Nghiên cứu sự biến đổi một số chỉ tiêu lâm sàng, phi lâm sàng và thử nghiệm biện pháp phòng, trị hội chứng viêm tử cung, viêm vú, mất sữa (mma) ở lợn nái sinh sản

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM NGUYỄN THỊ HỒNG MINH NGHIÊN CỨU SỰ BIẾN ĐỔI MỘT SỐ CHỈ TIÊU LÂM SÀNG, PHI LÂM SÀNG VÀ THỬ NGHIỆM BIỆN PHÁP PHÒNG, TRỊ HỘI CHỨNG VIÊM TỬ CUNG, VIÊM VÚ, MẤT SỮA (MMA) Ở LỢN NÁI SINH SẢN LUẬN ÁN TIẾN SĨ CHUYÊN NGÀNH: SINH SẢN VÀ BỆNH SINH SẢN GIA SÚC HÀ NỘI, 2014 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM NGUYỄN THỊ HỒNG MINH NGHIÊN CỨU SỰ BIẾN ĐỔI MỘT SỐ CHỈ TIÊU LÂM SÀNG, PHI LÂM SÀNG VÀ THỬ NGHIỆM BIỆN PHÁP PHÒNG, TRỊ HỘI CHỨNG VIÊM TỬ CUNG, VIÊM VÚ, MẤT SỮA (MMA) Ở LỢN NÁI SINH SẢN CHUYÊN NGÀNH : SINH SẢN VÀ BỆNH SINH SẢN GIA SÚC MÃ SỐ : 62 64 01 06 NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS.TS NGUYỄN VĂN THANH TS TRỊNH ĐÌNH THÂU HÀ NỘI, 2014 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu khoa học riêng Các số liệu, kết nêu luận án trung thực, xác chưa cơng bố cơng trình khác Tôi xin cam đoan giúp đỡ thực luận án cảm ơn thông tin trích dẫn luận án rõ nguồn gốc Hà Nội, ngày 08 tháng năm 2014 Nghiên cứu sinh Nguyễn Thị Hồng Minh Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận án Tiến sỹ Khoa học Nông nghiệp Page i LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian học tập, nghiên cứu hoàn thành luận án, nhận hướng dẫn, bảo tận tình thầy giáo, giúp đỡ, động viên bạn bè, đồng nghiệp gia đình Nhân dịp hồn thành luận án, cho phép tơi bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc PGS.TS Nguyễn Văn Thanh; TS Trịnh Đình Thâu tận tình hướng dẫn, dành nhiều công sức, thời gian tạo điều kiện cho tơi suốt q trình học tập thực đề tài Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn chân thành tới Ban Giám đốc, Ban Quản lý đào tạo, Bộ môn Ngoại Sản, Khoa Thú y - Học viện Nơng nghiệp Việt Nam tận tình giúp đỡ tơi q trình học tập, thực đề tài hồn thành luận án Tơi xin chân thành cảm ơn tập thể lãnh đạo, cán công chức, viên chức Chi cục Thú y tỉnh Bắc Ninh, cảm ơn trang trại chăn nuôi, công ty lợn giống giúp đỡ tạo điều kiện cho tơi suốt q trình thực đề tài Xin chân thành cảm ơn gia đình, người thân, bạn bè, đồng nghiệp tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ tơi mặt, động viên khuyến khích tơi hồn thành luận án./ Hà Nội, ngày 08 tháng năm 2014 Nghiên cứu sinh Nguyễn Thị Hồng Minh Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận án Tiến sỹ Khoa học Nông nghiệp Page ii MỤC LỤC Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục chữ viết tắt vii Danh mục bảng viii Danh mục hình x Danh mục sơ đồ x Danh mục biểu đồ x MỞ ĐẦU 1 Tính cấp thiết đề tài Mục tiêu đề tài 3 Ý nghĩa khoa học ý nghĩa thực tiễn đề tài Phạm vi nghiên cứu Những đóng góp đề tài Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Khái quát hội chứng viêm tử cung (Metritis), viêm vú (Mastitis), sữa (Agalactia) - MMA 1.1.1 Viêm tử cung (Metritis) 1.1.2 Viêm vú (Mastitis) 10 1.1.3 Mất sữa (Agalactia) 15 1.2 Những nghiên cứu hội chứng viêm tử cung, viêm vú, sữa (MMA) 17 1.2.1 Nghiên cứu nước 17 1.2.2 Nghiên cứu nước 28 1.3 Ảnh hưởng hội chứng MMA 33 1.3.1 Khả sinh sản lợn nái 33 1.3.2 Sinh trưởng phát triển lợn 34 Chương PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nghiên cứu Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận án Tiến sỹ Khoa học Nông nghiệp 36 36 Page iii 2.