nghiên cứu mối liên quan giữa hội chứng rối loạn hô hấp sinh sản ở lợn (prrs) với vi khuẩn gây bệnh kế phát và xác định biện pháp phòng, trị bệnh

Bệnh viêm phổi ở lợn có rất nhiều nguyên nhân gây bệnh, vì vậy để xác định nguyên nhân gây bệnh viêm phổi cho lợn nuôi tại các khu vực khác nhau ở nước ta hiện nay là rất cần thiết, đặc

VIỆN THÚ Y

BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI:

NGHIÊN CỨU MỐI LIÊN QUAN GIỮA HỘI CHỨNG RỐI LOẠN

HÔ HẤP SINH SẢN Ở LỢN (PRRS) VỚI VI KHUẨN GÂY BỆNH

KẾ PHÁT VÀ XÁC ĐỊNH BIỆN PHÁP PHÒNG, TRỊ BỆNH

CNĐT: CÙ HỮU PHÚ

8940

HÀ NỘI – 2011

MỤC LỤC

Chương 1: Tổng quan tài liệu

1 Vi khuẩn A pleuropneumoniae, P.multocida, S Suis và bệnh do vi

khuẩn gây ra

2 Virus gây hội chứng PRRS (PRRS) ở lợn

12

12

41 Chương 2 Nội dung – phương pháp nghiên cứu 61

2.1 Nội dung nghiên cứu 61

2.2 Phương pháp nghiên cứu 61

Chương 3: Kết quả và thảo luận 63

3.1 Kết quả lấy mẫu bệnh phẩm lợn nghi mắc PRRS 63

3.2 Kết quả thực hiện nội dung 1 của đề tài 64

3.3 Kết quả thực hiện nội dung 2 của đề tài 94

3.4 Kết quả thực hiện nội dung 3 của đề tài 122

3.5 Kết quả thực hiện nội dung 4 của đề tài 130

3.6 Kết quả thực hiện nội dung 5 của đề tài 149

Tài liệu tham khảo 169

Phụ lục 181

DANH MỤC c¸c ký hiÖu, c¸c ch÷ viÕt t¾t

1 A pleuropneumoniae Actinobacillus pleuropneumoniae

5 CAMP Christic- Atkins- Munch- Petersen

12 MP- PCR Multiplex - Polymerase Chain Reaction

13 NAVETCO Công ty thuốc thú y Trung ương

14 PCR Polymerase Chain Reaction

15 PFGE Pulsed Field Gel Electrophoresis

16 P multocida Pasteurella multocida

Syndrome

Syndrome Virus

19 RAPD Randomly Amplifiel Polymorphic

20 S aureus Staphylococcus aureus

21 S suis Streptococcus suis

22 TCID Tissue Culture Infective Dose

25 TT-Huế Thừa Thiên Huế

26 TYE Tryptone Yeast Extract

DANH MỤC c¸c BẢNG

Bảng 1 Kết quả lấy mẫu bệnh phẩm lợn nghi mắc PRRS tại các địa

phương 63 Bảng 2 Kết quả xét nghiệm virus PRRS từ mẫu bệnh phẩm 65

Bảng 3 Kết quả xét nghiệm virus PRRS và vi khuẩn từ mẫu bệnh

phẩm 67

Bảng 3.1 KÕt qu¶ xÐt nghiÖm virus PRRS vµ vi khuÈn Actinobacillus

pleuropneumoniae, Pasteurella multocida vµ Streptococcus sui tõ

B¶ng 3.2 KÕt qu¶ xÐt nghiÖm virus PRRS vµ vi khuÈn Actinobacillus

pleuropneumoniae, Pasteurella multocida vµ Streptococcus suis

tõ mÉu bÖnh phÈm tõ n¬i kh«ng cã dÞch PRRS 69

B¶ng 3.3 KÕt qu¶ xÐt nghiÖm vi rót PRRS vµ vi khuÈn Actinobacillus

pleuropneumoniae, Pasteurella multocida vµ Streptococcus suis tõ

Bảng 4 Kết quả xét nghiệm virus PRRS từ mẫu bệnh phẩm 79

Bảng 5.Kết quả phân lập vi khuẩn P multocida, A.pleuropneumonia,

Bảng 6 Kết quả giám định một số đặc tính sinh học của các chủng vi

Bảng 7 Kết quả kiểm tra một số đặc tính sinh học của các chủng vi

Bảng 8 Kết quả kiểm tra một số đặc tính sinh học của các chủng vi

Bảng 9 Kết quả xác định một số đặc tính sinh vật hóa học của các

chủng vi khuẩn S suis phân lập được bằng hệ thống API 20 Strep 99

Bảng 10 Kết quả xác định serotype của các chủng vi khuẩn

A.pleuropneumonia, P multocida phân lập được 101

Bảng 11 Kết quả xác định serotype của 1 số chủng vi khuẩn S suis

Bảng 14 Kết quả xác định gen sản sinh độc tố (Apx) của 22 chủng

Bảng 15 Kết quả kiểm tra độc lực của các chủng S suis phân lập

được trên chuột bạch 112 Bảng 16 Kết quả kiểm tra các gen mã hóa các yếu tố độc lực của các

chủng S suis phân lập được bằng phương pháp PCR 114

Bảng 17 Phân lô thí nghiệm, liều gây bệnh và đường gây bệnh 116

Bảng 18 Kết quả theo dõi nhiệt độ lợn thí nghiệm gây bệnh thực

Bảng 19 Kết quả theo dõi lợn sau khi gây bệnh thực nghiệm 118

Bảng 20 Tổng hợp kết quả gây bệnh thực nghiệm các chủng vi

khuẩn phân lập trên lợn thí nghiệm 119

Bảng 21a Kết quả kiểm tra các gen mã hóa các yếu tố độc lực của

các chủng S suis phân lập được bằng phương pháp PCR 124

Bảng 21b Kết quả kiểm tra các gen mã hóa các yếu tố độc lực của

các chủng S suis phân lập được bằng phương pháp PCR 125

Bảng 22 Kết quả xác định PFGE profile của vi khuẩn Streptococcus 127

Bảng 23 Bộ giống vi khuẩn giống được chọn để chế vacxin viêm

Bảng 27 Kết quả kiểm tra vô trùng của vacxin chế tạo 140

Bảng 28 Kết quả kiểm tra chỉ tiêu an toàn của vacxin trên chuột nhắt

trắng 140 Bảng 29 Kết quả kiểm tra hiệu lực của vacxin trên chuột nhắt trắng 141

Bảng 30 Tổng hợp kết quả công cường độc cho lợn sau khi tiêm

vacxin 144 Bảng 31 Kết quả kiểm tra kháng thể trong máu lợn được tiêm vacxin

DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ, ẢNH

Hình ảnh lợn mắc PRRS tại các địa phương 73

Lợn gây bệnh thực nghiệm khi chết có bệnh tích như lợn bị mắc

Phản ứng của các chủng S suis bằng hệ thống API 20 Strep 100

Ảnh 3.3 Kết quả phản ứng PCR định type vi khuẩn P multocida 102

Hình 3.4 M (Maker 1kb), apx ICA, apx IICA, apx IIICA với chủng

Chữ ký xác nhận

1 PGS.TS Cù Hữu Phú Viện Thú y

Chủ nhiệm đề tài Phân lập vi khuẩn, chế tạo và thử nghiệm vacxin

2 TS Đỗ Ngọc Thuý Viện Thú y

Thư ký đề tài Phân lập vi khuẩn, chế tạo và thử nghiệm vacxin

3 TS Nguyễn Thị Thu Hằng Viện Thú y Phân lập vi khuẩn, chế vacxin

4 TS Đào Thị Hảo Viện Thú y Phân lập vi khuẩn, chế vacxin

5 ThS Âu Xuân Tuấn Viện Thú y Phân lập vi khuẩn, chế vacxin

6 ThS Văn Thị Hường Viện Thú y Phân lập vi khuẩn, chế vacxin

7 BS Nguyễn Xuân Huyên Viện Thú y Phân lập vi khuẩn, chế vacxin

8 BS Lê Thị Minh Hằng Viện Thú y Phân lập vi khuẩn, chế vacxin

9 TS Nguyễn Tiến Dũng Viện Thú y Phân lập và giám định virus

PRRS

10 TS Nguyễn Viết Không Viện Thú y Phân lập và giám định virus

PRRS

Mở đầu

Hội chứng rối loạn hô hấp và sinh sản ở lợn (Porcine Respiratory and Reproductive Syndrome - PRRS) được ghi nhận lần đầu tiên trên thế giới vào năm 1987 ở Mỹ tại vùng bắc của bang California, bang Iowa và Minnesota Năm 1988 bệnh lan sang Canada Sau đó bệnh xuất hiện ở một số nước Châu

Âu như Đức năm 1990, Hà Lan, Tây Ban Nha, Bỉ, Anh năm 1991 và Pháp năm 1992

Từ năm 2005 trở lại đây, 25 nước và vùng lãnh thổ thuộc tất cả các châu lục trên thế giới đều có dịch PRRS lưu hành (trừ úc và Newzeland) Có thể khẳng định rằng PRRS là nguyên nhân gây tổn thất kinh tế cho ngành chăn nuôi lợn ở nhiều quốc gia trên thế giới (Nguyễn Bá Hiên và cs, 2007)

Theo báo cáo của Cục Thú y: Virus PRRS được phỏt hiện lần đầu tiờn tại nước ta năm 1997 trờn đàn lợn nhập từ Mỹ vào cỏc tỉnh phớa Nam, 10 trong

số 51 con cú huyết thanh dương tớnh với PRRS và cả đàn được tiờu hủy ngay Tuy nhiờn, theo điều tra ở một số địa bàn thuộc thành phố Hồ Chớ Minh và cỏc tỉnh lõn cận cho thấy 25% mẫu huyết thanh lợn cú khỏng thể virus PRRS (596/2308 mẫu) và 5/15 trại (chiếm 33%) cú lưu hành huyết thanh hội chứng PRRS Trại chăn nuụi cụng nghiệp tại TP Hồ Chớ Minh tỷ lệ lợn cú huyết thanh dương tớnh với hội chứng PRRS là 5,97%

Năm 2003, tỷ lệ huyết thanh dương tớnh với hội chứng PRRS trờn lợn nuụi tập trung ở Cần Thơ là 66,86%

Như vậy, hội chứng PRRS đó được phỏt hiện ở Việt Nam từ năm 1997, tuy nhiờn, từ năm 1997 đến trước thỏng 3/năm 2007 chưa phỏt hiện cỏc ổ dịch lõm sàng trờn đàn lợn

