 2.1.3 Động vật thực nghiệm 39 2.1.4 Thiết bị thí nghiệm 39 2.2 Bố trí thí nghiệm phương pháp nghiên cứu 39 2.2.1 Phương pháp đánh giá xử lý nguyên liệu 41 2.2.2 Xây dựng chế độ chiết xuất phytoestrogen 44 iii 2.2.3 Phương pháp thu nhận phytoestrogen aglycone 45 2.2.4 Phương pháp đánh giá khả chống oxy hóa cao chiết phytoestrogen 48 2.2.5 Phương pháp đánh giá hoạt tính phytoestrogen in vivo 49 2.3 Xử lý số liệu 51 Chương 3: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 53 3.1 Đánh giá xử lý nguyên liệu 53 3.1.1 Đánh giá hàm lượng tạp chất phôi đậu tương 53 3.1.2 Đặc tính bột phơi đậu tương 53 3.1.3 Đặc tính bột phôi đậu tương loại lipid 56 3.2 Xây dựng chế độ chiết xuất phytoestrogen 58 3.2.1 Khảo sát yếu tố ảnh hưởng đến trình chiết xuất phytoestrogen 58 3.2.2 Tối ưu hóa phương pháp đáp ứng bề mặt 64 3.3 Thu nhận phytoestrogen aglycone 72 3.3.1 Thu nhận cao phytoestrogen tổng 72 3.3.2 Chuyển hóa phytoestrogen glucoside thành aglycone enzyme βglucosidase 73 3.3.3 Chuyển hóa phytoestrogen glucoside thành aglycone enzyme cellulase 78 3.3.4 So sánh hiệu trình thủy phân glucoside enzyme βglucosidase cellulase 85 3.3.5 Tinh phytoestrogen aglycone 88 3.4 Đánh giá khả chống oxy hóa cao chiết phytoestrogen 92 3.4.1 Đánh giá khả quét gốc tự DPPH cao chiết phytoestrogen 93 3.4.2 Đánh giá lực khử sắt cao chiết phytoestrogen 94 3.5 Đánh giá hoạt tính phytoestrogen in vivo 97 3.5.1 Thử nghiệm liều phytoestrogen an toàn chuột BALB/c 97 3.5.2 Ảnh hưởng cao chiết phytoestrogen đến trọng lượng chuột thí nghiệm…… 97 3.5.3 Ảnh hưởng cao chiết phytoestrogen đến khối lượng tử cung 99 3.5.4 Ảnh hưởng cao chiết phytoestrogen đến số lượng noãn trứng 103 3.5.5 Ảnh hưởng cao chiết phytoestrogen đến hàm lượng estradiol 107 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 111 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ CỦA LUẬN ÁN 113 TÀI LIỆU THAM KHẢO 114 PHỤ LỤC iv PHỤ LỤC Phụ lục Sắc ký đồ HPLC chất chuẩn phytoestrogen Phụ lục Sắc ký đồ HPLC bột phôi đậu tương Phụ lục Sắc ký đồ HPLC bột phôi đậu tương loại lipid Phụ lục Sắc ký đồ HPLC cao phytoestrogen tổng Phụ lục Sắc ký đồ HPLC cao phytoestrogen aglycone thô Phụ lục Sắc ký đồ HPLC cao phytoestrogen aglycone thô 10 Phụ lục Sắc ký đồ HPLC cao phytoestrogen aglycone tinh .12 Phụ lục Khả quét gốc tự DPPH cao chiết 14 Phụ lục Năng lực khử sắt cao chiết 14 Phụ lục 10 Dạng mơ hình tương quan khả quét gốc DPPH acid ascorbic 15 Phụ lục 11 Dạng mơ hình tương quan khả qt gốc DPPH cao phytoestrogen tổng 16 Phụ lục 12 Dạng mơ hình tương quan khả qt gốc DPPH cao phytoestrogen aglycone thô 17 Phụ lục 13 Dạng mơ hình tương quan khả qt gốc DPPH cao phytoestrogen aglycone tinh 18 Phụ lục 14 Dạng mô hình tương quan lực khử sắt acid ascorbic 19 Phụ lục 15 Dạng mơ hình tương quan lực khử sắt cao phytoestrogen tổng 20 Phụ lục 16 Dạng mô hình tương quan lực khử sắt cao phytoestrogen aglycone thô 21 Phụ lục 17 Dạng mơ hình tương quan lực khử sắt cao phytoestrogen aglycone tinh 22 Phụ lục 18 Kiểm tra pair T-Test với cân nặng nhóm thí nghiệm 