BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ Phạm Trí Nhựt NGHIÊN CỨU ĐÁNH GIÁ THÀNH PHẦN HÓA HỌC, HOẠT TÍNH SINH HỌC VÀ TÁC DỤNG CHĂM SÓC SỨC KHỎE[.]
BỘ GIÁO DỤC VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ ĐÀO TẠO VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - Phạm Trí Nhựt NGHIÊN CỨU ĐÁNH GIÁ THÀNH PHẦN HÓA HỌC, HOẠT TÍNH SINH HỌC VÀ TÁC DỤNG CHĂM SĨC SỨC KHỎE CỦA SẢN PHẨM “CAO KHAI” SẢN XUẤT TỪ DÂY KHAI (Coptosapelta flavescens Korth.) LUẬN VĂN THẠC SĨ: HÓA HỮU CƠ TP Hồ Chí Minh, 2021 BỘ GIÁO DỤC VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ ĐÀO TẠO VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - Phạm Trí Nhựt NGHIÊN CỨU ĐÁNH GIÁ THÀNH PHẦN HĨA HỌC, HOẠT TÍNH SINH HỌC VÀ TÁC DỤNG CHĂM SÓC SỨC KHỎE CỦA SẢN PHẨM “CAO KHAI” SẢN XUẤT TỪ DÂY KHAI (Coptosapelta flavescens Korth.) Chuyên ngành: Hóa hữu Mã số: 8440114 LUẬN VĂN THẠC SĨ: HÓA HỮU CƠ NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: Hướng dẫn 1: PGS.TS Bạch Long Giang Hướng dẫn 2: PGS.TS Lê Tiến Dũng TP Hồ Chí Minh, 2021 LỜI CAM ĐOAN Tơi Phạm Trí Nhựt, học viên cao học lớp Hữu 2019A, chuyên ngành Hóa hữu cơ, Học viện Khoa học Công nghệ - Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam, xin cam đoan: Đây luận văn thân trực tiếp thực hướng dẫn Thầy PGS TS Bạch Long Giang PGS TS Lê Tiến Dũng khuôn khổ Chương trình Khoa học Cơng nghệ đề tài cấp Sở Khoa học Công nghệ tỉnh Ninh Thuận (Mã số: 12/2020/HĐ-SKHCN ngày 12/10/2020) Các số liệu thơng tin nghiên cứu hồn tồn xác, trung thực khách quan, xác nhận chấp thuận sở nơi nghiên cứu TP Hồ Chí Minh, ngày 19 tháng năm 2021 Học viên Phạm Trí Nhựt i LỜI CẢM ƠN Sau năm học tập cao học Học viện Khoa học Công nghệ - Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam, đến tơi hồn thành chương trình học tập Với lịng biết ơn kính trọng xin chân thành cám ơn: Học viện Khoa học Công nghệ - Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam người thầy, người cô đáng kính tận tình đào tạo, dạy tơi suốt trình học tập Thầy PGS TS Bạch Long Giang Thầy PGS TS Lê Tiến Dũng, hai người thầy trực tiếp giúp đỡ, hướng dẫn, đóng góp nhiều ý kiến q báu, tận tâm dìu dắt tơi bước hồn thành luận văn Tập thể cán nhân viên thuộc Viện khoa học môi trường – Trường Đại học Nguyễn Tất Thành giúp đỡ tận tình để hồn thành luận văn Bên cạnh đó, tơi xin gửi lời cảm ơn đến Tập đồn Vingroup – Cơng ty CP hỗ trợ Chương trình học bổng đào tạo Thạc sĩ, Tiến sĩ nước Quỹ Đổi sáng tạo Vingroup (VINIF), Viện Nghiên cứu Dữ liệu lớn (VINBIGDATA) đồng hành để thực luận văn thạc sĩ TP Hồ Chí Minh, ngày 19 tháng năm 2021 Học viên Phạm Trí Nhựt ii DANH MỤC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT Tên viết tắt Tên tiếng Anh Tên tiếng Việt ALT Alamin amino transferase AST Aspartat amino transferase COD Chemical Oxygen Demand ĐVTN Nhu