Năm 2007: Toàn quốc cú 324 xó, phường của 65 huyện, quận thuộc 18 tỉnh,

thành phố cú dịch Số lợn mắc bệnh là 70.577 con (chiếm 0,26% tổng đàn, toàn quốc cú 26.560.651 con), số lợn chết và phải tiờu huỷ là 20.366 (chiếm

gần 0,08%)

Đợt 1: dịch lợn PRRS lần đầu tiên xuất hiện tại nước ta tại Hải Dương

vào ngày 12/3/2007 Dịch đ x ra tại 146 xã, phường của 25 huyện, quận thuộc

07 tỉnh gồm: Hải Dương, Hưng Yên, Quảng Ninh, Thái Bình, Bắc Ninh, Bắc Giang và Hải Phòng Số lợn mắc bệnh là 31.750, trong đó số chết và phải tiêu hủy là 7.296 con

Đợt 2: ngày 25/6/2007, dịch xuất hiện tại Quảng Nam và lan ra các tỉnh

miền Trung, ngày 13/7/2007 dịch xuất hiện tại các tỉnh Nam bộ, dịch xuất hiện tại 178 xã, phường của 40 huyện, quận thuộc 14 tỉnh, thành phố gồm Quảng Nam, TT Huế, Đà Nẵng, Quảng Ngãi, Bình Định, Quảng Trị, Long

An, BR Vũng Tàu, Khánh Hòa, Cà Mau, Lạng Sơn, Hà Nội, Thái Bình và Hải Dương Số lợn mắc bệnh là 38.827 con, trong đó số chết và tiêu hủy là 13.070 con

Năm 2008: Dịch PRRS đã xảy ra thành hai đợt chính tại 956 xã, phường

thuộc 103 huyện của 26 tỉnh, thành phố Tổng số lợn mắc bệnh là 309.586 con, trong đó số lợn chết và buộc phải tiêu huỷ là 300.906 con

Đợt 1: dịch tái phát ngày 28/3/2008 tại một số tỉnh miền Trung như

Thanh Hóa, Nghệ An, Hà Tĩnh, sau đó dịch lây lan và xuất hiện ở 825 xã, phường của 61 huyện, quận của 10 tỉnh, thành phố gồm Thái Nguyên, Thái Bình, Nam Định, Ninh Bình, Thanh Hóa, Nghệ An, Hà Tĩnh, TT Huế, Quảng Nam, Lâm Đồng làm 271.654 con lợn mắc bệnh, trong đó đã tiêu hủy 270.608 con Những tỉnh bị ảnh hưởng nặng là Thanh Hóa, Hà Tĩnh, TT Huế, Nghệ An và Thái Bình

Đợt 2: dịch xuất hiện tại 131 xã, phường của 42 huyện, quận thuộc 19

tỉnh, thành phố gồm: BR-Vũng Tàu, Bạc Liêu, Bến Tre, Bình Định, Cà Mau, Gia Lai, Hà Nam, Hải Dương, Lào Cai, Phú Thọ, Phú Yên, Quảng Nam, Quảng Ninh, Quảng Trị, Sóc Trăng, Tây Ninh, TT-Huế, Trà Vinh, Vĩnh Long Tổng số gia súc mắc bệnh là 37.932 con, trong đó số chết và tiêu hủy là

30.298 con Dịch xuất hiện rải rác khắp 3 miền, trong đó tỉnh bị ảnh hưởng nặng là Quảng Trị, TT Huế và BR-Vũng Tàu

Năm 2009: Dịch PRRS xảy ra ở 69 xã thuộc 26 huyện của 13 tỉnh, thành là

BR Vũng Tàu, Bạc Liêu, Bến Tre, Bắc Giang, Bình Dương, Đắc Lắc, Đồng Nai, Gia Lai, Hưng Yên, Quảng Ninh, Quảng Nam, Tiền Giang và Vĩnh Long với 7.030 lợn mắc bệnh và 5.847 lợn buộc phải tiêu hủy

Năm 2010: Đợt 1/2010: (23/3/2010 - 30/6/2010) Dịch lợn PRRS đã xảy ra từ

ngày 23/3/2010 tại Hải Dương

Toàn quốc ghi nhận các ổ dịch PRRS tại 461 xã, phường, thị trấn của 71 quận, huyện thuộc 16 tỉnh, thành phố gồm: (Hải Dương, Hưng Yên, Hải Phòng, Thái Bình, Bắc Ninh, Bắc Giang, Thái Nguyên, Lạng Sơn, Hà Nội, Nam Định, Hà Nam, Nghệ An, Quảng Ninh, Hòa Bình, Cao Bằng, Sơn La) Tổng số lợn mắc bệnh là 146.051 con trong đó số tiêu hủy là 65.911 con

Đợt 2/2010 tại miền Nam

Bắt đầu từ ngày 11/6/2010 tại Sóc Trăng Sau đó dịch xuất hiện tại Tiền Giang (ngày 19/6), Bình Dương (ngày 27/6), Long An (ngày 15/7), Lào Cai (11/7), Quảng Trị (01/7)

Toàn quốc ghi nhận các ổ dịch PRRS tại 42.080 hộ chăn nuôi của 1.517

xã, phường, thị trấn thuộc 215 quận, huyện của 36 tỉnh, thành phố là Sóc Trăng, Quảng Trị, Tiền Giang, Lào Cai, Long An, Bình Dương, Bạc Liêu, Quảng Nam, Đồng Nai, Bình Phước, Đà Nẵng, Vĩnh Long, Khánh Hòa, Đắc Lắc, Hậu Giang, Bà Rịa Vũng Tàu, Lâm Đồng, Tây Ninh, Đồng Tháp, An Giang, Cần Thơ, Kiên Giang, Bến Tre, Cà Mau, Kontum, Đắc Nông, Gia Lai, Trà Vinh, Bình Thuận, Quảng Ninh, Ninh Thuận, Phú Yên, Sơn La, Nam

Định, Thanh Hóa, Hà Tĩnh

Tổng số lợn trong đàn mắc bệnh là 968.115 con, số mắc bệnh là 666.896 con, trong đó số chết, tiêu hủy là 372.788 con

Nh− vËy, t¹i ViÖt Nam, dÞch PRRS cã thÓ sÏ cã nh÷ng diÔn biÕn phøc

tạp và có nguy cơ bùng phát ở tất cả các địa phương trong cả nước

Trong hội chứng PRRS thì vai trò của vi khuẩn kế phát là một trong những nguyên nhân chính gây chết hàng loạt lợn tại các địa phương hiện nay Trong vụ dịch PRRS tại Trung quốc nâm 2006 (Kegong Tian, Xiuling Yu )

đã làm cho 2.000.000 con lợn mắc bệnh và bệnh đã lay lan ra 10 tỉnh khac nhau ở Trung quốc Trong nghiên cứu của Thanawongnuwech, R, Brown G B.; (2000) đã xác định mối liên quan chặt chẽ giữa độc lực của virus gây

bệnh với khả năng gây bệnh của vi khuẩn Streptococcus suis trong hội chứng

rối loạn hô hấp sinh sản ở lợn

Bệnh viêm phổi ở lợn có rất nhiều nguyên nhân gây bệnh, vì vậy để xác

định nguyên nhân gây bệnh viêm phổi cho lợn nuôi tại các khu vực khác nhau

ở nước ta hiện nay là rất cần thiết, đặc biệt là xác định được vai trò của bệnh viêm phổi lợn trong hội chứng PRRS cũng như khả năng phòng chống bệnh có một ý nghĩa rất lớn của về mặt khoa học và thực tiễn Việc khống chế được bệnh viêm phổi ở lợn đóng vai trò đặc biệt quan trọng trong việc phòng chống dịch PRRS ở lợn ở nước ta

Mục tiêu của đề tài

- Xác định mối liên quan giữa hội chứng rối loạn sinh sản- hô hấp ở lợn (PRRS) và bệnh viêm phổi ở lợn do vi khuẩn gây ra với vai trò của gây bệnh

viêm phổi của vi khuẩn Actinobacillus pleuropneumoniae, Pasteurella multocida, Streptococcus suis ở lợn nuôi tại Việt nam

- Chế được vacxin vi khuẩn và quy trình phòng chống bệnh

- Đề xuất quy trình tổng hợp phòng chống PRRS

Chương 1 Tổng quan tài liệu

1 VI KHUẩN A PLEUROPNEUMONIAE, P MULTOCIDA, S SUIS VÀ BệNH DO

VI KHUẩN GÂY RA

1.1 Vi khuẩn Actinobacillus pleuropneumoniae và bệnh viờm phổi lợn:

1.1.1 Vi khuẩn Actinobacillus pleuropneumoniae

Vi khuẩn Actinobacillus pleuropneumoniae là một tác nhân quan trọng

gây bệnh viêm phổi - màng phổi ở lợn Năm 1978 Kilian và cộng sự đã đặt tên

là Haemophilus pleuropneumoniae

Vi khuẩn A pleuropneumoniae là nguyờn nhõn gõy viờm phổi- màng phổi ở lợn A pleuropneumoniae trước đõy đó được gọi tờn là Haemophilus parahaemolyticus hay H pleuropneumoniae, nhưng sau này đó được xếp vào

họ Actinobacillus và đặt tờn là A.pleuropneumoniae do đó xỏc định được chỳng cú sự tương đồng về DNA giữa H pleuropneumoniae và A ligrieressi

(Pohl và cộng sự, 1983)

A pleuropneumoniae là loại cầu trực khuẩn nhỏ, gram õm, cú vỏ,

khụng cú khả năng di động, cú tới 95% vi khuẩn này gõy dung huyết thạch mỏu, dung huyết dạng β Vi khuẩn A pleuropneumoniae khụng mọc trờn mụi trường thạch mỏu thụng thường trừ khi thạch mỏu được bổ xung NAD và

chỳng mọc xung quanh cỏc khuẩn lạc của tụ cầu do Staphylococcus aureus

trong quỏ trỡnh phỏt triển trờn thạch mỏu đó phỏ huỷ hồng cầu cú trong mỏu

và sản sinh ra chất NAD Vi khuẩn A pleuropneumoniae hỡnh thành khuẩn

lạc 0,5 - 1mm sau 24h nuụi cấy trờn thạch mỏu cú cấy kốm tụ cầu và hỡnh thành vựng dung huyết β, nhất là khi sử dụng mỏu cừu

Trong mụi trường nuụi cấy, vi khuẩn đũi hỏi yếu tố V để phỏt triển, nú phỏt triển tốt trờn mụi trường thạch Chocola nhưng vi khuẩn khụng mọc trờn

mụi trường MacConkey Actinobacilus pleuropneumoniae cú khả năng sản

sinh giáp mô, sản sinh Indol và không hình thành nha bào Phản ứng Catalaza, Ureaza, CAMP - Test dương tính Lên men các loại đường: Xylose, Ribose, Glucose, Fructose, Maltose, Malnitol

