Nghiên cứu quy trình chiết tách ent kauran dipecpenoit có tác dụng chống ung thư và chống viêm từ cây khổ sâm bắc bộ (croton tonkinensis gagnep , euphorbiaceae (giai đoạn 2 phụ lục)

Bộ khoa học và công nghệ ĐạI học quốc gia hà nội Trờng đại học Khoa học tự nhiên Đề tài độc lập cấp nhà nớc báo cáo tổng hợp kết quả khoa học công nghệ đề tài nghiên cứu quy trình chiết tách ent-kauran Ditecpenoit có tác dụng chống ung th Và chống viêm từ cây khổ sâm Bắc Bộ (croton tonkinensis gagnep., euphorbiaceae) - Giai đoạn 2 Mã số: ĐTĐL.2009G/03 Phụ lục Cơ quan chủ trì: Trờng Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia Hà Nội Chủ nhiệm : GS TSKH Phan Tống Sơn 9072-1 Hà Nội 6/2011 §Ò tµi §T§L.2009G/03 1 ĐỀ TÀI NHÁNH CỦA ĐỀ TÀI ĐTĐL.2009G/03 NGHIÊN CỨU ĐỘNG THÁI TÍCH LŨY CỦA HOẠT CHẤT ENT-KAURAN DITECPENOIT TRONG CÂY KHỔ SÂM BẮC BỘ (CROTON TONKINENSIS GAGNEP., EUPHORBIACEAE) Chủ nhiệm Đề tài nhánh: PGS TS Phan Minh Giang Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia Hà Nội Nội dung nghiên cứu của Đề tài nhánh này là nghiên cứu động thái tích lũy của hoạt chất ent- kauran ditecpenoit trong cây khổ sâm Bắc Bộ (Croton tonkinensis Gagnep., Euphorbiaceae) theo thời gian ở một số vùng nguyên liệu. 1 Khảo sát các vùng trồng cây nguyên liệu khổ sâm Bắc Bộ và Thu thập các mẫu nguyên liệu cây khổ sâm Bắc Bộ cho nghiên cứu 1.1 Lựa chọn các vùng trồng cây nguyên liệu kh ổ sâm Bắc Bộ Trong số các địa phương đã lâu năm trồng cây nguyên liệu khổ sâm Bắc Bộ để dùng làm thuốc có thể kể đến Mỹ Đức, Quốc Oai (Hà Tây cũ), Ngọc Trục thuộc Từ Liêm, Gia Lâm và Hòa Bình. 1.2 Khảo sát các vùng trồng cây nguyên liệu khổ sâm Bắc Bộ Đã tổ chức khảo sát thực địa các vùng trồng cây nguyên liệu khổ sâm Bắc Bộ bao gồm Mỹ Đức, Quốc Oai (Hà Tây cũ), Ng ọc Trục , Gia Lâm và Hòa Bình (vùng Kỳ Sơn). Bảo quản các cây cung cấp nguyên liệu để có thể thu thập mẫu cho 3 thời điểm trong năm (xem Bảng 1: Danh sách mẫu cây khổ sâm Bắc Bộ cho nghiên cứu). Các thời điểm thu thập mẫu và bộ phận cây cần thu hái được lựa §Ò tµi §T§L.2009G/03 2 chọn dựa trên kinh nghiệm của nhân dân địa phương và các tài liệu tham khảo về thời gian thu thập nguyên liệu của các cây thuốc cổ truyền [1,2]. Hình 1: Lá và hoa một cây khổ sâm Bắc Bộ (Ngọc Trục) 1.3 Thu thập các mẫu thực vật Các mẫu thực vật bao gồm các bộ phận có khả năng chứa hàm lượng cao các hoạt chất ent-kauran ditecpenoit là lá và cành con