Nghiên cứu độ ổn định của viên nén bao phim chứa paracetamol, phenylephrin, cafein và acid ascorbic

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CẦN THƠ NGÔ THỊ PHƯƠNG ÁNH NGHIÊN CỨU ĐỘ ỔN ĐỊNH CỦA VIÊN NÉN BAO PHIM CHỨA PARACETAMOL, PHENYLEPHRIN, CAFEIN VÀ ACID ASCORBIC LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC CẦN THƠ – 2019 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CẦN THƠ NGÔ THỊ PHƯƠNG ÁNH NGHIÊN CỨU ĐỘ ỔN ĐỊNH CỦA VIÊN NÉN BAO PHIM CHỨA PARACETAMOL, PHENYLEPHRIN, CAFEIN VÀ ACID ASCORBIC Chuyên ngành: Kiểm nghiệm Thuốc Độc chất Mã số: 60.72.04.10.CK LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC Người hướng dẫn khoa học: TS Lê Hữu Phước TS Đỗ Châu Minh Vĩnh Thọ CẦN THƠ – 2019 LỜI CẢM ƠN Trong thời gian nghiên cứu vừa qua, em nhận nhiều quan tâm, giúp đỡ tận tình từ q Thầy Cơ, gia đình bạn bè Em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến TS Lê Hữu Phước quý Thầy Cơ khoa Dược, đặc biệt Bộ mơn Hóa phân tích – Kiểm nghiệm – Độc chất, Trường Đại học Y Dược Cần Thơ tạo điều kiện thuận lợi để em làm việc phịng thí nghiệm hồn thành nghiên cứu Đặc biệt, em xin tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến TS Đỗ Châu Minh Vĩnh Thọ hết lòng hướng dẫn, truyền đạt kiến thức, kinh nghiệm cho em suốt trình thực đề tài Cuối cùng, em xin cảm ơn gia đình bạn bè động viên, giúp đỡ để em hồn thành luận văn tốt nghiệp LỜI CAM ĐOAN Luận văn cơng trình nghiên cứu cá nhân tơi, thực hướng dẫn khoa học TS Lê Hữu Phước TS Đỗ Châu Minh Vĩnh Thọ Những số liệu kết quả, kết luận nghiên cứu trình bày luận văn hồn tồn trung thực Tơi xin hoàn toàn chịu trách nhiệm lời cam đoan Học viên Ngô Thị Phương Ánh MỤC LỤC Trang phụ bìa Lời cảm ơn Lời cam đoan Mục lục Danh mục chữ viết tắt Danh mục bảng Danh mục hình vẽ, biểu đồ ĐẶT VẤN ĐỀ Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Phương pháp nghiên cứu độ ổn định thuốc 1.2 Tổng quan Paracetamol (PAR) 1.3 Tổng quan Phenylephrin HCl (PHE) 10 1.4 Tổng quan acid ascorbic (ASC) 11 1.5 Tổng quan Cafein khan 14 1.6 Tổng quan viên nén bao phim chứa Paracetamol, Phenylephrin, cafein Acid ascorbic 17 1.7 Phương pháp định lượng hoạt chất chế phẩm nghiên cứu …………………………………………………………………… 18 1.8 Tổng quan phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao 19 1.9 Thẩm định quy trình phân tích phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao 21 Chương ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 24 2.1 Đối tượng nghiên cứu 24 2.2 Hoá chất thuốc thử - trang thiết bị nghiên cứu 24 2.3 Phương pháp nghiên cứu 26 Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 