Đánh giá đặc điểm kháng staphylococcus aureus kháng methicillin (mrsa) của một số dược liệu thu hái tại tỉnh bình dương

ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP HỒ CHÍ MINH TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA MAI THỊ NGỌC LAN THANH ĐÁNH GIÁ ĐẶC ĐIẺM KHÁNG STAPHYLOCOCCUS AUREUS KHÁNG METHICILLIN (MRSA) CỦA MỘT SỐ Dược LIỆU THƯ HÁI TẠI TỈNH BÌNH DƯƠNG LUẬN ÁN TIẾN SĨ KỸ THUẬT TP HỊ CHÍ MINH - NĂM 2022 ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP HỒ CHÍ MINH TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA MAI THỊ NGỌC LAN THANH ĐÁNH GIÁ ĐẶC ĐIẺM KHÁNG STAPHYLOCOCCUS AUREUS KHÁNG METHICILLIN (MRSA) CỦA MỘT SƠ DUỢC LIỆU THU HÁI TẠI TỈNH BÌNH DỮƠNG Chuyên ngành: Công Nghệ sinh học Mã số chuyên ngành: 62420201 Phản biện độc lập 1: PGS TS Phạm Thị Phượng Trang Phản biện độc lập 2: PGS TS Trần Cát Đông Phản biện 1: PGS TS Nguyen Thị Thu Hoài Phán biện 2: PGS TS Trần Hùng Phàn biện 3: PGS TS Nguyễn Thúy Hương NGƯỜI HƯỚNG DẢN KHOA HỌC: PGS TS Trương Vũ Thanh PGS TS Hồng Anh Hồng TP HỒ CHÍ MINH - NĂM 2022 LỜI CAM ĐOAN Tác già xin cam đoan cơng trình nghicn cứu cúa thân tác giả Các két nghiên cứu kết luận luận án trung thực, không chép từ nguồn hình thức Việc tham kháo nguồn tài liệu (nểu có) dã thực trích dẫn ghi nguồn tài liệu tham khảo quy định Tác gia luận án Chữ ký Mai Thị Ngọc Lan Thanh i TÓM TẤT LUẬN ÁN Đồ tài “Đánh giá đặc diem kháng Staphylococcus aureus kháng methicillin (MRSA) cua số dược liệu thu hái tính Bình Dương” thực từ tháng 12/2015 đến tháng 12/2020 môn Công nghệ sinh học Bộ mơn Hóa Dược, khoa Kỳ Thuật Hóa Học, trường Đại học Bách Khoa Thành phố Hồ Chí Minh; mơn Sinh học ứng dụng, khoa Khoa Học Tự Nhiên, Đại học Thú Dầu Một Mục tiêu đề tài xác định hoạt tinh kháng vi khuẩn Staphylococcus aureus kháng methicillin (MRSA) cua cao ethanol thực vật/cao phân đoạn/tinh chất Nội dung đề tài bao gồm: Sàng lọc hoạt tính kháng MRSA cua cao ethanol toàn phần/cao phân đoạn từ thực vật thu hái tỉnh Bình Dương; Dánh giá khả kháng khuân MRSA cúa cao ethanol toàn phần/cao phân đoạn; Xác định công thức hợp lực cao phân đoạn với kháng sinh, công thức hợp lực cao phân đoạn với nhau; Xác định hoạt tính ức chế hình thành màng sinh học, hoạt tính ửc chế tan huyết, hoạt tính ức chế PBP2a, ức chế khả chịu muối MRSA cao phân đoạn; Xác định phân tích hoạt tinh tinh chất từ cao ethanol tồn phần cho hoạt tính kháng MRSA tốt Kốt đạt sau: Kốt xác định bốn cao chiết ethanol toàn phần từ Ngành Ngạnh Nam, Xăng Mã, Trâm Trịn, Cị Ke có hoạt tính kháng MRSA, cao ethanol tồn phần Trâm Tròn, Xăng Mã, Cò Ke báo cáo lần đầu hoạt tính kháng MRSA Kết quà thừ độc tính nguyên bào sợi tế bào ung thư gan xác định tinh an toàn cao chiết ethanol tồn phần Ngành Ngạnh Nam, Xăng Mã, Trâm Trịn, Cò Ke Mục tiêu cua luận án xác định nhóm hoạt chât kháng MRSA, cơng thức hợp lực đích tác động nhóm hoạt chất kháng MRSA Ket đề tài thu nhận cao phân đoạn