Vi khuẩn A pleuropneumoniae có 12 serotype, riêng serotype 5 lại

được chia thành 5a và 5b Một số serotype có tính tương đồng kháng nguyên như serotype 1- 9 và 11, serotype 3, 6 và 8, serotype 4 và 7 (Perry và cs, 1990) Sự phân bố các serotype ở các nước có sự khác nhau: serotype 2 thường gặp ở Thuỵ Điển, Đan Mạch; serotype 1, 5 ở Mỹ và Canada; serotype 1- 9 ở Mehio; serotype 2, 9, 11 ở Newzeland Các serotype khác nhau có độc lực khác nhau phụ thuộc vào khả năng sản sinh giáp mô, khả năng dung huyết

và yếu tố gây độc tế bào Các serotype 1, 2, 5, 9, 10 và 11 có độc lực cao hơn các serotype khác

Ba sản phẩm ngoại tế bào được biết đến nhất là ba loại độc tố tế bào thuộc họ RTX của độc tố và được Frey và cộng sự, (1993) đặt tên:

+ ApX I có khả năng gây dung huyết mạnh có trọng lượng phân tử

105-110 kDa, có ở chủng thuộc serotype 1, 5, 9, 10 và 11 và được mã hoá bởi nhóm gen apx bao gồm ApX IC, apX IIA, apX IB và ApX ID cho gen hoạt hoá, cấu trúc và 2 gen bài suất

+ ApX II là chất dung huyết có trọng lượng phân tử 103 → 105 kDa được thấy ở các chủng trên trừ serotype 10 và được điều khiển bằng những gen tương tự Các gen bài suất protein được điều khiển bởi ApX I

+ ApX III là độc tố không gây dung huyết có trọng lượng phân tử 120 kDa được thấy ở chủng thuộc serotype 2, 3, 4, 6 và 8 và quyết định bởi nhóm gen apx III Người ta đã xác định được nhiều gen và nhóm gen (ví dụ nhóm gen apx III)

Phân lập vi khuẩn A pleuropneumoniae từ các tổ chức và chất tiết có

thể được tiến hành trên thạch máu cừu 5% cùng với đường cấy ngang của

Staphylococcus aureus Sau khi nuôi cấy hiếu khí qua đêm, khuẩn lạc nhỏ

xuất hiện ở xung quanh đường cấy thẳng (đòi hỏi NAD) được bao bọc xung quanh bởi vùng sáng dung huyết hoàn toàn Điều này cho phép chẩn đoán vi khuẩn học nhanh Vi khuẩn có thể mọc trên thạch chocolate nhưng không thấy rõ trên môi trường này Để nhận dạng các đặc tính sinh hoá, cần quan tâm tới hiện tượng CAMP, urease dương tính và lên men đường mannitol

Trong trường hợp tiền cấp tính vi khuẩn có thể được phân lập từ cả ở các cơ quan khác (nhiễm trùng huyết) Có thể dùng kỹ thuật PCR (Gram và

CS, 1996) hoặc test huyết thanh với kháng thể hấp thụ hoặc kháng thể đơn

dòng để xác định vi khuẩn phân lập được có phải là A pleuropneumoniae

không Có thể xác định tới các serotype bằng cách sử dụng kỹ thuật PCR cho các gen hoạt hoá câú trúc của độc tố (Frey và cộng sự, 1993) hoặc có thể sử dụng kháng thể đơn dòng với từng serotype (eg, Lairini và cộng sự, 1995, cho serotype 1; Rodriguz - Barbosa và cộng sự, 1995 cho serotype 2) Việc định serotype có thể xác định được khi cho ngưng kết vi khuẩn từ nuôi cấy trên môi trường giàu dinh dưỡng cùng với huyết thanh, hoặc bằng phản ứng đồng ngưng kết (Mittal và cộng sự, 1987); phương pháp khuếch tán trên thạch và bằng phản ứng ngưng kết hồng cầu gián tiếp Nicolet, 1988 đã đưa ra được các phương pháp xác định chủng, phương pháp này có thể xác định chủng vi khuẩn ở các tổ chức và cả những chủng phân lập bằng các phản ứng với các hạt latex, bằng cách sử dụng kháng nguyên vỏ polysaccharide làm mẫn cảm các hạt latex Các serotype của các chủng phân lập được sẽ nhanh chóng cho khẳng định chẩn đoán vi khuẩn học và điều này là cần thiết khi dự định tiêm chủng vaccine Điều đó chứng minh sự phân bố tại chỗ của các serotype, cho phép đánh giá tình trạng dịch tễ học và theo dõi sự tiến hành các phản ứng huyết thanh học đặc hiệu

1.1.2 Bệnh viêm phổi do vi khuẩn Actinobacillus pleuropneumoniae gây ra

ở lợn:

Vi khuẩn A pleuropneumoniae là một tác nhân chính gây bệnh viêm

phổi - màng phổi ở lợn

Viêm phổi màng phổi là một bệnh nhiễm trùng quan trọng ở đường hô hấp của lợn và xảy ra ở hầu hết các nước có nền công nghiệp chăn nuôi lợn Bệnh này quan trọng ở chỗ nó có thể gây viêm phổi mà kết quả là lợn bị chết hoặc có thể trở thành bệnh mãn tính hoặc các thể nhẹ trên nhiều lứa lợn dẫn đến thiệt hại do lợn chết hay giảm năng suất, tăng giá thành do việc dùng thuốc hoặc vacxin

Bệnh viêm phổi truyền nhiễm của lợn có phân bố rộng rãi Bệnh có mặt

và lan truyền ở hầu hết các nước châu Âu và một phần ở Mỹ, Canada, Mexico, Nam Mỹ, Nhật Bản, Hàn Quốc và Úc Mặc dù chỉ một vài serotype

là thịnh hành trên những nước nhất định, một số serotype (serovar) được coi

là ít độc (ví dụ: serovar 3) có độc lực rất thấp và về dịch tễ chúng không quan trọng ở một số nước nhất định nhưng lại có thể gây nên dịch ở một số nước khác (Desrosiers và cộng sự, 1984; Brandreth và Smith, 1985)

A pleuropneumoniae là một vật ký sinh ở đường hô hấp có tính đặc

hiệu lớn với lợn Trong nhiễm trùng tối cấp tính và cấp tính vi khuẩn không chỉ thấy ở các tổn thương ở phổi và ở máu mà còn ở chất tiết đường mũi Tất

cả lợn ở các lứa tuổi đều bị cảm nhiễm, nhưng nhờ có kháng thể trung hoà độc tố nên có sự thay đổi thể bệnh ở những đàn có tính chất bệnh dịch Trong trường hợp cấp tính của bệnh thì tỷ lệ chết thường cao Tỷ lệ chết cũng phụ thuộc vào độc lực của vi khuẩn và sự lưu hành bệnh trong môi trường nhưng thường là cao

Thể bệnh và tỷ lệ tử vong sẽ bị trầm trọng hơn khi có mặt của các bệnh khác như bệnh Aujeszky và hội chứng hô hấp sinh dục ở lợn (PRRS), có

nhiều nghiên cứu cho thấy rằng việc nhiễm trùng đồng thời A pleuropneumoniae và virut PRRS luôn làm bệnh trầm trọng hơn so với khi

nhiễm trùng riêng rẽ (Pol và cộng sự, 1997)

Vi khuẩn này sống sót ở môi trường tự nhiên trong một thời gian ngắn

Tuy nhiên, khi được bảo vệ bởi chất nhầy hoặc các chất hữu cơ khác thì nó có thể sống trong ít ngày và nó có thể sống được 30 ngày ở nước sạch với nhiệt

độ 40C

Vi khuẩn A pleuropneumoniae ở phổi nhanh chóng bị thực bào hoặc

dính lên đại thực bào của phế nang và sản sinh ra độc tố Apx I, Apx II, và Apx III Hầu hết các độc tố có khả năng gây độc cho đại thực bào của phế nang, các tế bào nội mô, tế bào biểu mô phế nang, tế bào nội mô của mao mạch ở thành phế nang, nhất là Apx III rất có hoạt tính chống lại đại thực bào của phế nang Các vi khuẩn có vỏ có khả năng chống lại được sự thực bào và dường như cũng kháng lại sự hoạt động của bổ thể Sự hư hại do các độc tố và cytokines đi kèm với hiện tượng nhiễm trùng là nguyên nhân chủ yếu làm xuất hiện và tăng tổn thương

Thế tối cấp tính và cấp tính của bệnh có gây nên hiệu ứng toàn thân tương tự như nhiễm khuẩn máu ở trên người Có sự khác nhau về độc lực giữa các serotype và thậm chí ở cùng một serotype Sự khác nhau đó là do sự khác nhau ở cấu trúc vỏ, khác nhau về thành phần LPS hoặc chủng loại dung huyết Trên thực tế những serotype 1,5, 9, 10 và 11 có độc lực mạnh hơn các serotype khác

Triệu chứng lâm sàng

Triệu chứng lâm sàng có nhiều mức phụ thuộc vào tuổi của gia súc, tình trạng miễn dịch, điều kiện môi trường và mức độ cảm nhiễm với tác nhân gây bệnh Tiến triển lâm sàng có thể là quá cấp tính, cấp tính hoặc mãn tính

Thể quá cấp tính: một hoặc nhiều lợn cai sữa cùng một chuồng hoặc

khác chuồng trở nên ốm nặng với sốt tới 41,50C, đờ đẫn và không muốn ăn

Có một thời gian ngắn nôn mửa và đi ngoài, con vật bị bệnh nằm trên sàn, không có dấu hiệu thở rõ ràng, mạch đập tăng lên rất sớm và trụy tim mạch

Da trên mũi, tai, chân và sau cùng là toàn bộ cơ thể trở nên tím tái ở giai đoạn cuối

Thời gian ngắn trước khi chết thường có những biểu hiện khó thở dữ dội với thở bằng mồm, gia súc vẫn ở tư thế ngồi, nhiệt độ ở hậu môn giảm nhanh Ngay trước khi chết thường có chảy nhiều dịch bọt nhuốm máu ở mồm và lỗ mũi Tử vong xảy ra 24 → 36 giờ sau khi xuất hiện các dấu hiệu lâm sàng Một số trường hợp con vật chết đột ngột không có biểu hiện lâm sàng và người ta tìm thấy chết trong chuồng Nhiều nghiên cứu cho thấy thời gian diễn biến của bệnh ít nhất là ba giờ từ khi bị nhiễm trùng cho đến chết Ở lợn sơ sinh bệnh xảy ra như nhiễm trùng huyết với hậu quả tử vong

