Nghiên cứu thu nhận chế phẩm vi sinh vật tổng hợp enzym pectinase, cellulase và ứng dụng trong sản xuất cà phê nhân theo phương pháp lên men

ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP HCM TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN LÊ HỒNG PHÚ NGHIÊN CỨU THU NHẬN CHẾ PHẨM VI SINH VẬT TỔNG HỢP ENZYME PECTINASE, CELLULASE VÀ ỨNG DỤNG TRONG SẢN XUẤT CÀ PHÊ NHÂN THEO PHƢƠNG PHÁP LÊN MEN LUẬN ÁN TIẾN SĨ SINH HỌC TP.HCM - 2012 ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP HCM TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN LÊ HỒNG PHÚ NGHIÊN CỨU THU NHẬN CHẾ PHẨM VI SINH VẬT TỔNG HỢP ENZYME PECTINASE, CELLULASE VÀ ỨNG DỤNG TRONG SẢN XUẤT CÀ PHÊ NHÂN THEO PHƢƠNG PHÁP LÊN MEN Chuyên ngành: Hóa Sinh Mã số: 1.05.10 LUẬN ÁN TIẾN SĨ SINH HỌC NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC PGS.TS NGUYỄN ĐỨC LƢỢNG TP HCM – 2012 LỜI CẢM ƠN Chân thành cảm ơn đến thầy: PGS TS NGUYỄN ĐỨC LƢỢNG Ngƣời khơi gợi cho ý tƣởng đề tài ngƣời hƣớng dẫn cho thực đề tài Trân trọng cảm ơn cô PGS TS ĐỒNG THỊ THANH THU PGS TS PHẠM THỊ ÁNH HỒNG giảng viên để suốt đời học hỏi hỗ trợ nhiều mặt tinh thần học thuật Trân trọng cảm ơn TS LÊ PHI NGA giúp đỡ tạo điều kiện cho tơi hồn thành đề tài Tri ân ba suốt đời tận tụy tiến con, vơ cảm ơn mẹ với trái tim nhân hậu nguồn động viên lớn lao Cảm ơn NGUYỄN THỊ KIM CHÂU, ngƣời ln hết lịng ủng hộ giúp đỡ lớn lao để tơi hồn thành tốt luận án Cảm ơn tất thành viên nhóm dự án nghiên cứu sản xuất cà phê chất lƣợng cao nhằm mục đích xuất Nguyễn Thảo Nguyên Đỗ Đại Nghĩa Nguyễn Thị Minh Trinh Nguyễn Hữu Thái Ngô Tiến Hiễn Vinh Lê Thị Lệ Phạm Mỹ Vẹn Nguyễn Thị Kim Châu Nguyễn Thị Ngà 10 Cao Hoàng Tấn 11 Nguyễn Văn Hân 12 Nguyễn Thị Bảo Anh 13 Nguyễn Thị Cẩm Vân 14 Võ Ngọc Thanh Đã nỗ lực tơi vƣợt qua nhiều khó khăn hỗ trợ tơi hoàn tất nội dung nghiên cứu luận án Và cuối cho đƣợc cảm ơn Ban chủ nhiệm khoa đồng nghiệp Khoa CNSH ĐH Quốc Tế nơi công tác giúp đỡ tạo điều kiện để tơi hồn thành luận án Tác giả luận án Lê Hồng Phú I LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng Các số liệu kết Luận án trung thực chưa cơng bố cơng trình khác Tác giả Luận án II MỤC LỤC Lời cam đoan I Mục lục II Danh mục ký hiệu, chữ viết tắt VI Danh mục bảng VII Danh mục hình IX MỞ ĐẦU CHƢƠNG 1- TỔNG QUAN 1.1 GIỚI THIỆU CHUNG VỀ CÀ PHÊ 1.1.1 Sơ lƣợc lịch sử phát triển cà phê Việt Nam 1.1.2 Giá trị kinh tế cà phê 1.1.3 Tình hình sản xuất cà phê 1.1.4 Tầm quan trọng ngành chế biến cà phê Việt Nam 1.1.5 Những vấn đề kỹ thuật cần nghiên cứu chế biến cà phê 1.2 TRÁI CÀ PHÊ 10 1.2.1 Cấu tạo trái cà phê 10 1.2 Thành phần hóa học 11 1.2.2.1 Thành phần hóa học vỏ 11 1.2.2.2 Thành phần hóa học lớp nhớt 12 1.3 NHÂN CÀ PHÊ 12 1.3.1 Thành phần hóa học nhân cà phê 12 1.3.1.1 Carbohydrates 13 1.3.1.2 Hợp chất chứa nitơ 14 1.3.1.3 Acid chlorogenic 17 1.3.1.4 Hương thơm cà phê 18 1.3.1.5 Acid carboxylic 19 1.3.1.6 