Nghiên cứu thực nghiệm đặc tính sinh học và che phủ khuyết hổng xương của màng tim heo vô bào trên xương hàm thỏ bị tổn thương tại đại học quốc gia tp hồ chí minh, năm 2021 2022

BÙI CÚC NGHIÊN CỨU THỰC NGHIỆM ĐẶC TÍNH SINH HỌC VÀ CHE PHỦ KHUYẾT HỔNG XƯƠNG CỦA MÀNG TIM HEO VÔ BÀO TRÊN XƯƠNG HÀM THỎ BỊ TỔN THƯƠNG TẠI ĐẠI HỌC QUỐC GIA THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH 2021-2022 2022 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CẦN THƠ BÙI CÚC NGHIÊN CỨU THỰC NGHIỆM ĐẶC TÍNH SINH HỌC VÀ CHE PHỦ KHUYẾT HỔNG XƯƠNG CỦA MÀNG TIM HEO VÔ BÀO TRÊN XƯƠNG HÀM THỎ BỊ TỔN THƯƠNG TẠI ĐẠI HỌC QUỐC GIA THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH 2021-2022 Chuyên ngành: Răng Hàm Mặt Mã số: 8720501 LUẬN VĂN THẠC SĨ RĂNG HÀM MẶT Người hướng dẫn khoa học: TS.BS LÊ NGUYÊN LÂM Cần Thơ – Năm 2022 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi, kết nghiên cứu trình bày luận văn trung thực, khách quan chưa công bố nơi Tác giả luận văn Bùi Cúc LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành luận văn này, nhận hướng dẫn, hỗ trợ, giúp đỡ tận tình Thầy, Cơ, anh chị, gia đình, bạn bè nhà khoa học nghành Trước hết, xin cám ơn chân thành đến: - Ban Giám hiệu Trường Đại học Y Dược Cần Thơ - Ban Chủ nhiệm khoa Răng Hàm Mặt – Trường Đại học Y Dược Cần Thơ - Phòng Đào Tạo Sau Đại học – Trường Đại Học Y Dược Cần Thơ - Ban Giám hiệu Trường Đại học Khoa Học Tự Nhiên, Đại học Quốc Gia Thành phố Hồ Chí Minh Đã giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho suốt q trình học tập, nghiên cứu hồn thành luận văn Đặc biệt xin chân thành cảm ơn TS Lê Nguyên Lâm ủng hộ, hướng dẫn tận tình cung cấp tư liệu cho tơi hoàn tất luận văn Xin cảm ơn quý đồng nghiệp, bạn học viên giúp đỡ, động viên tơi cố gắng học tập hồn thành luận văn Tôi không quên giúp đỡ, chia sẻ gia đình, bạn bè, tạo điều kiện thuận lợi mặt vật chất lẫn tinh thần suốt trình học tập thực đề tài nghiên cứu Xin gửi lòng biết ơn chân thành Tác giả luận văn Bùi Cúc MỤC LỤC Lời cam đoan Lời cảm ơn Mục lục Danh mục chữ viết tắt Danh mục thuật từ Danh mục hình Danh mục bảng MỞ ĐẦU Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Đặc điểm sống hàm sau 1.2 Các kỹ thuật điều trị thiếu xương cấy ghép implant 1.3 Đặc điểm màng ngăn sử dụng ghép xương 1.4 Đại cương màng tim vô bào 1.5 Một số nghiên cứu màng ngăn ứng dụng màng tim vô bào 12 Chương ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 2.1 Đối tượng nghiên cứu 17 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 17 2.1.2 Tiêu chuẩn chọn mẫu 17 2.1.3 Tiêu chuẩn loại trừ 19 2.1.4 Địa điểm thời gian nghiên cứu 19 2.2 Phương pháp nghiên cứu 19 2.2.1 Thiết kế nghiên cứu 19 2.2.2 Cỡ mẫu nghiên cứu 19 2.2.3 Phương pháp chọn mẫu 19 2.2.4 Nội dung nghiên cứu 19 2.2.5 Phương tiện kỹ thuật thu thập số liệu 22 2.2.6 Biện pháp hạn chế sai số 32 2.2.7 Phương pháp xử lý phân tích số liệu 32 2.3 Đạo đức nghiên cứu 32 Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 33 3.1 