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu 36 2.3 Nội dung nghiên cứu 36 2.3.1 Xác định số đặc điểm dịch tễ học hội chứng MMA 36 2.3.2 Ảnh hưởng hội chứng MMA đến suất sinh sản lợn nái 36 2.3.3 Biểu lâm sàng biến đổi số tiêu huyết học lợn mắc hội chứng MMA 2.3.4 37 Xác định biến đổi tính chất thành phần hóa học sữa lợn mắc hội chứng MMA 37 2.3.5 Phân lập giám định loài vi khuẩn 37 2.3.6 Xác định tính mẫn cảm kháng sinh vi khuẩn phân lập 37 2.3.7 Thử nghiệm phác đồ điều trị hội chứng MMA 37 2.3.8 Đề xuất biện pháp phòng hội chứng MMA 38 2.4 Phương pháp nghiên cứu 38 2.4.1 Xác định số tiêu lâm sàng 38 2.4.2 Phương pháp điều tra hồi cứu để nắm tình hình dịch tễ lợn mắc hội chứng MMA 2.4.3 38 Phương pháp xác định tiêu sinh sản để đánh giá ảnh hưởng hội chứng MMA đến suất sinh sản lợn nái 39 2.4.4 Phương pháp lấy mẫu 39 2.4.5 Các phương pháp dùng xét nghiệm số tiêu phi lâm sàng: sinh lý, sinh hóa máu 2.4.6 40 Phương pháp phân tích tiêu chất béo, protein, đường, vật chất khô đo pH sữa 40 2.4.7 Phương pháp phân lập giám định vi khuẩn mẫu sữa lợn 41 2.4.8 Phương pháp phân lập giám định vi khuẩn hiếu khí có dịch tử cung 2.4.9 42 Phương pháp kiểm tra kháng sinh đồ vi khuẩn phân lập từ sữa dịch viêm tử cung lợn mắc hội chứng MMA với 10 loại kháng 2.4.10 sinh thông dụng 45 Ứng dụng điều trị hội chứng MMA 46 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận án Tiến sỹ Khoa học Nông nghiệp Page iv 2.4.11 Thử nghiệm biện pháp phòng hội chứng MMA 47 2.4.12 Xử lý số liệu 48 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 49 3.1 Kết xác định số đặc điểm dịch tễ học hội chứng MMA 49 3.1.1 Xác định số biểu lâm sàng lợn nái mắc hội chứng MMA 49 3.1.2 Tình hình mắc hội chứng MMA đàn lợn nái trang trại nghiên cứu 51 3.1.3 Ảnh hưởng lứa đẻ đến tỷ lệ mắc hội chứng MMA 52 3.1.4 Ảnh hưởng mùa vụ đến tỷ lệ mắc hội chứng MMA 54 3.2 Ảnh hưởng hội chứng MMA đến suất sinh sản lợn nái 55 3.3 Một số tiêu hồng cầu lợn mắc hội chứng MMA 59 3.3.1 Kết huyết cầu huyết sắc tố lợn mắc hội chứng MMA 59 3.3.2 Số lượng công thức bạch cầu lợn nái mắc hội chứng MMA 61 3.3.3 Kết kiểm tra hàm lượng protein tổng số, tiểu phần protein huyết lợn nái mắc hội chứng MMA lợn nái bình thường 3.3.4 62 Hàm lượng đường huyết hoạt độ enzyme GOT, GPT máu lợn mắc hội chứng MMA 64 3.4 Kết phân lập, giám định vi khuẩn 65 3.4.1 Kết phân lập, giám định vi khuẩn sữa lợn mắc hội chứng MMA 3.4.2 65 Sự biến động số lượng vi khuẩn phân lập sữa lợn mắc hội chứng MMA sữa lợn bình thường 3.4.3 67 Kết phân lập giám định vi khuẩn hiếu khí dịch tử cung lợn mắc hội chứng MMA 3.4.4 69 Kết kiểm tra số lượng vi khuẩn hiếu khí dịch tử cung lợn nái mắc hội chứng MMA 3.5 71 Kết kiểm tra kháng sinh đồ vi khuẩn hiếu khí phân lập từ mẫu sữa, mẫu dịch tử cung lợn mắc hội chứng MMA với 10 loại kháng sinh thông dụng Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận án Tiến sỹ Khoa học Nông nghiệp 73 Page v 3.5.1 Kết kiểm tra kháng sinh đồ vi khuẩn hiếu khí phân lập từ mẫu sữa lợn mắc hội chứng MMA với 10 loại kháng sinh 3.5.2 73 Kết kiểm tra kháng sinh đồ chủng vi khuẩn hiếu khí phân lập từ dịch tử cung lợn mắc hội chứng MMA với 10 loại kháng sinh 79 thông dụng 3.5.3 Tính mẫn cảm kháng sinh tập đồn vi khuẩn mẫu dịch tử cung lợn mắc hội chứng MMA 3.6 90 Kết khảo sát số tiêu chất lượng, thành phần tính chất sữa lợn 92 3.7 Kết thử nghiệm điều trị hội chứng