Các chất khoáng 20 1.3.2 Tính chất vật lý 20 1.4 PECTIN 21 1.4.1 Cấu tạo pectin 21 1.4.2 Tính chất pectin 22 1.4.2.1 Tính chất làm đơng đặc 22 1.4.2.2 Tính tạo gel pectin 22 1.4.2.3 Tính nhớt dung dịch pectin 22 1.4.2.4 Pectin trái cà phê 23 1.4.3 Ứng dụng 23 1.5 CELLULOSE 23 1.5.1 Cấu tạo 23 1.5.2 Tính chất 24 1.5.3 Ứng dụng 25 1.5.4 Cellulose trái cà phê 25 1.6 GIỚI THIỆU CHUNG ENZYME PECTINASE VÀ CELLULASE 25 III 1.6.1 Pectinase 26 1.6.1.1 Phân loại chế tác động 26 1.6.1.2 Ứng dụng 27 1.6.1.3 Hệ vi sinh vật có khả tổng hợp enzyme pectinase 27 1.6.2 Cellulase 27 1.6.2.1 Phân loại chế tác dụng 27 1.6.2.2 Ứng dụng 29 1.6.2.3 Hệ vi sinh vật có khả tổng hợp enzyme cellulase 30 1.7 GIỚI THIỆU VI SINH VẬT SINH PECTINASE VÀ CELLULASE ĐƢỢC NGHIÊN CỨU TRONG LUẬN ÁN VÀ PHƢƠNG PHÁP ĐỊNH DANH VSV 30 1.7.1 Tổng quan chung vi sinh vật 30 1.7.2 Phƣơng pháp định danh vi sinh vật 31 1.8 CƠ SỞ KHOA HỌC CỦA VIỆC TÁCH VỎ VÀ LÊN MEN CÀ PHÊ 32 1.8.1 Giới thiệu tách vỏ cà phê 32 1.8.1.1 Sơ lược nghiên cứu tách vỏ cà phê giới 32 1.8.1.2 Sơ lược nghiên cứu tách vỏ cà phê nước 32 1.8.2 Giới thiệu lên men cà phê 33 1.8.2.1 Sơ lược lên men cà phê giới 34 1.8.2.2 Sơ lược lên men cà phê nước 38 1.8.3 Tăng suất tách vỏ lớp nhớt cà phê tƣơi 39 1.8.4 Nâng cao hiệu suất trích ly cà phê bột 39 1.8.5 Cải thiện chất lƣợng cảm quan cà phê 39 CHƢƠNG - VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 41 2.1 VẬT LIỆU 41 2.1.1 Nhân cà phê 41 2.1.1.1 Giống 41 2.1.1.2 Nguồn gốc 41 2.1.2 Nguồn vi sinh vật nghiên cứu 41 2.1.2.1 Nấm sợi 41 2.1.2.2 Nấm men 41 2.1.2.3 Vi khuẩn 41 2.1.3 Môi trƣờng sử dụng 41 2.1.3.1 Môi trường phân lập nuôi cấy nấm sợi, nấm men vi khuẩn 41 2.1.3.1 Môi trường phân lập nuôi cấy nấm sợi, nấm men vi khuẩn 41 2.1.3.2 Môi trường nhân giống 42 2.1.3.3 Môi trường giữ giống 42 2.1.4 Hóa chất 42 2.1.4.1 Hóa chất sử dụng cho môi trường 42 2.1.4.2 Hóa chất sử dụng cho phương pháp xác định hoạt tính enzyme 42 2.1.4.3 Hóa chất sử dụng cho phương pháp xác định thành phần 43 2.1.5 Thiết bị - dụng cụ 43 2.2 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 44 2.2.1 Phƣơng pháp vi sinh vật 44 IV 2.2.1.1 Phương pháp phân lập giống vi sinh vật từ nhân cà phê 44 2.2.1.2 Phương pháp cấy chuyền giữ giống (trong điều kiện vô trùng) 44 2.2.1.3 Phương pháp nhân giống 44 2.2.1.4 Phương pháp lên men 44 2.2.1.5 Phương pháp đếm tế bào vi sinh vật chế phẩm 45 2.2.2 Phƣơng pháp hóa lý 45 2.2.2.1 Phương pháp xác định độ ẩm 45 2.2.2.2 Phương pháp trích chất hịa tan 46 2.2.2.3 Phương pháp nghiền 46 2.2.2.4 Phương pháp rây 46 2.2.2.5 Phương pháp ngâm 46 2.2.3 Phƣơng pháp hóa sinh 47 2.2.3.1 Các phương pháp xác định hoạt tính enzyme cellulase, pectinase 47 2.2.3.2 Các phương pháp xác định thành phần chủ yếu cà phê 52 2.2.4 Phƣơng pháp định danh vi sinh vật 60 2.2.4.1 Phương pháp định danh nấm sợi 60 2.2.4.2 Phương pháp định danh vi khuẩn nấm men 61 2.2.5 Cách