Đặc tính sinh học màng tim vô bào 33 3.2 Đánh giá xâm nhập tế bào nguyên bào sợi qua màng tim vô bào 40 3.3 Kết ghép màng tim vô bào mô hình thỏ 41 Chương BÀN LUẬN 53 4.1 Đặc tính sinh học màng tim vô bào 53 4.2 Đánh giá xâm nhập tế bào nguyên bào sợi qua màng tim vô bào 60 4.3 Kết ghép màng tim vơ bào mơ hình thỏ 62 KẾT LUẬN 72 KIẾN NGHỊ 73 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT bCC Basal Cell Culture medium CT Computerized Tomography DMEM/F12 Dulbecco's Modified Eagle Medium/Nutrient Mixture F12 Ham DMSO Dimethyl Sulfoxide dPP Decellularized Porcine Pericardium ĐC Đối chứng ECM Extracellular Matrix ePTFE Expanded Polytetrafluoroethylene FDA Food and Drug Administration GBR Guided Bone Regeneration GTR Guided Tissue Regeneration HE Haematoxylin/Eosin hGF Human Gingival Fibroblasts KS Kháng sinh OD Optical Density PBS Phophate Buffer Saline PGA Polyglycolic Axit PLA Polylactic Axit SDS Sodium Dodecyl Sulfate TN Thí nghiệm TP HCM Thành phố Hồ Chí Minh VLSH Vật liệu sinh học DANH SÁCH CÁC THUẬT TỪ Basal Cell Culture medium Môi trường nuôi Computerized Tomography Cắt lớp vi tính Decellularized Porcine Pericardium Màng tim heo vơ bào Food and Drug Administration Cục quản lí thực phẩm dược phẩm Guided Bone Regeneration Tái tạo xương có hướng dẫn Guided Tissue Regeneration Tái tạo mơ có hướng dẫn Human Gingival Fibroblasts Nguyên bào sợi nướu người Optical Density Mức độ quang học DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Thay đổi sống hàm sau Hình 1.2 Kỹ thuật ghép xương khối Hình 1.3 Kỹ thuật tái tạo xương có hướng dẫn Hình 1.4 Kỹ thuật tái tạo xương theo chiều ngang có hướng dẫn Hình 1.5 Màng tự tiêu từ collagen gân bò Miomend Hình 1.6 Kỹ thuật tái tạo xương theo chiều ngang có hướng dẫn Hình 1.7 Cấu tạo màng ngồi tim 10 Hình 2.1 Đối tượng thử nghiệm 18 Hình 2.2 Nguyên bào sợi nướu người 24 Hình 2.3 Mơ hình ni đĩa transwell well 29 Hình 3.1 Hình dạng tế bào nguyên bào sợi nướu sau ngày thử nghiệm độc tính (độ phóng đại 100 lần) 33 Hình 3.2 Kết nhuộm Giemsa tế bào hGF sau ngày thử nghiệm độc tính (độ phóng đại 100 lần) 35 Hình 3.4 Mảnh ghép màng tim ghép da lưng chuột 37 Hình 3.5 Hình nhuộm mô học HE mảnh ghép sau tháng ghép da lưng chuột 40 Hình 3.6 Giếng transwell 40 Hình 3.7 Hình nhuộm Giemsa tế bào nằm lớp màng đáy giếng transwell (độ phóng đại 100 lần) 41 Hình 3.8 Quy trình ghép màng tim vô bào vào thể thỏ 42 Hình 3.9 Vết thương thỏ sau tháng 42 Hình 3.10 Kết chụp X-quang sau ghép tháng nhóm thỏ thử nghiệm tháng 43 Hình 3.11 Kết chụp X-quang sau ghép tháng nhóm thỏ thử nghiệm tháng 45 Hình 3.12 Kết chụp CT xương hàm thỏ sau ghép xương màng 46 Hình 3.13 Kết CT xương hàm thỏ tháng ghép xương màng 47 Hình 3.14 Kết CT xương hàm thỏ tháng sau ghép xương màng 48 Hình 3.15 Kết nhuộm HE xương hàm phủ màng thương mại thỏ sau ghép tháng 51 Hình 3.16 Kết nhuộm HE xương hàm phủ màng thương mại thỏ sau ghép tháng 51 Hình 3.17 Kết nhuộm HE xương hàm phủ màng tim vô bào dPP thỏ sau ghép