cầu oxi hóa học Động vật thực nghiệm EC50 Effective Concentration Nồng độ ức chế 50% GC-MS Gas ChromatographyMass Spectrometry Phương pháp sắc ký khí – khối phổ HCT Hematocrit Thể tích hồng cầu HEK-293 Human Embryonic Kidney 293 cells Tế bào thận bào thai người 293 HGB Hemoglobin Lượng huyết sắc tố thể tích máu IASP International Association for the Study of Pain Hiệp hội quốc tế nghiên cứu đau LD0 Maximum Tolerable Dose Liều tối đa không làm chết động vật thử nghiệm LD50 Lethal Dose 50% Liều gây chết 50% LYM Lymphocyte Bạch cầu Lymphô MCH Mean Corpuscle hemoglobin Hàm lượng hemogiobin trung bình hồng cầu MCHC Mean Corpuscular Hemoglobin Concentration Nồng độ huyết sắc tố trung bình thể tích máu MCV Mean Corpuscle Volume Thể tích trung bình hồng cầu iii MONO Monocyte Bạch cầu Mono NF-κB Nuclear factor-κB Yếu tố nhân kappa B NSAIDs Non-steroidal antiinflammatory drugs Nhóm thuốc kháng viêm không steroid NSAIDS Non Steroid Antiinflammation Drug Thuốc kháng viêm không steroid PLT Platelet Count Số lượng tiểu cầu thể tích máu RBC Red Blood Cell Số lượng hồng cầu thể tích máu SEM Standard Error of the Mean Sai số chuẩn trung bình SSRI Selective serotonin reuptake inhibitors Nhóm thuốc ức chế tái thu hồi serotonin chọn lọc TCA Tricyclic antidepressants Nhóm thuốc chống trầm cảm ba vòng TFC Total Flavonoid Content Hàm lượng flavonoid tổng TI Therapeutic Index Chỉ số điều trị TNF-a Tumor necrosis factor-a Yếu tố hoại tử u - alpha TPC Total Polyphenol Content Hàm lượng polyphenol tổng WBC White Blood Cell Số lượng bạch cầu thể tích máu iv DANH MỤC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Hình 1.1 Dây khai (Coptosapelta tomentosa (Blume) Valeton ex K Heyne) Hình 1.2 Các hợp chất phân lập từ rễ C flavescens Hình 1.3 Hình ảnh khảo sát điều tra dược liệu địa bàn tỉnh Ninh Thuận 11 Hình 2.1 Dây khai Cao Khai thu thập tỉnh Ninh Thuận 25 Hình 2.2 Quá trình sản xuất Cao Khai 26 Hình 2.3 Biểu chuột đau quặn thử nghiệm khảo sát tác động giảm đau ngoại biên 41 Hình 2.4 Biểu giật đuôi chuột thử nghiệm giảm đau trung ương 42 Hình 3.1 Hình ảnh vi học bột cao dây Khai 43 Hình 3.2 Cao Khai bột Cao Khai 44 Hình 3.3 Các phản ứng xác định thành phần hóa thực vật định tính: Anthraquinon (a), saponin (b), glycosid tim (c), triterpenoid (d), flavonoid (e), chất khử (f) 46 Hình 3.4 Hàm lượng polyphenol, flavonoid saponin triterpenoid có Cao Khai 48 Hình 3.5 Giá trị IC50 khả quét gốc tự DPPH ABTS Cao Khai so với Vitamin C 50 Hình 3.6 Hình ảnh quan chuột sau 14 ngày thử nghiệm độc tính cấp 54 Hình 3.7 Hình ảnh quan chuột sau 90 ngày thử nghiệm độc tính bán trường diễn 58 Hình 3.8 Độ sưng phù chân chuột lô thử nghiệm theo thời gian 63 Hình 3.9 Độ sưng phù chân chuột theo thời gian chứng bệnh diclofenac mg/kg 64 Hình 3.10 Độ sưng phù chân chuột theo thời gian lô chứng bệnh, Cao