được thu thập tại các thời điểm trong năm. Các thời điểm được lựa chọn là tháng 4, tháng 9 và tháng 1 dương lịch. Bảng 1: Danh sách các mẫu cây khổ sâm Bắc Bộ cho nghiên cứu STT Địa phương thu mẫu Ký hiệu mẫu 1 HB-L1 2 HB-T1 3 HB-L2 4 HB-T2 5 HB-L3 6 Hòa Bình HB-T3 §Ò tµi §T§L.2009G/03 3 7 GL-L1 8 GL-T1 9 GL-L2 10 GL-T2 11 GL-L3 12 Gia Lâm GL-T3 13 QO-L1 14 QO-T1 15 QO-L2 16 QO-T2 17 QO-L3 18 Quốc Oai QO-T3 19 NT-L1 20 NT-T1 21 NT-L2 22 NT-T2 23 NT-L3 24 Ngọc Trục NT-T3 25 MD-L1 26 MD-T1 27 MD-L2 28 MD-T2 29 MD-L3 30 Mỹ Đức MD-T3 Hai chữ đầu là ký hiệu của vùng nguyên liệu (ví dụ, NT = Ngọc Trục); L hoặc T là bộ phận nguyên liệu (L = lá và T = cành con); các ký hiệu 1, 2 hoặc 3 được dùng để chỉ các thời điểm thu thập mẫu tương ứng với tháng 4, tháng 9 và tháng 1 dương lịch. Tài liệu tham khảo 1) Võ Văn Chi, Từ điển cây thuốc Việt Nam, Nhà xuất bản Y học, Thành phố Hồ Chí Minh, 2007. §Ò tµi §T§L.2009G/03 4 2) Đỗ Tất Lợi, Những cây thuốc và vị thuốc Việt Nam, Nhà xuất bản Khoa học và Kỹ thuật, Hà Nội, 1997. 2 Nghiên cứu quy trình xử lý các mẫu thực vật (bao gồm lá và cành con của cây khổ sâm Bắc Bộ) Đã nghiên cứu xây dựng quy trình xử lý mẫu thực vật để có bột nguyên liệu thực vật khô cho nghiên cứu phân tích. 2.1 Mẫu thực vật Mẫu thực vật là cành lá (nhánh cây) tươi của cây khổ sâm Bắc Bộ (Croton tonkinensis Gagnep.) thuộc họ Thầu dầu (Euphorbiaceae) được thu thập thực địa tại một số thời điểm theo vụ thu hoạch trong năm tại một số vùng trồng cây nguyên liệu khổ sâm Bắc Bộ quan trọng, như đã nêu ở Bảng 1. 2.2 Quy trình chung xử lý các mẫu thực vật Các khảo sát của nhóm nghiên cứu chúng tôi đã cho thấy các nguyên liệu thực vật khô từ lá cây khổ sâm Bắc Bộ có thể chứa một hàm lượng khá cao các hoạt chất ent-kauran ditecpenoit. Một điều thuận lợi cho các quá trình xử lý mẫu trong trường hợp nghiên cứu các hoạt chất từ cây khổ sâm Bắc Bộ là các hoạt chất ditecpenoit này thường có độ ổn định hóa học khá cao và được thu nhận ở trạng thái rắn không dễ bị bay hơi. Tuy nhiên để giảm các ảnh hưởng đến các hoạt chất việc xử lý mẫu đòi hỏi một quá trình làm khô mẫu chậm và tránh các tác động mạnh của nhiệt độ và độ ẩm. Do đó trước khi tiến hành các nghiên cứu chiết xuất các mẫu thực vật đã được xử lý để ổn định mẫu theo một quy trình chung gồm năm bước sau (xem Sơ đồ 1). §Ò tµi §T§L.2009G/03 5 Quy trình chung xử lý các mẫu thực vật từ cây khổ sâm Bắc