Thể cấp tính: Nhiều lợn cùng bị ở 1 chuồng hoặc ở những chuồng khác

nhau Nhiệt độ cơ thể từ 40,5 → 410C Da đỏ, con vật buồn bã, mệt, không muốn dậy, không muốn uống, bỏ ăn Các dấu hiệu hô hấp nặng với khó thở,

ho, và đôi khi thở bằng mồm trở lên rõ Thường xuất hiện trụy tim mạch, với xung huyết các đầu chi Toàn trạng suy sụp trong vòng 24 giờ đầu, bệnh diễn biến khác nhau ở từng con vật, phụ thuộc mức độ tổn thương phổi và thời điểm bắt đầu điều trị Ở cùng một nhóm gia súc có thể xuất hiện mọi giai đoạn bệnh, từ trung gian tới tử vong, bán cấp hoặc mãn tính

Thể bán cấp và mãn tính: xuất hiện sau khi các dấu hiệu cấp tính biến

đi Không sốt hoặc sốt ít, xuất hiện ho tự phát hoặc thỉnh thoảng, với các cường độ khác nhau Có thể súc vật kém ăn, giảm tăng trọng, có thể xác định các gia súc bị ốm bằng dấu hiệu các con vật này không gắng sức được Khi di chuyển, chúng thường đi phía sau và khi bị chặn lại chúng thường ít chống

cự, ở các đàn gia súc bị nhiễm mãn tính thường có nhiều súc vật bị nhiễm mãn tính không biểu hiện rõ trên lâm sàng Các dấu hiệu lâm sàng có thể làm

rõ lên bởi các nhiễm trùng đường hô hấp khác (mycoplasma, vi khuẩn, virus)

có thể thấy các đợt bùng phát nguyên phát có thể thấy xảy thai Các biến chứng như viêm khớp, viêm nội tâm mạc và áp xe ở các vị trí khác nhau có thể xảy ra ở các động vật và được cho là chủ yếu là do các chủng

số tổn thương đại thể ở các trường hợp tối cấp tính các vùng viêm phổi trở nên sẫm màu và chắc với viêm màng phổi có ít tơ huyết hoặc không tơ huyết

và mặt cắt thường mủn Viêm màng phổi tơ huyết thường rất rõ ở các gia súc chết trong giai đoạn cấp tính của bệnh ít nhất 24 giờ sau khi nhiễm trùng và khoang màng phổi chứa dịch nhuốm máu Khi tổn thương tiến triển lớn hơn, viêm màng phổi tơ huyết trên vùng phổi tổn thương trở nên xơ và có thể dính rất chặt màng phổi vào thành ngực tới mức làm cho phổi dính vào thành ngực ngay cả khi mổ tử thi lấy phổi ra phân tích Tổn thương sớm ở phổi là phổi trở nên đỏ tím hoặc đen đồng đều và sau đó trở nên sáng hơn và sau đó vẫn cứng

ở những khu vực bị nặng nhất Trong các giai đoạn đầu của bệnh, những biến đổi về tổ chức bệnh lý được đặc trưng bởi sự hoại tử, xuất huyết, thâm nhiễm các tế bào bạch cầu trung tính, sự hoạt hoá đại thực bào và tiểu cầu, nghẽn mạch máu, phù rộng và tiết dịch gỉ viêm lẫn fibrin Sau phản ứng cấp tính đặc trưng là sự thâm nhiễm đại thực bào, xơ hoá rõ quanh những vùng hoại tử và viêm màng phổi fibrin

Chẩn đoán

Trên lâm sàng có thể nghi viêm phổi - màng phổi ở các đợt cấp bùng phát Sự xuất hiện dịch gỉ viêm phổi cấp tính với các vùng hoại tử được bao quanh bởi hàng rào với các mảnh tế bào bạch cầu trung tính cho thêm bằng chứng là viêm phổi - màng phổi Ở nhiễm trùng mãn tính mổ khám thấy các ổ

apxe cứng, ranh giới rõ kết hợp với viêm màng phổi cùng viêm màng ngoài tim rất có giá trị gợi ý tới bệnh Ở các động vật mới chết dễ dàng tìm thấy căn nguyên bệnh tại phế quản hoặc dịch tiết ở mũi và tổn thương phổi

Phân lập đầu tiên A pleuropneumoniae từ các tổ chức và chất tiết có

thể được tiến hành trên thạch máu cừu 5% cùng với đường cấy ngang của

Staphylococcus aureus Sau khi nuôi cấy hiếu khí qua đêm, khuẩn lạc nhỏ

xuất hiện ở xung quanh đường cấy thẳng (đòi hỏi NAD) được bao bọc xung quanh bởi vùng sáng dung huyết hoàn toàn Điều này cho chẩn đoán vi khuẩn học nhanh Chúng có thể mọc trên thạch chocolate nhưng không rõ rệt trên môi trường này Trong trường hợp nhiễm trùng ghép mà thường là với

Pasteurella multocida hoặc cùng với các vi khuẩn khác thì cần sử dụng môi

trường chọn lựa Có thể dùng kỹ thuật PCR hoặc test huyết thanh với kháng thể hấp thụ hoặc kháng thể đơn dòng để xác định vi khuẩn phân lập được có

phải là A pleuropneumoniae không Có thể xác định tới các serotype bằng

cách sử dụng kỹ thuật PCR cho các gen hoạt hoá câú trúc của độc tố hoặc có thể sử dụng kháng thể đơn dòng với từng serotype Việc định serotype có thể xác định được khi cho ngưng kết từ nuôi cấy trên môi trường giàu dinh dưỡng cùng với huyết thanh hoặc bằng phản ứng đồng ngưng kết Trong một số trường hợp dùng phương pháp khuếch tán trên gel thạch và bằng phản ứng ngưng kết hồng cầu gián tiếp Các serotype của các chủng phân lập được sẽ nhanh chóng cho khẳng định chẩn đoán vi khuẩn học và điều này là cần thiết khi dự định tiêm chủng có trong Vacxin cho lợn Điều đó chứng minh sự phân

bố tại chỗ của các serotype, cho phép đánh giá tình trạng dịch tễ học và theo dõi sự tiến hành các phản ứng huyết thanh học đặc hiệu

Điều trị

A.pleuropneumoniae trên ống nghiệm rất nhạy cảm với Penicilline,

Ampiciline, Cephalosporin, Chloramphenicol, Tetracycline, Colistin, Sulfonamide, Cotrimoxazole (Trimethoprim + Sulfamethoxazole) (Nicolet và

Điều trị kháng sinh chỉ có hiệu quả ở giai đoạn mới phát của bệnh, khi

đó nó có thể làm giảm tỷ lệ tử vong, nếu điều trị muộn thì có thể có nhồi máu hoặc tổn thương mãn tính làm cho gia súc bị rối loạn hô hấp ngay cả khi chúng qua khỏi được Phải dùng kháng sinh liều cao (tiêm bắp thịt hoặc dưới

da vì gia súc ốm thường không ăn uống được) Sự thành công của việc điều trị phụ thuộc chủ yếu vào việc phát hiện sớm các dấu hiệu lâm sàng của bệnh và can thiệp điều trị sớm

Phòng bệnh

Đã có nhiều loại vacxin được sản xuất cho bệnh này gồm 2 nhóm chính: Các vi khuẩn đã chết (vacxin vô hoạt) và các vacxin với một số thành phần cấu tạo của vi khuẩn Vacxin vô hoạt toàn khuẩn đặc hiệu theo serotype

có thể có miễn dịch với các serotype khác có phản ứng chéo

Các vacxin thử nghiệm gồm các vi khuẩn đã bị làm yếu, giảm độc lực, hoặc các vi khuẩn đã chết hoặc các thành phần cấu tạo của chúng dùng theo đường khí dung hoặc đường uống đã cho thấy có một số tác dụng bảo vệ nhất định Thường dùng vacxin khi kháng thể của mẹ giảm đi và đem lại sự bảo vệ cao trong các thí nghiệm, làm giảm tỷ lệ tử vong, giảm số thuốc cần dùng để

1.2 Vi khuẩn Pasteurella multocida và bệnh viêm phổi ở lợn:

1.2.1 Vi khuẩn Pasteurella multocida

Vi khuẩn P.multocida là loại cầu trực khuẩn nhỏ, ngắn, có hình trứng,

bầu dục hay hình cầu, bắt màu gram âm, không lông, không di động, không hình thành nha bào Kích thước vi khuẩn 0,25 - 0,4µm x 0,4 - 1,5 µm, vi khuẩn thường đứng riêng lẻ, đôi khi ghép đôi hoặc tạo thành chuỗi ngắn Vi khuẩn phân lập từ bò có kích thước đồng nhất 0,5- 1,2µm Vi khuẩn phân lập

từ lợn thì có dạng tròn hơn 0,8- 1,0 µm P.multocida là vi sinh vật yếm khí tuỳ tiện, mọc tốt trên hầu hết các môi trường thông thường giàu dinh dưỡng Phản ứng Oxydaza, Indol dương tính, không di động, Ureaza âm tính, không mọc trên môi trường MacConkey, không dung huyết và không đòi hỏi nhân tố

X và V Những phản ứng này có ích trong sự phân biệt của P.multocida từ

nhóm vi khuẩn cùng nhóm mà những nhóm này có liên quan trong những

bệnh về phổi lợn có tên như: P haemolytica, Actinobacillus suis và A pleuropneumoniae

Vi khuẩn P.multocida phát triển tốt ở nhiệt độ 370C với độ pH là 7,2- 7,6 Vi khuẩn mọc kém ở nhiệt độ phòng và pH<6 và > 8,5 Vi khuẩn mọc tốt hơn nếu cho thêm 5- 10% huyết thanh động vật

Trong quá trình nuôi cấy vi khuẩn ở môi trường lỏng, người ta có thể dùng phương pháp sục khí để tăng cường sự phát triển của vi khuẩn

P.multocida Khi so sánh phương pháp nuôi cấy sục khí và nuôi cấy tĩnh thấy

Manninger (1919) đã xác định vi khuẩn P.multocida là có giáp mô

Những vi khuẩn có giáp mô thì thấy có độc lực, những vi khuẩn không có giáp mô thì không có độc lực

Carter (1955) đã phân P.multocida thành 5 serotyp kháng nguyên giáp

mô khác nhau là serotyp A, B, D, E và F Giáp mô của chủng typ A có cấu tạo bởi axit Hyaluronic nhưng có một sự liên quan mật thiết với các thành phần khác như Polysaccharit, Protein và Lipit (Carter, 1967)

Rosenbusch và Merchant, 1939 nghiên cứu 113 chủng P multocida đã chia vi khuẩn thành 3 nhóm:

- Nhóm 1: lên men đường Arabinose, Dulcitol, không lên men Xylose Những chủng này phân lập từ gia cầm

- Nhóm 2: lên men Xylose, không lên men Arabinose, Dulcitol Những chủng này phân lập từ động vật có vú

- Nhóm 3: gồm các chủng lên men phân giải cả Arabinose, Dulcitol, Xylose

Theo Carter, 1984 P.multocida không mọc trên môi trường MacConkey,

phản ứng Catalase, Oxydase dương tính, Urease âm tính, lên men đường Glucose, Succrose, Mannitol, không lên men Lactose

P.multocida có kháng nguyên rất phức tạp và cấu trúc từng loại kháng nguyên cũng luôn thay đổi Kháng nguyên của P.multocida có 2 loại chính là kháng nguyên vỏ (K) và kháng nguyên thân (O) P multocida có 5 serotype

kháng nguyên vỏ A, B, D, E và F Trong đó A, B và D đã được xác định gây

bệnh cho lợn, tuy nhiên serotype B cũng không phải là nguyên nhân chính ở những ổ dịch cho lợn ngoài tự nhiên ở Bắc Mỹ và Châu Âu Serotype phổ biến nhất được phân lập trong bệnh viêm phổi là type A

P.multocida cũng có 16 serotype kháng nguyên thân Những chủng

thuộc serotype 3 và 5 cũng đã được phát hiện là rất phổ biến ở lợn Với những chủng A:3, A:5 D:5 và D:3

Việc xác định serotype của P multocida gồm 2 hệ thống là: hệ thống dựa vào kháng nguyên giáp mô và hệ thống dựa vào kháng nguyên thân

* Định type kháng nguyên giáp mô: Dựa vào phản ứng bảo hộ trên chuột, Roberts, 1947 đã đề xuất 4 type huyết thanh P.multocida gồm type I,

II, III, IV Husson, 1954 đề xuất thêm type V Vậy hệ thống định type của Roberts gồm 5 type: I, II, III, IV, V

Sử dụng phản ứng kết tủa (Carter, 1952) và phản ứng ngưng kết gián

tiếp hồng cầu (Carter, 1955) để định type P multocida và đã chia nó thành 4

type khác nhau: A, B, C, D; kháng huyết thanh điều chế từ thỏ

Năm 1961 tác giả đề xuất thêm type E và năm 1963 đề nghị bỏ type C Năm 1987 Rimler và Rhoade đề xuất thêm type F Do đó hệ thống định type kháng nguyên giáp mô của Carter gồm 5 type: A, B, D, E, F Trong đó type

A, B, D thường gặp ở lợn, type D hiếm hơn

* Định type kháng nguyên thân: Dùng phương pháp kết tủa trong ống

nghiệm xác định type kháng nguyên thân Kháng nguyên được xử lý bằng acid HCl, Namioka và Murata, 1961 đề xuất 11 serotype ký hiệu từ 1- 11

Heddlesston và cs, 1972 bằng kỹ thuật kết tủa khuếch tán trên thạch

AGPT (Agar Gel Precipitin Test) đã chia kháng nguyên thân P.multocida

thành 16 serotype, ký hiệu từ 1- 16 (ưu điểm của phương pháp này là có thể xác định được các chủng đã mất giáp mô mà phương pháp ngưng kết không thực hiện được và còn tránh được hiện tượng tự ngưng kết và ngưng kết chéo trong các phản ứng ngưng kết) trong đó type 3 và type 5 thường gặp ở lợn

Carter và Chengappa, 1981 sử dụng phương pháp điện di miễn dịch đối

chiếu (CIE) để xác định typ B, E của P multocida

Kỹ thuật ELISA cũng đang được sử dụng trong việc xác định serotype kháng nguyên của P multocida (Dawkins và cs, 1990)

Kháng nguyên vỏ là nhân tố rất quan trọng trong yếu tố gây bệnh, đặc biệt là serotype A điều này giúp vi khuẩn tránh được sự thực bào trong quá

trình đại thực bào ở phổi Theo Pijoan và Fuentes (1987), một số chủng P multocida có thể gây ra chứng viêm màng phổi và các ổ áp xe trong thí

nghiệm gây nhiễm ở lợn

Các yếu tố độc lực này khác nhau ở các chủng, ở những chủng có độc lực yếu trong phổi không xác định rõ tính chất Tuy nhiên Iwanmatso và Sawada (1988) đã tìm thấy những chủng thuộc serotype D hay những chủng gây độc (của cả 2 serotype) ở những ổ áp xe nhưng không có trong bệnh viêm màng phổi

- Sự cư trú ở màng nhày:

Sự cư trú của vi khuẩn P multocida là vấn đề quan trọng để hiểu được

sự phát sinh bệnh của vi khuẩn này Jacques (1987) đã tìm được cả 2 serotype

A và D cư trú rất ít khi phân lập ở tế bào biểu mô thuộc ống khí quản, nhưng chủng thuộc serotype A thì cư trú nhiều hơn Sau đó ông chỉ ra rằng chủng thuộc serotype A hầu hết đều bám ở lớp lông mao của tế bào biểu mô

Pijoan và Trigo (1989) cũng đã phát hiện thấy sự bám rải rác của các chủng thuộc serotype A và D nhưng nhận thấy rằng những chủng serotype D

thường bám ở những tế bào không có lông mao và sau đó đã thấy ở một số chủng gây độc đặc biệt phát hiện có lông trên bề mặt của chúng, tuy nhiên vai trò của những cấu trúc này trong việc bám dính vẫn là vấn đề phải xem xét từ trước đến nay Ngược lại với sự gắn kết yếu với bề mặt tế bào biểu mô, vi

khuẩn P multocida đã thực sự gắn kết chặt chẽ ở niêm dịch nhầy ở mũi,

nhiều câu hỏi được đặt ra như nơi gắn kết thông thường ở đâu và điểm nào là nơi cư trú

1.2.2 Bệnh viêm phổi lợn do vi khuẩn Pasteurella multocida gây ra

Bệnh viêm phổi do Pasteurella gây ra là kết quả của sự lây nhiễm của

vi khuẩn P multocida cho phổi Bệnh thường thấy ở giai đoạn cuối của bệnh

viêm phổi cục bộ hay ở những bệnh ghép ở đường hô hấp ở lợn Hội chứng này là một trong những bệnh gây thiệt hại cho lợn đặc biệt khi chúng sản sinh tăng lên Nhiều nghiên cứu đã cho biết: ở đàn lợn bệnh, bệnh tích viêm phổi khi mổ khám dao động từ 30% đến 80% Những số liệu gần đây tại Mỹ cho thấy trong 6634 mẫu lấy từ lợn để kiểm tra phổ biến là 74% lợn bị viêm phổi

và 13 % với chứng viêm màng phổi

Bệnh viêm phổi do Pasteurella xuất hiện rộng khắp trên thế giới nhưng

bệnh hay xảy ra và gây thiệt hại ở các nước nhiệt đới và á nhiệt đới như Ấn

Độ, Pakistan, Iran, Irac, Thái Lan, Philippin, Indonesia, Lào, Campuchia, Hà Quốc và Việt Nam và ở tất cả các điều kiện khí hậu và điều kiện chăn nuôi

Vì vi khuẩn P multocida thường cư trú ở đường hô hấp trên của lợn do vậy

thực sự rất khó tiêu diệt và vi khuẩn có thể tìm thấy trong các đàn lợn khoẻ

mạnh Vì vậy vi khuẩn P multocida gây bệnh thường kết hợp với những tác nhân khác như vi khuẩn Mycoplasma hyopneumoniae và làm cho quá trình

viêm phổi càng nặng thêm

Triệu chứng

Triệu chứng lâm sàng của bệnh rất khác nhau tuỳ thuộc vào từng chủng

vi khuẩn P multocida , thường xuất hiện 3 thể:

+ Thể cấp tính: Ở thể này thông thường là do hầu hết các chủng P

multocida thuộc serotype B, những chủng này rất ít, hay không gặp ở Châu âu

và Bắc Mỹ Những con vật mắc bệnh thường thấy chứng khó thở, cố ra sức để thở, gõ vào bụng có âm đục “bịch, bịch”, hóp bụng vào để thở, sốt cao nhiệt

độ lên tới 41- 420C, tỷ lệ chết cao (5-40%) Trong trường hợp những con vật chết và hấp hối có thể thấy những vết đổi màu tím ở vùng bụng (có thể là do

sốc nội độc tố)

+ Thể á cấp tính: Ở thể này hiện tượng ho và thở thể bụng thường thấy

ở những lợn lớn Ho ở những lợn ở lứa tuổi này thường được coi là tiêu chuẩn xác định là bệnh nghiêm trọng Triệu chứng lâm sàng của bệnh ở thể này

giống như viêm màng phổi do A pleuropneumoniae gây ra, nhưng những đặc điểm phân biệt chính là bệnh viêm phổi do Pasteurella thì hiếm khi gây ra chết đột ngột, hơn nữa lợn mắc bệnh viêm phổi do Pasteurella gây ra có thể

tồn tại một thời gian dài

Gần đây bùng nổ những vụ dịch do PRDC (Porcine respiratory disease complex) ở lợn trưởng thành (khoảng 16- 18 tuần tuổi) ở những trại đang sử dụng phương pháp tách đàn và cai sữa sớm (SEW) đã thấy xuất hiện những lợn có triệu chứng ho và thở thể bụng ở lợn nhưng không phải do bệnh viêm phổi

+ Thể mãn tính: Đây là thể đặc trưng thường thấy của bệnh, bởi vì

thỉnh thoảng xuất hiện ho, sốt nhẹ hoặc không Những con vật bị ảnh hưởng thường ở giai đoạn lợn lớn (10- 16 tuần tuổi) Những dấu hiệu không thể phân

biệt được khi vi khuẩn lây nhiễm sau khi bội nhiễm M hyopneumoniae, P

multocida thì tiếp tục và kịch liệt hơn tiền nhiễm Mycoplasmosis

sự phân ranh giới rõ ràng giữa vùng tổ chức phổi bị tổn thương và vùng tổ chức phổi bình thường Phần bị ảnh hưởng của phổi sẽ có sự biến đổi mầu sắc

từ mầu đỏ sang mầu xám xanh phụ thuộc vào giai đoạn của bệnh

Các trường hợp bệnh nghiêm trọng có thể xuất hiện viêm phế mạc và apse ở các mức độ khác nhau Trong các trường hợp này thường thấy phế mạc dính chặt vào thành xoang ngực và phế mạc có vùng mờ đục, khô Đấy chính

là bệnh tích chủ yếu để phân biệt được bệnh viêm phổi do Pasteurella với viêm phổi do Actinobacillus, trong đó thường thấy mủ chảy ra có mầu vàng

và dính cùng với rất nhiều sợi fibrin (Pijoan, 1989)