khai 400 800 mg/kg thể trọng 66 v Hình 3.11 Độ sưng phù chân chuột theo thời gian lô Diclofenac, Cao khai 400 800 mg/kg 66 Hình 3.12 Số lần đau quặn chuột lơ chứng bệnh lơ chứng dương 69 Hình 3.13 Thời gian đau quặn chuột lô chứng bệnh lô sử dụng thuốc 70 Hình 3.14 Số lần đau quặn chuột lô Cao Khai 400 mg/kg 71 Hình 3.15 Thời gian đau quặn chuột lơ Cao Khai 400 mg/kg 72 Hình 3.16 Số lần đau quặn chuột lô Cao Khai 800 mg/kg 73 Hình 3.17 Thời gian đau quặn chuột lô Cao Khai 800 mg/kg 74 Hình 3.18 Tiềm thời giật lơ chứng bệnh lơ chứng dương 76 Hình 3.19 Tiềm thời giật đuôi lô chuột thử nghiệm 78 vi DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Các saponin phân lập từ rễ Dây khai Bảng 1.2 Độ tro tồn phần bột Cao KhaiLỗi! Thẻ đánh dấu khơng được xác định Bảng 1.3 Độ tro không tan acid bột Cao KhaiLỗi! Thẻ đánh dấu không được xác định Bảng 3.1 Độ ẩm bột Cao Khai 44 Bảng 3.2 Kết phân tích sơ hóa thực vật Cao Khai 45 Bảng 3.3 Hàm lượng saponin tổng Cao Khai 47 Bảng 3.4 Hàm lượng anthranoid toàn phần Cao Khai 47 Bảng 3.5 Kết phân tích hàm lượng vi sinh vật kim loại nặng Cao Khai 52 Bảng 3.6 Tỷ lệ chuột sống/chết lô thử nghiệm độc tính cấp 54 Bảng 3.7 Ảnh hưởng Cao Khai đến trọng lượng chuột thử nghiệm đánh giá độc tính cấp 55 Bảng 3.8 Ảnh hưởng Cao Khai đến thông số huyết học chuột bình thường thử nghiệm độc tính cấp 56 Bảng 3.9 Ảnh hưởng Cao Kha lên chức gan, thận chuột thử nghiệm độc tính cấp 57 Bảng 10 Tỷ lệ chuột sống/chết lơ thử nghiệm độc tính bán trường diễn 58 Bảng 3.11 Ảnh hưởng Cao Khai đến trọng lượng chuột thử nghiệm đánh giá độc tính bán trường diễn 59 Bảng 3.12 Ảnh hưởng Cao Khai đến thông số huyết học chuột bình thường thử nghiệm độc tính bán trường diễn 60 Bảng 3.13 Ảnh hưởng Cao Khai lên chức gan, thận chuột thử nghiệm độc tính bán trường diễn 61 vii Bảng 3.14 Sự thay đổi độ phù chân chuột theo lô thử nghiệm (%) 63 Bảng 3.15 Khả giảm độ phù bàn chân chuột I (%) lô diclofenac mg/kg lô Cao khai 66 Bảng 3.16 Số lần đau quặn lô chuột thử nghiệm giảm đau ngoại biên (lần) 68 Bảng 3.17 Thời gian đau quặn lô chuột thử nghiệm giảm đau ngoại biên (giây) 69 Bảng 3.18 Tỷ lệ giảm số lần đau quặn lô Cao Khai 800 mg/kg so với lô chứng bệnh 74 Bảng 3.19 Tỷ lệ giảm thời gian đau quặn lô Cao Khai 800 mg/kg so với lô chứng bệnh 75 Bảng 3.20 Tiềm thời giật đuôi lô chuột thử nghiệm nhúng đuôi (giây) 76 viii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii DANH MỤC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT iii DANH MỤC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ v DANH MỤC CÁC BẢNG vii MỞ ĐẦU xiv CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan nguyên liệu 1.2 Tình hình nghiên cứu thuộc lĩnh vực đề tài 1.2.1 Ngoài nước 1.2.2 Trong nước 1.3 Tổng quan thử nghiệm độc tính cấp 14 1.3.1 Định nghĩa 14 1.3.2 Tầm quan trọng việc xác định