MMA 94 3.8 Kết thử nghiệm biện pháp phòng hội chứng MMA vệ sinh thú y chăm sóc ni dưỡng 97 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 102 Kết luận 102 Kiến nghị 103 Danh mục cơng trình cơng bố có liên quan đến luận án 104 Tài liệu tham khảo 105 Phụ lục 113 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận án Tiến sỹ Khoa học Nông nghiệp Page vi DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Ý nghĩa chữ viết tắt BA Blood Agar: thạch máu CFU Clony Forming Unit: đơn vị khuẩn lạc cs Cộng ĐVT Đơn vị tính ELISA Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay: hấp phụ miễn dịch liên kết với enzyme FSH Follicle Stimulating Hormone: Hormon làm trúng chín GOT Glutamate Oxalate Transaminase: GPT Glutamate Pyruvate Transaminase: men chuyển hóa LH Lutenizing Hormone: Hormon làm rụng trứng Mac Thạch Maconkey MIC Minimum inhibitory concentration: nồng độ ức chế tối thiểu MMA Metritis, mastitis, agalactia: hội chứng viêm tử cung, viêm vú, sữa OR Odds Ratio: hệ số tương quan P Khối lượng thể PGF Prostaglandin F: hormon sinh sản PPDS Post partum dysgalactia syndrome: hội chứng rối loạn tiết sữa sau đẻ PRRS Porcine reproductive and respiratory syndrome: hội chứng rối loạn men chuyển hóa sinh sản hơ hấp lợn PTNT Phát triển Nông thôn SE Standard Error: Sai số chuẩn Spp species Plural: loài YCW yeast cell wall: men vách tế bào Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận án Tiến sỹ Khoa học Nông nghiệp Page vii DANH MỤC BẢNG TT Tên bảng Trang 2.1 Bảng qui chuẩn lâm sàng phòng xét nghiệm NCCS 1999 46 2.2 Bố trí thử nghiệm biện pháp tổng hợp phòng hội chứng MMA 47 3.1 Kết theo dõi số biểu lâm sàng lợn nái mắc hội chứng MMA 49 3.2 Tỷ lệ lợn nái mắc hội chứng MMA địa phương 51 3.3 Tỷ lệ lợn nái mắc hội chứng MMA theo lứa đẻ 53 3.4 Tỷ lệ lợn nái mắc hội chứng MMA qua mùa năm 54 3.5a Ảnh hưởng hội chứng MMA đến số tiêu sinh sản 56 3.5b Ảnh hưởng hội chứng MMA đến suất sinh sản lợn nái 57 3.6 Kết kiểm tra số tiêu huyết học lợn nái mắc hội chứng MMA lợn nái bình thường 3.7 59 Số lượng bạch cầu công thức bạch cầu lợn nái mắc hội chứng MMA lợn nái bình thường 3.8 61 Kết kiểm tra hàm lượng protein huyết lợn mắc hội chứng MMA lợn bình thường 3.9 62 Hàm lượng đường huyết hoạt độ men sGOT, sGPT lợn nái mắc hội chứng MMA lợn nái bình thường 3.10 64 Số loài vi khuẩn sữa lợn nái mắc hội chứng MMA lợn nái bình thường 3.11 66 Kết xác định số lượng vi khuẩn hiếu khí sữa lợn mắc hội chứng MMA sữa lợn bình thường 3.12 68 Kết phân lập vi khuẩn dịch tử cung lợn nái mắc hội chứng MMA lợn nái bình thường 3.13 69 Kết xác định số lượng vi khuẩn hiếu khí dịch tử cung lợn nái mắc hội chứng MMA lợn nái bình thường Học viện Nơng nghiệp Việt Nam – Luận án Tiến sỹ Khoa học Nông nghiệp 72 Page viii Chích lặp lại vào 11 (10 tới 12) ngày sau Phối giống phát lên giống Chương trình : Chích bắp ml LUTALYSER Phối giống phát lên giống Nếu chu kỳ thú điều trị, chương trình 3, bắt buộc phải theo dõi phát lên giống cịn chương trình 1, yêu cầu thời gian phối giống “Bị đực phối trực tiếp” sử dụng chương trình LUTALYSER cần phối giống lặp lại lần lên giống kế tiếp, chu kỳ sau, thú không mang thai lần phối giống Trục thai kích thích trâu bò đẻ: LUTALYSER sử dụng liều cao liều lượng dùng để làm tiêu thể vàng gia súc khơng có mang Căn định này, liều hiệu nghiệm biến đổi từ 25-35 mg (5-7 ml) chích bắp Giai đoạn mang thai yếu tố quan trọng ảnh hưởng