Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn chất lượng, xác định LD50 và tác dụng lên thần kinh trung ương trên thực nghiệm của siro laroxen

Bộ Quốc Phòng HọcViện Quân Y ****** Phạm văn Vợng Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn chất lợng, xác định LD50 tác dụng lên thần kinh trung ơng thực nghiệm siro laroxen (Khoá luận tốt nghiệp dợc sĩ đại học khoá 1999 2005) Cán hớng dÉn: TS NguyÔn Minh ChÝnh LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Nội dung trình bày gồm: Đặt vấn đề Tổng quan tài liệu Vật liệu phơng pháp nghiên cứu Kết bàn luËn KÕt luËn LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Đặt vấn đề - Thuốc tâm thần kinh ®ãng vai trß quan träng - Thuèc cã nguån gèc hoá dợc có nhiều tác dụng phụ - Gần đây, Học Viện Quân Y đà điều chế đợc Rotundin sulfat Đây nguyên liệu cho nhiều dạng thuốc nh: thuốc tiêm, viên nén, viên nang, siro Trong dạng siro đợc bào chế Trung tâm nghiên cứu ứng dụng sản xuất thuốc - Học viện Quân Y có tên siro Laroxen - So với dạng bào chế khác, siro dạng thuốc phổ biến thích hợp với ngời già trẻ nhỏ Từ ý nghĩa khoa học thực tiễn nói trên, tiến hành đề tài nhằm mục tiêu sau: Xây dựng tiêu chuẩn chất lợng siro Laroxen Xác định LD50 xác định tác dụng giảm đau, gây ngủ, trấn tĩnh chống co giật thuốc động vËt thùc nghiÖm LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Phần i - Tổng quan 1.1 Cây bình vôi (stephania lour Menispermaceae) 1.1.1 Đặc điểm thực vật Dây leo, thân xoắn nhẵn, thờng xanh, sống lâu năm, rễ củ phình to ảnh 1: Cây Bình vôi ( Stephania glabra (Roxb) – Menispermaceae) LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 1.1.2 Phân bố, trồng hái chế biến - Việt Nam phân bố tỉnh nh: Hà Tây, Hoà Bình, Hà Giang, Tuyên Quang, Phú Thọ, Phú Yên, Ninh Thuận v.v [17], [7], [6] - Bình vôi hạt phần đầu củ - Khi thu củ đem cạo vỏ nâu đen, thái lát mỏng, phơi sấy khô đem chiết Rotundin 1.1.3 Bộ phận dùng thành phần hoá học - Bộ phận dùng: Dợc liệu củ bình vôi đà đợc phơi sấy khô [7], [6] - Thành phần hoá học: Củ bình vôi có nhiều alcaloid có Rotundin (Ltetrahydropalmatin) alcaloid khác nh: Stepharin, Cycleanin, Ngoài có tinh bột, đờng khử LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 1.2 Hỵp chÊt Rotundin Rotundin sulfat 1.2.1 Hợp chất Rotundin 1.2.1.1 Đặc ®iĨm cÊu tróc ho¸ häc.[3], [7], [23], [7] CTPT: C21H25NO4 CTCT: KLPT: 355,43 TKH: 5,8,13,13-tetrahydro-2,3,9,10- tetramethoxy6H dibenzo [a,g] quinolizine (CÊu tróc nhãm isoquinolin) LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 1.2.1.2 Các thông số hoá lý [23], [7] - Bột kết tinh trắng vàng, không mùi không vị - Độ tan: Không tan nớc, tan Cloroform, dễ tan acid loÃng - Điểm chảy (mp): 141- 1440 C - - Phổ tử ngoại: có đỉnh hÊp thơ t¹i 281nm LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 