cthylacctatc Ngành Ngạnh Nam, Xăng Mã, Trâm Trịn, Cị Kc cho hoạt tính kháng MRSA Trong đó, cao phân đoạn ethylacetate Trâm Trịn có giá trị MIC thấp mg/mL Phương pháp bàn cờ sư dụng nhằm xác định số FIC cúa cao phân đoạn ethylacetate Ngành Ngạnh Nam, Xãng Mã, Trâm Tròn, Cò Ke với kháng sinh 11 bốn cao phân đoạn cthylacctatc Ngành Ngạnh Nam, Xăng Mã, Trâm Tròn, Cò Kc với Ket xác định cao phân đoạn ethylacetate Ngành Ngạnh Nam, Trâm Trịn có khả họp lực với kháng sinh cefoxitin, với công thức hợp lực cao phân đoạn ethylacetate Ngành Ngạnh Nam nồng độ 0,812 mg/mL cefoxitin nồng độ 0,002 mg/mL (1:1); Công thức hợp lực cùa cao phân đoạn ethylacetate Trâm Tròn với cefoxitin cao phân đoạn ethylacetate Trâm Tròn nồng độ 0,500 mg/mL cefoxitin 0,008 mg/mL (1:1) Tuy nhiên, chi có cao phân đoạn ethylacetate Trâm Tròn họp lực với vancomycin, với công thức hợp lực cao phân đoạn cthylacctate Trâm Tròn 0' nồng độ bàng 0,24 mg/mL vancomycin có nồng độ bàng 0,001 mg/mL (1:1) Các kết lừ phương pháp nhuộm với crystal violet chụp ánh SEM chi rang, cao phân đoạn ethylacetate Ngành Ngạnh Nam nồng độ bàng 0,4062 mg/mL cao phân đoạn ethylacetate Trâm Tròn nồng độ bang 0,2500 mg/mL ức che hình thành màng sinh học chung MRSA Ảnh chụp SEM xác định hình thái tổ bào MRSA màng sinh học thay đối xứ lý với hai cao phàn đoạn Thứ nghiệm khả chịu muối, xác định vách tể bào đích tác động cùa cao phàn đoạn ethylacetate Ngành Ngạnh Nam phần trăm tế bào MRSA sống sót so với đối chứng giảm 58,89% Sứ dụng phương pháp nuôi môi trường thạch máu nhẳm xác định kha ức chế độc tính tan huyết chủng MRSA tiếp xúc với dung dịch khảo sát Kốt xác định cao phân đoạn ethylacetate Xăng Mã ức chế hoàn toàn kha tan huyết chủng MRSA nông độ mg/mL Mục tiêu luận án xác định cấu trúc tinh chất chính, cơng thức họp lực chế kháng MRSA Kết thu nhận bốn tinh chất từ cao ethanol tồn phần Trâm Trịn pinostrobin, 4-methoxy benzoic acid, dimethyl pinocembrin, acid betulonic Trong đó, lượng pinostrobin tìm thây nhiêu nhât với hiệu suât chiêt 12,79 ± 0,21 mg pinostrobin/ Ig bột khô, dimethyl pinocembrin lần tách chiết từ chi Trâm Công thức họp lực pinostrobin vancomycin pinostrobin nồng độ bàng 12,8 pg/mL vancomycin nồng độ 0,5 pg/mL (1:1) 111 ABSTRACT The thesis title: “Evaluation of methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) characteristics of some medicinal herbs collected in Binh Duong province” was carried out at the Department of Biotechnology, the Department of Chemistry- Faculty of Chemical Engineering, Ho Chi Minh City University of Technology, the Department of Applied Biology, Thu Dau Mot University from December 2015 to December 2019 The main purpose of this study is to collect the ethanol plant extracts/fractions/main pured compounds which have anti-MRSA activity The content of the topic includes: Screening the ethanol plant extracts are collected in Binh Duong province and evaluation of anti-MRSA