Nghiên cứu tác dụng dược lý của hợp chất chiết xuất từ dược liệu nam sâm đứng trên thực nghiệm

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRƯƠNG MẪN NHI NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG DƯỢC LÝ CỦA HỢP CHẤT CHIẾT XUẤT TỪ DƯỢC LIỆU NAM SÂM ĐỨNG TRÊN THỰC NGHIỆM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP BÁC SĨ Y HỌC CỔ TRUYỀN MÃ SỐ : 7720115 Thành Phố Hồ Chí Minh – Năm 2022 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRƯƠNG MẪN NHI NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG DƯỢC LÝ CỦA HỢP CHẤT CHIẾT XUẤT TỪ DƯỢC LIỆU NAM SÂM ĐỨNG TRÊN THỰC NGHIỆM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP BÁC SĨ Y HỌC CỔ TRUYỀN MÃ SỐ : 7720115 Thầy hướng dẫn: TS Ds Nguyễn Ngọc Chương Th.S Bs Cao Thị Thuý Hà Thành Phố Hồ Chí Minh – Năm 2022 MỤC LỤC CHỮ VIẾT TẮT ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 TỔNG QUAN CÂY NAM SÂM ĐỨNG 1.1.1 Danh pháp 1.1.2 Mô tả 1.1.3 Sinh thái 1.1.4 Phân bố 1.1.5 Thành phần hoá học 1.1.6 Công dụng theo y học cổ truyền 1.1.7 Những tác dụng Boerhacvia erecta phát qua cơng trình nghiên cứu giới 1.2 TỔNG QUAN ĐÁI THÁO ĐƯỜNG 1.2.1 Định nghĩa 1.2.2 Tình hình dịch tễ 1.2.3 Phân loại 1.2.4 Triệu chứng lâm sàng 1.2.5 Chẩn đoán 1.2.6 Các nhóm thuốc điều trị đái tháo đường ngoại trừ Insulin 1.3 TỔNG QUAN ENZYME α-GLUCOSIDASE CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ THIẾT BỊ 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 2.1.2 Chuẩn bị mẫu nghiên cứu 2.2 PHƯƠNG TIỆN NGHIÊN CỨU 2.2.1 Hoá chất thuốc thử 2.2.2 Thiết bị dụng cụ 2.3 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 2.3.1 Phương pháp nội dung nghiên cứu 2.3.2 Phương pháp xử lí số liệu KẾ HOẠCH THỰC HIỆN KẾT QUẢ DỰ KIẾN TÀI LIỆU THAM KHẢO CHỮ VIẾT TẮT ATP : Adenosine Triphosphate BN : Bệnh nhân DDT : DL-Dithiothreitol, thuốc thử Cleland DMSO : Dimethyl sulfoxide DNA : Acid Deoxyribonucleic DPP-4 : Dipeptidyl peptidase-4 ĐTĐ : Đái tháo đường ĐVTN : Động vật thí nghiệm EC50 : Nồng độ hiệu 50% đối tượng thử nghiệm EDTA : Ethylenediaminetetraacetic acid GHS :Globally Harmonized System of Classification and Labelling of Chemicals (Hệ thống hài hịa tồn cầu phân loại ghi nhãn hóa chất) GLP-1: Glucagon-like peptide-1 (Peptide giống Glucagon-1) GLP-1RA : GLP-1 Receptor Agonist (Đồng vận thụ thể GLP-1) GLUT1 : Glucose transporter (Chất chuyên chở glucose loại 1) GLUT2 : Glucose transporter (Chất chuyên chở glucose loại 2) GLUT4 : Glucose transporter (Chất chuyên chở glucose loại 4) HbA1c : Hemoglobin A1c (Hemoglobin liên kết với glucose) HEPES : (4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic acid) (chất đệm acid sulfonic zwitterionic) HIV/AIDS : Human immunodeficiency virus infection/Acquired immunodeficiency syndrome (Hội chứng nhiễm virus làm suy giảm miễn dịch người) IC50 : Nồng độ ức chế 50% đối tượng thử nghiệm IDF : International Diabetes Federation (Liên đoàn đái tháo đường