Phương pháp định lượng RNA

PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG RNA NỘI DUNG BÁO CÁO I • GIỚI THIỆU II • PHƯƠNG PHÁP QUANG PHỔ KẾ • PHƯƠNG PHÁP MEIBAUM III • ỨNG DỤNG Phương pháp định lượng RNA I. Giới thiệu chung Khái niệm định lượng acid nucleic Khái niệm định lượng RNA I. GIỚI THIỆU Phương pháp định lượng RNA là phương pháp gì???? Là phương pháp dùng để xác định nồng độ trung bình của RNA có mặt trong 1 hỗn hợp nào đó!!!! II. CÁC PHƯƠNG PHÁP G ỒM 2 PP CHÍNH PHƯƠNG PHÁP QUANG PHỔ KẾ PHƯƠNG PHÁP MEIBAUM Phương pháp định lượng RNA II. PHƯƠNG PHÁP QUANG PHỔ KẾ Nguyên tắc Nguyên liệu Cách làm Các yếu tố ảnh hưởng Ưu và nhược điểm PHƯƠNG PHÁP QUANG PHỔ KẾ Nguyên Tắc: - Do thành phần bazơ nitơ trong RNA có khả năng hấp thụ ánh sáng vùng tử ngoại, với bước sóng cực đại là 260 nm. - Độ hấp thụ tỉ lệ với nồng độ RNA [...]... protein - Độ chính xác tương đối III PHƯƠNG PHÁP MEIBAUM Phương pháp định lượng RNA Nguyên tắc Nguyên liệu Cách làm Hấp thụ ánh sáng cực đại ở  = 670nm Nguyên tắc RNA Orcinol Đun nóng Phức chất có màu xanh lá cây Cường độ màu tỷ lệ với hàm lượng RNA trong dung dịch PHƯƠNG PHÁP MEIBAUM ♥ ♥ ♥ ♥ ♥ ♥ ♥ ♥ NGUYÊN LIỆU VÀ HÓA CHẤT: DD RNA chuẩn 500μg/ml DD RNA cần xác định hàm lượng DD H2SO4 10% Thuốc thử orcinol... xác định tiến hành pha loãng để có các nồng độ 50, 100, 200, 300, 400 và 500 m/ml  Lấy từ mỗi nồng độ ra 2ml  Tiến hành thí nghiệm như với dung dịch RNA mẫu ở trên  Dựng đồ thị tương quang giữa mật độ quang học và nồng độ RNA tương ứng Từ số đọc về mật độ quang học thu được của dung dịch mẫu đối chiếu với đồ thị RNA => lượng RNA trong mẫu III ỨNG DỤNG - Phương pháp định lượng RNA dùng để xác định. .. Cách làm Phương pháp định lượng RNA 2ml dung dịch RNA 10ml H2SO4 10% Bình nón (V = 50ml) Có nút nhám Đặt vào nồi cách thủy đang sôi trong 30 phút Làm nguội Dung dịch thủy phân RNA 2ml Dung dịch thủy phân RNA Thuốc thử orcinol Ống nghiệm Dung dịch màu xanh lá cây Làm nguội đến nhiệt độ phòng Lắc đều Đặt vào nồi cách thủy đang sôi trong 20 phút  Xây dựng đồ thị chuẩn RNA :  Từ dung dịch gốc RNA tinh...- Nồng độ RNA trong mẫu được tính theo công thức: C (μg/ml)=A260nm 40.n - Trong đó: ♥ C: nồng độ của RNA ( μg/ml) ♥ A260nm: là độ hấp thụ của dd RNA ở 260nm ♥ 40 là hệ số chuyển đổi với RNA ♥ n: là số lần pha loãng CÁC YẾU TỐ ẢNH HƯỞNG:  Nhiệt độ  Nồng độ ion  Độ pH  Tạp chất ( DNA, Protein) ƯU ĐIỂM - Đơn giản - Nhanh chóng KHUYẾT ĐIỂM - Số đọc bị ảnh hưởng nếu mẫu dd RNA có lẫn DNA và... học và nồng độ RNA tương ứng Từ số đọc về mật độ quang học thu được của dung dịch mẫu đối chiếu với đồ thị RNA => lượng RNA trong mẫu III ỨNG DỤNG - Phương pháp định lượng RNA dùng để xác định nồng độ RNA có trong 1 hỗn hợp, đây là một trong những bước cơ bản của mọi nghiên cứu, thí nhiệm trong các lĩnh vực sinh học y học, di truyền,… • TÀI LIỆU THAM KHẢO: - Giáo trình thực tập sinh hóa – Trường Đại . PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG RNA NỘI DUNG BÁO CÁO I • GIỚI THIỆU II • PHƯƠNG PHÁP QUANG PHỔ KẾ • PHƯƠNG PHÁP MEIBAUM III • ỨNG DỤNG Phương pháp định lượng RNA I. Giới thiệu chung Khái niệm định. chung Khái niệm định lượng acid nucleic Khái niệm định lượng RNA I. GIỚI THIỆU Phương pháp định lượng RNA là phương pháp gì???? Là phương pháp dùng để xác định nồng độ trung bình của RNA có mặt trong. có mặt trong 1 hỗn hợp nào đó!!!! II. CÁC PHƯƠNG PHÁP G ỒM 2 PP CHÍNH PHƯƠNG PHÁP QUANG PHỔ KẾ PHƯƠNG PHÁP MEIBAUM Phương pháp định lượng RNA II. PHƯƠNG PHÁP QUANG PHỔ KẾ Nguyên tắc Nguyên liệu Cách