Nghiên cứu tác dụng dược lý thực nghiệm trên sỏi tiết niệu và phân lập chất có hoạt tính của ý dĩ coix lachryma jobi l

T À Ĩ L IỆ U TH AM K H Ả O FeiZhou RuiminZhou, Xufeng Hao, Xinfeng Wu,Weihong Rao, Yongkang Chen, Deyu Gao Radiation Physics and Chemistry 77, 169 ­ 173 (2008) Bong Kyun Park, Sunho Jeong, Dongjo Kim, Jooho Moon, Soonkwon Lim, Jang Sub Kim Journal of Colloid and Interface Science 311,417 ­ 424 (2007) Han­Xuan Zhang, Uwe Siegert, Ran Liu, Wen­Bin Cai Nanoscale Res Lett 4,705­708 (2009) Mohammad Vaseem, Kil Mok Lee, Dae Young Kim, Yoon­Bong Hahn Materials Chemistry and Physics 125 334­341(2011) Yang Jian­guang, ZhouYuang­lin, Takeshi Okamoto, Ryoichi Ichino, Masazumi Okiđo J Mater Sci 42 7638­ 7642(2007) Jin Wen, Jie Li, Shijun Liu, Qi­yuan Chen Colloids and Surfaces A: Physicochemical and Engineering Aspects 373,29­35(2011) F Ruimin Zhou, Xinfeng Wu, Xufeng Hao, Fei Zhou, Hongbin Li, Weihong Rao Nuclear Instruments and Methods in Physics Research B 266,599­603 (2008) Konghu Tian, Caiiin Liu, Haijun Yang, Xianyan Ren Colloids and Surfaces A: Physicochemical and Engineering Aspects 397, 12­15(2012) Sulekh Chandra, Avdhesh Kumar, Praveen Kumar Tomar Journal of Saudi Chemical Society (2011) 10 Mohammad Hossein Habibi, Reza Kamrani, Reza Mokhtari Microchim Acta 171, 91­95 (20Ỉ0) NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG D ợ c LÝ THựC NGHIỆM TRÊN SỎI TIÉT NIỆU VÀ PHÂN LẬP CHẤT CỐ HOẠT TÍNH CỦA Ý DI (Coũc lachryma-jobi L.) DS P hạm Đ ức Vịnh*; D S Trần Thúy Ngần* s v Đ ễ Thị Yến*; s v Đào Hồng Hạnh* _ A lf _ ị _ iO M TA T H ng dẫn; TS N guyễn Quỳnh Chỉ* Ý dĩ (Coỉx lachryma-jobi L var ỉachryma-ịobi) loài bàn địa Việt Nam sử dụng y học cổ truyền để điều trị số bệnh lý đường tiểt niệu chưa nghiên cứu tác dụng nên sỏi tiết niệu Do nghiên cứu thực với mục tiêu đánh giá tác dụng cùa địch chiết nước toàn phần than Ý dĩ phân ỉập chaE có hoạt tính ức chế h nh thành sịi tiết niệu số mô h nh lý thực nghiệm, Phương pháp nghiên cứu: Dịch chiết nước toàn phần thân Ý dĩ đánh giá tác dụng ức chế h nh thành sỏi tiết niệu phương pháp in Vito in vivo Phương pháp ỉn vitro tiến hành đĩa 96 giếng dựa phàn ứng ion canxi oxalat Song mơi traờng nước tiểu nhân tạo Thí nghiệm in vivo sử đụng chuột cống trắng giổng đực, khối lượng từ Ỉ80 ­ 220g gây sỏi thận ethylen giycol 0,75% 28 ngày Chất tinh khiết phân lập săc ký cột, nhậi đạng băng phổ khối phỗ cộng hưởng từ hạt nhân Kết nghiên cứu: ^ Ở thí nghiệm in vitro, dịch chiết nước Ý dĩ thể tác dụng ức chế h nh thành tinh thể calci oxalat phụ thuộc vào nồng độ, với tỷ lệ ức ché đa 33,1% so với mẫu chứng làm tăng tỷ lệ COD/COM Tù phân đoạn ethyl acetat ­ phân đoạn địch chiết có tác dụng ức chế mạnh ­ phân lập acid p­coumaric Trên chuột cống trắng sử dụng tác nhân gây sỏi ethylen glycoĩ, dịch chiết nước Ý đĩ 2,52g/kg thể tác dụng làm giảm số lượng sỏi lắng đọng thận so với lô chứng bệnh sau 28 ngày điều trị, Từ phân đoạn ethyl acetat ­ phân đoạn thề tác đụng ức chế