23 Phụ lục 19 Kiểm tra phân bố chuẩn số liệu ngoại lai khối lượng tử cung 26 Phụ lục 20 Kiểm tra T-Test khối lượng tử cung với nhóm nghiên cứu 27 Phụ lục 21 Kiểm tra phân bố chuẩn số liệu ngoại lai số nang sơ cấp .32 Phụ lục 22 Kiểm tra T-Test với số lượng nang sơ cấp 33 Phụ lục 23 Kiểm tra phân bố chuẩn số liệu ngoại lai hàm lượng estradiol huyết 38 Phụ lục 24 Kiểm tra T-Test với hàm lượng estradiol nhóm nghiên cứu 39 v DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Tên tiếng Anh Tên tiếng Việt Acid deoxyribonucleic ADN ANOVA Analysis of variance Phân tích phương sai ASE Accelerated solvent extraction Phương pháp chiết xuất chất lỏng có áp suất AUC Area under the curve Vùng đường cong BMP-2 Bone morphogenetic protein Chất khô CK DPPH 2,2-diphenyl-picrylhydrazyl ĐCSL Đối chứng sinh lý đvC Đơn vị carbon E2 17-β-estradiol ELISA Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay Kỹ thuật enzyme liên kết kháng thể ER Estrogen receptor Thụ thể estrogen FAO Food and Agriculture Organization of the United Nations Tổ chức Lương thực Nông nghiệp Liên hợp quốc FDA Food and Drug Administration Cục quản lý Thực phẩm Dược phẩm Hoa Kỳ HDL-C High density lipoprotein cholesterol Lipoprotein cholesterol tỉ trọng cao HER Human epidement growth factor receptor Thụ thể yếu tố tăng trưởng thượng bì HPLC High-performance liquid chromatography Sắc ký lỏng hiệu cao HPR Horseradish Peroxidase LAB Lactic acid bacteria Vi khuẩn sinh acid lactic vi LD0 Lethal dose 0% Liều an toàn LDL-C Low density lipoprotein cholesterol Lipoprotein cholesterol tỉ trọng thấp LOF Lack of fit MAE Microwave-asissted extraction Phương pháp chiết xuất có hỗ trợ vi sóng Acid ribonucleic thông tin mARN MSPD Matrix solid-phase dispersion Phương pháp chiết xuất phân tán pha rắn ma trận NAMS North American Menopause Society Hiệp hội mãn kinh Bắc Mỹ NPCE Negative pressure cavitation extraction Phương pháp chiết xuất xâm thực áp suất âm OD Optical density Phép đo mật độ quang PCNA Proliferating cell nuclear antigen Kháng nguyên nhân tế bào tăng sinh PLE Pressurized liquid extraction Phương pháp chiết xuất lỏng cao áp PR Progesterone PSE Pressurized solvent extraction Phương pháp chiết xuất dung môi cao áp SD Standard deviation Độ lệch chuẩn Carbon dioxide siêu tới hạn SC-CO2 SFE Supercritical fluid extraction Phương pháp chiết xuất chất lỏng siêu tới hạn SLE Solid liquid extraction Phương pháp chiết xuất rắn - lỏng SPE Solid phase extraction Phương pháp chiết xuất pha rắn SPSS Statistical package for the Social Phần mềm máy tính phục vụ cơng tác phân tích thống kê vii TCVN Tiêu chuẩn Việt Nam Topo Topoisomerase UAE Ultrasonication-asissted extraction Phương pháp chiết xuất có hỗ trợ siêu âm UNU University of united nation Đại học Liên hợp quốc US United nation of states Hoa Kỳ UV Ultra violet Tia cực tím UVB Ultra violet-B Tia cực tím loại B VCD 4-vinylcyclohexene diepoxide VLDL-C Very low density lipoprotein cholesterol Lipoprotein cholesterol tỉ trọng thấp WHO World Health Organization Tổ chức Y tế giới viii