LD50 14 1.3.3 Phương pháp xác định LD50 15 1.4 Tổng quan viêm 15 1.4.1 Khái niệm viêm 15 1.4.2 Nguyên nhân gây viêm 16 1.4.3 Các mơ hình nghiên cứu kháng viêm thực nghiệm 16 1.5 Tổng quan đau 20 1.5.1 Định nghĩa 20 1.5.2 Các mơ hình khảo sát tác dụng giảm đau 20 CHƯƠNG NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .24 2.1 Mục tiêu nội dung nghiên cứu 24 2.2 Nguyên liệu hóa chất 24 2.3 Phương pháp phân tích 26 2.3.1 Đánh giá tiêu 26 2.3.2 Phân tích sơ thành phần hóa thực vật 27 2.3.3 Đánh giá hàm lượng số hoạt chất 31 x 2.3.4 Đánh giá hoạt tính kháng oxi hóa 34 2.3.5 Đánh giá xác định tính an tồn hàm lượng kim loại nặng vi sinh vật cao Khai 35 2.3.6 Đánh giá độc tính sản phẩm cao Khai 36 2.3.6.1 Khảo sát độc tính cấp đường uống chuột nhắt trắng 36 2.3.6.2 Khảo sát độc tính bán trường diễn đường uống chuột nhắt trắng 37 2.3.7 Khảo sát tác động kháng viêm cấp mơ hình gây viêm bàn chân chuột carrageenan 37 2.3.8 Đánh giá tác dụng giảm đau sản phẩm Cao Khai 39 2.3.8.1 Khảo sát tác động giảm ngoại biên phương pháp gây đau quặn acid acetic 39 2.3.8.2 Khảo sát tác động giảm đau trung ương phương pháp nhúng đuôi chuột 41 2.4 Xử lý kết phân tích thống kê 42 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 43 3.1 Xác định sơ thành phần hóa lý Cao Khai 43 3.1.1 Kết khảo sát vi học bột Cao Khai 43 3.1.2 Xác định độ ẩm 43 3.1.3 Xác định độ tro toàn phần 44 3.1.4 Xác định độ tro không tan acid 44 3.1.4 Kết sơ thành phần hóa thực vật Cao Khai 45 3.2 Kết định lượng số nhóm hoạt chất 46 3.2.1 Hàm lượng saponin tổng 46 3.2.2 Hàm lượng anthranoid toàn phần 47 3.2.3 Hàm lượng polyphenol, flavonoid saponin triterpenoid 48 3.2.3 Kết đánh giá hoạt tính chống oxi hóa 49 3.3 Kết xác định hàm lượng kim loại nặng, tính an tồn vi sinh vật Cao Khai 52 3.3 Kết đánh giá độc tính Cao Khai 53 xi 3.3.1 Độc tính cấp Cao Khai 53 3.3.1.1 Tác động Cao Khai lên trọng lượng chuột thử nghiệm 55 3.3.1.2 Tác động Cao Khai lên số huyết học 55 3.3.1.3 Tác động Cao Khai lên chức gan, thận 57 3.3.2 Độc tính bán trường diễn Cao Khai 58 3.3.2.1 Tác động Cao Khai lên trọng lượng chuột thử nghiệm 59 3.3.2.2 Tác động Cao Khai lên số huyết học 59 3.3.2.3 Tác động Cao Khai lên chức gan thận 61 3.4 Kết đánh giá tác dụng kháng viêm Cao Khai 62 3.4.1 So sánh mức độ phù chân chuột lô sinh lý lô chứng bệnh 62 3.4.2 So sánh mức độ phù chân chuột lô chứng bệnh Diclofenac mg/kg 64 3.4.3 So sánh mức độ phù chân chuột lô chứng bệnh lô Cao khai liều 400 800 mg/kg 65 3.4.4 So sánh mức độ phù chân chuột lô diclofenac mg/kg lô cao thử 66 3.5 Tác dụng giảm đau Cao Khai 67 3.5.1 Khảo sát mơ hình gây đau quặn acid acetic 67 3.5.1.1 Khảo sát số lần đau mơ hình gây đau quặn acid acetic 67 3.5.1.2 Khảo sát số lần đau quặn chuột lô chứng bệnh lô chứng dương 68 3.5.1.3 Khảo sát thời gian đau mơ hình gây đau quặn acid