đến hiệu quarcuar liều dùng Các thử nghiệm thực tế cho thấy bò mang thai tới 150 ngày, LUTALYSER gây sảy thai nhân tạo thành công Tuy nhiên, bị mang thai từ 150-270 ngày chí dùng LUTALYSER liều cao hiệu Ngựa: LUTALYSER làm tiêu thể vàng ngựa với liều 5mg (1ml) chích bắp Tác động tiêu thể vàng sử dụng nhằm : a Kiểm soát hiệu thời gian lên giống rụng trứng chu kỳ động dục ngựa Điều trị ngựa vàng khơng biểu lên giống (khó phối giống) b Tạo sẩy thai nhân tạo ngựa (đáp ứng khác cần điều trị lặp lại) Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận án Tiến sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 121 Heo: Kích đẻ heo: Chích bắp 10 mg (2ml/nái) vòng ngày so với ngày đẻ dự kiến LUTALYSER sử dụng để kích đẻ heo vòng ngày so với ngày đẻ dự kiến Đáp ứng với thuốc khác cá thể dao động từ 24-36 từ lúc chích thuốc tới lúc sinh Nó thuận tiện chop người nhân viên việc kiểm soát thời gian sinh heo nái heo hậu bị mang thai giai đoạn cuối Sử dụng sớm ngày trước ngày đẻ dự kiến, heo đẻ yếu ớt, tỷ lệ sống sót giảm Có tỷ lệ nhỏ heo không đáp ứng số lý cá biệt chưa xác định CHỐNG CHỈ ĐỊNH - CHÚ Ý : a Thận trọng, phụ nữ tuổi sinh đẻ tránh tiếp xúc với dung dịch b Những người mắc bệnh hen, suyễn có bệnh hơ hấp, phụ nữ có thai khơng phép chích thuốc cho gia súc c LUTALYSER đổ da cần rửa với xà phịng nước d Khơng cần thiết phải ngưng tiêu thụ sữa cho người cho thú e Không giết mổ gia súc sử dụng thuốc để tiêu thụ cho người vòng 24 sau diều trị f Không nên sử dụng thuốc cho trâu bị bị rối loạn cấp tính bán cấp tính tim mạch, hơ hấp tiêu hóa g Phải kiểm tra tình trạng mang thai trước chích LUTALYSER thuốc gây sảy thai kích đẻ sử dụng liều đủ cao nhiều loài động vật h Không tiêm tĩnh mạch i LUTALYSER không hiệu sử dụng trước ngày thứ sau rụng trứng j Ở thú mang thai, cần nghĩ đến khả tử cung bị vỡ, đặc biệt cổ tử cung khơng giãn nở k Kích đẻ heo sớm 72 so với ngày sinh dự kiến làm giảm khả sống sót heo l Bảo quản nhiệt độ phịng , khơng q 300C Học viện Nơng nghiệp Việt Nam – Luận án Tiến sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 122 QUY CÁCH : lọ 10 ml lọ 30 ml SĐKNK : PFU-56 NGÀY SẢN XUẤT VÀ HẠN SỬ DỤNG : 24 tháng kể từ ngày sản xuất Sử dụng hết vòng 28 ngày kể từ mở nắp chai Ngày bsanr xuất hạn sử dụng xem bao bì Doanh nghiệp nhập : Cơng ty TNHH TN DP SANG -18Bis/9 Ng T.Minh Khai –Q1.-Tp HCM VPĐD PFIZER H.C.P Cororation Vietnam Phòng 7.1B, lầu tòa nhà Etown – 364 Cộng Hòa, P.13, Q Tân Bình, TP Hồ Chí Minh ĐT: 08.38122461-38122737-FAX : 08 38122712 BAYTRIL® 5% Hoạt chất Enrofloxacin 5% phổ kháng khuẩn rộng, Baytril 5% dùng để điều trị bệnh nhiễm khuẩn đường hơ hấp, tiêu hố, niệu sinh dục, da khớp suyễn, tụ huyết trùng, viêm teo mũi truyền nhiễm, thương hàn E.coli, MMA (viêm vú, viêm tử cung, sữa), viêm da, khớp nhiễm trùng kế phát heo, trâu, bò, dê, cừu LIỀU LƯỢNG VÀ CÁCH DÙNG - Liều lượng: Heo, trâu, bò, dê, cừu: 1ml/20kg thể trọng/ngày, 2-3 ngày Lưu ý - Ngưng sử dụng sản phẩm ngày trước giết thịt - Không dùng Baytril cho ngựa BẢO QUẢN: Để nơi khô mát, tránh ánh nắng trực tiếp ĐĨNG CHAI: Chai 100 ml Học viện Nơng nghiệp Việt Nam – Luận án Tiến sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 123 III SƠ ĐỒ PHÂN LẬP VI KHUẨN (1) Sơ đồ phân lập nhóm coliforms Mẫu sữa MC 37OC/24h MC: khuẩn lạc màu hồng Gram -, trực OF test: + Oxidase: – KIA: (vàng/vàng/ H2S -) LDC LDC+ LDC – *E.coli *Citrobacter diversus