activity of ethanol plant extracts and fractions; the fractions of ethanol plant extracts are collected, which are evaluated the antiMRSA activity of these fractions, simultaneous assessment of the mechanism of antibacterial activity of fractions; The main pure compound is isolated from ethanol plant extract which has the most anti-MRSA activity The synergistic formula of main compound with antibiotic is determined The results are as follows: There are four plant species, including Cratoxylum cochinchinense, Carallia brachiata, Syzygium glomeratum, Grewia asiatica L had been identified with anti-MRSA activity Among them, ethanol extracts of Carallia brachiata, Syzygium glomeratum, Grewia asiatica L were reported anti-MRSA activity the first time The Sulforhodamine B assay is carried out for testing toxicity of ethanol plant extracts on fibroblast cells and hepatocyte cells The results present that Cratoxylum cochinchinense, Carallia brachiata, Syzygium glomeratum, Grewia asiatica L ethanol extracts are safe The elhylacetate fractions of Cratoxylum cochinchinense, Carallia brachiata, Syzygium glomeratum, Grewia asiatica L leaf extracts are collected for testing anti-MRSA activity Especially, ethylacetate Syzygium glomeratum fraction has the lowest MIC value of Img/mL The checkerboard method was undertaken to determine synergistic interactions of plant extracts and isolated pure compounds in combination with antibiotic and the four iv cthylacctatc of Cratoxylum cochinchinense, Carallia brachiata, Syzygium glomeratum, Grewia asiatica L extracts together demand for FICIs The results shown that two ethylacetate of Cratoxylum cochinchinense, Syzygium glomeratum extracts can synergize with cefoxitin The synergistic formulation of ethylacetate of Cratoxylum cochinchinense extract and cefoxitin is 0.812 mg/mL (NN Ea) and 0.002 mg/mL (cefoxitin) (1:1); the synergistic formulation of the ethylacetate of Syzygium glomeratum extract is 0.500 mg/mL (SCTT Ea) and 0.008 mg/mL (cefoxitin) (1:1), respectively However, only the ethylacetate of Syzygium glomeratum extract is determined the synergistic activity with vancomycin The synergistic formulation of the ethylacetate of Syzygium glomeratum extract and vancomycin is 0.24 mg/mL (SCTT Ea) and 0.001 mg/mL (vancomycin) (1:1) The results from crystal violet assay and SEM technique have shown that ethylacetate Cratoxylum cochinchinense fraction at a concentration of 0.4062 mg/mL and ethyl acetate Syzygium glomeratum fraction at a concentration of 0.2500 mg/mL, which inhibited the biofilm formation on MRS A SEM images are collected, which presented the change of morphologies of MRSA cells inside the biofilm when MRSA had been treated with these two fractions The salt tolerance test was undertaken to identify damage to the cell wall on MRSA The results show that MRSA cells are treated with the ethylacetate of Cratoxylum