Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn kiểm nghiệm và khảo sát độ ổn định của viên nén bao phim thực phẩm chức năng chứa cao chiết lá sầu đâu ăn lá (azadirachta indica a juss)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC Y DƢỢC CẦN THƠ TRẦN NGỌC DUNG NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN KIỂM NGHIỆM VÀ KHẢO SÁT ĐÔ ỔN ĐỊNH CỦA VIÊN NÉN BAO PHIM THỰC PHẨM CHỨC NĂNG CHỨA CAO CHIẾT LÁ SẦU ĐÂU ĂN LÁ (Azadirachta indica A.Juss) LUẬN VĂN THẠC SĨ DƢỢC HỌC CẦN THƠ – 2019 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC Y DƢỢC CẦN THƠ TRẦN NGỌC DUNG NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN KIỂM NGHIỆM VÀ KHẢO SÁT ĐÔ ỔN ĐỊNH CỦA VIÊN NÉN BAO PHIM THỰC PHẨM CHỨC NĂNG CHỨA CAO CHIẾT LÁ SẦU ĐÂU ĂN LÁ (Azadirachta indica A.Juss) Chuyên ngành:Kiểm nghiệm thuốc độc chất Mã số: 8720210 NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC PGs.TS Nguyễn Thị Ngọc Vân Cần Thơ – 2019 LỜI CẢM ƠN Tôi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến PGS.TS.DS Nguyễn Thị Ngọc Vân thời gian qua Cơ tận tình hƣớng dẫn, truyền đạt kiến thức kinh nghiệm quý báu, hƣớng dẫn giải vấn đề gặp phải trình nghiên cứu để hồn thành luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn, anh chị, em trung tâm Kiểm nghiệm Thuốc, Mỹ phẩm, Thực phẩm Tỉnh Cần Thơ tạo điều kiện, hỗ trợ nhiệt tình suốt thời gian tơi thực luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn, anh chị, em trung tâm Kiểm nghiệm Thuốc, Mỹ phẩm, Thực phẩm Tỉnh Sóc Trăng tạo điều kiện cho tơi hồn thành luận văn, bên cạnh cho tơi gửi lời cảm ơn sâu sắc đến DS Tùng DS Oanh Công ty Cổ phần dƣợc Spharm tạo điều kiện cho gửi mẫu thuốc theo dõi tủ vi khí hậu Xin đƣợc cảm ơn nhà nghiên cứu, tác giả báo cáo, luận văn, hỗ trợ Thầy, Cô thƣ viện trƣờng LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan thành nghiên cứu Các số liệu, kết nêu luận văn đƣợc đảm bảo trung thực chƣa đƣợc cơng bố cơng trình nghiên cứu khác Cần Thơ, ngày 05 tháng 10 năm 2019 Trần Ngọc Dung MỤC LỤC Trang phụ bìa LỜI CẢM ƠN LỜI CAM ĐOAN MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH ĐẶT VẤN ĐỀ Chƣơng 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan dƣợc liệu viên nén chứa cao Sầu đâu 1.1.1 Dƣợc liệu Sầu đâu 1.1.2 Chế phẩm thực phẩm chức chứa cao dƣợc liệu 1.2 Xây dựng tiêu chuẩn sở viên nén TPCN chứa cao Sầu đâu 10 1.2.1 Chỉ tiêu định tính, định lƣợng 10 1.2.2 Chỉ tiêu tính chất, độ đồng khối lƣợng, độ rã giới hạn nhiễm khuẩn 14 1.3 Độ ổn định tuổi thọ thuốc 15 1.3.1 Khái niệm 15 1.3.2 Phƣơng pháp nghiên cứu độ ổn định thuốc 17 1.3.3 Cách xác định tuổi thọ thuốc 18 Chƣơng 2: ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 2.1 Đối tƣợng 21 2.1.1 Đối tƣợng nghiên