Bộ: 1. Các mẫu thực vật (cành lá tươi) của cây khổ sâm Bắc Bộ được lưu giữ trong các túi lưới có kích thước 60 cm x 80 cm (rộng x dài) trong bóng râm ở điều kiện nhiệt độ phòng thoáng, mát cho bước xử lý tiếp theo ngay sau đó. Các túi nguyên liệu này đều được gắn nhãn có ghi tên mẫu, địa điểm thu thập mẫu, thời gian thu thập mẫu và người trực tiếp thu th ập mẫu. 2. Sau đó các mẫu thực vật của cây khổ sâm Bắc Bộ được hong khô trong bóng râm trong điều kiện có quạt thông gió trong khoảng thời gian năm ngày. Các mẫu thực vật này sau khi đã được lấy ra một phần để dùng cho các nghiên cứu chiết tách đều đuợc bảo quản ở nhiệt độ phòng trong điều kiện thoáng, mát nhằm hạn chế các ảnh hưởng đến các hoạt chất ent-kauran ditecpenoit có ở trong các mẫu. 3. Các mẫu thực vật của cây khổ sâm Bắc Bộ, sau khi đã được hong khô trong bóng râm, được xử lý tách riêng phần lá và phần cành con (được xác định là phần gắn liền với lá có đường kính khoảng từ 1-1,5 mm) cho bước nghiên cứu chiết xuất. Đây là các bộ phận của cây được sử dụng theo kinh nghiệm trong Y học cổ truyền và có hàm lượng hoạt chất ent-kauran ditecpenoit cao. 4. Mẫu thực vật (lá ho ặc cành con, để riêng) của cây khổ sâm Bắc Bộ sau đó được sấy trong tủ sấy ở điều kiện nhiệt độ 40 o C trong 48 giờ. Các mẫu nguyên liệu thực vật (tức lá khô hoặc cành con khô, để riêng) của cây khổ sâm Bắc Bộ bây giờ đã được ổn định cho các nghiên cứu chiết xuất. 5. Để cho dung môi hữu cơ có thể thẩm thấu vào các cấu trúc tế bào của các mô thực vật trong quá trình chiết xuất, các nguyên liệu thực vật (lá khô hoặc cành con khô) của cây khổ sâm Bắc Bộ cần được xay thành bột mịn. Cho các nghiên cứu chiết xu ất ở quy mô phân tích, các nguyên liệu thực vật này được xay thành bột trong máy xay cỡ nhỏ (Philips, Hà Lan). Để giảm nhiệt sinh ra Đề tài ĐTĐL.2009G/03 6 trong quỏ trỡnh xay mu, mỏy xay c t ch hot ng cho khong thi gian 30 giõy. Sơ đồ 1: Quy trình chung xử lý các mẫu thực vật của cây khổ sâm Bắc Bộ Phõn tớch sc ký lp mng (TLC) nh tớnh kim tra s cú mt ca cỏc hot cht ent-kauran ditecpenoit trong cỏc mu sau x lý: Quy trỡnh phõn tớch TLC chung 1) Ngõm chit 1 g mu sau x lý vi MeOH khan trong bỡnh Erlenmeyer (1 ngy). 2) Ct loi kit dung mụi MeOH di ỏp sut gim. 3) Chun b mu dung dch phõn tớch TLC (10 mg phn chit MeOH/1 ml MeOH). 