cochinchinense extract, which decreased the surviving of MRSA cells on high salt concentrated medium The MRSA cultured blood agar method was carried out to determine the ability to inhibit hemolytic toxicity of MRS A strains when MRS A cells were treated with the ethylacetate of plant extracts or pinostrobin The results showed that the ethylacetate of Carallia brachiata extract completely inhibited the hemolytic ability on the MRSA strain at a concentration of mg/mL In this research, four pure compounds are isolated from the Syzygium glomeraturn ethanol extract, which are pinostrobin, 4-methoxy benzoic acid, dimethyl pinocembrin, betulonic acid Among them, the amount of pinostrobin was highest with an extraction yield of V 12.79±0.21 mg of pinostrobin in g of dried leaf powder, dimethyl pinocembrin is the first isolated from the genus Syzygium The synergistic formulation of pinostrobin and vancomycin is 12.8 pg/mL (pinostrobin) and 0.5 pg/mL (vancomycin) (1:1), respectively vi LỜI CÁM ƠN Tôi xin trân trọng gửi lời biết ơn sâu sắc đen PGS.TS Trương Vũ Thanh TS Hoàng Anh Hoàng hai người thầy hướng dẫn tận tình, bảo cho tơi hồn thành Luận Án Đặc biệt, Tơi xin kinh dâng lịng biết ơn cho người thầy giúp định hướng giúp đỡ nhiều động viên cho tơi vượt qua nhiều khó khăn để có ngày hơm nay, chinh người thầy PGS.TS Lẽ Phi Nga Tôi xin gửi lời tri ân sâu sắc đến gia đình ln ung hộ, giúp đỡ vật chất tinh thần đế yên tâm hồn thành Luận Án Tơi chân thành cám ơn đến Lãnh đạo Đại học Thủ Dầu Một, Thầy cô Khoa Kỳ Thuật Hóa Học, Phịng sau đại học Bách Khoa TP.HCM đồng nghiệp cung cấp tài liệu, tạo điều kiện cho tơi nghiên cứu hồn thành Luận Án đóng góp ý kiến Đặc biệt, tơi xin gửi lời đến TS Nguyễn Thị Nhật Hang, chị ung hộ tạo điều kiện cho nghiên cửu, học tập, làm việc Tôi cám ơn bạn sinh viên, đồng chí, đồng đội ln sát cánh bên tôi, đặc biệt cám ơn bạn Trần Thị Mai Thy ủng hộ tinh thần vật chất Luận án hoàn thành giúp đỡ, động viên tạo điều kiện đặc biệt cho biến ước mơ thành thực Tơi kinh dâng lịng thương mến biết ơn đến Ngoại cúa tôi, người cho nhiều ý tưởng nghiên cứu Một lan nữa, xin chân thành biết ơn đến tất người bên cạnh khỏ khăn, thử thách hay giây phút vui sướng nhận dược kết mong dợi vii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i TÓM TẦT LUẬN ÁN ii ABSTRACT iv LỜI CAM ƠN vii DANH MỤC CÁC HÌNH xi DANH MỤC BẢNG .xiii DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT xvi MỞ ĐẦU Đối tượng phạm vi nghiên cứu Nội dung nghiên cứu Ý nghĩa khoa học ý nghĩa thực tiễn CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tống quan MRSA 1.1.1 Đặc điềm vi thể độc tính chi Staphylococcus 1.1.2 Cơ chế kháng thuổc MRSA 1.1.3 Đặc điếm sinh lý MRSA 1.2 Tông quan sô kháng sinh 1.2.1 Nhóm Glycopeptide 1.2.2 Nhóm Oxazolidinone 1.2.3 Cephalosporin 1.2.4 Các thuốc khác 1.3 Cao chiểt/phân đoạn/tinh chất kháng MRSA 1.3.1 Tóm lược nghiên cứu .8 1.3.2 Các đích tác động cùa