1.2.1.3 ChiÕt xuÊt vµ tinh chÕ Rotundin ChiÕt xuất, tinh chế Rotundin đạt hàm lợng 90 - 95% sản phẩm trung gian tinh chế Rotundin tinh khiết đạt hàm lợng 99% [7], [20], [31] 1.2.1.4 T¸c dơng sinh häc Rotundin (L- tetrahydropalmatin) cã t¸c dơng an thần, gây ngủ v.v [20], [27] 1.2.2 Hợp chất Rotundin sulfat 2.2.2.1 Đặc điểm cấu trúc hoá học [7], [9], [10], [8] - CTPT: C21 H25 NO4.H2 SO4 - CTCT: - KLPT: 453,51 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 1.2.2.2 Các thông số lý, hoá [7], [9], [10], [8] - Tinh thể màu trắng ánh vàng, không mùi vị chát - Độ tan: dễ tan níc, tan Methanol, Ýt tan Ethanol cao độ, không tan Ether, Chloroform - Điểm chảy ( t c) : 213 221 C - Năng xuất quay cực riêng (25D): không dới - 210 Tạp chất liên quan: không 0,5% - pH (dung dÞch 1% níc): 1,5  2,5 - Phỉ tư ngoại: có đỉnh cực đại 281nm - Định lợng: Rotundin sulfat phải chứa từ 98,0 % đến 101,0% C24H25NO4.H2SO4 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 1.2.2.3 §iỊu chế Rotundin sulfat [7], [9], [10], [8] Lần đầu tiên, qui trình sản xuất Rotundin sulfat đợc Học viện Quân Y công bố (2001): Nguyên tắc: Rotundin + Acid sulfuric Muối Rotundin sulfat Sơ đồ qui trình: Hệ dung môi H2 SO4 Rotundin dd đồng tan đun nóng xúc tác, nhiệt độ Lạnh, kết tinh Phản ứng Lọc rửa, loại t¹p Tinh thĨ Tinh thĨ SÊy nhĐ LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com B¶ng 5: KÕt định tính Siro Laroxen Phản ứng + + + + + + + + + + + + MÉu Nh vËy c¸c mẫu có chứa hoạt chất Rotundin sulfat phản ứng 1, 2, 3, đợc dùng để định tính hoạt chất có Siro Laroxen 3.1.6 Phổ [UV] Siro Laroxen Kết quét phổ tử ngoại tõ bíc sãng 200 - 800 nm cđa Siro Laroxen pha lo·ng nh sau: LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 1.0 Abs 0.75 0.5 281.2 0.25 0.0 200.0 225.0 250.0 Quang Pho 275.0 300.0 325.0 350.0 375.0 400.0 nm Hình 2: Phổ tử ngoại [UV] Siro Laroxen 3.1.7 Kết định lợng Siro Laroxen 3.1.7.1 Xây dựng ®êng chuÈn LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Bảng 6: độ hấp thụ E dung dịch Rotundin sulfat siro pha loÃng Các thông Nồng độ dung dÞch (g/ml) 20 30 40 50 60 70 Sè ETB RSD% 1% E1cm 0,2423 0,3627 0,4812 0,57 1,6 121,15 120,9 0,6072 0,7315 0,8547 1,48 0,81 0,28 1,66 120,3 121,44 121,92 122,1 1% E1cm 121,30 r 0,998 PT E = 0,01183 C + 0,01425 Từ kết này, tiến hành xây dựng đờng chuẩn định Rotundin sulfat có Siro Laräxen LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 20 30 40 50 60 70 Hinh 3: ®êng chuÈn Rotundin sulfat siro pha lo·ng KÕt qu¶ ë b¶ng hình cho thấy: Độ hấp thụ nồng độ dung dịch Rotundin sulfat siro pha loÃng (khoảng nồng độ từ 20 đến 70 g/ml) có mối tơng quan tuyến tính chặt chẽ với hệ số tơng quan r b»ng 0,998 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 3.1.7.2 Kết qủa định lợng Bảng 7: Hàm lượng Rotundin sulfat Siro Laroxen Các mẫu đo Các th«ng MÉu MÉu MÉu MÉu MÉu ? 