Nghiên cứu mô, ở thuỳ phụ thấy có dịch rỉ viêm của phế quản Sự nghiêm trọng của viêm phế quản là sự tăng sản của tế bào nội mô và sự có mặt rất nhiều của tế bào bạch cầu trung tính trong mủ nhầy (chất tiết nhầy có mủ) ở phế quản và trong phế nang Bệnh tích này là không đặc trưng cho sự nhiễm khuẩn P.multocida mà nó phổ biến cho mọi trường hợp viêm phổi do nhiễm khuẩn

Dấu hiệu bệnh này cũng thể hiện mối liên quan giữa việc gây bệnh

viêm phế quản do Pasteurella với bệnh viêm cầu thận, cũng do Pasteurella

(Buttenschon, 1991) Tác giả này cũng kết luận rằng hai bệnh này có liên quan với nhau bởi quá trình vi khuẩn phát tán từ những bệnh tích ở phổi

Chẩn đoán

Chủ yếu dựa trên xét nghiệm vi trùng học Vi khuẩn P multocida là vi

khuẩn dễ nuôi cấy từ những mẫu đưa đến phòng thí nghiệm, những mẫu được lấy tốt nhất cho sự phân lập vi khuẩn bao gồm: dịch khí quản và những mô tế bào phổi đã bị nhiễm bệnh được lấy từ khoảng giữa mô tế bào lây nhiễm và tế bào bình thường Những mẫu lấy qua bông từ dịch mũi cũng được xem là

mẫu tốt cho việc phân lập P multocida, những mẫu dịch thấm này nên được

để trong môi trường vận chuyển phù hợp như Stuart’s Những mẫu phổi phải

được đưa đến càng nhanh càng tốt và tránh bị tạp, tất cả các mẫu phải được bảo quản lạnh (4- 8oC) cho đến khi cấy

Việc nuôi cấy vi khuẩn P multocida có thể đạt kết quả trong phòng thí

nghiệm với những phương tiện tối thiểu nhất Những mẫu đạt chất lượng tốt thì sẽ tìm thấy vi khuẩn khi cấy trực tiếp trên đĩa thạch máu hay thạch Glucose Nhiều tác giả đã phân lập thành công từ những hạch hầu và xương xoắn của những lợn trưởng thành, sử dụng bằng thạch máu có bổ xung 3,75 U/ml Bacitracin; 5µg/ml Clindamycin; 0,75µg/ml Gentamycin và 2,25µg/ml Amphotericin B Vi khuẩn phân lập có thể tăng sinh do việc tiêm truyền canh

trùng vào xoang bụng của chuột bạch và sau đó cấy lại vi khuẩn P multocida

sau 24 giờ từ gan và dịch ổ bụng

Điều trị

Kháng sinh rất đa dạng và sự kết hợp giữa các loại kháng sinh đã được

sử dụng thường xuyên như: Oxytetracyline 11mg/kg; Oxytetracyline chậm: 20mg/kg; Procaine penicillin 66.000 U/kg; Benzathine penicillin 32.000 U/kg

và rất nhiều loại kháng sinh khác Tuy nhiên việc điều trị bằng kháng sinh ngày càng khó khăn hoặc không thành công, điều này là do tính kháng thuốc

rộng rãi ở vi khuẩn P multocida

Thực vậy Cote và cộng sự (1991) ở 29 nông trường được điều tra phân

lập P.multocida, đã tìm thấy một số các Plasmid trung gian kháng thuốc với

Streptomycin và Sulfonamid

Người ta đã thông báo rằng Cephalosporins và Fluorinated quinolone thế hệ thứ 3 là thuốc có hiệu quả nhất Một số thuốc kháng sinh đã được dùng

có hiệu quả cho điều trị P.multocida: Lincomycin- spectinomycin, một số

Cephalosporin và nhiều Quinolones: Enrofloxacin và Danofloxacin Trong đó Ceftiofur đã được một số tác giả chứng minh là kháng sinh tốt để chống lại vi

khuẩn P multocida

Phòng bệnh

Chỳng ta đó cú một số vacxin vụ hoạt dựng cho việc phũng bệnh viờm

phổi do Pasteurella Một vài thụng bỏo gần đõy với vacxin chống lại vi khuẩn

P multocida, nhưng khụng cho kết quả chống lại tớnh tương đồng

Việc ỏp dụng nuụi cấy sục khớ để tăng số lượng vi khuẩn trong 1ml canh trựng rỳt ngắn thời gian nuụi cấy trong sản xuất vacxin cũng đang được tiến hành tại Viện Thỳ y và cỏc cơ sở sản xuất vacxin khỏc tại Việt nam

1.3 Vi khuẩn Streptococcus suis và bệnh do vi khuẩn gây ra ở lợn, ở

người:

1.3.1 Vi khuẩn Streptococcus suis (S suis):

Vi khuẩn S suis có hình cầu hoặc hình trứng, đường kính có khi đến 1

àm, chúng thường đứng riêng le, xếp thành đôi hoặc thành từng chuỗi ngắn như chuỗi hạt, có độ dài ngắn không đều nhau Chiều dài của chuỗi tuỳ thuộc vào điều kiện môi trường Vi khuẩn bắt màu Gram dương, yếm khí tùy tiện và không di động Vi khuẩn không sinh nha bào, nhưng có khả năng hình thành giáp mô

Các vi khuẩn được nuôi cấy sau 18 giờ chú yếu là có dạng hình cầu, kích thước 0.5 - 1 àm, đứng thành dạng chuỗi 5-10 tế bào Trong canh trùng già, sau 30 giờ nuôi cấy, vi khuẩn có thể thay đổi tính chất bắt màu, chuỗi cũng thấy dài hơn

Vi khuẩn S suis phát triển tốt trong điều kiện yếm khí tùy tiện

- Trên môi trường thạch máu: Sau 24 nuôi cấy, hình thành khuẩn lạc nhỏ, hơi vồng và sáng trắng Có thể quan sát thấy các kiểu dung huyết gồm:

+ Dung huyết kiểuα: vùng dung huyết xung quanh khuẩn lạc thường có màu xanh (dung huyết từng phần hay dung huyết không hoàn toàn)

+ Dung huyết kiểu β: Bao quanh khuẩn lạc là một vùng tan máu hoàn toàn trong suốt, có bờ rõ ràng do Hemoglobin được phân huỷ hoàn toàn

+ Dung huyết kiểu γ (hay còn gọi là không dung huyết): không làm biến đổi thạch máu

Vi khuẩn không chứa men Catalase và Oxidase, vì vậy phản ứng Catalase và Oxidase âm tính

Vi khuẩn dễ bị diệt bởi nhiều chất sát trùng như: phenol, iod, hypochloride, acid phenic 3-5% diệt vi khuẩn trong vòng 3-15 phút, formol 1% vi khuẩn bị diệt trong vòng 60 phút, cồn nguyên chất không có tác dụng

đối với vi khuẩn, cồn 70oC diệt vi khuẩn trong vòng 30 phút, tím gentian 1/300000 cũng có tác dụng diệt vi khuẩn

Các chất sát trùng thông thường dùng để vệ sinh chuồng trại có thể giết

chết S suis typ 2 trong vòng chưa đến 1 phút

Vi khuẩn S suis typ 2 có thể tồn tại trong nước 4oC trong 1- 2 tuần Trong nước có nhiễm phân, chúng có khả năng tồn tại ở 0oC trong 104 ngày,

9oC trong 10 ngày và 22-25oC trong 8 ngày Bởi vậy, trong thời gian mùa hè hoặc ở nhiệt độ chuồng nuôi đạt 22-25oC, vi khuẩn này có thể sống tới 8 ngày trong phân, nhưng ít hơn 24 giờ trong bụi (Clifton-Hadley và cộng sự, 1984)

S suis typ 2 còn được tìm thấy trên xác những con lợn đã thối rữa trong các

trang trại với thời gian tồn tại là trong 6 tuần ở 4oC và 12 ngày ở 22- 25oC

Đây chính là nguồn lây nhiễm bệnh quan trọng 1 cách gián tiếp thông qua các

động vật truyền bệnh trung gian như chim, mèo, chuột hoặc chó Hadley và cộng sự, 1986c) Vi khuẩn có thể tồn tại tới 2 giờ ở 50oC, nhưng ở

(Clifton-60oC thì bị diệt sau 10 phút

Phân loại vi khuẩn S suis theo serotyp:

Trong thời gian từ 1983 đến 1995, có 32 loại serotyp mới của S suis

được phát hiện và phân loại dựa trên cấu trúc kháng nguyên polysaccharide của giáp mô, nâng tổng số serotyp của vi khuẩn này lên thành 35 loại (Ký hiệu

từ 1 đến 34, và 1/2) (Petch và cộng sự, 1983, Higgins và cộng sự, 1995) Trong đó, đáng chú ý nhất là các chủng thuộc serotyp 2 phân lập được thường xuyên nhất ở lợn và cũng là nguyên nhân gây ra các thể bệnh nguy hiểm khác nhau ở lợn và người (Higgins và cộng sự , 2002)

Các chủng thuộc các serotyp khác nhau có đặc tính gây bệnh khác nhau

và gây ra các thể bệnh khác nhau Thậm chí các chủng vi khuẩn thuộc cùng 1 serotyp cũng có thể gây ra các thể bệnh khác nhau do vùng địa lý mà chúng phân bố (Higgins và cộng sự , 2002) Một số serotyp không có độc lực và có thể được phân lập từ các lợn khỏe mạnh, không có triệu chứng lâm sàng như các serotyp 17, 18, 19 và 21 (Higgins và cộng sự , 2002) Trong khi đó, có 1

số chủng có thể phân lập được từ lợn và cả các loài động vật khác nữa như serotyp 20 và 31 từ bê, serotyp 33 từ cừu non (Gottschalk và cộng sự, 1989, Higgins và cộng sự, 1995)