4) Phõn tớch TLC nh tớnh : s dng bỡnh trin khai TLC Sigma-Aldrich, bn mng TLC Aluminium precoated sheets silica gel 60 F 254 (Merck, Germany), Mẫu thực vật thô 1. Hong khô trong bóng râm Mẫu thô khô 2. Sấy ở 40 o C 3. Tách mẫu Mẫu lá 4. Xay nguyên liệu khô Mẫu cành con Bột mịn Bột mịn §Ò tµi §T§L.2009G/03 7 chất chuẩn ent-7β-hydroxy-15-oxokaur-16-en-18-yl axetat (1) (1 mg/1 ml CH 2 Cl 2 ), đưa mẫu lên bản mỏng: 20 µl cho mẫu phần chiết MeOH (10 mg/1 ml MeOH) và 5 µl cho mẫu chuẩn, hệ dung môi n-hexan-axeton 3:1 (v/v), nhiệt độ triển khai TLC: nhiệt độ phòng, thuốc thử hiện màu: Dragendorff- Munier (hiện màu da cam) và vanilin/H 2 SO 4 đặc 1% (hiện màu tím), phương pháp phân tích TLC định tính: so sánh và co-TLC. 2.3 Áp dụng quy trình xử lý mẫu chung Quy trình xử lý mẫu chung nêu trên đã được áp dụng để xử lý 30 mẫu nguyên liệu tươi của cây khổ sâm Bắc Bộ bao gồm 15 mẫu lá và 15 mẫu cành con. Các nguyên liệu sau khi xử lý đều đạt yêu cầu sử dụng; phân tích TLC đã cho thấy sự có mặt các hoạt chất ent-kauran ditecpenoit mục tiêu trong các nguyên liệu này. 2.4 Kết luận 1) Đối với các mẫu th ực vật (lá và cành con) từ cây khổ sâm Bắc Bộ đã khảo sát và xác định các điều kiện thích hợp để xử lý ổn định mẫu thực vật tươi mà không làm ảnh hưởng đến các hoạt chất ent-kauran ditecpenoit: thời gian hong khô ngoài không khí, nhiệt độ sấy (40 o C) và thời gian sấy mẫu, để thu được các mẫu nguyên liệu thực vật khô ổn định. 2) Đã áp dụng phương pháp TLC để kiểm tra định tính các thành phần, kết quả cho thấy sự có mặt của các thành phần hoạt chất ent-kauran ditecpenoit cần thu nhận ở tất cả các mẫu sau xử lý. 3) Quy trình chung đã được áp dụng để xử lý 30 mẫu nguyên liệu tươi của cây khổ sâm Bắc Bộ được thu thập tại các vùng trồng cây khổ sâm Bắc Bộ khác nhau tại ba thời điểm trong năm. §Ò tµi §T§L.2009G/03 8 3 Điều chế phần chiết metanol toàn phần của các mẫu thực vật Theo quy trình của chúng tôi, các nghiên cứu phân tích được thực hiện trên các phần chiết MeOH. Theo sự đánh giá của chúng tôi metanol có một số giá trị ưu việt: metanol là dung môi được sử dụng phổ biến trong sản xuất do có giá thành thấp, độ chiết các ent-kauran ditecpenoit có hoạt tính sinh học đạt cao, có tính phù hợp với các quy trình cần loại bỏ các chất màu gây cản trở trong quá trình sả n xuất. Quy trình điều chế phần chiết metanol toàn phần cho phân tích từ lá và từ cành con của cây khổ sâm Bắc Bộ 3.1 Nguyên liệu thực vật Nguyên liệu thực vật (lá và cành con của cây khổ sâm Bắc Bộ, Croton tonkinensis Gagnep., Euphorbiaceae) được xử lý ổn định theo một quy trình chung (xem Mục 2, Phần 2.2). Các mẫu nguyên liệu khô đều được xay thành bột mịn để dùng cho các nghiên cứu chiết xuất các hoạt chất ent-kauran ditecpenoit. 