Quốc tế) KATP : Kênh kali phụ thuộc ATP LD50 : Liều gây chết 50% đối tượng thử nghiệm NAD : Nicotinamid Adenin Dinucleotid NADH : dạng khử Nicotinamid Adenin Dinucleotid OD : Mật độ quang OECD : Organisation for Economic Co-operation and Development (Tổ chức Hợp tác Phát triển Kinh tế) p-NP : p-nitrophenol p-NPB : p-nitrophenyl butyrate pNPG : p-nitrophenyl-α-D-glucopyranoside PPARγ : Peroxisome proliferator-activated receptor (Thụ thể hoạt hoá tăng sinh peroxisome) SGLT2 : Sodium Glucose Transporter (Kênh đồng vận chuyển Natri-glucose 2) STEPwise : Điều tra quốc gia yếu tố nguy bệnh không lây nhiễm STZ : Streptozocin TZD : Thiazolidinedione ĐẶT VẤN ĐỀ Năm 2019, tồn giới có 463 triệu người độ tuổi từ 20 đến 79 tương đương 11 người trưởng thành sống với bệnh đái tháo đường Dự đoán vào năm 2045, số tăng tới khoảng 700 triệu người, hay nói cách khác trung bình mười người trưởng thành có người mắc bệnh ĐTĐ Ở Việt Nam, năm 1990 kỷ trước, tỷ lệ bệnh ĐTĐ 1,1% (ở thành phố Hà Nội), 2,52% (ở thành phố Hồ Chí Minh), 0,96% (ở thành phố Huế), nghiên cứu năm 2012 Bệnh viện Nội tiết Trung ương cho thấy: tỷ lệ mắc đái tháo đường toàn quốc người trưởng thành 5,42%, tỷ lệ đái tháo đường chưa chẩn đoán cộng đồng 63,6% Tỷ lệ rối loạn dung nạp glucose 7,3%, rối loạn glucose huyết lúc đói 1,9% (tồn quốc năm 2003) Theo kết điều tra STEPwise yếu tố nguy bệnh không lây nhiễm Bộ Y tế thực năm 2015, nhóm tuổi từ 18-69, cho thấy tỷ lệ ĐTĐ toàn quốc 4,1%, tiền ĐTĐ 3,6%, tỷ lệ ĐTĐ chẩn đoán 31,1%, tỷ lệ ĐTĐ chưa chẩn đoán 69,9% Trong số người chẩn đoán, tỷ lệ ĐTĐ quản lý sở y tế: 28,9%, tỷ lệ ĐTĐ chưa quản lý: 71,1% Dữ liệu cập nhật Liên đoàn Đái tháo đường Quốc tế (IDF) cho thấy năm 2019 Việt Nam có tỷ lệ 6% người trưởng thành mắc ĐTĐ [2] [3] Cây Nam Sâm đứng (Boerhavia Erecta) phân bố rộng khắp nước ta, khu vực Bình Thuận, Ninh Thuận, Ninh Hồ, Phú n,….Cây có đặc tính chịu hạn, chịu nắng gió tốt, sinh trưởng vùng đất cát, đất trống, đất bỏ hoang Bên cạnh lợi trồng trọt, lồi cịn có nhiều tác dụng chữa bệnh ứng dụng y học cổ truyền số nghiên cứu y học đại Trong y học cổ truyền, rễ sử dụng nhằm lợi tiểu, tẩy giun sán, hạ sốt, bảo vệ gan, nhuận tràng, ; toàn sử dụng điều trị nhiễm nấm da đầu, thấp khớp, ghẻ Những tác dụng Nam Sâm đứng nghiên cứu giới tác dụng hạ đường huyết, chống oxy hoá, kháng viêm Trên sở khoa học đó, có nhiều khả thành phành phần hóa học có tác dụng sinh học dduojc ứng dụng YHCT tương lai Vì việc phân lập hợp chất tinh khiết dược liệu đóng góp phần quan trọng việc đánh giá tác dụng sinh học, đặc biệt định hướng khả ức chế enzyme alpha glucosidase Do đó, đề tài: “NGHIÊN CỨUTÁC DỤNG DƯỢC LÝ CỦA HỢP CHẤT CHIẾT XUẤT TỪ DƯỢC LIỆU NAM SÂM ĐỨNG TRÊN THỰC NGHIỆM” thực với ba mục tiêu: Chiết xuất cao ethanol 96% toàn phần, cao phân đoạn Hexan, Hexan:ethyl acetat ethyl acetat từ dược liệu Nam sâm đứng Phân lập 1-2 hợp chất tinh khiết từ phân đoạn ethyl acetat Đánh giá khả