1.3.2 Bệnh do vi khuẩn Streptococcus suis (S suis) gây ra ở lợn:

Streptococcus là một loại liên cầu khuẩn, có mặt ở khắp nơi trong tự nhiên, trên cơ thể động vật và cả ở người Vi khuẩn Streptococus đã trực tiếp

hoặc gián tiếp gây bệnh cho gia súc nói chung và ở lợn nói riêng, kể cả người

Đối với lợn, vi khuẩn Streptococcus suis (S suis) đóng vai trò quan

trọng trong quá trình gây bệnh đối với lợn, chúng thường gây bệnh ở thể bại huyết, các thể bệnh ở đường sinh sản, đường hô hấp, viêm não, viêm khớp Trong những trang trại chăn nuôi tập trung với mật độ cao, các bệnh do vi

khuẩn S suis gây ra rất phổ biến Vi khuẩn S suis thường xuyên phân lập

được từ vòm họng và đường hô hấp trên của lợn khoẻ Chúng thường tồn tại và khu trú ở họng, hạch amidan, xoang mũi của lợn Những con lợn mang trùng này, nếu được nhốt chung với những con lợn khoẻ mạnh khác sẽ làm lây lan mầm bệnh trong đàn, lợn mẹ truyền cho lợn con thông qua đường hô hấp

* Một vài nột về tỡnh hỡnh bệnh do S suis gõy ra ở lợn

Vi khuẩn S suis là một trong số cỏc tỏc nhõn gõy bệnh quan trọng và

gây ra những thiệt hại đáng kể trong công nghiệp chăn nuôi lợn Các thông

báo đầu tiên về bệnh do S suis gây ra ở lợn đã được chính thức xác nhận lần

đầu tiên ở Hà Lan vào năm 1951 (Jansen và Van Dorssen, 1951) và ở Anh vào năm 1954 (Field và cộng sự, 1954) Kể từ đó, bệnh đã được thông báo là xảy ở hầu khắp các nước trên thế giới - nơi có ngành chăn nuôi lợn phát triển (Higgins và cộng sự, 2002)

Các dạng bệnh do vi khuẩn này gây ra ở lợn rất đa dạng, bao gồm như viêm não, nhiễm trùng máu, viêm khớp, viêm nội tâm mạc, viêm đa thanh mạc, viêm màng bụng, viêm phổi, và thường dẫn đến chết đột ngột (Higgins

và cộng sự, 2002, Lun và cộng sự, 2007) Ngoài ra, vi khuẩn còn có thể phân lập được trong các trường hợp lợn bị viêm teo mũi và sảy thai Bệnh xảy ra ở lợn mọi lứa tuổi, nhưng thường gặp nhất ở giai đoạn 3-16 tuần tuổi do lợn thời kỳ sau cai sữa trở nên đặc biệt mẫn cảm với vi khuẩn này (Lamont và cộng sự, 1980) Tuy nhiên, các triệu chứng của bệnh do vi khuẩn này gây ra là

có sự sai khác nhau giữa các quốc gia (Higgins và cộng sự, 2002)

Vi khuẩn S suis typ 1 thường gây bệnh cho lợn còn đang theo mẹ (1-3

tuần tuổi), có khi tới 6 tuần tuổi và thường ở thể bại huyết hoặc các nhiễm trùng tại chỗ như viêm màng não, viêm não, viêm khớp, viêm nội tâm mạc, đặc biệt là lợn con từ 1-7 ngày tuổi (Cook và cộng sự, 1988) Đôi khi, nhóm

vi khuẩn thuộc typ 2 cũng gây bệnh cho lứa tuổi này, nhưng thường ít gặp hơn Lợn con bị nhiễm bệnh là do lợn mẹ truyền qua đường hô hấp, đường tiêu hoá (do tiếp xúc với phân, các chất thải hoặc các chất tiết khác), đường máu (do tiếp xúc trực tiếp hoặc qua kim tiêm nhiễm trùng) Với một số cá thể, hiện tượng nhiễm khuẩn chỉ biểu hiện ở dạng nhiễm khuẩn qua máu và không bao giờ phát bệnh Tuy nhiên, với một số cá thể khác, vi khuẩn sẽ gây bệnh và biểu hiện bằng hiện tượng nhiễm trùng máu hoặc vi khuẩn di chuyển đến hệ thần kinh trung ương, gây viêm màng não và đây chính là biểu hiện bệnh lý quan trọng nhất

Trong khi đó, các chủng thuộc S suis typ 2 thường gây ra bệnh cho lợn

giai đoạn sau cai sữa và vỗ béo (4-16 tuần tuổi) với rất nhiều thể bệnh như viêm não, viêm nội tâm mạc, ngoại tâm mạc, cơ tim hoại tử, viêm phổi, viêm khớp và bại huyết (Gogolewski và cộng sự, 1990, Sanford và cộng sự, 1987a, 1987b, St John và cộng sự, 1982, Vetcht và cộng sự, 1985) Bệnh thường xảy

ra sau khi lợn khoẻ được nuôi hoặc nhốt chung với lợn bệnh và thường gây chết đột ngột với các biểu hiện như sốt, có triệu chứng thần kinh, viêm khớp

Ngoài ra, vi khuẩn S suis còn là nguyên nhân gây ra các thể bệnh như

viêm phế quản – phổi, viêm màng phổi và viêm phổi ở các lứa tuổi của lợn (Sanford và Tilker, 1982, Erickson và cộng sự, 1984)

Ở Anh, bệnh do S suis typ 2 chủ yếu là gây ra các triệu chứng như bại

huyết và viêm não ở lợn cai sữa (Windsor và Elliott, 1975) Trong khi đó, ở

các nước Bắc Mỹ, các báo cáo đều chỉ ra rằng S suis là vi khuẩn chủ yếu

phân lập được từ những lợn bị viêm phổi (Koehne và cộng sự, 1979, Sanford

và Tilker, 1982, Erickson và cộng sự, 1984) Những năm sau đó, các nghiên cứu từ Anh lại kết luận rằng vi khuẩn này là nguyên nhân chính gây bại huyết, viêm não và viêm đa khớp, ít khi gây viêm phổi (MacLennan và cộng sự,

1996, Heath và cộng sự, 1996), trong khi đó, các bệnh tích ở phổi vẫn là chủ yếu trong các trường hợp lợn bị bệnh tại Bắc Mỹ (Reams và cộng sự, 1994,

1996, Hogg và cộng sự, 1996) Tại Hà Lan, tỷ lệ S suis typ 2 có liên quan đến

viêm phổi chiếm 42% các trường hợp mắc bệnh, tiếp đến là viêm não (18%), viêm nội tâm mạc (18%), và viêm đa thanh mạc (10%) (Vecht và cộng sự, 1985) Một nghiên cứu ở Nhật giữa 1987 và 1991 đã cho biết kết quả là 38%

số chủng S suis phân lập được từ lợn bị viêm não và 33% từ lợn bị viêm

phổi (Kataoka và cộng sự, 1993)

Tháng 7 và 8/2005, một vụ dịch lớn nhất chưa từng gặp trong lịch sử ngành chăn nuôi lợn đã xảy ra tại tỉnh Tứ Xuyên, Trung Quốc, với 6736 lợn

mắc bệnh trong 641 ổ dịch, gõy chết 644 con, và lõy nhiễm bệnh cho 208 người, trong đú cú 39 người đó tử vong (Lun và cộng sự, 2007)

- Triệu trứng và bệnh tích ở lợn:

Triệu chứng của các thể bệnh do vi khuẩn S suis gây ra là rất phức tạp,

khó nhận biết và khó phân biệt khi mà bệnh có biểu hiện bội nhiễm, kế phát bởi một số vi khuẩn khác Các thể bệnh và bệnh tích của bệnh do các serotyp khác nhau gây ra là không giống nhau (Vansconcelos và cộng sự, 1994)

Clifon-Hadley (1983) nghiên cứu ở lợn gây bệnh thực nghiệm và quan sát lợn trong các ổ dịch tự nhiên thấy: lợn từ 1-3 tuần tuổi thường mắc thể viêm não và viêm màng não với các triệu chứng như: ủ rũ, kém ăn, sưng hầu, khó nuốt, đi lại khó khăn, lông khô, dựng đứng, sốt, da mẩn đỏ Lợn hoạt

động khó khăn, đi lại loạng choạng, khi nằm có biểu hiện tư thế như bơi chèo,

tê liệt Biểu hiện viêm não chính là căn cứ chính để chẩn đoán bệnh vì triệu

chứng này ít gặp hơn ở lợn trưởng thành Vi khuẩn S suis serotyp 1 thường

gây ra các thể bệnh cho lợn ở lứa tuổi này

Thể viêm khớp thường xảy ra ở lợn cai sữa và lợn trưởng thành Lợn mắc bệnh có hiện tượng viêm 1 khớp, khớp viêm thường là khớp bẹn, đầu gối hoặc khớp bàn chân Các tổn thương đầu tiên bao gồm thủy thũng, sưng khớp, màng khớp xung huyết, dịch khớp đục Bệnh có thể tiến triển nặng hơn với hiện tường sợt hóa và áp xe các tổ chức trong khớp, khớp bị thoái hóa, viêm khớp có mủ ở lợn con Bệnh xảy ra đối với hệ thống xương thường là thoái hóa

ở các đốt sụn Sau 15- 30 ngày mắc bệnh, có thể thấy các đốt sụn bị hoại tử Ngoài ra, các triệu chứng như viêm não, viêm phổi, bại huyết, viêm nội tâm mạc, viêm teo mũi, xảy thai, viêm âm đạo cũng có thể quan sát thấy, tùy thuộc vào serotyp của chủng vi khuẩn gây bệnh Lợn mắc bệnh có thể chết do khó

thở, tím tái, hoặc kiệt sức Các serotyp khác nhau của S suis đều có thể gây

bệnh cho lợn ở lứa tuổi này

Mổ khám có thể quan sát thấy các bệnh tích như da có các đốm đỏ, các hạch lympho bị xưng và xung huyết, viêm thanh dịch có fibrin bao phủ; bao

khớp xưng, trong khớp chứa dịch trong và đục; màng não và não có thể tích bình thường hoặc bị xung huyết, phù và có chứa dịch tiết Trường hợp viêm não cấp tính do vi khuẩn gây ra thì các biến đổi bệnh lý rất điển hình Với lợn

bị bệnh thể phổi thì bệnh tích ở phổi có các mức độ biểu hiện khác nhau từ viêm phổi màng phổi dạng nhục hoá đến viêm phổi dạng fibrin có mủ

Các biến đổi về bệnh tích vi thể không có sự sai khác giữa các serotyp gây bệnh và thường tập trung ở não, phổi, tim và các khớp (Reams và cộng sự, 1994) Các tổn thương có thể quan sát thấy gồm viêm màng não, viêm não, viêm phổi-màng phổi có mủ hoặc viêm phổi kẽ

- Chẩn đoán bệnh:

Việc chẩn đoán bệnh do vi khuẩn S suis gây ra thường dựa vào tuổi

mắc bệnh, các triệu chứng lâm sàng, bệnh tích đại thể, tác nhân gây bệnh và bệnh tích vi thể của con vật mắc bệnh Điều cần lưu ý khi chẩn đoán là phải tiến hành phân lập vi khuẩn từ 1 vài cơ quan phủ tạng khác nhau của cùng 1 lợn mắc bệnh và từ vài lợn bệnh trong cùng 1 đàn để tìm ra serotyp gây bệnh chính (Higgins và cộng sự, 2002)