32 3.1 Xây dựng thẩm định quy trình định lượng đồng thời paracetamol, phenylephrin, cafein acid ascorbic viên nén bao phim phương pháp sắc ký lỏng với đầu dò dãy diod quang 32 3.2 Nghiên cứu độ ổn định điều kiện lão hóa cấp tốc 44 3.3 Nghiên cứu độ ổn định điều kiện theo dõi dài hạn 48 Chương BÀN LUẬN 52 4.1 Khảo sát điều kiện sắc ký thích hợp 52 4.2 Khảo sát quy trình xử lý mẫu 54 4.3 Thẩm định quy trình phân tích 54 4.4 Ứng dụng quy trình định lượng để kiểm tra độ ổn định thuốc 56 4.5 Ước lượng tuổi thọ thuốc theo hướng dẫn ICH 52 KẾT LUẬN 61 KIẾN NGHỊ 62 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT HOA, VIẾT TẮT Chữ viết tắt Viết nguyên ACN Acetonitrile ASC Acid ascorbic BYT Bộ Y Tế CAF Cafein DAD Diode array detectors DĐVN V Dược điển Việt Nam V HPLC High Performance Liquid Chromatography Nghĩa tiếng Việt Đầu dò dãy diod quang Sắc ký lỏng hiệu cao LOD Limit of detection Giới hạn phát LOQ Limit of quantitation Giới hạn định lượng MAO Enzym monoaminoxidase PAR Paracetamol PDA Photodiode Array Detector PHE Phenylephrine SAL Acid salicylic SKĐ Sắc ký đồ Đầu dò dãy diod quang DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Nghiên cứu độ ổn định điều kiện bảo quản Bảng 1.2 Tần số thử nghiệm Bảng 2.1 Thông tin chất chuẩn đối chiếu……………………………………25 Bảng 2.2 Chỉ tiêu chất lượng thành phẩm thời điểm đánh giá 26 Bảng 2.3 Điều kiện bảo quản thời gian lấy mẫu 27 Bảng 3.1 Chương trình vận hành gradient 32 Bảng 3.2 Kết khảo sát tính phù hợp hệ thống mẫu viên nén bao phim (n=7) 34 Bảng 3.3 Kết khảo sát tính phù hợp hệ thống mẫu hỗn hợp chuẩn PAR, ASC, PHE, CAF (n=7) 35 Bảng 3.4 Độ tinh khiết pic độ tương thích phổ UV-Vis mẫu thử so với mẫu chuẩn 38 Bảng 3.5 Kết khảo sát tính tuyến tính, miền giá trị 39 Bảng 3.6 Kết khảo sát độ qui trình phân tích 42 Bảng 3.7 Kết độ xác ngày liên ngày 43 Bảng 3.8 Tóm tắt thơng tin lơ thuốc quy mơ pilot cho khảo sát độ ổn định điều kiện cấp tốc 44 Bảng 3.9 Kết nghiên cứu độ ổn định điều kiện cấp tốc 45 Bảng 3.10 Ước lượng tuổi thọ thuốc theo số k 47 Bảng 3.11 Ước lượng tuổi thọ theo quy tắc Van’t Hoff 47 Bảng 3.12 Tóm tắt thơng tin lô thuốc quy mô pilot cho khảo sát độ ổn định điều kiện dài hạn 48 Bảng 3.13 Kết nghiên cứu độ ổn định điều kiện dài hạn 49 Bảng 3.14 Ước lượng tuổi thọ thuốc theo số k điều kiện dài hạn 50 Bảng 4.1 Sự thay đổi hàm lượng bốn hoạt chất điều kiện cấp tốc 57 Bảng 4.2 Kết so sánh phương pháp ước lượng tuổi thọ 59 DANH MỤC CÁC HÌNH, SƠ ĐỒ VÀ ĐỒ THỊ Hình 1.1 Cấu trúc phân tử paracetamol Hình 1.2 Cấu trúc phân tử phenylephrin HCl 10 Hình 1.3 Cấu trúc phân tử acid ascorbic 11 Hình 1.4 Cấu trúc