cao chiết/tinh chất 14 1.4 Tống quan số dược liệu thu hái Binh Dương 18 1.4.1 Ngành Ngạnh Nam 18 vi li Khảo sát ức chế hình thành màng sinh học cao phân đoạn Xăng Mã Hình P7.1 Khả ức chế hình thành màng sinh học cao phân đoạn Xăng Mã 135 Thử nghiệm ức chế tan huyết khả tan huyết MRSA Cao phân đoạn cthylacctatc Ngành Ngạnh Nam, Trâm Trịn, Cị Kc pỉnostrobin kích thước vịng tan huyết (mm) E2-E3-E4-F1-F2-F3: 11,5-11,5-11-8,5-9,511,5 (min) Hình P8.1 ức chế độc tính tan huyết từ cao phân đoạn ethylacetate Cò Ke Cao phân đoạn ethylacetate Cao phân đoạn ethylacetate Pinostrobin nr1 s Ngành Ngạnh Nam Irani Iron Hình P8.2 Thí nghiệm ức chế độc tính tan huyết cao phân đoạn ethylacetate Ngành Ngạnh Nam, Trâm Tròn pinostrobin 136 Kit latex PBP2a a Hình ánh Kít latex PBP2a Thành phần kít gồm: dung dịch chiết 1, dung dịch chiết 2, kháng thê đơn dòng kháng trực tiếp PBP2’, mẫu đối chứng không chứa kháng thế, thẻ que trài 9.2 Thử nghiêm ức chế biểu protein PBP2a chủng MRSA Ghi chú: vòng 1: đối chúng TSB+MRSA; vòng 2: TSB+MRSA+cefo 16pg/mL; vòng 3: TSB+MRSA+cao phân đoạn ethylacetate Xăng Mã; vòng 4: TSB+MRSA+cao phân đoạn ethylacetate Cị Ke Hình 9.1 Thư nghiệm ức chế biểu PBP2a hai cao phân đoạn ethylacetate Xăng Mã, Cò Ke 137 10 Thử nghiệm khả chịu muối MRSA Mật độ tế bào Mẩu Pinostrobin SCTT Ea Ghi (Log(CFU/mL)) môi trường TSA 7,75+0,02 7,99+0,02 Mật độ tế bào (Log(CFU/mL)) môi trường TSA-NaCl 7,74+0,01 7,98+0,03 Giá trị mật độ tể bào trung bình (CFU/mL) ± độ lệch chuân Phần trăm tế bào MRSA sống sót (%) 98,23+0,03 97,26+0,03 Phần trăm tế bào chịu muối trung bình (%) ± độ lêch chuẩn SCTT Ea: Cao phân đoạn ethylacetate Trâm Trịn 10.1 Mât tế bào MRSA sau xử lý vời cao phân đoan Ngành Ngành Nam hai nồng đô NN Ea (1,625 mg/mL), NN Ea2 (0,812 mg/mL) mẫu TSA TSA-NaCl NNEal NNEal NNEal NNEal NNEa2 NNEa2 NNEa2 NNEa2 CFU/mL 3.500.000 4.000.000 5.000.000 5.000.000 5.000.000 5.500.000 5.000.000 5.000.000 log 6,54 6,60 6,70 6,70 6,70 6,74 6,70 6,70 CFU/mL 1.795.000 2.150.000 1.500.000 1.750.000 2.230.000 2.735.000 4.650.000 3.750.000 log 6,25 6,33 6,18 6,24 6,35 6.44 6,67 6,57 MRSA đổi chứng 630.000.000 8,80 590.000.000 8,77 MRSA đối chứng MRSA đổi chứng MRSA đối chứng 635.000.000 625.000.000 633.000.000 8,80 8,80 8,80 625.000.000 620.000.000 623.000.000 8,80 8,80 8,80 138 10.2 So sánh su khác biệt vê niât đô tê bào MRSA hai môi trường TSA TSA có bố sung NaCl One-Way ANOVA - Control MRSA by medium Dependent variable: Control MRSA (density (Log(CFU/mL))) Factor: medium Number of observations: Number of levels: Suiiiinary Statistics for Control MRSA medium Count A verage Standard deviation Coeff ofvariation Minimum Maximum Range Stnd skewness TSA TSA-NaCI Total 4 8.8 8.785 8.7925 0.0 0173205 0.0138873 0.