bố trí thí nghiệm 62 Thí nghiệm 1: Khảo sát thành phần pectin cellulose lớp nhớt thành phần hóa học chủ yếu nhân cà phê 65 Thí nghiệm 2: Phân lập định danh chủng vi sinh vật từ vỏ, nhân cà phê 65 Thí nghiệm 3: Nghiên cứu tạo chế phẩm vi sinh vật có hoạt tính pectinase cellulase 66 Thí nghiệm 4: Nghiên cứu trình tách vỏ cà phê 71 Thí nghiệm 5: Nghiên cứu ứng dụng chế phẩm lên men nhằm nâng cao hiệu suất trích chất hịa tan chất lượng cà phê 73 Thí nghiệm 6: Lên men cà phê theo cách kết hợp chế phẩm 75 Thí nghiệm 7: Kiểm tra độc tố aflatoxin, hàm lượng caffeine phẩm 75 Thí nghiệm 8: Đánh giá cảm quan 76 Thí nghiệm 9: Thử nghiệm lên men kết hợp chế phẩm tốt từ nấm sợi, nấm men vi khuẩn 76 2.2.6 Phƣơng pháp đánh giá cảm quan 76 2.2.7 Phƣơng pháp xử lý số liệu 79 CHƢƠNG - KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN .80 3.1 THÀNH PHẦN HÓA HỌC CHỦ YẾU CÓ TRONG CÀ PHÊ 80 3.1.1 Thành phần pectin cellulose lớp nhớt 80 3.1.2 Thành phần hóa học chủ yếu có nhân cà phê 80 3.2 PHÂN LẬP VÀ ĐỊNH DANH CÁC CHỦNG VI SINH VẬT 82 3.2.1 Phân lập định danh chủng nấm sợi vỏ, nhân cà phê 82 3.2.2 Phân lập định danh chủng nấm men vi khuẩn vỏ, nhân cà phê 86 3.3 NGHIÊN CỨU TẠO CÁC CHẾ PHẨM VSV 89 V 3.3.1 Nghiên cứu điều kiện tạo chế phẩm có hoạt tính pectinase cao 89 3.3.1.1 Xác định môi trường tối ưu cho sinh tổng hợp enzyme pectinase 89 3.3.1.2 Xác định độ ẩm tối ưu cho sinh tổng hợp enzyme pectinase 94 3.3.1.3 Xác định thời gian tối ưu cho sinh tổng hợp enzyme pectinase chủng nấm sợi 96 3.3.1.4 Xác định nồng độ đường ( oBrix ) dung dịch malt đến sinh tổng hợp enzyme pectinase 101 3.3.1.5 Xác định pH ban đầu dung dịch malt đến khả sinh tổng hợp enzyme pectinase 103 43.3.1.6 Ảnh hưởng lượng muối (NH4)2SO4 bổ sung đến khả sinh tổng hợp enzyme pectinase 105 3.3.1.7 Xác định nhiệt độ nuôi đến khả sinh tổng hợp enzyme pectinase 107 3.3.1.8 Tổng kết quy trình tạo chế phẩm có hoạt tính pectinase cao 109 3.3.2 Nghiên cứu điều kiện tạo chế phẩm có hoạt tính cellulase cao 110 3.3.2.1 Xác định môi trường tối ưu cho sinh tổng hợp enzyme cellulase 110 3.3.2.2 Xác định độ ẩm tối ưu cho sinh tổng hợp enzyme cellulase 114 3.3.2.3 Xác định ảnh hưởng thời gian ni đến q trình sinh tổng hợp cellulase chủng vi sinh vật 116 3.3.2.4 Tổng kết quy trình tạo chế phẩm có hoạt tính cellulase cao 120 3.4 KHẢO SÁT CHẤT LƢỢNG CHẾ PHẨM THEO THỜI GIAN BẢO QUẢN 121 3.4.1 Số lƣợng tế bào vsv thay đổi theo thời gian bảo quản 122 3.4.2 Khảo sát hoạt tính enzyme pectinase thay đổi theo thời gian bảo quản 123 3.4.3 Khảo sát hoạt tính enzyme cellulase thay đổi theo thời gian bảo quản 124 3.4.4 Tổng kết khảo sát chất lƣợng chế phẩm theo thời gian bảo quản sơ hạch toán kinh tế 125 3.5 NGHIÊN CỨU QUÁ TRÌNH TÁCH VỎ CÀ PHÊ 125 3.5.1 Khảo sát ảnh hƣởng lƣợng chế phẩm vsv đến khả tách vỏ cà phê tƣơi 126 3.5.2 Khảo sát ảnh hƣởng thời gian xử lý đến khả tách vỏ cà phê tƣơi 128 3.5.3 Tổng