3.2 Quy trình chung điề u chế các phần chiết metanol toàn phần. Chiết xuất các hoạt chất ent-kauran ditecpenoit từ cây khổ sâm Bắc Bộ Trong bước chuẩn bị chiết xuất, các tế bào thực vật đã được chuẩn bị cho sự tiếp xúc với dung môi hữu cơ sau khi nguyên liệu khô (lá hoặc cành con) đã được chuyển thành dạng bột mịn. Do độ phân cực của các hoạt chất ent-kauran ditecpenoit cũng như để hạn ch ế sự giải phóng các chất màu, chất dễ bay hơi và sáp (dễ tan trong các dung môi ít phân cực) vào dịch chiết, và do tính chất hóa học tương đối trơ của MeOH đối với các hoạt chất ent-kauran ditecpenoit mục tiêu ở điều kiện chiết xuất được lựa chọn (ngâm chiết ở nhiệt độ phòng) và giá thành phù hợp cho các mục đích sản xuất lượng lớn, MeOH đã được lựa chọn làm dung môi chiết. Quá trình chiết r ắn - lỏng các hoạt chất §Ò tµi §T§L.2009G/03 9 ent-kauran ditecpenoit từ nguyên liệu thực vật cây khổ sâm Bắc Bộ đã được thực hiện theo Sơ đồ 2 qua các bước sau. Quy trình chung chiết các mẫu thực vật từ cây khổ sâm Bắc Bộ 1. Ngâm chiết bột nguyên liệu khô (lá hoặc cành con của cây khổ sâm Bắc Bộ) trong MeOH khan trong các bình Erlenmeyer 250 ml ở nhiệt độ phòng. Khối lượng nguyên liệu được sử dụng cho mỗi lần ngâm chiết mẫu phân tích là 50 g lá hoặc 10 g cành con. 2. Sau khi ngâm chiết ba ngày, các dị ch chiết MeOH được lọc hút chân không bằng phễu lọc Büchner. Lặp lại quy trình ngâm chiết và gộp các dịch chiết MeOH lại. Dùng MeOH tráng kỹ bã nguyên liệu sau mỗi lần ngâm chiết. 3. Cất loại kiệt nhanh MeOH bằng thiết bị quay cô chân không dưới áp suất giảm ở nhiệt độ < 50 o C, thu được các phần chiết MeOH. 4. Tiếp tục loại hết dung môi ở các phần chiết MeOH này bằng áp suất giảm trong 30 phút. Sơ đồ 2: Quy trình điều chế các phần chiết MeOH từ cây khổ sâm Bắc Bộ bét nguyªn liÖu l¸ (cµnh con) MeOH dÞch chiÕt MeOH 2 lÇn (x 3 ngµy) cÊt lo¹i MeOH phÇn chiÕt MeOH [...]... 0,8 7 (3H, s, H3-19 ), 0,9 7 (3H, s, H3-18 ), 1,1 6 (3H, s, H3 -20 ), 2, 0 1 (3H, s, 1-OAc ), 2, 0 2 (3H, s, 7-OAc ), 3,1 2 (1H, br s, H13 ), 4,8 6 (1H, br s, H-1 ), 4,8 9 (1H, s, H-14 ), 5,4 2 (1H, s, H-17a ), 5,4 5 (1H, dd, J = 1 2, 4 Hz, 3,9 Hz, H-7β ), 6,1 7 (1H, s, H-17b) C-NMR (CDCl3): δ (ppm) 1 6,6 (t, C-11 ), 1 8,5 (q, C -20 ), 2 1 ,2 (q, C-19 ), 13 2 2, 6 (t, C -2 ), 2 5,0 (t, C-6 ), 3 1,0 (t, C- 12 ), 3 2, 9 (q, C-18 ), 3 3,0 (s, C-4 ),. .. 