(1% 0.19716% 0.157945% 8.8 8.77 877 8.8 8.8 8.8 0.0 0.03 0.03 0.0 -1.66296 medium Stnd kurtosis TSA TSA-NaCI Total -2.44949 0.0 ANOVA Table for Control MRSA by medium Source Sum of Squares Df Mean Square Between groups Within groups Total (Corr.) 0.00045 0.0009 0.00135 0.00045 0.00015 F-Ratio p-Value 3.00 0.1340 Tabic of Means for Control MRSA by medium with 95.0 percent LSD intervals medium TSA TSA-NaCl Total Count 4 Mean 8.8 785 8.7925 Stnd error (pooled s) 0.00612372 00612372 Lower limit 8.7894 8.7744 Upper limit 8.8106 7956 Multiple Range Tests for Control MRSA by medium Method: 95.0 percent LSD medium Count Mean 8.785 TSA-NaCI 8.8 TSA Homogeneous Groups X X S/g Contrast Difference +/- Limits 0.0211909 TSA - TSA-NaCl 0.015 * denotes a statistically significant difference Khơng có khác biệt mật độ tế bào MRSA hai môi trui'mg TSA TSA có bo sung NaCI có ý nghĩ thống kê 139 10.3 So sánh sư khác biêt mât đô tể bào MRSA hai môi trường TSA TSA có bồ sung NaCL MRSA bi xử lý với cao phân đoan ethyl acetate Ngành Nganh Nam nồng đô bang 1,625 mg/mL One-Way ANOVA-XX Ẹalby medium Dependent variable: NN Eal (density (log (CFU/mL))) Factor medium Number of observations: Number of levels: Summary Statistics for NN Eal medium Count Average Standard deviation Coeff of variation Minimum Maximum Range Stnd skewness TSA TSA-NaCI Total 4 6.635 6.25 6.4425 0.0789515 00616441 0.215986 18992% 986306% 3.3525 2% 6.54 18 6.18 6.7 633 6.7 0.16 15 0.52 -0.388231 390388 0.0880306 medium Sind, kurtosis TSA TSA-NaCl Total -1.3557 0.612372 -1.24071 ANOVA Table for XX Eal bv medium Source Between groups Within groups Total (Corr.) Sum of Squares 0.29645 0.0301 0.32655 Df Mean Square 0.29645 0.00501667 F-Ratio 59.09 P-Vaiue 0.0003 Table of Means for NN Eat by medium M ith 95.0 percent LSD inters ills medium TSA TSA-NaCl Total Count 4 Mean 6.635 6.25 6.4425 Sind, error /pooled s) 0.0354142 0.0354142 Lower limit 6.57373 6.18873 Upper limit 6.69627 6.31127 Multiple Range Tests fur NN Eat by medium Method: 95,0 percent LSD medium Count Mean TSA-NaCl 6.25 TSA 6.635 Homogeneous Groups X Sis 4/- Limits Contrast Difference ♦ TSA - TSA-NaCl 0.385 0.12255 * denotes a statistically significant difference Có khác biệt mật độ tế bào MRSA hai mơi trường TSA TSA có bổ sung NaCl, có ý nghĩa thống kê 140 11 Thử nghiệm khả diệt khuấn theo thòi gian Bảng 11.1 Mật độ tế bào MSSA thay đổi theo thời gian khảo sát MRSA xử lý với NN EA MSSA đối chứng thời gian mật độ tế bào control log 0 2 4 6 6 8 21 21 21 24 24 24 32.000.000 38.000.000 57.000.000 56.000.000 46.000.000 66.000.000 1.600.000.000 2.600.000.000 2.200.000.000 138.000.000.000 131.000.000.000 131.000.000.000 167.000.000.000 115.000.000.000 146.000.000.000 106.000.000.000 34.000.000.000 31.000.000.000 30.000.000.000 1.000.000.000 1.000.000.000 1.000.000.000 7,51 7,58 7,76 7,75 7,66 7,82 9,20 9,41 9,34 11,14 11,12 11,12 11,22 11,06 11,16 11,03 10,53 10,49 10,48 9,00 9,00 9,00 mật độ tế bào control 32.000.000 38.000.000 57.000.000 376.000 400.000 450.000 394.000 600.000 650.000 6.000.000 20.000.000 20.000.000 20.000.000 13.600.000 