cứu 21 2.1.2 Tiêu chuẩn chọn mẫu 21 2.1.3 Tiêu chuẩn loại trừ 21 2.1.4 Địa điểm nghiên cứu 21 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 22 2.2.1 Thiết kế nghiên cứu 22 2.2.2 Cỡ mẫu 22 2.2.3 Chất chuẩn, hóa chất, thuốc thử - Trang thiết bị 22 2.2.4 Nội dung nghiên cứu 23 2.2.5 Phƣơng pháp phân tích đánh giá kết 31 2.2.6 Phƣơng pháp kiểm soát sai số 31 2.2.7 Xử lý thống kê kết phân tích 31 2.3 Đạo đức nghiên cứu 32 Chƣơng 3: KẾT QUẢ 33 3.1 Xây dựng tiêu chuẩn kiểm nghiệm viên nén TPCN chứa cao Sầu đâu 33 3.1.1 Kết xây dựng quy trình định tính viên nén chứa cao Sầu đâu 33 3.1.2 Xây dựng quy trình định lƣợng sắc ký lỏng 36 3.1.3 Kết xây dựng tiêu kiểm nghiệm theo Dƣợc điển Việt Nam V 45 3.1.4 Đề xuất tiêu chuẩn sở cho viên nén TPCN chứa cao Sầu đâu 47 3.2 Khảo sát độ ổn định viên nén TPCN chứa cao Sầu đâu 50 Chƣơng 4: BÀN LUẬN 58 4.1 Xây dựng tiêu chuẩn kiểm nghiệm viên nén thực phẩm chức chứa cao Sầu đâu 58 4.1.1 Xây dựng quy trình định tính viên nén TPCN chứa cao Sầu đâu 58 4.1.2 Xây dựng quy trình định lƣợng viên nén TPCN chứa cao Sầu đâu 59 4.1.3 Xây dựng tiêu kiểm nghiệm theo Dƣợc điển Việt Nam V 66 4.2 Khảo sát độ ổn định viên nén TPCN chứa cao Sầu đâu 68 KẾT LUẬN 71 KIẾN NGHỊ 72 TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt AOAC Từ nguyên Nghĩa Tiếng Việt Association of Official Analytical Hiệp hội hóa học phân tích Chemists As Asymmetry factor Hệ số bất đối DĐVN Dƣợc điển Việt Nam Dƣợc điển Việt Nam HPLC Highperformance liquid Sắc ký lỏng hiệu cao chromatography International conference Hiệp hội đồng thuận harmonisation quốc tế LOD Limit of detection Giới hạn phát PAD Diode array detector Đầu dò dãy diod quang R2 Coefficient of Correlation Hệ số tƣơng quan RH Relative humidity Độ ẩm tƣơng đối Rs Resolution factor Hệ số phân giải RSD Relative Standard Deviation Độ lệch chuẩn tƣơng đối S Area Diện tích đỉnh SD Standard deviation Độ lệch chuẩn SKĐ Sắc ký đồ Sắc ký đồ TPCN Thực phẩm chức Thực phẩm chức tR Retention time Thời gian lƣu TT Thuốc thử Thuốc thử UV-Vis Ultravioletvisiblespectrophotometry Tử ngoại - khả kiến VNSĐ Viên nén bao phim chứa cao Sầu Viên nén bao phim chứa ICH đâu cao Sầu đâu DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Thành phần hóa học nhóm hoạt chất có Sầu đâu đƣợc nghiên cứu nƣớc Bảng 1.2 Thành phần hóa học nhóm hoạt chất có Sầu đâu đƣợc nghiên cứu giới Bảng 1.3 Một số dạng bào chế tiêu chuẩn kiểm nghiệm đối thực phẩm chức chứa cao dƣợc liệu Bảng 1.4 Phƣơng pháp định lƣợng rutin theo số Dƣợc điển 11 Bảng 1.5 Nghiên cứu định lƣợng hoạt chất dƣợc liệu Sầu đâu nƣớc giới nƣớc 13 Bảng 1.6 Phân vùng khí hậu theo WHO 16 Bảng 1.7 Cách tính tuổi thọ dựa vào chênh lệch tuổi thọ thực nghiệm 20 Bảng 2.1 Số lƣợng mẫu