tháng 52 Hình 3.18 Kết nhuộm HE xương hàm phủ màng tim vô bào dPP thỏ sau ghép tháng 52 Hình 4.1 Khử tế bào mô gan 54 Hình 4.2 Màng CoPios 56 Hình 4.3 Cơ chế phương pháp MTT 59 Hình 4.4 Mơ hình đánh giá di cư tế bào mơ hình đĩa transwell 62 Hình 4.5 Mơ hình sử dụng vật liệu hình trụ để nghiên cứu tái tạo xương vùng xương sọ thỏ 63 Hình 4.6 Cấu tạo xương sọ thỏ 63 Hình 4.7 Mơ hình thỏ khuyết hổng xương hàm Lundgen 64 Hình 4.8 Cấu trúc xốp xương Neobone với lỗ lớn thơng 66 Hình 4.9 Kết nhuộm HE cấu trúc màng thương mại dPP sử dụng nghiên cứu 67 Hình 4.10 Sự hình thành xương thỏ sau tháng ghép xương màng dPP (x40) 68 44 Nataliia V Shchotkina (2021), “Optimized method of bovine pericardium decellularization for tissue engineering”, Wiad Lek, Vol 74(4), pp 815-820 45 Weiyong Sheng (2018), “Aortic Valve Replacement with Bovine Pericardium in Patients with Aortic Valve Regurgitation”, Int Heart J, Vol 60 (6), pp 1344 - 1349 46 Keith L Spinali, Eric G Schmuck (2018), “Natural Sources of Extracellular Matrix for Cardiac Repair”, Adv Exp Med Biol, Vol 1098, pp 115-130 47 Fatiesa Sulejmani (2019), “Evaluation of transcatheter heart valve biomaterials: Computational modeling using bovine and porcine pericardium”, Journal of the Mechanical Behavior of Biomedical Materials Vol 97, pp 159 – 170 48 Vishnu Jayakumar Sunandhakumari (2018), Fabrication and In Vitro Characterization of Bioactive Glass/Nano Hydroxyapatite Reinforced Electrospun Poly(ε-Caprolactone) Composite Membranes for Guided Tissue Regeneration, Bioengineering, Vol (3), pp 54 49 Michael J Tolan (1997), “Aortic Valve Repair of Congenital Stenosis With Bovine Pericardium”, The Society of Thoracic Surgeons, Vol 63, pp 465 – 469 50 Ha Le Bao Tran (2017), “Preparation and characterization of acellular porcinepericardium for cardiovascular surgery”, Turkish Journal of Biology, Vol 40, pp 1243 - 1250 51 Istan Urban (2017), Vertical and Horizontal Ridge Augmentation, Quintessence Publishing, pp 146-177 52 Basak Uygun (2010), “Organ Reengineering Through Development of a Transplantable Recellularised Liver Graft Using Decellularised Liver Matrix”, Nature medicine, Vol 16, pp 814 - 820 53 Marta Vallecillo-Rivas (2021), “The Collagen Origin Influences the Degradation Kinetics of Guided Bone Regeneration Membranes”, Polymers, Vol 13 (17), pp 3007 54 Terence Woodsa, Paul F Gratzera (2005), “Effectiveness of three extraction techniques in the development of a decellularized bone– anterior cruciate ligament–bone graft”, Biomaterials, Vol 26, pp 7339 – 7349 Phụ lục: Hình ảnh nghiên cứu Hình ảnh thỏ nghiên cứu Hình quy trình ghép xương màng thỏ Vết mổ sau tháng ghép xương màng Hình ảnh X quang thỏ trước ghép, sau ghép, tháng, tháng tháng Hình ảnh CT sau ghép xương màng Hình ảnh CT sau 01 tháng ghép xương màng Hình ảnh CT sau tháng ghép xương màng Hình ảnh mơ học vùng ghép sau 01 tháng Hình ảnh mơ học vùng ghép sau 03 tháng TRU"O:\'.C DH y oi;·oc cA� f'JIO C◊:°'G H{)A X.-\ H