20.000.000 20.000.000 20.000.000 20.000.000 20.000.000 20.000.000 80.000.000 40.000.000 Table of Means for Control MSSA by time Stnd error time Count Mean (pooled s) 7.61667 0.0450573 7.74333 0.0450573 9.31667 0.0450573 3 11.16 0.0450573 11.0833 0.0450573 21 10.5 0.0450573 24 9.0 0.0450573 9.48857 Total 21 141 MRSA xử lý với SCTT EA log mật độ tế bào control log 7,51 7,58 7,76 5,58 5,60 5,65 5,60 5,78 5,81 6,78 7,30 7,30 7,30 7,13 7,30 7,30 7,30 7,30 7,30 7,30 7,90 7,60 32.000.000 38.000.000 57.000.000 30.200.000 40.000.000 40.000.000 8.000.000 20.000.000 20.000.000 6.000.000 20.000.000 20.000.000 20.000.000 12.000.000 20.000.000 20.000.000 60.000.000 40.000.000 60.000.000 160.000.000 148.000.000 160.000.000 7,51 7,58 7,76 7,48 7,60 7,60 6,90 7,30 7,30 6,78 7,30 7,30 7,30 7,08 7,30 7,30 7,78 7,60 7,78 8,20 8,17 8,20 with 95.0 percent LSD intervals Lower limit 7.54833 7.675 9.24833 11.0917 11.015 10.4317 8.93167 Upper limit 7.685 7.81167 9.385 11.2283 11.1517 10.5683 9.06833 Summary Statistics for NN Eal time Count A verage Standard deviation 21 24 Total 3 3 3 21 7.61667 5.61 5.73 7.12667 7.24333 7.3 7.6 6.88952 0.12897 00360555 0.113578 0.300222 0.0981495 0.0 0.3 0.822694 Summary Statistics for SCTT Eal Count time A verage Standard deviation 21 24 Total 3 3 3 21 7.61667 7.56 7.16667 7.12667 7.22667 7.72 8.19 7.51524 0.12897 0.069282 023094 0300222 0.127017 0.103923 0.0173205 0.386013 142 Coeff of variation 1.69326% 0.642701% 1.98217% 4.21266% 1.35503% 0.0% 3.94737% 11.9412% Coeff of varia tion 1.69326% 0.916429% 3.22242% 4.21266% 75762% 1.34615% 0.211484% 5.13641% Bảng 11.2 Mật độ tế bào MRSA thay đồi theo thòi gian kháo sát Đối chứng MRSA thời gian CFU/mL log 0 2 4 6 8 21 21 21 24 24 24 83.000.000 84.000.000 83.000.000 260.000.000 276.000.000 265.000.000 91.000.000.000 75.500.000.000 61.400.000.000 170.000.000.000 158.000.000.000 171.000.000.000 47.000.000.000 47.000.000.000 48.000.000.000 91.000.000.000 84.000.000.000 80.000.000.000 25.000.000.000 25.000.000.000 25.000.000.000 7,92 7,92 7,92 8,41 8,44 8,42 10,96 10,88 10,79 11,23 11,20 11,23 10,67 10,67 10,68 10 96 10,92 10,90 10,40 10,40 10,40 MRSA xử lý với NN EA mật độ tể bào control 83.000.000 84.000.000 83.000.000 28.800.000 15.400.000 17.400.000 160.000 150.000 180.000 0 0 0 0 0 0 143 MRSA xử lý với SCTT EA log mật độ tế bào control log 7,92 7,92 7,92 7,46 7,19 7,24 5,20 5,18 5,26 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 83.000.000 84.000.000 83.000.000 12.880.000 16.000.000 16.000.000 260.000.000 260.000.000 250.000.000 260.000.000 200.000.000 220.000.000 100.000.000 140.000.000 43.000.000 80.000.000 31.000.000 45.000.000 40.000.000 40.000.000 16.000.000 7,92 7,92 7,92 7,11 7,20 7,20 8,41 8,41 8,40 8,41 8,30 8,34 8,00 8,15 7,63 7,90 7,49 7,65 7,60 7,60 7,20 Summary Statistics for ■ control -MRSA -Coed of variation time Count A veraze Standard deviation 21 24 Total 3 3 3 21 7.92 