0,7202 0,7147 0,7252 0,7292 0,7257 RSD% 1,32 0,72 1,02 1,37 0,59 Hàm lượng 99,46 98,68 100,16 100,73 100,17 số (%) Kết bảng cho thấy: + Hàm lượng mẫu đạt từ 98 đến 101% Như tiêu chuẩn hàm lượng Rotundin sulfat phải đạt từ 95 % đến 105 % so với hàm lượng ghi nhÃn LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 3.1.8 Kết qủa xác định sai số đóng gói Kết thể bảng sau: Bảng 8: Thể tích đơn vị đóng gói Siro Laroxen MÉu ®o ThĨ tÝch (ml) 101,3 98,7 RSD% 1,78 0,89 TB 99,5 99,8 1,34 NhËn xÐt: Trong lần đo mẫu, lọ thể tích Siro Laroxen nhỏ 95 ml lớn 110 ml Như tiêu chuẩn sai số đóng gói: thể tích Siro Laroxen lä tõ : 97 - 107ml 3.1.9 ®é KÕt quả: Các mẫu có độ tơng đơng với hỗn dịch chuẩn đối chiếu số I LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 3.2 Kết nghiên cứu LD50 cđa Siro Laroxen Sau 72 giê sè l­ỵng cht chết sống lô nghiên cứu trình bày bảng Bảng 9: Kết xác định LD50 LiỊu Sè cht chÕt Sè cht sèng L« n (mg/kg) (72 giê) (72 giê) 10 120 10 10 240 10 10 360 10 10 480 10 10 600 10 NhËn xét: Không có chuột bị chết lô nghiên cứu LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 3.3 KÊT qủa xác định tác dụng dợc lý Siro Laroxen 3.3.1 Tác dụng gây ngủ Siro Laroxen chuột nhắt trắng Chuột nhắt trắng chia làm lô: Lô chứng, lô thử lô sánh, kết qủa sau: Bảng 10: Thời gian gây ngủ kéo dài giấc ngủ lô nghiên cứu Lô thí nghiệm n NMSL 10 Thời gian gây ngđ Thêi gian kÐo dµi giÊc (phót) ngđ (phót) 0 Siro Laroxen 12 8,75  1,91 48,67  16,50 12 7,83  3,46 Seduxen p 0,05 50,17  16,72 p 0,05 - Siro Laroxen có tác dụng gây ngủ rõ rệt kéo dài giấc ngủ - Tác dụng gây ngủ kéo dài giấc so sánh với Seduxen liều sử dụng có tác dụng tương tự, hiệu lực có phần yếu hơn, khác biệt cã ý nghÜa: p 0,05 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 4.3.2 Tác dụng chống hÃn Bảng 11, 12: T¸c dơng chèng h·n so s¸nh lô nghiên cứu Lô thí n Số trận ®¸nh Sè trËn ®¸nh Tû lƯ % øc chÕ nghiƯm (cặp) XP sau 30 phút Hành vi hÃn NMSL 12 34,67  7,12 34,83  5,42 Siro 36,33  4,40 22,92  6,43 36,91 Laroxen p 0,05 P Lô thí n Số trận Số trận đánh Tỷ lệ % ức chế nghiệm (cặp) đánh XP sau 30 hµnh vi h·n Siro 12 36,33  4,40 22,92  6,43 36,91 32,33  7,65 21,83  4,07 32,48 Laroxen Seduxen P p 0,05 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com NhËn xÐt 3.3.3 T¸c dơng giảm đau Bảng 13,14: Tác dụng giảm đau so sánh lô nghiên cứu Lôthí nghiệm n Xuất ph¸t Sau 30 NMSL 14 12,64  3,1 12,57 3,37 Siro Laroxen 14 13,14  3,16 p 0,05 22,21  5,85 p  0,05 L« thÝ nghiƯm n Siro Laroxen 14 13,14  3,16 Seduxen XuÊt ph¸t Sau 30 22,21  5,85 14 13,86  3,42 p> 0,05 23,07  5,73 p> 0,05 NhËn xÐt: - Thêi gian chịu nóng tăng nên rõ rệt nhóm uống Siro Laroxen so víi nhãm uèng n­íc muèi sinh lý (gÊp 1,56 