kết nghiên cứu q trình tách vỏ cà phê cơng nghệ tách vỏ cà phê 129 3.6 KẾT QUẢ QUÁ TRÌNH LÊN MEN 129 3.6.1 Ảnh hƣởng thời gian ngâm độ ẩm cà phê 130 3.6.2 Ảnh hƣởng độ ẩm cà phê đến khả chiết chất hòa tan nhân cà phê 130 3.6.2.1 Ảnh hưởng độ ẩm cà phê đến khả chiết chất hòa tan Coffea arabica 131 3.6.2.2 Ảnh hưởng độ ẩm cà phê đến khả chiết chất hòa tan Coffea robusta 131 3.6.2.3 Ảnh hưởng độ ẩm cà phê đến khả chiết chất hòa tan Coffea chari 132 3.6.3 Ảnh hƣởng lƣợng chế phẩm vsv đến khả chiết chất hòa tan nhân cà phê 133 VI 3.6.3.1 Ảnh hưởng lượng chế phẩm vsv đến khả chiết chất hòa tan Coffea arabica 133 3.6.3.2 Ảnh hưởng lượng chế phẩm vsv đến khả chiết chất hòa tan Coffea robusta 135 3.6.3.3 Ảnh hưởng lượng chế phẩm vsv đến khả chiết chất hòa tan Coffea chari 137 3.6.4 Ảnh hƣởng thời gian lên men đến khả chiết chất hòa tan nhân cà phê 139 3.6.4.1 Ảnh hưởng thời gian lên men đến khả chiết chất hòa tan Coffea C arabica CPVSV từ nấm sợi 139 3.6.4.2 Ảnh hưởng thời gian lên men đến khả chiết chất hòa tan Coffea C C robusta CPVSV từ nấm sợi 141 3.6.4.3 Ảnh hưởng thời gian lên men đến khả chiết chất hòa tan Coffea chari CPVSV từ nấm sợi 143 3.6.5 Tổng kết nghiên cứu lên men nhân cà phê quy trình lên men 145 3.6.6 Nghiên cứu đánh giá cảm quan cà phê 145 3.6.6.1 Đánh giá cảm quan cà phê C arabica 146 3.6.6.2 Đánh giá cảm quan cà phê C robusta 147 3.6.6.3 Đánh giá cảm quan cà phê C chari 147 3.6.7 Thử nghiệm lên men kết hợp chế phẩm tốt từ nấm sợi, nấm men vi khuẩn 148 3.6.7.1 Khảo sát nồng độ chất tan lên men kết hợp 149 3.6.7.2 Khảo sát hàm lượng caffeine giải phóng lên men kết hợp 151 3.6.8 Quy trình tách vỏ lên men cà phê chế phẩm 153 3.6.8.1 Quy trình tách vỏ chế phẩm vsv 153 3.6.8.2 Quy trình lên men cà phê chế phẩm vsv 154 CHƢƠNG - KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 157 DANH MỤC CƠNG TRÌNH .159 TÀI LIỆU THAM KHẢO 161 PHỤ LỤC 170 VII DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Chữ tắt Chữ nguyên Ý nghĩa C arabica C chari C robusta CMC Coffea arabica Coffea chari Coffea robusta Carboxymethylcellulose Chế phẩm vi sinh vật Caffeoxyl quinic acid Cà phê chè Cà phê mít Cà phê vối Một dẫn xuất cellulose CPVSV CQA CT DNS ĐC MT NL PGA PTN TCVN TN vsv Chế phẩm vi sinh vật Hợp chất thơm cà phê Canh trƣờng Canh trƣờng 3,5 - dinitrosalicylic acid Một chất thử cho xác định đƣờng khử Đối chứng Đối chứng Môi trƣờng Môi trƣờng Nguyên liệu Nguyên liệu Potato glucose agar Môi trƣờng giữ giống gồm khoai tây, glucose thạch Phịng thí nghiệm Phịng thí nghiệm Tiêu chuẩn Việt Nam Tiêu chuẩn Việt Nam Thí nghiệm Thí nghiệm Vi sinh vật Vi sinh vật Biocoffee8 Duncan Subset for alpha = 0.05 Sample N 3 3 33.0000 10 33.0000 Sig 9.4400 10.4933 12.0667 15.6667 19.4333 22.4433 24.5000 27.1667 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 Biocoffee10 Duncan Subset for alpha = 0.05 Sample N 3 3 31.5333 10 31.7200 Sig 7.2733 