phân tử cafein 14 Hình 1.5 Sơ đồ cấu tạo máy sắc ký lỏng hiệu cao (UPLC) 20 Hình 3.1 Sắc ký đồ 2D 3D mẫu thử viên nén bao phim 33 Hình 3.2 Sơ đồ qui trình chiết 34 Hình 3.3 Sắc ký đồ mẫu chuẩn tiêm lần liên tiếp 36 Hình 3.4 Sắc ký đồ mẫu thử tiêm lần liên tiếp 36 Hình 3.5 Sắc ký đồ mẫu placebo (1), mẫu pha động (2), dung môi pha mẫu (3), mẫu hỗn hợp chuẩn (4), mẫu thử (5), mẫu thử thêm chuẩn (6) 37 Hình 3.6 SKĐ kiểm tra độ tinh khiết pic PAR mẫu viên nén bao phim với đầu dò dãy diod quang (b) độ tinh khiết pic; (c) phổ UV PAR 38 Hình 3.7 Sắc ký đồ mẫu chuẩn (a) mẫu chuẩn pha loãng điều kiện nhiệt độ (b), ánh sáng (c), ảnh hưởng H2O2 (d) (e) sắc ký đồ 3D mẫu pha loãng H2O2 39 Hình 3.8 Phương trình đường thẳng hồi qui phenylephrine, acid ascorbic, paracetamol cafein 40 Hình 3.9 Sắc ký đồ minh họa tính tuyến tính PHE, ASC, PAR, CAF mức nồng độ chọn 40 Hình 3.10 Sắc ký đồ mẫu chuẩn 0,13ppm (a) mẫu trắng giả lập (b) 41 Hình 3.11 Sắc ký đồ khảo sát độ 42 Hình 3.12 Sắc ký đồ thể độ xác liên ngày viên nén bao phim nghiên cứu chứa PHE, ASC, PAR, CAF 43 Hình 3.13 Đồ thị biểu diễn tương quan % hàm lượng hoạt chất [C] theo thời gian (t) điều kiện cấp tốc 46 Hình 3.14 Đồ thị biễu diễn tương quan % hàm lượng hoạt chất Log(C/Co) theo thời gian (t) điều kiện cấp tốc 46 Hình 3.15 Đồ thị biễu diễn tương quan % hàm lượng hoạt chất [C] theo thời gian (t) điều kiện dài hạn 50 Hình 4.1 Đường hồi quy hàm lượng – ước lượng tuổi thọ bốn hoạt chất nghiên cứu (PHE, ASC, PAR, CAF)……………………………………………… 58 Phụ lục 1.3 SKĐ minh họa ảnh hưởng tỉ lệ pha động Phụ lục 1.4 SKĐ minh họa ảnh hưởng yếu tố gây sốc chất oxi hóa mạnh dung dịch H2O2 30% Phụ lục Thẩm định quy trình định lượng Phụ lục 2.1 SKĐ kiểm tra độ tinh khiết pic CAF mẫu viên nén bao phim với đầu dò dãy diod quang (b) độ tinh khiết pic; (c) phổ UV CAF Phụ lục 2.2 SKĐ kiểm tra độ tinh khiết pic PHE mẫu viên nén bao phim với đầu dò dãy diod quang (b) độ tinh khiết pic; (c) phổ UV PHE Phụ lục 2.3 SKĐ kiểm tra độ tinh khiết pic ASC mẫu viên nén bao phim với đầu dò dãy diod quang (b) độ tinh khiết pic; (c) phổ UV ASC Phụ lục 2.4 Kết tính tương thích hệ thống hỗn hợp chuẩn PHE Lần tR S Rs k' As N 1.14 363470.2 2.25 1.102 1.2 1649 1.14 363870.2 2.24 1.102 1.17 1654 1.14 363070.2 2.22 1.104 1.2 1648 1.13 362670.2 2.29 1.103 1.16 1647 1.14 363250.2 2.28 1.100 1.2 1658 1.15 363270.2 2.28 1.105 1.2 1658 1.14 363270.2 2.27 1.090 1.2 1642 TB 1.14 363267 2.26 1.101 1.19 1650.86 RSD 0.51% 0.10% 1.13% 0.46% 1.46% 0.36% ASC PAR Lần tR S Rs k' As N 3.4 1102396 6.51 2.373 1.1 2450 3.39 1067121 2.340 1.1 2473 3.4 6.45 2.333 1.13 2488 3.4 1089726 