lần), khác biệt có ý nghĩa: p 0,05 Chứng tỏ Siro Laroxen có tác dụng giảm đau - liều đà sử dụng, so sánh với Seduxen, tác dụng giảm đau Siro Laroxen, sù kh¸c biƯt víi p > 0,05 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 3.3.4 T¸c dơng chèng co giật mô hình gây co giật corazon 0,5% Bảng 15: Tác dụng chống co giật Siro Laroxen Thêi gian tiỊn Thêi gian co Tû lƯ L« n co giËt (phót) giËt (phót) chÕt (%) NMSL 10 2,01  0,11 22,14  0,90 20 Siro Laroxen 20 3,80  0,22 13,85  0,81  0,05  0,05  0,05 P LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com PhÇn iv - KÕt luËn 4.1 kÕt luËn Tõ kết thu được, có số kết luận sau: 4.1.1 Tiêu chuẩn chất lượng Siro Laroxen + Tính chất: dung dịch lỏng, sánh; màu vàng nâu, vị đắng, mùi thơm chanh + Độ trong: dung dịch phải có độ tương đương với hỗn dịch chuÈn ®èi chiÕu sè I + Tû träng : 1,31 - 1,33 + pH : 2,1 - 2,5 + Phæ UV : max = 281,2 nm + Định tính: phải có phản ứng rotundin sulfat + Định lượng: hàm lượng Rotundin sulfat C21H25ON4.H2SO4: từ 95% - 105% hàm lượng ghi nhÃn + Sai số đóng gói: Thể tích Siro Laroxen không nhỏ 97% lớn 107 % so với thể tích ghi nhÃn + Độ nhiễm khuẩn: phải đảm bảo không nhiÔm khuÈn LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 4.1.2 LD50 - Chưa tìm LD50 Siro Laroxen đường uống chuột nhắt trắng thí nghiệm - Siro Laroxen dạng lọ 100 ml, lượng Rotundin sulfat 600 mg Trung tâm nghiên cứu ứng dụng sản xuất thuốc - Học viện Quân Y bào chế độc 4.1.3 Tác dụng dược lý siro Laroxen Siro Laroxen có tác dụng: - Gây ngủ kÐo dµi giÊc ngđ ë liỊu 120 mg/kg thĨ träng cht Thêi gian kÐo dµi giÊc ngđ lµ 48,67  16,50 Tác dụng tương tự Seduxen liều 15mg/kg thĨ träng cht - Chèng h·n ë liỊu 20 mg/kg thể trọng chuột, tác dụng có phần mạnh Seduxen liều 5mg/kg thể trọng chuột (gấp 1,12 lÇn) LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com - Giảm đau liều 30 mg/kg thể trọng chuột, tác dụng tương tự Seduxen liều 10mg/kg thể trọng chuột - Chống co giật mô hình gây co giËt b»ng corazon 0,5% ë liỊu 60 mg/kg thĨ trọng chuột 4.2 kiến nghị Tiếp tục nghiên cứu độ ổn định, để từ hoàn thiện tiêu chuẩn së cña Siro Laroxen LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com ... học thực tiễn nói trên, tiến hành đề tài nhằm mục tiêu sau: Xây dựng tiêu chuẩn chất lợng siro Laroxen Xác định LD50 xác định tác dụng giảm đau, gây ngủ, trấn tĩnh chống co giật thuốc động vật thực. .. Bình định mức, pipet xác loại 1, 2, ml, bơm tiêm số dụng cụ khác Tất thiết bị dụng cụ đạt tiêu chuẩn DĐVN III 2.2 Phơng pháp nghiên cứu 2.2.1 Phơng pháp xây dựng tiêu chuẩn chất lợng Dựa vào thông... luanvanchat@agmail.com 2.2.1.1 Ph¬ng pháp xác định tính chất Siro Laroxen Màu sắc, mùi vị: xác định cảm quan 2.2.1 Phơng pháp xác định tỷ trọng (d2020) Xác định tỷ trọng Siro Laroxen phơng pháp dùng picnomet,