0,9 0 (3H, s, H3-19 ), 0,9 5 (3H, s, H3-18 ), 1 ,2 7 (3H, s, H3 -20 ), 1,9 7 (3H, s, 14-OAc ), 1,9 9 (3H, s, 1-OAc ), 3,0 8 (1H, br s, H13 ), 4,1 9 (1H, dt, J = 1 1,9 Hz, 4,6 Hz, H-7 ), 4,8 6 (1H, br s, H-1 ), 5,4 1 (1H, s, H-17a ), 6,0 1 (1H, s, H-14 ), 6,1 8 (1H, s, H-17b) 13 C-NMR (CDCl3): δ (ppm) 1 6,6 (t, C-11 ), 1 8,6 (q, C -20 ), 2 1,4 (q, C-19 ), 2 2, 7 (t, C -2 ), 2 7,3 (t, C-6 ), 3 2, 3 (t, C- 12 ), 3 2, 9 (s, C-4 ), 3 3 ,2 (q, C-18 ),. .. 0,8 4 (3H, s, H3-19 ), 1,1 4 (3H, d, J = 1,1 9 Hz, H3 -20 ), 3,1 0 (1H, m, H-13 ), 2, 1 0 (3H, s, 18-OAc ), 3,6 6 (1H, d, J = 1 0,8 Hz, H-18a ), 3,8 7 (1H, d, J = 1 0,8 Hz, H-18b ), 4,0 5 (1H, dd, J = 1 2, 0 Hz, 4,4 Hz, H-7 ), 5 ,2 9 (1H, t, J = 1,1 Hz, H-17a ), 5,9 7 (1H, t, J = 1,1 Hz, H-17b) 16 §Ò tµi §T§L .20 09G/03 13 C-NMR (CDCl3): δ (ppm) 1 7,5 (t, C -2 ), 1 7,5 (q, C-19 ), 1 8,0 (t, C-11 ), 1 8 ,2 (q, C -20 ), 2 7,7 (t, C-6 ), 2 7,9 ... C-4 ), 3 4,9 (t, C-3 ), 4 2, 3 (s, C-10 ), 4 5,7 (d, C-13 ), 4 6,9 (d, C-5 ), 4 6,9 9 (d, C-9 ), 6 0,9 (s, C-8 ), 7 2, 7 (d, C-1 ), 7 4,3 (d, C-14 ), 7 5,9 (d, C-7 ), 11 8,3 (t, C-17 ), 14 6,7 (s, C16 ), 17 0,1 (s) /2 1 ,2 (q) (1-OAc ), 16 8,1 (s) /2 1 ,2 (q) (7-OAc ), 20 5,0 (s, C-15) 4.3 Kết luận 1) Qua các thí nghiệm đã xây dựng được quy trình chiết tách và tinh chế thích hợp các mẫu chuẩn ent- kauran ditecpenoit từ lá cây khổ sâm Bắc Bộ. .. C-6 ), 2 7,9 (t, C-14 ), 3 2, 8 (t, C- 12 ), 3 5,4 (t, C-3 ), 3 6,4 (s, C-4 ), 3 7,6 (d, C-13 ), 3 8,9 (t, C-1 ), 3 9,6 (s, C-10 ), 4 6,3 (d, C-5 ), 5 1,8 (d, C-9 ), 5 8,3 (s, C-8 ), 7 0,8 (d, C-7 ), 7 2, 3 (t, C-18 ), 11 5,0 (t, C-17 ), 14 9 ,2 (s, C-16 ), 17 1 ,2 (s) /2 1,1 (q) (18-OAc ), 20 9,7 (s, C-15) ent- 1 ,1 4α-diaxetoxy-7β-hydroxykaur-16-en-15-on (2) : OAc 12 11 13 9 20 14 1 10 2 3 5 4 8 H 16 O OAc 7 6 OH H 18 17 15 19 2 1 H-NMR (CDCl3):... (q, C-18 ), 3 5,0 (t, C-3 ), 4 4 ,2 (d, C-13 ), 4 3,0 (s, C-10 ), 4 7,6 (d, C-5 ), 4 8,1 (d, C-9 ), 6 1,6 (s, C8 ), 7 2, 7 (t, C-1 ), 7 2, 9 (d, C-7 ), 7 6,1 (d, C-14 ), 11 7,7 (t, C-17 ), 14 6,0 (s, C-16 ), 17 0,1 (s) /2 1 ,2 (q) (1-OAc ), 17 0,6 (s) /2 1,4 (q) (14-OAc ), 20 6,5 (s, C-15) ent- 1 ,7 β-diaxetoxy-14α-hydroxykaur-16-en-15-on (3): OAc 12 11 13 9 20 14 1 10 2 3 5 4 H 6 H 18 