10.4067 11.2333 15.6600 19.3433 21.5067 22.1467 26.2667 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 529 N17 Khảo sát ảnh hưởng thời gian xử lý đến khả tách vỏ cà phê tươi Biocoffee1 Duncan Biocoffee2 Duncan Subset for alpha = 0.05 sample N 1 3 Subset for alpha = 0.05 sample 91.4333 N 3 85.6667 99.2533 3 87.5867 99.2533 98.4700 99.2533 98.8733 3 99.3200 99.1400 95.0200 Sig 1.000 1.000 950 Sig 1.000 Duncan Biocoffee3 Duncan 79.7067 N sample 85.4800 3 99.1933 99.1933 99.2533 88.0733 91.9867 Sig 1.000 1.000 1.000 953 Biocoffe10 Duncan N N 93.9067 95.7267 3 97.8200 99.3333 99.3333 99.3333 Sig .076 3 3 160 Control Duncan 2 Subset for alpha = 0.05 sample 544 Subset for alpha = 0.05 Subset for alpha = 0.05 sample 084 Biocoffee8 Subset for alpha = 0.05 sample 57.5867 99.0667 3 99.1867 99.6667 79.9533 99.6667 81.5500 Sig 92.9400 N 95.0800 1.000 1.000 540 Sig 63.0533 67.2000 74.9467 1.000 1.000 1.000 1.000 057 KẾT QUẢ QUÁ TRÌNH LÊN MEN N18 Ảnh hưởng thời gian ngâm độ ẩm cà phê C.arabica Duncan C.robusta Duncan Subset for alpha = 0.05 sample N Subset for alpha = 0.05 3 3 57.7333 59.8667 sample 32.0000 N 3 57.8333 3 59.6667 59.6667 60.2667 60.2667 59.8667 61.1333 61.0000 61.6333 61.2333 61.7333 61.3333 62.2000 61.3333 62.2000 Sig 48.7667 54.8667 1.000 1.000 1.000 103 302 39.5333 Sig 1.000 096 107 N19 Ảnh hưởng lượng CPVSV từ nấm sợi đến khả chiết chất hòa tan Coffea arabica C.chari Duncan Control Duncan Subset for alpha = 0.05 Subset for alpha = 0.05 sample N sample 30.9333 3 52.8000 54.8000 57.3333 58.7333 58.7333 59.7333 59.7333 60.7333 60.7333 44.5667 N 1.000 1.000 109 070 138 20.1000 20.2000 20.2000 3 20.7700 22.1333 23.1667 Sig 25.210 Sig .710 051 1.000 1.000 1.000 N19 Ảnh hưởng lượng CPVSV từ nấm sợi đến khả chiết chất hòa tan Coffea arabica Biocoffee1CPVSV Duncan Biocoffee3CPVSV Duncan Subset for alpha = 0.05 sample N Subset for alpha = 0.05 sample N 24.3333 25.0667 24.8367 25.7633 3 25.8000 3 3 Sig 26.3600 27.2800 30.1667 33.2433 094 1.000 1.000 1.000 1.000 Biocoffee8CPVSV Duncan N 1 3 3 Sig 27.8167 30.3300 Sig .069 1.000 sample N 29.6567 30.0400 29.6667 30.7067 31.6667 31.9000 31.6933 32.6967 3 30.6667 980 1.000 1.000 Subset for alpha = 0.05 26.8633 1.000 1.000 Biocoffee10CPVSV Duncan 26.7967 Subset for alpha = 0.05 sample 065 Sig 27.8667 30.7067 32.6967 1.000 151 051 1.000 N20 Ảnh hưởng lượng CPVSV từ nấm men vi khuẩn đến khả chiết chất hòa tan Coffea arabica Biocoffee12CPVSV Duncan Biocoffee14CPVSV Duncan Subset for alpha = 0.05 Subset for alpha = 0.05 sample N sample N 1 19.4667 21.4333 19.8000 5 22.3667 3 22.8667 22.8667 3 23.4000 3 21.3167 Sig .266 1.000 106 087 Biocoffee15CPVSV Duncan N 1 3 3 Sig 25.3667 26.8400 28.3667 Sig sample 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 Control N 3 19.9967 20.3333 22.8700 21.2233 23.4267 21.7000 24.2933 3 22.9567 24.6333 23.6333 20.1933 1.000 Subset for alpha = 0.05 