cho mục tiêu đề tài 22 Bảng 2.2 Danh mục chất chuẩn, hóa chất, dung môi 22 Bảng 2.3 Danh mục trang thiết bị 23 Bảng 2.4 Các tiêu kiểm nghiệm số lƣợng mẫu cho lô 29 Bảng 2.5 Kế hoạch lấy mẫu khảo sát độ ổn định phƣơng pháp cấp tốc 29 Bảng 2.6 Kế hoạch lấy mẫu khảo sát điều kiện dài hạn 30 Bảng 3.1 Kết thời gian lƣu mẫu chuẩn mẫu thử lô 34 Bảng 3.2 Kết khảo sát mẫu thử pH đệm 3,0 37 Bảng 3.3 Kết tính tƣơng thích hệ thống 38 Bảng 3.4 Diện tích đỉnh độ tinh khiết pic rutin 40 Bảng 3.5 Kết khảo sát độ xác ngày (n = 6) 43 Bảng 3.6 Kết độ xác liên ngày (n=18) 43 Bảng 3.7 Kết thẩm định độ 44 Bảng 3.8 Kết hàm lƣợng rutin viên (mg) 45 Bảng 3.9 Kết khảo sát độ đồng khối lƣợng 46 Bảng 3.10 Kết khảo sát độ rã 46 Bảng 3.11 Kết thử giới hạn nhiễm khuẩn 47 Bảng 3.12 Khảo sát độ ổn định phƣơng pháp cấp tốc 50 Bảng 3.13 Khảo sát độ ổn định phƣơng pháp thử dài hạn 51 Bảng 3.14 Ƣớc tính tuổi thọ theo hàm lƣợng rutin 55 Bảng 3.15 Ƣớc tính tuổi thọ theo hàm lƣợng rutin 56 DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH Hình 1.1 Cây Sầu đâu Hình 1.2.Sơ đồ bào chế viên nén chứa cao sầu đâu quy mơ 5000 viên 10 Hình 2.1 Viên nén bao phim chứa cao Sầu đâu 21 Hình 3.1 Sắc ký đồ (1) mẫu chuẩn (2) mẫu thử 35 Hình 3.2 Phổ UV (1) mẫu chuẩn (2) mẫu thử 35 Hình 3.3 Sắc ký đồ định tính mỏng 36 Hình 3.4 Kết tối ƣu hóa quy trình chiết phƣơng pháp siêu âm 38 Hình 3.5 Chồng sắc ký đồ tính tƣơng thích hệ thống mẫu chuẩn 39 Hình 3.6 Chồng sắc ký đồ tính tƣơng thích hệ thống mẫu thử 39 Hình 3.7 Sắc ký đồ đánh giá độ đặc hiệu rutin 39 Hình 3.8 Phổ UV (1) mẫu chuẩn (2) mẫu thử 40 Hình 3.9 Phổ 3D (1) mẫu thử (2) mẫu chuẩn 40 Hình 3.10 Đồ thị hồi qui tuyến tính diện tích pic nồng độ rutin 41 Hình 3.11 Sắc ký đồ LOD rutin 0,1µg/mL 42 Hình 3.12 Sắc ký đồ LOQ rutin 0,3 µg/mL 42 Hình 3.13 Hình ảnh viên thành phẩm chứa cao Sầu đâu 45 Hình 3.14 Sự tƣơng quan C t điều kiện cấp tốc – Lô 001 52 Hình 3.15 Sự tƣơng quan lnC t điều kiện cấp tốc – Lô 001 52 Hình 3.16 Sự tƣơng quan 1/C t điều kiện cấp tốc – Lô 001 53 Hình 3.17 Sự tƣơng quan C t điều kiện dài hạn – Lô 001 53 Hình 3.18 Sự tƣơng quan lnC t điều kiện dài hạn – Lô 001 54 Hình 3.19 Sự tƣơng quan 1/C t điều kiện dài hạn – Lô 001 54 Hình 3.20 Sự tƣơng quan lnC t điều kiện cấp tốc – Lơ 001 55 Hình 3.21 Sự tƣơng quan lnC t điều kiện dài hạn – Lô 001 56 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Bộ Y tế (2010), Dược điển việt nam IV, Nhà xuất Y học, Hà Nội,555-558, 786-787 Bộ Y tế (2017), Dược điển Việt Nam V, tập 1, NXB Y học, tr 848-849 Bộ Y tế (2012), Thông tƣ số 19/2012Bô Hƣớng dẫn việc công bố hợp quy công bố phù hợp quy định an toàn thực phẩm Bộ Y tế (2014), Thông tƣ số 43/2014 quy định việc quản lý thục phẩm chức Bộ Y tế (2018), Thông tƣ số 32/2018 quy định việc đăng ký thuốc V Văn Chi (2012), Từ điển thuốc Việt Nam, tập II, NXB Y học Hà Nội, 677-678 Vũ Văn Độ (2007), Tách chiết, tinh số hoạt chất tinh từ hạt neem (Azadirachta indica A Juss) trồng Việt Nam khả ứng dụng, Luận án tiến sĩ Sinh học, Viện Sinh học Nhiệt đới, Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam Phạm Hoàng Hộ (2006), Cây cỏViệt Nam, tập II, NXB Trẻ, tr 391 Chữ Thị Thanh Huyền, Nguyễn Thị Kiều Anh (2012), Luận văn thạc sĩ dược học: “Nghiên cứu định lượng acid oleanolic đinh lăng sắc ký lỏng hiệu cao”, Đại học dƣợc Hà Nội 10 Viện Dƣợc Liệu (2004), Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam, tập II, NXB Khoa học Kỹ thuật Hà Nội, 1116-1122 11 Trần Thị Phƣơng Linh (2012), Luận văn: “Xây dựng tiêu chuẩn sở cao dược liệu Râu Mèo (Herba Orthosiphonis spiralis”, Đại học Cần Thơ 12 Nguyễn Thanh Luân(2017), Khảo sát tác dụng hạ đường huyết cao chiết sầu đâu(Azadirachta indica A Juss) mơ hình thực nghiệm in vitro chuột nhắt trắng,Luận văn Dƣợc sĩ đại học, Trƣờng Đại học Y dƣợc Cần Thơ 13 V Thị Kiều Oanh, Thạch Trần Minh Uyên (2014), Nghiên cứu phân lập số limonoid Sầu đâu (Azadirachta indica A Juss Meliaceae), Trƣờng Đại học Y Dƣợc Cần Thơ 14 Lê Thị Diệp Phụng (2006), Đánh giá tác động chế phẩm viên nén từ nhân hạt Neem (Azadirachta Indica A Juss) lên Ngài gạo (Corcyra Cephalonica St.), Luận văn Đại học công nghệ sinh học, Trƣờng Đại học Nơng lâm Thành phố Hồ Chí Minh 15 Nguyễn Thị Ý Nhi (2012), Nghiên cứu thành phần limonoid neem Azadirachta indica A.Juss trồng Ninh Thuận, Luận án tiến sĩ Hoá học 2012, Trƣờng Đại học Khoa học tự nhiên, thành phố Hồ Chí Minh 16 V Thị Nhƣ Ngọc (2012), Luận văn “Xây dựng tiêu chuẩn sở cao dược liệu rau má (Herba Centellae asiaticae)”, Đại học Cần Thơ 17 Trương Thảo Ngọc (2017),Nghiên cứu bào chế viên nén bao phim hỗ trợ điều trị đái tháo đường từ Sầu đâu ăn (Azadirachta sp.) An Giang, Luận văn Dƣợc sĩ đại học, Trƣờng Đại học Y dƣợc Cần Thơ 18 Văn Thị Hồng Nguyệt (2005),Góp phần tìm hiểu thành phần hóa học neem Azadirachta indica, họ xoan (Meliaceae), Luận văn Thạc sĩ khoa học Hoá học, Trƣờng Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia Tp.HCM 19 Bùi Ngân Thanh Tạo (2018), Nghiên cứu xây dựng quy trình định lượng chất đánh dấu sầu đâu ăn (Azadirachta indica),Luận văn chuyên khoa cấp dƣợc học, Trƣờng Đại học Y Dƣợc Cần Thơ 20 Nguyễn Ngọc Nhã Thảo, Nguyễn Kim Nguyệt, Nguyễn Thị Ngọc Vân, Nguyễn Thị Trang Đài, Dƣơng Xuân Chữ (2018), “Nghiên cứu bào chế viên nén bao phim hỗ trợ điều trị đái tháo đường từ Sầu đâu (Azadirachta indica) An Giang” Tạp chí Y Dƣợc học Cần Thơ, số 13-14, tr 259-269 21 Trần Thị Thiên Thy (2017), Nghiên cứu bào chế cao đặc hỗ trợ điều trị đái tháo đường