19 3 17 16 17 8 15 7 O OH OAc §Ò tµi §T§L .20 09G/03 1... phần chiết MeOH và các chất chuẩn (các mẫu lần lượt từ trái sang phải : GL-L, HB-L, NT-L, MD-L, QO-L, U-L, GL-T, HB-T, NT-T, MD-T, QO-T, U-T, và các mẫu chất chuẩn S1 (1 ), S2 (2) và S3 (3 ), hiện màu bằng đèn UV ở λ 25 4 nm, các vệt chất của S 1, S2 và S3 không hiện màu với đèn UV) Bảng 3: Sắc ký đồ TLC chuẩn của phần chiết MeOH từ lá và cành con của cây khổ sâm Bắc Bộ STT Rf × 100 1 Lá Cành con 8 1,8 DragendorffMunier... lượt từ trái sang phải : GL-L, HB-L, NT-L, MD-L, QO-L, U-L, GL-T, HB-T, NT-T, MD-T, QO-T, U-T, và các mẫu chất chuẩn S1 (1 ), S2 (2) và S3 (3 ), hiện màu bằng thuốc hiện Dragendorff-Munier, chuẩn S1 hiện màu da cam, các chuẩn S2 và S3 hiện màu trắng) 23 §Ò tµi §T§L .20 09G/03 Hình 3: Phân tích TLC các phần chiết MeOH và các chất chuẩn (các mẫu lần lượt từ trái sang phải : GL-L, HB-L, NT-L, MD-L, QO-L, U-L,... GL-L, HB-L, NT-L, MD-L, QO-L, U-L, GL-T, HB-T, NT-T, MD-T, QO-T, U-T, và các mẫu chất chuẩn S1 (1 ), S2 (2) và S3 (3 ), hiện màu bằng thuốc hiện vanilin/H2SO4 đặc 1 %, chuẩn S1 hiện màu tím, các chuẩn S2 và S3 hiện màu xám) Các sắc ký đồ TLC chuẩn của phần chiết n-hexan từ lá và cành con của cây khổ sâm Bắc Bộ được nêu tổng quát trong Bảng 5 Bảng 5: Sắc ký đồ TLC chuẩn của phần chiết n-hexan từ lá và cành... MD-T, QO-T, U-T, và các mẫu chất chuẩn S1 (1 ), S2 (2) và S3 (3 ), hiện màu bằng thuốc hiện Dragendorff-Munier, chuẩn S1 hiện màu da cam, các chuẩn S2 và S3 hiện màu trắng) Bảng 4: Sắc ký đồ TLC chuẩn của phần chiết MeOH-SPE từ lá cây khổ sâm Bắc Bộ STT Rf × 100 Dragendorff-Munier 1 8 1,8 vàng 2 5 4,5 xanh 3 4 8,5 xanh 4a) 4 5,5 da cam 5 3 0,3 vàng 6 2 8,8 xanh 7 2 1 ,2 xanh a) chất 1 27 §Ò tµi §T§L .20 09G/03 3) . (3H, s, H 3 -20 ), 2, 0 1 (3H, s, 1-OAc ), 2, 0 2 (3H, s, 7-OAc ), 3,1 2 (1H, br s, H- 13 ), 4,8 6 (1H, br s, H-1 ), 4,8 9 (1H, s, H-14 ), 5,4 2 (1H, s, H-17a ), 5,4 5 (1H, dd, J = 1 2, 4 Hz, 3,9 Hz, H-7β ), 6,1 7. C -20 ), 2 7,7 (t, C-6 ), 2 7,9 (t, C-14 ), 3 2, 8 (t, C- 12 ), 3 5,4 (t, C-3 ), 3 6,4 (s, C-4 ), 3 7,6 (d, C-13 ), 3 8,9 (t, C-1 ), 3 9,6 (s, C-10 ), 4 6,3 (d, C-5 ), 5 1,8 (d, C-9 ), 5 8,3 (s, C-8 ), 7 0,8 (d, C-7 ),. (s, C-4 ), 3 3 ,2 (q, C-18 ), 3 5,0 (t, C-3 ), 4 4 ,2 (d, C-13 ), 4 3,0 (s, C-10 ), 4 7,6 (d, C-5 ), 4 8,1 (d, C-9 ), 6 1,6 (s, C- 8 ), 7 2, 7 (t, C-1 ), 7 2, 9 (d, C-7 ), 7 6,1 (d, C-14 ), 11 7,7 (t, C-17 ), 14 6,0 (s,