Phương pháp xác định serotyp vẫn đóng 1 vai trò quan trọng trong chẩn

đoán bệnh do vi khuẩn này gây nên Có thể thực hiện bằng nhiều kỹ thuật khác nhau, nhưng phương pháp ngưng kết nhanh hiện vẫn đang được sử dụng rộng rãi ở nhiều phòng thí nghiệm trên thế giới Vì phần lớn các serotyp gây bệnh đều thuộc các serotyp 1- 8 và 1/2 nên chỉ cần tiến hành phản ứng ngưng kết nhanh với các kháng huyết thanh này và gửi các chủng không xác định

được đến các phòng thí nghiệm tham chiếu để có kết quả chính xác (Higgins

và Gottschalk, 1996)

Các kỹ thuật sinh học phân tử cũng là công cụ hữu ích giúp phân biệt

các chủng S suis phân lập được, xác định nguồn gốc lây nhiễm trong đàn,

giúp khống chế ổ dịch hoặc tìm ra đúng chủng để bổ xung vào vacxin (Higgins và cộng sự, 2002) Gần đây, nhiều phòng thí nghiệm đã phát triển

phương pháp PCR dùng để giám định vi khuẩn S suis, xác định các yếu tố độc

lực và serotyp của chủng vi khuẩn gây bệnh đã được ứng dụng rộng rãi ở nhiều phòng thí nghiệm trên thế giới (Silva và cộng sự, 2006, Wisselink và cộng sự, 2002) Phương pháp này dựa trên phân tích các gen mã hoá các protein gây bệnh Phương pháp PCR có độ nhạy và độ đặc hiệu cao, có thể thực hiện với số lượng mẫu lớn trong 1 thời gian ngắn nên có thể giúp ích rất nhiều cho công tác kiểm soát bệnh

Trong việc xác định hàm lượng kháng thể kháng lại S suis, các phản

ứng huyết thanh học như ELISA, sử dụng kháng nguyên giáp mô tinh khiết cũng đã được ứng dụng và có độ đặc hiệu cao (Kataoka và cộng sự, 1996)

- Phòng bệnh do S suis gây ra ở lợn:

+ Phòng bệnh bằng vệ sinh, chăm sóc, nuôi dưỡng và quản lý:

+ Phòng bệnh bằng vacxin:

Hiện nay, các loại vacxin được sử dụng để phòng bệnh do S suis gây ra

cho lợn chủ yếu là các vacxin chuồng (autogenous vacxin) và hiệu quả bảo hộ của các loại vacxin này cũng chưa được xác định 1 cách rõ ràng (Higgins và cộng sự, 2002) Có thể liệt kê ra 1 số nguyên nhân của hiện tượng này như: sự thoái hoá của kháng nguyên bảo hộ hoặc vi khuẩn bị mất tính kháng nguyên

do quá trình xử lý bằng nhiệt hoặc formalin, do tính miễn dịch yếu của giáp mô của vi khuẩn, do sự sản sinh kháng thể đối với các kháng nguyên mà không có liên quan đến độc lực của vi khuẩn và sự thiếu hụt của các chủng hay serotyp liên quan đến quá trình sinh bệnh học (Higgins và cộng sự, 2002)

Các nhà khoa học cũng đã nghiên cứu và đưa vào chế tạo thử nghiệm nhiều loại vacxin khác nhau như: vacxin toàn khuẩn, vacxin sống nhược độc, vacxin sống vô hoạt, vacxin tiểu phần (chế từ kháng nguyên giáp mô hoặc các protein thành tế bào, protein là các yếu tố độc lực), Tuy nhiên, miễn dịch bảo hộ ở chuột hoặc lợn thí nghiệm được tiêm các loại vacxin này cũng rất thất thường và không ổn định

Trong 1 số trường hợp khẩn cấp, việc lựa chọn dùng vacxin vẫn là phương thức tối ưu nhất để bảo vệ sức khoẻ đàn lợn Tại Trung Quốc, năm

1994 đã dùng vacxin chế từ chủng nhược độc của vi khuẩn S suis chủng

ST.171 đông khô tiêm cho lợn từ cai sữa đến trưởng thành và nái có chửa ở thời kỳ đầu Khi sử dụng cho thêm nước muối sinh lý có bổ trợ keo phèn 20% hoà thành huyễn dịch tiêm dưới da hoặc tiêm bắp với liều 1ml/con Sau khi tiêm 7 ngày đã sinh miễn dịch, miễn dịch cao nhất là sau 14 ngày và thời gian miễn dịch kéo dài được 6 tháng

- Điều trị bằng kháng sinh:

Chẩn đoán phát hiện sớm bệnh co vi khuẩn S suis gây ra và điều trị

bằng kháng sinh thích hợp là biện pháp nhằm tăng khả năng sống sót cho đàn lợn Với lợn con trước cai sữa và ở giai đoạn đầu của bệnh, nếu sử dụng Penicilin và Dexametlasone sẽ mang lại hiệu quả rất cao Trong thực tế, khi sử

dụng Penicilin điều trị bệnh do S suis gây ra, điều trị từng cá thể kết hợp với

chăm sóc và nuôi dưỡng tốt có thể khỏi bệnh hoàn toàn, tránh được tử vong

1.3.3 Bệnh do vi khuẩn Streptococcus suis gây ra ở người:

Tại Việt Nam, theo báo cáo của Cục Y tế dự phòng, Bộ Y tế, từ đầu năm 2007 đến nay (7/2007) cả nước đã có 46 người mắc bệnh liên cầu, trong

đó có 2 người đã bị tử vong ở hai thể bệnh viêm màng não và nhiễm trùng

huyết, số bệnh nhân này được xác nhận là do nhiễm vi khuẩn S suis typ 2 Đa

số những người mắc bệnh tập trung ở các tỉnh Hưng Yên, Hải Dương, Hà Tây, Bắc Ninh, Hoà Bình, Vĩnh Phúc, Quảng Ninh, Ninh Bình, Nam Định, Sơn La,

Hà Nam, Bắc Giang và Thành phố Hà Nội Những người bị nhiễm bệnh đều

đã được xác nhận là có tiếp xúc trực tiếp với lợn bị bệnh hoặc tham gia giết

mổ và bán thịt lợn

* Tỡnh hỡnh bệnh do vi khuẩn S suis gõy ra ở người trờn thế giới và tại Việt Nam

Kể từ ca bệnh ở người do vi khuẩn S suis được thụng bỏo lần đầu tiờn

vào năm 1968 ở Đan Mạch, tớnh đến đầu năm 2005, đó cú khoảng 200 trường

hợp người nhiễm bệnh S suis được thụng bỏo trờn toàn thế giới (Lun và cộng

sự, 2007) Hầu hết những bệnh nhân này sống ở các nước châu Âu hoặc châu

Á Bệnh xuất hiện phổ biến hơn ở các vùng nuôi lợn tập trung hoặc ở những

nơi mà con người sống có sự tiếp xúc gần với lợn

Bảng 2.1 liệt kê số bệnh nhân mắc bệnh và chết do bệnh này ở các

nước khác nhau, trong đó Trung Quốc là nước dẫn đầu với 283 bệnh nhân

mắc bệnh và 54 người chết (chiếm tỷ lệ 19.1%) (Lun và cộng sự, 2007)

Bảng 2.1: Số bệnh nhân mắc bệnh do nhiễm S suis ở quốc gia khác nhau

*: Tỷ lệ % chỉ đối với các quốc gia có số bệnh nhân > 20 (Lun và cộng sự, 2007 [80])

Hầu hết các ca bệnh là do các chủng thuộc serotyp 2 gây ra, nhưng các

ca bệnh do serotyp 4 (1 ca), serotyp 14 (2 ca) và serotyp 1 (2 ca) cũng đã

được y sử ghi nhận Ở người, S suis thường gây ra viêm não mủ hoặc không

có mủ

Ngoài ra, viêm nội tâm mạc, viêm mô bào, cơ niệu kịch phát, viêm khớp, viêm phổi, và viêm nội nhãn cũng đã được thông báo Viêm khớp gây ảnh hưởng đến nhiều khớp, bao gồm khớp hông, khớp khuỷu tay, khớp cổ tay, xương chậu, xương sống, và ngón tay Trong hầu hết các trường hợp,

viêm khớp phản ánh hiện tượng nhiễm trùng máu nói chung do S suis Các

trường hợp nhiễm bệnh nặng thường đi kèm với các biểu hiện như sốc, nghẽn mạch ngoại vi, gây ra hiện tượng xuất huyết, thường dẫn đến chết trong vòng

vài giờ cũng đã từng được mô tả Người ta cũng đã chứng minh được rằng S suis là tác nhân gây ra các ổ viêm nhiễm nghiêm trọng khác Một trong số các

hậu quả của nhiễm bệnh này là thường dẫn đến khiếm thính do bị viêm não

bởi S suis

Trong thực tế, tỷ lệ bệnh nhân bị khiếm thính do bị nhiễm bệnh bởi S suis là thường cao hơn các trường hợp viêm não khác cũng do vi khuẩn gây ra

và có thể chiếm tới 50% ở châu Âu và 65% ở châu Á

Đường xâm nhập của vi khuẩn vào cơ thể người có thể là do các vết xây xước ở da, đường hầu họng, hoặc đường tiêu hóa (do ăn uống) Thời gian

ủ bệnh thường là từ vài giờ đến 2 ngày Vì vậy, hầu hết các ca bệnh ở người là những người nông dân có chăn nuôi lợn, công nhân làm việc tại lò mổ, những người tham gia vận chuyển thịt lợn, những người kiểm nghiệm thịt, và những người làm nghề bán thịt Các thông tin về sự xuất hiện và tần xuất người bị

nhiễm S suis trong những năm gần đây, đặc biệt là trong thời gian 15 năm

qua là đáng báo động, với phần lớn các dữ liệu là các công nhân làm việc tại

lò giết mổ Các biểu hiện của bệnh ở lợn không phải là điều tiên quyết cho các

nhiễm bệnh ở người có tiếp xúc với lợn, bởi vì vi khuẩn S suis đều cư trú ở

hầu hết các động vật nhưng không có các biểu hiện triệu chứng lâm sàng (The Pig Site)

Theo các nhà nghiên cứu, hiện chưa có dấu hiệu lây nhiễm bệnh giữa người với người thông qua tiếp xúc Các nghiên cứu cũng đã chỉ ra rằng nhìn