từ sầu đâu ăn (Azadirachta sp.) An Giang, Luận văn Đại học dƣợc học, trƣờng Đại học Y Dƣợc Cần Thơ 22 Trần Hoàng Yến (2019), Nghiên cứu xây dựng quy trình định lượng chất đánh dấu cao dược liệu chuẩn hóa Sầu đâu ăn Chuyên đề Dƣợc sĩ dƣợc học, Trƣờng Đại học Y Dƣợc Cần Thơ Tiếng Anh 23 Abalaka M, Oyewole OA, Kolawole AR, (2012), “Antibacterial activity of Azadirachta indica against some bacterial pathogens”, Advances in Life Sciences, 2(2), pp 5-8 24 Andrew P Jarvis, E David Morgan and Christine Edwards (1999), “Rapid Separation of Triterpenoids from Neem Seed Extracts”, Phytochem Anal, 10, pp 39–43 25 AOAC International (2012), "Appendix F: Guidelines for Standard Method Performance Requirements", AOAC Official Methods of Analysis, 1-1 26 ASEAN (2013), Asean guideline on stability study of drug product 27 Bansal P, Bansal R, Gupta V, (2010), “Antifertility effects of Azadirachtaindica (Neem)-A review”, Annals of Biological Research, 1(2), pp 108-113 28 Bhowmik D, Chiranjib, Yadav J, Tripathi KK, Kumar KPS (2010), “Herbal remedies of Azadirachta indica and its medicinal application”, Journal ofChemical and Pharmaceutical Research, 2(1), pp 62-67 29 British Pharmacopoeia 2016, iv-87-iv-88 30 FDA (2001), Guidance for Industry bioanalytical method validation 31 FDA (2012), Guidelines for the Validation of Chemical Methods for the FDA Foods Program 32 Gomase PV, Rangari VD, Verma PR (2011), “Phytochemical evaluation and hepatoprotective activity of fresh juice of young stem (tender) bark of Azadirachta indica A Juss”, International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences, 3(2), pp 55-59 33 ICH (2005), Q2(R1) Validation of analytical procedures: Text and methodology 34 Indian Pharmacopoeia 2018, 2524-2525 35 International Journal of Scientific and Research Publications, Volume 4, Issue 5, May 2014 “Medicinal and Therapeutical Potential of Neem (Azadirachta indica): A Review” 36 Jo S-H, Ka E-H, Lee H-S, Apostolidis E, Jang H-D and Kwon Y-I (2010), Comparison of Antioxidant Potential and Rat intestinal αGlucosidases inhibitory Activities of Quercetin, Rutin, and Isoquercetin, International Journal of Applied Research in Natural Products, 2(4), 52-60 37 Kazeem, M I., Dansu, T V., Adeola, S A (2013), “Inhibitory Effect ofAzadirachta indica A Juss Leaf Extract on the Activities of-Amylase and- Glucosidase”, Pakistan Journal of Biological Sciences, 16(21), pp 1358-1362 38 Kumar PS, Mishra D, Ghosh G, Panda CS (2010), “Biological action and medicinal properties of various constituent of Azadirachta indica (Meliaceae) an overview”, Annals of Biological Research, 1(3), pp 24-34 39 Mondali NK, Mojumdar A, Chatterje SK, Banerjee A, Datta JK, Gupta