ức chế enzyme alpha glucosidase chất phân lập CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 TỔNG QUAN CÂY NAM SÂM ĐỨNG Hình 1.1 Hình 1.2 Hình 1.3 Hình 1, 2, 3: Cây Nam Sâm đứng (Boerhavia Erecta) [8] Ảnh chụp bởi: J.M.Garg Creative Commons Attribution 3.0 Cây Nam Sâm đứng (Boerhavia Erecta) phân bố rộng khắp nước ta, khu vực Bình Thuận, Ninh Thuận, Ninh Hồ, Phú n,….Cây có đặc tính chịu hạn, chịu nắng gió tốt, sinh trưởng vùng đất cát, đất trống, đất bỏ hoang Bên cạnh lợi trồng trọt, cịn có nhiều tác dụng chữa bệnh ứng dụng y học cổ truyền số nghiên cứu y học đại Trong y học cổ truyền, rễ sử dụng nhằm lợi tiểu, tẩy giun sán, hạ sốt, bảo vệ gan, nhuận tràng, ; toàn sử dụng điều trị nhiễm nấm da đầu, thấp khớp, ghẻ;… Những tác dụng Nam Sâm đứng nghiên cứu giới tác dụng hạ đường huyết, chống oxy hoá, kháng viêm,….   1.1.1 Danh pháp Cây Nam Sâm đứng có tên khoa học Boerhavia Erecta L., thuộc chi Boerhavia, họ Bông phấn (Nyctaginaceae), Cẩm Chướng (Caryophyllales), lớp Ngọc Lan (Magnoliopsida), ngành Thực vật có mạch (Tracheophyta), giới Thực vật (Plantae) [7] 1.1.2 Mơ tả Cây cỏ mảnh, có lơng mịn chót, cao từ 40cm đến 80cm Phiến xoan tròn dài đến thon, đáy trịn hay cắt ngang, kích thước 2-3.5cm x 1-2.5cm Mặt phiến trắng có bột có tuyến, mặt xanh cuống dài từ 1cm đến 4cm Chùm-tụ tán dài, nhánh chót mang tụ tán hoa, cọng hoa dài từ 15 đến 20mm Bao hoa có màu trắng, hường hay đỏ; có khoảng 1-2 tiểu nhuỵ, thị Quả hình chuỳ lật ngược, cao khoảng 4mm, có cạnh to, nhiều hạt [2] 1.1.3 Sinh thái Cây sinh trưởng vùng đất cát, đất đá bãi đất trống, đất bỏ hoang, đất canh tác, ven đường; vùng đồng phù sa; độ cao từ mực nước biển đến 2.500 mét 1.1.4 Phân bố Cây tìm thấy khu vực nhiệt đới cận nhiệt đới, nơi có lượng mưa theo mùa nhiều nắng [8] Ở Việt Nam, Nam Sâm đứng phân bố chủ yếu tỉnh Bình Thuận, Ninh Thuận, Ninh Hồ, Phú Yên,… [2] 1.1.5 Thành phần hoá học Cấu trúc hoá học hợp chất tìm thấy Nam Sâm đứng (Boerhavia Erecta) 10 (7) [52]  3-methoxybenzoic acid (8) 3-methoxyacetophenone 4-O-b-glucopyranoside [13] (9) Isorhamnetin-3-O-rutinoside-7-O-b-glucopyranoside [10]  (10) Quercetin-3-O-rutinoside [11] (11) Quercetin-3-O-b-glucopyranoside [11] (12) Kaemferol-3-O-rutinoside [15] (13) Isorhamnetin-3-O-rutinoside [11] 4-O-bglucoside 15 d) BN có triệu chứng kinh điển tăng glucose huyết tăng glucose huyết cấp kèm mức glucose huyết tương ≥ 200 mg/dL (hay 11,1 mmol/L) Chẩn đốn xác định có kết ngưỡng chẩn đoán mẫu máu xét nghiệm thời điểm khác tiêu chí a, b, c; riêng tiêu chí d: cần lần xét nghiệm Lưu ý: Glucose huyết đói đo BN nhịn ăn (khơng uống nước ngọt, uống nước lọc, nước đun sơi để nguội) (thường phải nhịn đói qua đêm từ 14 giờ) Nghiệm pháp dung nạp glucose đường uống phải thực theo hướng dẫn Tổ chức Y tế giới: BN nhịn đói từ nửa đêm trước làm nghiệm pháp, dùng lượng 75g glucose, hòa 250-300 mL nước, uống phút; ngày trước BN ăn phần có khoảng 150-200 gam carbohydrat