BÁO CÁO THÍ NGHIỆM HÓA SINH Bài 1 Xác định hàm lượng nitơ tổng số bằng phương pháp Kjeldahl I Mục đích, ứng dụng thí nghiệm + Xác định hàm lượng nitơ tổng số có trong mẫu bằng phương pháp Kjeldahl + Đ.
BÁO CÁO THÍ NGHIỆM HĨA SINH Bài 1: Xác định hàm lượng nitơ tổng số phương pháp Kjeldahl I Mục đích, ứng dụng thí nghiệm: + Xác định hàm lượng nitơ tổng số có mẫu phương pháp Kjeldahl + Được ứng dụng để đo lượng nitơ có đất, nước thải, phân bón, vật liệu khác II Dụng cụ, bước tiến hành: 2.1 Dụng cụ, hóa chất: + Dụng cụ: * Bộ cất đạm * Bình tam giác 100ml * Ống đong * Micropipet + Hóa chất: * Nước cất * Dung dịch H3BO3 3% * Dung dịch NaOH 40% * Dung dịch H2SO4 0,1N * Chất thị Tashiro * Dịch vơ hóa mẫu 2.2 Bước tiến hành: 2.2.1 Chuẩn bị cất đạm: * Kiểm tra mức nước bình cầu * Kiểm tra khoá van cất * Cho nước cất chạy qua ống sinh hàn (bằng cách mở nhỏ từ từ van nước) * Đun sôi nước bình tạo * Rửa cất đạm (ống sinh hàn, bình cất) cách đóng mở van phù hợp, giúp nước chạy rửa tồn hệ thống cất 2.2.2.Cất đạm: cất Mẫu thí nghiệm: Chuẩn bị bình hấp thụ NH3: Cho vào bình tam giác (cỡ 100ml, miệng rộng): 20 ml H3BO3 3% (dùng ống đong) 2-3 giọt thị Tashiro Lắp bình vào cất đạm (đuôi ống sinh hàn ngập dung dịch ) Cho vào bầu cất (lần lượt) ml NaOH 40% (dùng ống đong) ml H2O (để tráng phễu) (dùng micropipet) ml dịch vơ hố mẫu (dùng micropipet hút dịch); Đóng khố bầu Tiến hành cất (khoảng 5-7 phút) Sau thấy dung dịch bình hấp thụ NH3 chuyển từ màu tím hồng thành màu xanh đợi khoảng phút Hạ bình, dùng giấy q tím hứng giọt nước ngưng chảy từ ống sinh hàn Thấy giấy đổi màu, đặt bình hứng vào vị trí cũ Khi khơng thấy đổi màu, lấy bình hấp thụ khỏi cất, tia nước cất tráng đuôi ống sinh hàn) Mẫu kiểm chứng Chuẩn bị bình hấp thụ NH3 : Cho vào bình tam giác (cỡ 100ml): 20 ml H3BO3 3% (dùng ống đong) 2-3 giọt thị Tashiro Lắp bình vào cất đạm (đi ống sinh hàn ngập dung dịch) Cho vào bầu cất: ml NaOH 40% (dùng ống đong) ml H2O (5 ml thay cho dịch vơ hố); Đóng khố bầu cất Tiến hành cất (khoảng 5-7 phút) kiểm tra tương tự mẫu thí nghiệm, dùng giấy q tím thử điểm kết thúc trình cất 2.2.3 Định phân: + Định phân lượng (NH4)2B4O7 tạo bình hấp thụ NH3 H2SO4 0,1N + Ghi lượng H2SO4 0,1N dùng định phân cho mẫu thí nghiệm mẫu kiểm chứng III Kết quả: Sau định phân lượng (NH4)2B4O7 tạo bình hấp thụ NH3 H2SO4 0,1N, thu kết sau: + Lượng H2SO4 0,1N dùng định phân cho mẫu thí nghiệm là: 7,80ml + Lượng H2SO4 0,1N dùng định phân cho mẫu thí kiểm chứng là: 0ml Ta có cơng thức tính hàm lượng nitơ tổng số sau: X= ( a−b ) 1,4 V 100 m V Với: X: Hàm lượng nitơ tổng số, tính (ml) a: Số ml H2SO4 0,1N dùng để định phân mẫu thí nghiệm, từ kết ta có a=7,80 (ml) b: Số ml H2SO4 0,1N dùng để định phân mẫu kiểm chứng, từ kết ta có b=0 (ml) 1,4: Số mg nitơ ứng với 1ml H2SO4 0,1N V: Dung tích bình định mức, có V=100 (ml) 100: Hệ số chuyển thành % m: Lượng mẫu cân, ta có m = 5000 (mg) V1: Số ml dung dịch thí nghiệm hút từ bình định mức cho vào bầu cất, có V1= (ml) Ta có: X= (7,80−0 ) 1,4 100 100 =4,368 % 5000.5 Vậy, hàm lượng nitơ tổng số có dịch cất đạm 4,368% IV Nhận xét kết quả: + Đây thí nghiệm nên kết tồn nhiều sai sót: Trong trình rửa cất đạm, khơng rửa kĩ, cất đạm chứa lượng nitơ từ lần thí nghiệm trước, dẫn đến kết thí nghiệm thu khơng Do đó, cần phải rửa thao tác, để đảm bảo kết thu sai số Trong trình cất đạm, phải nạp NaOH H2O trước, cho dịch vô hóa cuối cùng, đồng thời đóng khóa bầu cất lập tức, nhằm tránh thất đạm mơi trường, q trình cất đạm tạo khí NH3 dễ bay Quá trình định phân thực tay quan sát kết mắt thường Do phải thực từ từ, nhằm đảm bảo phát thời điểm dung dịch đổi màu + Ưu điểm phương pháp Kjeldahl dụng cụ thí nghiệm khơng đắt khơng phức tạp; thu kết đồng nhất, xác Nhưng phương pháp tồn số hạn chế, thời gian vơ hóa lâu, địng thời phải sử dụng H2SO4 đặc nóng Do đó, ngày cịn số phương pháp khác để xác định hàm lượng nitơ protein mẫu, ví dụ phương pháp Lowry, phương pháp Bradford,…