18.2667 1.000 24.3900 Duncan 23.3533 Subset for alpha = 0.05 sample 078 263 Sig .332 178 065 1.000 N21 Ảnh hưởng lượng CPVSV từ nấm sợi đến khả chiết chất hòa tan Coffea robusta Biocoffee1CPVSV Duncan Biocoffee2CPVSV Duncan Subset for alpha = 0.05 sample N 3 3 3 Sig Subset for alpha = 0.05 sample 28.3667 28.3900 28.8567 28.8767 28.8767 29.8567 29.4267 30.1933 3 32.3833 103 248 1.000 Biocoffee3CPVSV N 3 27.3667 Sig 1 25.4267 25.8167 25.8467 1.000 265 211 1.000 Subset for alpha = 0.05 sample N 29.9067 25.8167 25.8467 3 26.1867 35.7667 26.4267 35.8300 3 28.7833 199 078 1.000 Biocoffee8CPVSV Sig 33.0133 Duncan 30.5667 Subset for alpha = 0.05 sample 27.4267 1.000 Duncan N 1.000 Sig 32.1500 34.7433 36.8600 1.000 1.000 1.000 829 1.000 Biocoffee10CPVSV Duncan Control Duncan Subset for alpha = 0.05 sample N 1 3 3 Sig Subset for alpha = 0.05 sample N 20.1500 31.8867 20.3167 32.0033 3 3 30.1867 33.1133 34.8000 36.1167 1.000 604 1.000 1.000 1.000 21.1500 22.4100 23.3167 25.1200 Sig .495 1.000 1.000 1.000 1.000 N22 Ảnh hưởng lượng CPVSV từ vi khuẩn nấm men đến khả chiết chất hòa tan Coffea robusta Biocoffee12CPVSV Duncan Biocoffee14CPVSV Duncan Subset for alpha = 0.05 sample N 1 3 3 Sig Subset for alpha = 0.05 sample 19.1867 22.9333 25.8733 23.3533 26.3733 3 1.000 146 1.000 Biocoffee15CPVSV N 3 3 3 Sig 24.3533 27.3900 Sig 1.000 1.000 sample 1.000 Control 20.2267 20.3900 21.1900 21.7667 24.1333 3 22.9800 24.3533 23.4267 23.4333 1.000 N 21.9167 1.000 110 18.3900 1.000 1.000 Subset for alpha = 0.05 17.2800 1.000 23.3167 Duncan Subset for alpha = 0.05 sample 24.3533 Duncan 22.4667 21.4000 1.000 1 20.3067 1.000 N 409 Sig .621 099 191 N23 Ảnh hưởng lượng CPVSV từ nấm sợi đến khả chiết chất hòa tan Coffea chari Biocoffee1CPVSV Duncan Biocoffee2CPVSV Duncan Subset for alpha = 0.05 sample N 3 3 3 Subset for alpha = 0.05 23.3900 24.4267 25.2233 26.1867 27.4333 29.8367 Sig 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 Biocoffee3CPVSV Duncan sample N N 3 3 3 3 28.2233 28.2533 29.4267 29.8533 3 Sig 26.8033 30.8500 1.000 sample 31.7933 23.3900 32.2000 23.8167 33.8333 3 34.2400 1.000 150 1.000 Biocoffee10CPVSV N 1 27.8167 3 Sig Sig 30.0500 1.000 sample 29.7733 30.8067 31.8867 32.9433 1.000 1.000 1.000 144 144 Subset for alpha = 0.05 29.1333 1.000 1.000 Control Duncan 4 28.0100 Subset for alpha = 0.05 sample 24.9767 Duncan N 22.3167 1.000 1.000 20.2600 1.000 175 Subset for alpha = 0.05 19.3900 Sig .921 Biocoffee8CPVSV Duncan Subset for alpha = 0.05 sample 1.000 1.000 N 3 20.1500 20.3667 21.2600 21.8200 3 Sig 23.4267 24.8567 459 072 1.000 1.000 N24 Lượng CPVSV từ nấm men,vi khuẩn ảnh hưởng đến khả chiết chất hòa tan Coffea chari Biocoffee12CPVSV Duncan Biocoffee14CPVSV Duncan Subset for alpha = 0.05 Subset for alpha = 0.05 sample N sample N 20.9267 21.4267 23.1867 3 23.3533 23.7333 23.7333 3 3 24.3567 3 3 19.2167 19.9300 Sig 1.000 1.000 098 053 