mạnh nhat­ đa phân lập acidp­coumaric, thể tác dụng ức chế h nh thành tinh thể in vitro mạnh (ĨC 50=2 35 mM) so với natri citrat (IC 50 = 9,61 mM) * Bại học Dược Hà Nội 516 Kết luận: Các kết thu chứng minh tác dụng ức chế h nh thành sỏi tiết niệu dịch chiết nước Ý đĩ số mô h nh dược lý thực nghiệm, tạo sở cho việc phát triển Ý dĩ thành dược liệu tiềm điều trị sỏi tiết niệu * Từ khóa: Ý đĩ; Tác dụng ức chế sỏi tiết niệu The effects o f the aqueous extractm an d isolate active com pou nd fro m coix Lachrymajo b i var lachryma-jobi Sum m ary Coix lachryma-jobi L var lachryma-jobi is a native Vietnamese plant used traditionally to treat some urinary diseases but its effects on urolithiasis has not been evaluated yet Therefore, the objective of this study was to investigate the effects of the aqueous extract and isolate active compound from Coix lachryma-jobi var lachryma-jobi Methods: Aqueous extract of Coix lachryma-jobi var lachryma-jobi was studied using in vitro and in vivo methods The in vitro experiment was based on reaction between ion calcium and oxalate in artificial urine conducted on 96 ­ wells plate Urolithiasis was induced in male rats by ethylene glycol 0.75% comprising in drinking water for 28 days Compound was isolated on column chromatography and identified by mass specưoscopy and NMR spectroscopy Results: In vitro, the aqueous extract from Coix lachryma-jobi var lachryma-jobi exhibited concentration­dependent inhibitory activity on the formation of calcium oxalate crystals, wiih maximum inhibitory proportion 33.1%, and also increased COD/COM ratio In male rats receiving lithogenic treatment, a decrease in the density of crystal deposition in kidneys was observed on rats treated by 2.52 g/kg Coix lachryma-jobi var.lachryma-jobi 2.52 g/kg in 28­day period compared to their controls From ethyl acetate fraction whose inhibitory activity was the strongest, acid p­coumaric was isolated and showed more potent effect (IC 50 = 2.35 mM) than sodium citrate (IC 50=9.61 mM), reserved as positive control Conclusion: These findings indicating the antiurolithic activity in the aqueous extract of Coix lachryma-jobi var lachryma-jobi support for developing this plant as a promising medicinal plant in the treatment of kidney stones Key words: Coix lachryma-jobi var lachryma-jobi; Effects on urolithiasis I Đ Ặ T V Ấ N Đ Sỏi tiết niệu bệnh lỷ phổ biến, ảnh hưởng đến khoảng 12% dân số toàn cầu Cùng với phát triển y học đại, kỹ thuật ngoại khoa áp dụng điều trị để loại bỏ sỏi khỏi đường tiết niệu Tuy nhiên, phương pháp gây tai biến tỷ lệ tái phát cao [3] Thêm vào đó, chưa cỏ thuốc hóa dược thực hiệu để điều trị sỏi'tiết niệu, đặc biệt dự phòng tái phát sỏi V vậy, xu hướng sử dụng thuốc có nguồn gốc từ dược liệu điều trị sỏi tiết niệu ngày quan tâm Ý d ĩ (Coix lachryma-jobi L var lachryma-ịobì) lồi địa Việt Nam sử dụng từ lâu y học cổ truyền với tác dụng bồi bổ thể, lợi tiểu, trị phù thũng, tê thâp, tiểu tiện sòi [1], nhưng'chưa nghiên cứu theo định hướng tác dụng điều trị sỏi tiết niệu V vậy, nghiên cứu thực với hai mục tiêu: I ) Đ nh giá tác d ụn g ửc c h ế sỏi tiết niệu in vừro in vivo đich c h iấ toàn p hầ n thân Ý dĩ; 2) Phân lệp hoạt chấ t cồ tác d ụng ức c h ế sỏi t iấ niệu từ th â n Ý dĩ II NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN c ứ u 2.1 N guyên liệu ­ Dược liệu: Thân ý dĩ, thu hái Từ Liêm­ H Nội vào tháng 10 năm 2011 M au dược liệu Bùi Hồng Quang ­ Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật định tên khoa học Coỉx lachryma-Jobi L var ỉáchryma-jobi, họ lóa (Poaceae) Dịch chiết tồn phần thu phương pháp sắc với dung môi nước, cô đặc đến dạng cao lỏng 1:1 Các phân đoạn dịch chiết thu phương pháp chiết lỏng ­ lỏng với đung mơi có độ phân cực tăng dần: n­hexan, chloroform, ethylacetat 517 ­ Hóa chất động vật: T ả hóa c h ả sử đụng nghiên cứu đạt tiêu chuẩn phân tích Chuột cống trắng giống đực, chủng Wistar, khối lượng 180 ± 20 g đo Học viện Quân y cung cấp, nuôi điều kiện tiêu chuẩn 2.2 Phương pháp nghiên cửu Đánh g iá tác dạng ửc ch ế tình th ể canxi oxalat in vitro thân Ý d ĩ ­ Đánh giá tác dụng ức chế h nh thành tinh thể canxi oxalat ỉn vitro dịch chiết toàn phần Ý đ ĩ đĩa 96 giếng Costar 3596 (Corning, Mỹ) theo phương pháp Gohel W ong [4] mô tả Trên đĩa 96 giếng gồm có: eiếns chứng, giếng natrỉ eitrat giểno­ thử cho tư«pơ iVpơ I&n I.Ị tiểu nhân tạo, 20 Jil dung môi pha mẫu naưi citrat đung dịch thử Tinh thể canxi oxaỉat tạo thành thêm 20 *il dung dịch acid oxalic 0,04 N vào tất giếng Đo mật độ quang (OD) hệ thống máy ELISA bước sóng 620 nm thời điểm 30 phút sau phản ứng Tính tỷ lệ ức chế (%ƯC) quan s ỉ h nh ảnh tính thể giếng kính hiển vi soi ngược vào thời điểm kết thúc thí nghiệm Đ ánh giá tác d ụn g ứ c c h ế sỏi can xi oxalat in vivo cửa thân Ý d ĩ Đánh giá tác dụng ức chế h nh thành sỏi canxi oxalat dịch chiết toàn phần thân Ý d ĩ mức liều 52 g/kg chuột cống trắng với mô h nh gây sỏi thực nghiệm mô tả bời Karađi VR c s [6] Tác nhân gây'sỏi ethylen glycol, bổ sung nước uống hàng ngày chuột nồng độ 0,75% vịng 28 ngày Kết thúc thí nghiệm, lấy thận tất chuột để làm tíêú mơ bệnh học thận Bộ môn Giải phẫu bệnh ­ Trường Đại học Y Hà Nội Quan sát tiêu mơ bệnh học thận kính hiển vi phân cực, tiêu quan sát 10 vi trường khác (x40), tính số đám sỏi trang b nh/vi tnrờng Phân lập chất c hoợ t tinh Đánh giá khả ức chế h nh thành tinh thể canxi oxalat phân đoạn dịch chiét Ý d ĩ đĩa 96 giếng Phân đoạn có tác đụng ức chể h nh thành tinh thể canxi oxaíat mạnh nhât đữợc lựa chọn đe phân lập chất, sử dụng phương pháp sắc ký cột phương pháp kết t nh lại c ấ u trốc hóa học ciia chẩt phân lập xác định phổ khối (MS) phổ cộng hưởng tù hạt nhân (NMR) Tác dụng ức chế tinh thể canxi oxalat chất phân lập đánh giá phương pháp ỉn vitro X lý sổ liệu So liệu lưu trữ xử lý băĩig phân mềm SPSS ỉ 6.0 Tiến hành kiểm chuẩn trước xử ỉý số liệu theo phương pháp thống kê y học Sự khác biệt coi cồ ý nghĩa thống kê p