S, (2009), “Antifungal activities and chemical characterization of neem leaf extract on the growth of some selected fungal species in vitro culture 40 Muthulinggam Nishan, Partiban Subramanian (2014), Pharmacological and non pharmacological activity of Azadirachta indica (Neem) - A review”, International Journal of Biosciences, vol 5(6), pp 104-112 41 Murad N Abualhasan, Jumana Mansour, Nidal “Formulation and Development of a volum (2017) Validated UV- Spectrophotometric Analytical Method of Rutin Tablet, pages 42 Narasimhanaidu Kamalakkannan,PonnaianStanelyMainzen Prince(2006), Antihyperglycaemic and Antioxidant Effect of Rutin, a Polyphenolic Flavonoid, in Streptozotocin-Induced Diabetic Wistar Rats, Basic & Clinical Pharmacology & Toxicology, 98(1), 97-103 43 Pasupuleti Sreenivasa Rao, et al (2018), “Flavonol glycosides from Azadirachta Indica”, Drug Invention Today, 10(8), pp 1421-2426 44 Patil P, Patil S, Mane A, Verma S (2013), “Antidiabetic activity of alcoholic extract of neem (Azadirachta indica) root bark”, National Journal ofPhysiology,Pharmacy & Pharmacology, 3(2), pp 142146 45 Pongtip Sithisarn, Roongtawan Supabphol, Wandee Gritsanapan (2005), Comparison of free radical scavenging activity of siamese neem tree (Azadirachta indica A juss var siamensis Valeton) leaf extracts prepared by different methods of extraction, Med Princ Pract 2006, 15, 219–222 46 Pongtip Sithisarn, Wandee Gritsanapan (2005), Free radical scavenging activity and total flavonoid content of Siamese Neem tree leaf aqueous extractfrom different locations, Mahidol University Journal of Pharmaceutical Sciences, 32(1-2), 31-35 47 Pratima Tatke, Sonal Desai, Gabhe S Y (2014), "Isolation of Quercetin3-O-β-D-Glucoside from Azadirachta indica", American Journal ofPhytomedicine and Clinical Therapeutics, pp 870-876 48 Qionghua Wei, Cornelia M Keck, Rainer H Müller,European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics (2016) “ Preparation and tableting of long-term stable amorphous rutin using porous silica 49 Rao AR, Kumar SSU, Paramasivam TB, Kamalakshi S, Parashuraman AR, Shantha M, (1969), “Study of antiviral activity of tender leaves of margosa tree (Melia azadirachta) on vaccinia and variola virus - a preliminary report”, Indian Journal of Medical Research, 57, pp 495-502 50 Rasheed N.M.A., et al (2012), “Chemical marker compounds and their essential role in quality control of herbal medicines”, Annals ofPhytomedicine, 1(1), pp 1-8 51 Song Li, Wang Jin, Gao Quan, Ma Xiaojiang, et al (2018), "Simultaneous determination of five azadirachtins in the seed and leaf extracts of Azadirachta indica by automated online solid-phase extraction coupled with LC–Q-TOF–MS", Chemistry Central