6.38 2.339 1.1 2404 3.4 1091619 6.51 2.340 1.12 2417 3.37 1101650 6.61 2.345 1.1 2481 3.42 1099598 6.57 2.347 1.1 2423 TB 3.40 1092018 6.51 2.35 1.11 2448.00 RSD 0.44% 1.22% 1.27% 0.56% 1.13% 1.38% Lần tR S Rs k' As N 4.47 3939940 3.68 2.347 1.1 3092 4.5 3868690 3.65 2.347 1.14 3156 4.47 3872583 3.6 2.347 1.1 3162 4.46 3865992 3.6 2.347 1.12 3196 4.5 3857474 3.63 2.347 1.1 3262 4.37 3872520 3.62 2.347 1.1 3113 4.45 3860964 3.68 2.347 1.1 3098 TB 4.46 3876880 3.64 2.347 1.11 3154.14 RSD 0.99% 0.73% 0.94% 2.347 1.42% 1.93% CAF Lần tR S 7.13 16214564 7.11 16156430 7.11 Rs k' As N 2.347 0.99 20400 10.56 2.347 0.99 19818 16122691 10.67 2.347 19910 7.17 16093959 10.26 2.347 0.98 19732 7.12 16065854 10.52 2.347 19709 7.13 16077503 10.51 2.347 19340 7.07 16070474 10.2 2.347 19493 TB 7.12 16114496 10.45 2.347 0.99 19771.71 RSD 0.42% 0.34% 1.75% 2.347 0.79% 1.71% Phụ lục 2.5 Kết tính tương thích hệ thống hỗn hợp thử PHE Lần tR S Rs k' As N 1.16 5278912 2.21 1.06 0.900 1862.5 1.16 5321912 2.21 1.06 0.900 1832.8 1.16 5328912 2.21 1.06 0.900 1832.7 1.15 5338912 2.26 1.06 0.900 1832.8 1.16 5321912 2.21 1.06 0.900 1852.4 1.14 5318912 2.17 1.06 0.900 1862.6 1.16 5328912 2.21 1.061 0.902 1832.9 TB 1.16 5319769 2.21 1.06 0.900 1844.10 RSD 0.68% 0.36% 1.18% 0.04% 0.06% 0.79% ASC PARA Lần tR S Rs k' As N 3.41 965055 2.36 2.58 1.1 2456 3.41 979141 2.34 2.53 1.1 2467 3.47 981916 2.3333 2.54 1.1 2489 3.41 978918 2.31 2.57 1.12 2456 3.41 996582 2.35 2.51 1.1 2448 3.41 996575 2.363 2.54 1.1 2448 3.41 996574 2.35333 2.54 1.1 2448 TB 3.42 984965.86 2.34 2.54 1.10 2458.86 RSD 0.66% 1.23% 0.78% 0.93% 0.69% 0.61% Lần tR S Rs k' As N 4.49 13896880 3.67 3.42 1.1 3134 4.47 13836880 3.64 3.45 1.1 3194 4.48 13886880 3.64 3.39 1.12 3114 4.49 13876980 3.64 3.42 1.1 3174 4.42 13845880 3.64 3.41 1.13 3154 4.47 13736880 3.63 3.45 1.1 3134 4.48 13826880 3.64 3.4 1.1 3174 TB 4.47 13843894.29 3.64 3.42 1.11 3154.00 RSD 0.54% 0.39% 0.34% 0.68% 1.13% 0.90% CAF Lần tR S 7.1 12547001 7.16 Rs As N 10.78 6.08667 1.1 21064 12546001 10.62 6.12667 1.1 21412 7.21 12567001 10.45 6.0767 1.12 20685 7.18 12547001 10.55 6.05 1.1 20608 7.18 12567001 10.65 6.08667 1.1 20651 7.18 12547001 10.49 6.08667 1.1 20651 7.19 12447001 10.26 6.08667 1.1 20651 TB 7.17 6.09 1.10 20817.43 RSD 0.49% 0.37% 0.7% 1.47% 12538286.71 10.54 0.33% 1.57% k' Phụ lục Khảo sát độ ổn định Phụ lục 3.1 Độ ổn định lão hóa cấp tốc sau tháng lô 001  Với CAF Stability Study: Response versus Month, Batch Factor Information Factor Type Number of Levels Levels Batch Fixed 3 Model Selection with α = 0,25 Source DF Seq SS Seq MS F-Value P-Value