ngày, khơng mắc bệnh lý cấp tính không sử dụng thuốc làm tăng glucose huyết Định lượng glucose huyết tương tĩnh mạch [3] 16 Hình 1.4: Sơ đồ chẩn đoán đái tháo đường Nguồn: Bộ y tế 1.2.6 Các nhóm thuốc điều trị đái tháo đường ngoại trừ Insulin  Ức chế enzyme α-glucosidase Cơ chế tác dụng: thuốc cạnh tranh ức chế tác dụng enzyme thủy phân đường phức thành đường đơn, làm chậm hấp thu carbohydrat từ ruột Thuốc nhóm: Acarbose  Sulfonylurea Đường sử dụng: đường uống Cơ chế tác dụng: Nhóm sulfonylurea có chứa nhân sulfonic acid urea, thay đổi cấu trúc hóa học cho loại chế phẩm khác hoạt tính Thuốc kích thích tế bào beta tụy tiết insulin Thuốc gắn vào kênh kali phụ thuộc ATP (KATP) nằm màng tế bào beta tụy làm đóng kênh này, làm phân cực màng tế bào 17 Khi màng tế bào beta phân cực, kênh calci phụ thuộc điện mở ra, calci vào tế bào làm phóng thích insulin từ hạt dự trữ Thuốc làm giảm HbA1c từ – 1,5% Các thuốc nhóm: Glyburide/glibenclamide, Glimepiride, Gliclazide, Glipizide  Metformin Đường sử dụng: đường uống Cơ chế tác dụng: giảm sản xuất glucose gan Có tác dụng yếu tăng hiệu ứng incretin Thuốc làm giảm HbA1c khoảng – 1,5% Liều thường dùng 500-2000 mg/ngày Ít cần dùng đến liều 2500mg/ngày, liều tác dụng giảm glucose huyết không tăng nhiều tác dụng phụ nhiều  Glinides Hiện có Việt Nam: Repaglinide Cơ chế tác dụng tương tự sulfonylurea  Thiazolidinedione (TZD hay glitazone) Cơ chế tác dụng: Hoạt hóa thụ thể PPARγ, tăng biểu lộ chất chuyên chở glucose loại 1-4 (GLUT1 GLUT4) giảm nồng độ acid béo máu, giảm sản suất glucose gan, tăng adiponectin giảm phóng thích resistin từ tế bào mỡ, tăng chuyển hóa tế bào mỡ biệt hóa (preadipocytes) thành tế bào mỡ trưởng thành Tóm lại thuốc làm tăng nhạy cảm với insulin tế bào cơ, mỡ gan Thuốc nhóm: pioglitazone  Thuốc có tác dụng Incretin Cơ chế tác dụng: ức chế enzyme DDP- 4, enzyme thối giáng GLP-1, làm tăng nồng độ GLP-1 (glucagon-like peptide) có hoạt tính Thuốc nhóm: Sitagliptin, Saxagliptin, Vildagliptin, Linagliptin  Thuốc đồng vận thụ thể GLP-1 (GLP-1RA: GLP-1 Receptor Agonist) Thuốc đồng vận thụ thể GLP-1 hoạt động thông qua tương tác đặc hiệu với thụ thể GLP-1 tế bào beta tụy, kích thích tiết insulin làm giảm tiết glucagon không thích hợp theo cách phụ thuộc glucose GLP-1 RA làm chậm làm rỗng dày, làm giảm cân nặng khối lượng chất béo thể qua chế bao gồm làm giảm cảm giác đói giảm lượng nạp vào Ngoài ra, thụ thể GLP-1 có mặt số vị trí cụ thể tim, hệ thống mạch máu, hệ thống miễn dịch thận, ngăn ngừa tiến triển giảm viêm mảng xơ vữa động mạch chủ Thuốc nhóm: Liraglutide 18  Thuốc ức chế kênh đồng vận chuyển Natri-glucose SGLT2 (Sodium Glucose Transporter 2) Cơ chế tác dụng: Glucose lọc qua cầu thận sau tái hấp thu chủ yếu ống thận gần tác dụng kênh đồng vận chuyển Natri-glucose (Sodium Glucose CoTransporters (SGlT) SGLT2 giúp tái hấp thu khoảng 90% glucose lọc qua cầu thận, ức chế tác dụng kênh BN ĐTĐ type làm