Journal, 12(1), pp 85 52 Tirupati Naga Adithya et al (2017), "A current review on Azadirachta indica (Neem)”, World Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences, (12), pp 249-269 53 Tiwari V, Darmani NA, Yue BY, Shukla D, (2010), “In vitro antiviral activity of neem (Azadirachta indica L.) bark extract against herpes simplex virus type-1 infection”, Phytotherapy Research, 24(8), pp 1132-1140 54 Vesna Kuntic et al (2007), “Isocratic RP-HPLC method for rutin determination in solid oral dosage forms”, Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 43, pp 718-721 55 Willy Shah, Nilan Rane1, M.B.Kekare2And Vikas Vaidya1 (2010), Estimation Of Two Bioactive Compounds From Azadiracta Indica A.Juss Leaves using HPLC, International Journal of Pharma and Bio Sciences, V1(2) 2010 56 Woong-Hyun Kim et al (2012), The methanol extract of Azadirachta indica A Juss leaf protects mice against lethal endotoxemia and sepsis, Biomol Ther, 20(1), 96-103 57 Yang Y, Zhang F (2008), "Ultrasound-assisted extraction of rutin and quercetin from Euonymus Sonochem, 15(4), pp 308-313 alatus (Thunb.) Sieb", Ultrason Phụ lục Khảo sát diều kiện sắc ký PL 1.1 Kết khảo sát tỷ lệ pha động mẫu chuẩn mẫu thử pH đệm 3,0 STT Thời gian lưu Tỷ lệ pha động Mẫu chuẩn 35:65 21,220 37:67 15,880 40:60 12,012 Mẫu thử 21,477 16,428 12,531 PL 1.2 Kết khảo sát quy trình xử lý mẫu thử Thể tích dung mơi (mL) 20 30 40 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 Thời gian chiết Nhiệt độ ( phút) 20 40 20 40 20 40 30 40 40 40 30 50 30 60 30 40 30 50 30 60 30 40 30 50 30 60 Số lần chiết 2 2 2 3 4 Diện tích đỉnh 143234 174478 175967 203229 232965 237959 233576 250366 398178 381316 374810 396909 336265 PL 1.3 Kết hiệu suất chiết phương pháp chiết siêu âm Lượng thêm Lượng tìm lại Hiệu suất chiết (µg/mL) (µg/mL) (%) 8,0 7,6 95,18 8,0 7,5 93,29 8,0 7,5 93,78 10,8 10,4 96,38 11,1 10,9 97,82 11,3 11,0 97,53 13,8 13,2 96,27 13,9 13,5 97,11 13,9 13,6 97,84 Trung bình 96,13 RSD (%) 0,88 Phụ lục Dữ liệu thẩm định quy trình định lượng PL 2.1 Kết khảo sát tính tương thích hệ thống mẫu chuẩn Chuẩn Rutin Thông số sắc ký Số đĩa Hệ số Hệ số lý dung bất thuyết lượng đối (N) (k') (As) Chiều Cao pick Hệ số phân giải 1,105 13876 29,977 6,517 1,118 13950 29,986 7836 6,531 1,122 14003 30,013 405866 7813 6,539 1,134 13979 30,026 16,651 406275 7827 6,569 1,129 13934 29,999 16,700 403629 7869 6,591 1,120 13894 30,154 16,592 406000 7819 6,542 1,121 13939 30,026 SD 0,071 1685,090 33,110 0,032 48,653 0,065 RSD 0,428 0,415 0,423 0,494 0,350 0,217 L1 L2 L3 L4 L5 L6 TB Thời gian lưu (tR) Dện tích đỉnh (S) 16,510 404610 7784 6,505 16,538 407839 7782 16,569 407780 16586 0,010 0,898 PL 2.2 Kết khảo sát tính tương thích hệ thống