Month 88,0996 88,0996 764,48 0,000 Batch 0,6052 0,3026 2,63 0,126 Month*Batch 0,4433 0,2217 1,92 0,202 Error 1,0372 0,1152 Total 14 90,1853 Terms in selected model: Month Batch Month*Batch Model Summary S R-sq R-sq(adj) R-sq(pred) 0,339472 98,85% 98,21% 96,12% Coefficients Term Coef SE Coef T-Value P-Value VIF Constant 99,838 0,152 Month 657,62 0,000 -0,5712 0,0207 -27,65 0,000 1,00 -0,522 0,215 -2,43 0,038 4,00 0,312 0,215 1,45 0,180 4,00 0,210 0,215 0,98 0,354 * 0,0462 0,0292 1,58 0,148 4,00 -0,0524 0,0292 -1,79 0,106 4,00 0,0062 0,21 0,836 * Batch Month*Batch 0,0292 Regression Equation Batch Response = 99,316 - 0,5250 Month Response = 100,150 - 0,6237 Month Response = 100,048 - 0,5650 Month Shelf Life Estimation Lower spec limit = 90 Shelf life = time period in which you can be 95% confident that at least 50% of response is above lower spec limit Batch Shelf Life 16,347 15,208 16,472 Overall 15,208  Với PHE Stability Study: Response versus Month, Batch Factor Information Factor Type Number of Levels Levels Batch Fixed 3 Model Selection with α = 0,25 Source DF Seq SS Seq MS F-Value P-Value Month 113,374 113,374 500,76 0,000 Batch 4,056 2,028 8,96 0,007 Month*Batch 2,919 1,459 6,45 0,018 Error 2,038 0,226 Total 14 122,386 Terms in selected model: Month Batch Month*Batch Model Summary S R-sq R-sq(adj) R-sq(pred) 0,475817 98,34% 97,41% 94,39% Coefficients Term Coef SE Coef T-Value P-Value VIF Constant 103,181 0,213 484,89 0,000 Month -0,6480 0,0290 -22,38 0,000 1,00 Batch -1,343 0,301 -4,46 0,002 4,00 1,429 0,301 4,75 0,001 4,00 -0,087 0,301 -0,29 0,780 * 0,1123 0,0410 2,74 0,023 4,00 -0,1383 0,0410 -3,38 0,008 4,00 0,0260 0,63 0,541 * Month*Batch 0,0410 Regression Equation Batch Response = 101,838 - 0,5357 Month Response = 104,610 - 0,7863 Month Response = 103,094 - 0,6220 Month Fits and Diagnostics for Unusual Observations Obs Response Fit Resid Std Resid 11 98,420 97,533 0,887 2,23 14 94,560 95,174 -0,614 -2,04 R R R Large residual Shelf Life Estimation Lower spec limit = 90 Shelf life = time period in which you can be 95% confident that at least 50% of response is above lower spec limit Batch Shelf Life 19,647 17,182 19,026 Overall 17,182  Với PAR Stability Study: Response versus Month, Batch Factor Information Factor Type Number of Levels Levels Batch Fixed 3 Model Selection with α = 0,25 Source DF Seq SS Seq MS F-Value P-Value Month 120,841 120,841 179,91 0,000 Batch 31,546 15,773 23,48 0,000 Month*Batch 5,030 2,515 3,74 0,066 Error 6,045 0,672 Total 14 163,463 Terms in selected model: Month Batch Month*Batch Model Summary S R-sq R-sq(adj) R-sq(pred) 