Biocoffee15CPVSV Duncan N 24.8400 26.3533 Sig .090 23.3667 3 23.7933 sample 18.3900 1.000 1.000 1.000 157 N 20.1500 20.2800 3 23.7933 3 22.8833 24.3900 23.2867 22.4267 1.000 1.000 Control 20.0333 1.000 1.000 Subset for alpha = 0.05 Sig 23.9433 Duncan 22.4267 Subset for alpha = 0.05 sample 057 Sig 21.1967 22.0467 619 1.000 1.000 139 N25 Ảnh hưởng thời gian lên men đến khả chiết chất hòa tan Coffea C arabica CPVSV từ nấm sợi Biocoffee1time Duncan Biocoffee2time Duncan Subset for alpha = 0.05 sample N 26.2600 3 3 3 Subset for alpha = 0.05 27.2833 28.8000 30.8267 32.4267 35.3900 Sig 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 Biocoffee3time Duncan sample N N 3 3 3 3 25.0133 25.3900 3 28.1500 28.2833 3 26.3900 31.1867 Sig .179 23.2000 23.9700 25.3767 30.0467 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 Biocoffee10time Duncan sample N N 1 3 3 Sig 27.8333 33.7433 33.7633 34.0100 3 31.8700 34.0100 34.7333 Sig 1.000 1.000 467 053 Control sample N 20.1867 20.3533 20.3533 31.7900 31.8867 3 30.8600 33.2000 1.000 1.000 Subset for alpha = 0.05 29.8667 1.000 3 Duncan 28.8133 1.000 Subset for alpha = 0.05 sample 623 Subset for alpha = 0.05 22.3533 1.000 1.000 Biocoffee8time Duncan 21.3333 Sig Subset for alpha = 0.05 sample 748 1.000 Sig 20.9067 22.2167 23.3533 25.1500 529 052 1.000 1.000 1.000 N26.Thời gian ảnh hưởng đến khả chiết chất hòa tan Coffea C arabica CPVSV từ nấm men vi khuẩn Biocoffee12Time Duncan Biocoffee14Time Duncan Subset for alpha = 0.05 sample N 1 Subset for alpha = 0.05 sample 19.2000 N 23.7433 22.8567 24.2800 24.2800 23.2133 23.3900 3 3 3 24.1933 25.2667 Sig 1.000 106 1.000 1.000 Biocoffee15Time Duncan N 25.9000 27.3167 28.8167 Sig .073 694 23.2267 23.3900 3 3 Sig sample 552 N 3 19.8433 20.3900 21.2267 23.8467 21.7967 24.3900 3 22.8567 23.3900 23.3900 113 1.000 25.1667 1.000 1.000 Subset for alpha = 0.05 19.1167 23.8467 1.000 Control Duncan 24.3900 Subset for alpha = 0.05 sample 064 1.000 Sig .090 079 097 N27 Ảnh hưởng thời gian lên men đến khả chiết chất hòa tan Coffea C C robusta CPVSV từ nấm sợi Biocoffee1CPVSV Duncan Biocoffee2CPVSV Duncan Subset for alpha = 0.05 sample N 3 3 3 Sig Subset for alpha = 0.05 sample 27.8967 29.2333 28.8667 29.8167 29.4767 29.4767 30.9333 29.7967 31.7333 3 1.000 195 085 1.000 Biocoffee3CPVSV N 3 26.8000 Sig 35.4000 1.000 062 301 1.000 Subset for alpha = 0.05 sample N 23.3533 31.7967 23.8467 3 24.8300 34.7000 24.9333 34.9833 34.9833 35.7433 3 3 26.2300 29.8500 Sig .075 690 1.000 1.000 Biocoffee10CPVSV Duncan Sig 33.8367 37.8300 1.000 N 3 3 3 Sig sample N 19.8733 32.9000 20.3500 20.3500 32.9867 3 3 33.8633 34.8433 35.9000 1.000 058 1.000 Control 751 449 Subset for alpha = 0.05 31.8067 1.000 1.000 Duncan Subset for alpha = 0.05 sample 1.000 Biocoffee8CPVSV Duncan 32.3133 Subset for alpha = 0.05 sample 35.8000 Duncan N 1.000 1.000 Sig 20.8367 21.7767 23.3167 24.7933 081 076 