8.42333 10.8767 11.22 10.6733 10.9267 10 10.0629 0.0 0.0152753 0.085049 0173205 0.0057735 00305505 0.0 1.25615 0.0% 0.181345% 0.78194% 154372% 0.0540928% 0.279596% 0.0% 12.4831% fable of Means for NN Eal by time with 95.0 percent LSD intervals Stnd error Count (pooled s) Lower limit Upper limit time Mean 21 24 Total 3 3 3 21 7.92 7.29667 5.21333 0.0 0.0 0.0 0.0 2.91857 0.0326356 0.0326356 0.0326356 0.0326356 0.0326356 0.0326356 0.0326356 7.87051 24717 5.16384 -0.049495 -0 049495 -0.049495 -0.049495 Summary Statistics for SCTT Eal Count time A veraRe Standard deviation 21 24 Total 3 3 3 21 7.92 7.17 8.40667 8.35 7.92667 68 7.46667 7.84571 0.0 0.0519615 0.0057735 0.0556776 0.267644 020664 023094 0.445719 144 7.96949 7.34616 5.26283 0.049495 0.049495 0049495 0.049495 Coeff of variation 0.0% 0.724707% 0.0686777% 0.666798% 3.3765% 2.69062% 3.09295% 5.68105% 12 Phiếu trả kết xác định hoạt tính gây độc tế bào mẫu cao ethanol toàn phần thực vật PTN SHPT - BM Di tniyèn - ĐHKHTN KẾT QUÀ XÁC OỊNH HOẠT TÍNH GÂY Độc TÉ BÀO CỦA MÂU Người gửi mẫu: Đơn vị: Mă so : 01 Ngày trà kết quả: 09/08/2019 Phần trăm gây độc tế bào màu nồng độ dịng tí bào ung thư gan Hep G2 fibroblast Dòng tế Nồng độ Phần trăm gây dộc tí hào (%) Mau hào CK , (pg/mL) Lần Lần Lẳn TB ± ĐLC 200 -8,50 -5,38 3,66 -3,41 ± 6,32 100 -19,50 -8.46 -3,66 -10,54 ±8.12 50 -10,50 -2,31 3,66 -3,05 ±7,11 200 -19,50 -15,38 -5,49 -13,46 ±7,20 100 -18,00 -8.46 -1.83 -9,43 ±8,13 50 -11,50 -32,69 -6,71 -16,97 ±13,83 E+F XM E+F CK E+F Fibroblast XM E+F 200 1,94 1,12 7.53 3,53 ± 3,49 100 -14,10 -5,06 0.00 -6,39 ±7.14 50 -4,49 0,56 5,91 0,66 ± 5,20 200 5,81 8,99 12,90 9,23 ± 3,55 100 9.68 1,69 9,88 7,08 ± 4,67 50 -16.03 -7,87 -4,30 -9,40 ±6,01 TB: Trung bỉnh; ĐLC: Độ lệch chuẵn Lưu ý: Các mầu nhiễm khuẩn nên mầu sau hòa tan ĐMSO nồng độ 40 mg/mL sau pha lỗng đến nồng dộ cần thừ mơi trường nuôi cấy tế bào lọc loại khuẳn qua phin lọc 0,2 pm Trường Bộ môn PĨN SINH HOC PH BM Di Ĩruyen-Khoa S'.nh DH Khoa hoc Tu nhie Nguyền Thụy Vy 145 13 Phiếu xác định chủng vi khuấn MRSA ATCC33591 C) Microbiologies Certificate of Analysis: Lyophilized Microorqani ion and Performance Release Specifications Expiration Date: 2018/1/31 Microorganism Name: Staphylococcus aureus subsp aureus Release Information: Catalog Number: 0496 Quality Control Technologist: Kieshia L Negen Lot Number: 496-69“ Release Date: 2016/3/21 Reference Number: ATCC®33591™* Purity: < 0.1% Total Pellet CFU Passage from Reference: Performance Macroscopic Features: Medium to large, convex, white-yellow, creamy opaque, beta hemolytic Microscopic Features: Gram positive cocci occurring singly, in pairs and in irregular clusters Medium: SBAP Method: ID System: Vitek GP(1) See attached ID System results document Other Features/ Challenges: Results (1) Catalase (3% Hydrogen Peroxide): positive (1) Coagulase (rabbit plasma-tube): positive (1) Oxacillin (1 mcg - Disk Susceptibility):