0,819548 96,30% 94,25% 86,48% Coefficients Term Coef SE Coef T-Value P-Value VIF Constant 102,646 0,367 280,06 0,000 Month -0,6690 0,0499 -13,41 0,000 1,00 Batch 2,186 0,518 4,22 0,002 4,00 -3,022 0,518 -5,83 0,000 4,00 0,836 0,518 1,61 0,141 * Month*Batch -0,0860 0,0705 -1,22 0,254 4,00 0,1927 2,73 0,023 4,00 -0,1067 0,0705 -1,51 0,165 * 0,0705 Regression Equation Batch Response = 104,832 - 0,7550 Month Response = 99,624 - 0,4763 Month Response = 103,482 - 0,7757 Month Fits and Diagnostics for Unusual Observations Obs Response Fit 13 94,580 Resid Std Resid 95,772 -1,192 -2,30 R R Large residual Shelf Life Estimation Lower spec limit = 90 Shelf life = time period in which you can be 95% confident that at least 50% of response is above lower spec limit Batch Shelf Life 17,144 16,454 15,295 Overall 15,295  Với ASC Stability Study: Response versus Month, Batch Factor Information Factor Type Number of Levels Levels Batch Fixed 3 Model Selection with α = 0,25 Source DF Seq SS Seq MS F-Value P-Value Month 215,097 215,097 67,38 0,000 Batch 85,730 42,865 13,43 0,002 Month*Batch 5,804 2,902 0,91 0,437 Error 28,732 3,192 Total 14 335,364 Source DF Seq SS Seq MS F-Value P-Value Month 215,10 215,097 68,51 0,000 Batch 85,73 42,865 0,001 Error 11 34,54 3,140 Total 14 335,36 13,65 Terms in selected model: Month Batch Model Summary S R-sq R-sq(adj) R-sq(pred) 1,77192 89,70% 86,89% 79,67% Coefficients Term Coef SE Coef T-Value P-Value VIF Constant 100,829 0,792 127,24 0,000 Month -0,893 0,108 -8,28 0,000 1,00 3,012 0,647 4,66 0,001 1,33 -0,176 0,647 -0,27 0,791 1,33 -2,836 0,647 -4,38 0,001 * Batch Regression Equation Batch Response = 103,84 - 0,893 Month Response = 100,65 - 0,893 Month Response = 97,99 - 0,893 Month Shelf Life Estimation Lower spec limit = 90 Shelf life = time period in which you can be 95% confident that at least 50% of response is above lower spec limit Batch Shelf Life 13,265 10,109 7,3350 Overall 7,3350 ... ? ?Nghiên cứu độ ổn định viên nén bao phim chứa paracetamol, phenylephrin, cafein acid ascorbic? ?? Với mục tiêu sau: Xây dựng thẩm định quy trình định lượng đồng thời paracetamol, phenylephrin, cafein. ..BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CẦN THƠ NGÔ THỊ PHƯƠNG ÁNH NGHIÊN CỨU ĐỘ ỔN ĐỊNH CỦA VIÊN NÉN BAO PHIM CHỨA PARACETAMOL, PHENYLEPHRIN, CAFEIN VÀ ACID ASCORBIC Chuyên... cafein acid ascorbic có viên nén bao phim Khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ, độ ẩm điều kiện cấp tốc điều kiện dài hạn lên viên nén bao phim 3 Chương 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Phương pháp nghiên cứu độ ổn