Khuẩn lạc khô dẹp Khuẩn lạc bóng dẹp Một vài chủng có khuẩn lạc nhầy IMViC: +/+/-/*Klebsiella pneumonia Malonate: + IMViC: +/+/-/+ Urease: + Khuẩn lạc bóng lồi, tâm có màu trắng sữa IMViC: -/-/+/+ Di động: Urease: + * Enterobacter aerogenes Khuẩn lạc lồi bóng IMViC: -/-/+/+ Di động : + Urease: - Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận án Tiến sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 124 (2) Sơ đồ phân lập cầu khuẩn Gram dương Mẫu sữa Thạch máu BA 370C/24 – 48 Chọn khuẩn lạc điển hình nhuộm Gram (cầu khuẩn Gram dương) Catalase Catalase (-) Streptococcus spp (tiếp tục sơ đồ 3.…) Catalase (+) Staphylococcus spp Micrococcus spp Nitrate Nitrate (+) Staphylococcus spp Nitrate (-) Micrococcus spp Coagulase (+), dung huyết β Oxidase (-), Manitol (+) Staphylococcus aureus Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận án Tiến sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 125 (3) Sơ đồ xác định loài Streptococcus Streptococcus spp catalase (-), oxidase (-) Dung huyết dạng β S pyogenes, S agalactiae, S zooepidemicus, Dung huyết dạng α, γ S dysgalactiae, S agalactiae, S uberis, S faecalis, S pneumoniae Mọc MC S faecalis CAMP test (+) S agalactiae Không mọc MC S dysgalactiae, S agalactiae, S uberis, S pneumoniae CAMP test (-) S dysgalactiae, S uberis, S pneumoniae Optochin test (+) S pneumoniae CAMP test (+) S agalactiae CAMP test (-) S pyogenes, S zooepidemicus Trehalose (-), Lactalose (+), Sorbitol (+), Manitol (-) S zooepidemicus S pyogenes Optochin test (-) S dysgalactiae, S uberis Ewards medium esculin hydrolysis (+) S uberis Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận án Tiến sỹ Khoa học Nông nghiệp Ewards medium esculin hydrolysis (-) S dysgalactiae Page 126 MỘT SỐ HÌNH ẢNH MINH HỌA Ảnh Lợn viêm vú hội chứng MMA Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận án Tiến sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 127 Ảnh Lợn viêm tủ cung hội chứng MMA Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận án Tiến sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 128 Ảnh Dịch viêm tử cung lợn mắc hội chứng MMA Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận án Tiến sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 129 Ảnh Lợn nái sốt mắc hội chứng MMA Ảnh Lợn nái viêm tử cung, viêm vú, sữa Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận án Tiến sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 130 Ảnh Lợn nái viêm tử cung, sữa hội chứng MMA Ảnh Lợn mẹ mắc hội chứng MMA, lợn tiêu chảy Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận án Tiến sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 131 Ảnh 8: vệ sinh kém, lợn nái mắc MMA, lợn tiêu chảy, còi cọc Ảnh 9: vệ sinh đảm bảo, lợn mẹ khỏe, lợn phát triển đồng Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận án Tiến sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 132 Ảnh 10: lợn mẹ viêm tử cung, sữa, lợn tiêu chảy Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận án Tiến sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 133 Ảnh 11: xét nghiệm tiêu sinh lý máu lợn Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận án Tiến sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 134 Ảnh 12 Phân tích tiêu sinh lý máu lợn Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận án Tiến sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 135