tăng thải glucose qua đường tiểu giúp giảm glucose huyết Thuốc nhóm: Canagliflozin, Dapagliflozin Empagliflozin [3] Hình 5: Hướng dẫn điều trị đái tháo đường Nguồn: Bộ y tế 1.3 TỔNG QUAN ENZYME α-GLUCOSIDASE Enzym α-glucosidase nằm viền bàn chải niêm mạc ruột có tác dụng chuyển hóa oligo-, tri- disaccharide (ví dụ sucrose) thành monosaccharide nhỏ ví dụ glucose, fructose) giúp dễ hấp thu [33] Enzym tuyến tuỵ α-amylase enzym quan trọng giúp phá vỡ carbohydrate chế độ ăn tinh bột thành monosaccharide đơn giản hệ tiêu hóa Những chất tiếp tục bị phân giải α-glucosidase thành glucose, hấp thu, vào máu Do đó, việc ức chế enzym α-glucosidase làm chậm q trình hấp thu glucose làm giảm lượng glucose máu [34] Với chế hoạt động trên, nhóm thuốc không gây hạ glucose huyết sử dụng đơn độc nguy hạ đường huyết gia tăng sử dụng kết hợp thuốc điều trị ĐTĐ khác sulfonylure, insulin, [9] Tác dụng không mong muốn chủ yếu đường tiêu hóa tăng lượng carbohydrat khơng hấp thu ruột non đến đại tràng, dẫn đến sình bụng, đầy hơi, ngồi phân lỏng [3] 19 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ THIẾT BỊ 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu Cây Nam Sâm đứng sản xuất công ty TNHH SX-TM HỒNG ĐÀI VIỆT- Trung tâm Nghiên cứu & Sản xuất Dược liệu Miền Trung, Khu công nghiệp Hồ Hiệp Nam, TX Đơng Hồ, Phú n Lơ sản xuất: SĐ 010922, ngày sản xuất: 12/09/2022, đạt tiêu chuẩn sở 2.1.2 Chuẩn bị mẫu nghiên cứu Toàn nam sâm đứng nghiền thành bột (4kg) ngấm kiệt methanol 99% Dịch methanol 99% cô quay áp suất thấp để thu cao methanol thô Từ cao chiết methanol 99%, tiến hành phân bố lại dung môi nhexane, n-hexane: ethyl acetate (1:1, v/v), ethyl acetate 2.2 PHƯƠNG TIỆN NGHIÊN CỨU 2.2.1 Hoá chất thuốc thử Hoá chất: methanol 99%, n-hexane, cloroform, ethyl acetate, silica gel pha thường pha đảo (Silica gel pha thường có cỡ hạt 0,040-0,063 mm (240–430 mesh) Silica gel pha đảo ODS), dung dịch α-glucosidase 0.5UI, dung dịch Na2CO3 0,2 M, Streptozocin, đệm citrate 0,1M lạnh (pH 4,5), dung dịch glucose 5%, Dimethyl sulfoxide (DMSO) Thuốc thử: dung dịch H2SO4 10%, dung dịch p-nitrophenyl-α-D-glucopyranoside (pNPG) mM 2.2.2 Thiết bị dụng cụ Thiết bị: bình ngấm kiệt hình nón, máy quay Buchi, đèn tử ngoại, máy HPLC Perkin Elmer Serie 2000, máy Kofler micro-hotstage, máy Kruss A.Kruss GmbH P8000 optronic polarimeter, máy PerkinElmer Lambda 25 UV-VIS spectrometer, máy Shimadzu FTIR-8200 infrared spectrophotometer, máy HR-ESI-MS (Bruker MicroOTOF–Q 10187), máy cộng hưởng từ hạt nhân (BRUKER AVANCE) (tần số 500 MHz phổ 1H-NMR) 125 MHz (đối với phổ 13C-NMR), máy đo đường huyết Benecheck Plus (xuất xứ Đài Loan), Dụng cụ: bình ngấm kiệt, mỏng tráng sẵn DC-Alufolien 60 F 254 (Merck 1,05715), mỏng pha đảo RP18 F254s (Merck), mỏng tráng sẵn silica gel 60G F254 (Merck, ký hiệu 105875), cột thủy tinh, que thử glucose huyết 20 2.3 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 2.3.1 Phương