1.000 1.000 1.000 N28.Thời gian lên men ảnh hưởng đến khả chiết chất hòa tan Coffea C C robusta CPVSV từ nấm men vi khuẩn Biocoffee12CPVSV Duncan Biocoffee14CPVSV Duncan Subset for alpha = 0.05 Subset for alpha = 0.05 sample N sample N 23.8167 25.9267 23.8267 26.4000 24.3900 3 3 18.4000 21.8233 22.8367 Sig 1.000 1.000 1.000 069 Biocoffee15CPVSV Duncan Sig N 1 3 3 24.3167 27.5000 1.000 22.0267 23.3100 24.1333 25.2333 1.000 1.000 1.000 109 1.000 Control Subset for alpha = 0.05 18.3667 1.000 1.000 Duncan 17.5000 Sig 23.3100 Subset for alpha = 0.05 22.3533 1 sample 1.000 1.000 1.000 sample N 1 20.1567 20.3500 3 3 3 21.1833 21.9000 22.6700 23.1667 Sig .396 1.000 1.000 1.000 1.000 N29.Ảnh hưởng thời gian lên men đến khả chiết chất hòa tan Coffea chari Biocoffee1CPVSV Duncan Biocoffee2CPVSV Duncan Subset for alpha = 0.05 Subset for alpha = 0.05 sample N sample N 24.3900 23.3133 24.8900 3 4 3 3 3 Sig 26.9133 28.3600 29.8667 32.3200 092 1.000 1.000 1.000 1.000 Sig 24.8667 26.3667 27.3200 29.3000 33.3167 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 Biocoffee3CPVSV Duncan Biocoffee8CPVSV Duncan Subset for alpha = 0.05 Subset for alpha = 0.05 sample N sample N 3 28.8567 25.7867 3 26.1333 33.8933 26.3167 34.1267 3 4 3 3 24.8267 27.1667 28.3667 Sig 1.000 073 1.000 1.000 Biocoffee10CPVSV Duncan Sig N 34.8567 35.7633 1.000 1.000 sample N 28.8633 19.8233 29.4000 20.3500 20.3500 5 3 3 3 3 30.9667 31.8500 32.8067 33.8533 199 1.000 1.000 1.000 1.000 Subset for alpha = 0.05 Sig .421 Control Duncan 32.7933 Subset for alpha = 0.05 sample 1.000 1.000 Sig 20.8633 21.8900 23.3667 24.8533 080 086 1.000 1.000 1.000 N30.Thời gian lên men ảnh hưởng đến khả chiết chất hòa tan Coffea chari CPVSV từ nấm men vi khuẩn Biocoffee12Time Duncan Biocoffee14Time Duncan Subset for alpha = 0.05 sample N Subset for alpha = 0.05 sample N 21.1667 21.1867 23.3333 3 23.3567 3 23.8233 3 3 18.8267 22.7633 24.4000 Sig 1.000 1.000 096 1.000 Biocoffee15Time Duncan N 24.8800 26.3033 Sig .941 1.000 23.3567 3 23.8633 sample 18.3167 1.000 1.000 Control 077 N 19.8667 20.3000 3 23.8633 3 22.9000 24.4000 23.3667 22.3900 1.000 1.000 20.1767 1.000 1.000 Subset for alpha = 0.05 Sig 24.2233 Duncan 22.4000 Subset for alpha = 0.05 sample 063 Sig 20.8700 21.8200 103 1.000 1.000 082 ... NHIÊN LÊ HỒNG PHÚ NGHIÊN CỨU THU NHẬN CHẾ PHẨM VI SINH VẬT TỔNG HỢP ENZYME PECTINASE, CELLULASE VÀ ỨNG DỤNG TRONG SẢN XUẤT CÀ PHÊ NHÂN THEO PHƢƠNG PHÁP LÊN MEN Chuyên ngành: Hóa Sinh Mã số: 1.05.10... enzyme pectinase, cellulase ứng dụng sản xuất cà phê theo phương pháp lên men? ?? 3 Mục tiêu đề tài: Nghiên cứu tạo chế phẩm vi sinh vật có khả sinh tổng hợp pectinase cellulase, tìm quy trình kỹ thu? ??t... thu? ??c vi sinh vật có hoạt tính pectinase cellulase nhƣ: nấm sợi, nấm men, vi khuẩn? ?Lên men cà phê sử dụng hai phƣơng thức lên men bề mặt lên men sâu 37 a Lên men nấm men Lên men cà phê nấm men,