mẫu thử Thử Rutin Thơng số sắc ký Số đĩa Hệ số Hệ số lý dung bất huyết lượng đối (N) (k') (As) Chiều Cao pick Hệ số phân giải 0,849 14031 3,987 6,764 0,849 14015 4,033 6778 6,788 0,846 13975 4,003 514125 6804 6,795 0,842 13939 4,003 17,148 510943 6849 6,794 0,837 13943 4,014 17,166 508377 6871 6,803 0,835 13931 4,026 17,127 513984 6782 6,785 0,843 13972 4,011 SD 0,0036 3764,384 78,546 0,016 0,006 42,037 RSD 0,209 0,732 1,154 0,239 0,006 0,306 L1 L2 L3 L4 L5 L6 TB Thời gian lưu (tR) Dện tích đỉnh (S) 17,086 518823 6659 6,766 17,080 515756 6729 17,134 515879 17,149 0,017 0,422 PL 2.3 Kết khảo sát tính tuyến tính mẫu chuẩn Diện tích pic Nồng độ (µg/mL) S (lần 1) S (lần 2) S (tb) 2.5 110566 112169 111367.5 227358 223813 225585.5 10 446080 445343 445711.5 20 890071 890984 890527.5 30 1334868 1334762 1334815 40 1774762 1775597 1775180 50 2217387 2218327 2217857 PL.2.4 Bảng phân tích tuyến tính Fthực nghiệm 1307095,17 ta 1143,28 tb 2,61241 Phương trình tuyến tính Y = 44325X+ 2847 R2 0,999996 PL 2.5 Kết khảo sát độ xác ngày thứ (n=6) Khối lượng bột thuốc đem cân (g) 1,6009 1,6002 1,6079 1,6095 1,6095 1,6088 Hàm lượng trung bình RSD% (n=6) Mẫu thử Diện tích đỉnh(mAU.s) 407283 416310 427085 423110 427334 418070 Hàm lượng rutin (mg/viên) 0,4641 0,4746 0,4845 0,4795 0,4845 0,4740 0,4749 1,624 PL 2.6 Kết khảo sát độ xác ngày thứ (n=6) Khối lượng bột thuốc đem cân (g) 1,6005 1,6027 1,6042 1,6094 1,6068 1,6069 Hàm lượng trung bình RSD% (n=6) Mẫu thử Diện tích đỉnh(mAU.s) 404310 409302 511399 420559 411369 4415211 Hàm lượng rutin (mg/viên) 0,4632 0,4683 0,4702 0,4792 0,4695 0,4738 0,4707 1,144 Phụ lục Ước tính tuổi thọ chế phẩm PL 3.1 Sự tương quan lnC t điều kiện lão hóa cấp tốc Lơ – 002 PL 3.2 Sự tương quan lnC t điều kiện lão hóa cấp tốc Lơ – 003 lnC t (tháng) PL 3.3 Sự tương quan lnC t điều kiện dài hạn Lô – 002 4.61 4.6 4.59 4.58 4.57 4.56 y = -0.0078x + 4.6045 R² = 0.9975 4.55 4.54 4.53 PL 3.4 Sự tương quan lnC t điều kiện dài hạn Lô – 003 4.61 4.6 4.59 4.58 4.57 4.56 y = -0.0083x + 4.6039 R² = 0.9981 4.55 t (tháng) 4.54 4.53 ... tiêu chuẩn kiểm nghiệm viên nén bao phim thực phẩm chức ch? ?a cao Sầu đâu ăn (Azadirachta indica) Khảo sát độ ổn định viên nén bao phim thực phẩm chức ch? ?a cao Sầu đâu ăn theo hƣớng dẫn ASEAN 3... đƣờng, thực đề tài: ? ?Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn kiểm nghiệm xác định hạn dùng viên nén bao phim thực phẩm chức ch? ?a cao Sầu đâu ăn (Azadirachta indica) ” với mục tiêu cụ thể nhƣ sau: Xây dựng tiêu. .. TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan dƣợc liệu viên nén ch? ?a cao Sầu đâu 1.1.1 Dƣợc liệu Sầu đâu Cây Sầu đâu có tên khoa học Azadirachta indica A Juss gọi Melia indica (A Juss), Melia azadirachta