pháp nội dung nghiên cứu 2.3.1.1 Phương pháp điều chế cao thô cao phân đoạn Các dung môi sử dụng đạt tiêu chuẩn dược dụng tiêu chuẩn phân tích Hóa chất thử nghiệm cung cấp Sigma Thiết bị bình ngấm kiệt, máy quay Buchi mơn Bào chế phịng thí nghiệm trung tâm- khoa Y học cổ truyền Sử dụng phương pháp, quy trình thường quy lĩnh vực hóa học hợp chất thiên nhiên để điều chế cao thô, cao phân đoạn phân lập hợp chất Cách tiến hành Bột khô (4 kg) làm ẩm với lượng vừa đủ ethanol 96% Sau cho tất bột dược liệu vào bình ngấm kiệt hình nón cụt nhằm thu dịch chiết dược liệu Sử dụng phương pháp ngấm kiệt chiết xuất ngược dòng nhằm thu dịch chiết đậm đặc dược liệu chiết kiệt Dịch ethanol 96% cô quay để thu cao ethanol thô Từ cao chiết ethanol 96%, tiến hành phân bố lại dung môi n-hexane, cloroform ethyl acetate Quá trình cụ thể trình bày sau: Cao ethanol 96% thô phân tán vào nước thực chiết lỏng-lỏng với n-hexane Quá trình lặp lại lần, thu phần dung dịch phía trên, cô quay đuổi dung môi để thu cao n-hexane Phần dung dịch phía tiếp tục thực chiết lỏng-lỏng với cloroform để thu cao cloroform Tiếp tục thực việc chiết lỏng-lỏng với dung môi ethyl acetate để thu cao ethyl acetate Phần dung dịch cịn lại quay đuổi dung mơi thu cao nước Tiêu chí đánh giá cao chiết: theo Dược điển Việt Nam V, mức đánh giá độ ẩm cho cao đặc không 20% (Theo PL 1.1, trang PL-9 DĐVN V) 2.3.1.2 Phương pháp ly trích hợp chất từ phân đoạn Sử dụng phương pháp cô lập hợp chất theo định hướng dựa kết thử nghiệm hoạt tính sinh học invitro cao phân đoạn loài Boerhavia Erecta, cao phân đoạn có hoạt tính sinh học cao sử dụng để cô lập chất Sử dụng phương pháp sắc ký cột để chia cao có hoạt tính thành nhiều phân đoạn khác nhau, từ phân đoạn tiến hành cô lập hợp chất tinh khiết cách sử dụng phương pháp sắc ký cột pha thường, cột pha đảo RP18, sắc ký mỏng điều chế HPLC kết hợp với sắc ký lớp mỏng Tất thí nghiệm thực Phịng thí nghiệm Khoa Y học Cổ Truyền, Đại học Y Dược TP.HCM Sắc ký lớp mỏng (TLC): Sắc ký lớp mỏng thực mỏng tráng sẵn DC-Alufolien 60 F254 (Merck 1,05715), mỏng pha đảo RP18 F254s (Merck) Các cấu tử hữu phát đèn tử ngoại hai bước sóng 254 nm 365 nm, phun dung dịch H2SO4 10% lên mỏng, sấy khơ hơ nóng từ từ bếp điện màu ... DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRƯƠNG MẪN NHI NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG DƯỢC LÝ CỦA HỢP CHẤT CHIẾT XUẤT TỪ DƯỢC LIỆU NAM SÂM ĐỨNG TRÊN THỰC NGHIỆM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP BÁC... HỢP CHẤT CHIẾT XUẤT TỪ DƯỢC LIỆU NAM SÂM ĐỨNG TRÊN THỰC NGHIỆM” thực với ba mục tiêu: Chiết xuất cao ethanol 96% toàn phần, cao phân đoạn Hexan, Hexan:ethyl acetat ethyl acetat từ dược liệu Nam. .. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ THIẾT BỊ 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu Cây Nam Sâm đứng sản xuất công ty TNHH SX-TM HỒNG ĐÀI VIỆT- Trung tâm Nghiên cứu & Sản xuất Dược liệu Miền Trung,