acetic 69 3.5.1.4 Khảo sát thời gian đau chuột lô chứng bệnh lô chứng dương 70 3.5.2 Khảo sát tác dụng giảm đau ngoại biên Cao Khai liều 400 mg/kg 71 3.5.2.1 Khảo sát số lần đau quặn lơ chuột mơ hình tiêm phúc mơ acid acetic 71 xii 3.5.2.2 Thời gian đau quặn lơ chuột mơ hình tiêm phúc mơ acid acetic 72 3.5.3 Khảo sát tác dụng giảm đau ngoại biên Cao Khai liều 800 mg/kg 73 3.5.3.1 Số lần đau quặn lô chứng bệnh, chứng dương, Cao Khai 800mg/kg mô hình tiêm phúc mơ acid acetic 73 3.5.3.2 Thời gian đau quặn lô chứng bệnh, chứng dương, Cao Khai 800mg/kg mơ hình tiêm phúc mô acid acetic 74 3.5.4 Khảo sát tác động giảm đau trung ương mơ hình nhúng chuột 75 3.5.4.1 Lựa chọn chuột vào thử nghiệm 75 3.5.4.2 Khảo sát mơ hình gây đau phương pháp nhúng đuôi chuột 75 3.5.5 Khảo sát tác dụng giảm đau trung ương Cao Khai 77 BÀN LUẬN KẾT QUẢ 79 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 91 BÀI BÁO KHOA HỌC 92 TÀI LIỆU THAM KHẢO .93 PHỤ LỤC SỐ LIỆU THỰC NGHIỆM 110 PHỤ LỤC ANOVA 118 PHỤ LỤC TỔNG QUAN VỀ CÁC PHƯƠNG PHÁP THỬ NGHIỆM IN VITRO TRÊN ĐỘNG VẬT 144 xiii MỞ ĐẦU Dây Khai (Coptosapelta flavescens Korth.) dược liệu quý có tên gọi Vàng hoan, Dây cổ rùa, Dây họng trâu sử dụng từ lâu đời nhiều dân tộc giới Ở Malaysia, rễ Dây khai dùng loại kem dưỡng da thuốc đắp cho trẻ nhỏ Thuốc sắc từ rễ có tác dụng điều trị nhiễm trùng giun sán, đau bụng, sốt viêm loét mũi Ở Sumatra, rễ dây khai luộc chín, nghiền thành bột, chà xát khắp thể giúp chống lại sốt thấp khớp Tuy nhiên, phân bố đặc hữu, nghiên cứu lồi Theo kinh nghiệm dân gian lâu đời đồng bào Rhe tỉnh Quảng Ngãi, Bình Định dùng nước sắc rễ Khai để rửa vết thương chém, chặt, bị chơng, làm cho vết thương mủ, chóng sinh cơ, lên da non Dạng thuốc xơng cịn dùng chữa cảm cúm Từ lâu, đồng bào dân tộc phối hợp dây khai với nhiều loại dược liệu khác, tạo phương thuốc bí truyền mang tên Cao Khai Cao Khai sử dụng phương thuốc y học cổ truyền với tác dụng điều trị bệnh xương khớp, kháng viêm, kháng khuẩn, làm thuốc bổ huyết, tăng cường sinh lực Cao Khai sử dụng rộng rãi nhiều tỉnh miền Nam Nam Trung Bộ nước ta, chí cịn bán sang nước láng giềng Lào, Campuchia… Tuy nhiên, người dân sử dụng Cao Khai điều trị bệnh chủ yếu theo kinh nghiệm dân gian, thiếu sở khoa học, chưa lưu ý nghiên cứu độc tính sử dụng lâu dài hết đánh giá hiệu thực công dụng sản phẩm Cao Khai Hơn nữa, điều đáng quan tâm chưa có hệ thống tiêu chuẩn kiểm nghiệm Cao Khai nên dễ dẫn đến giả mạo, nhầm lẫn gây ảnh hưởng đến sức khỏe người sử dụng đồng thời gây khó khăn cho việc nghiên cứu tác dụng sinh học cơng dụng chữa bệnh Vì vậy, để làm rõ giá trị thực sản phẩm Cao Khai sở cho việc sử dụng sản phẩm việc hỗ trợ sức khỏe, học viên tiến hành đề tài “Nghiên cứu đánh giá thành phần hóa học, hoạt tính sinh học tác dụng chăm sóc sức khỏe sản phẩm “Cao Khai” sản xuất từ dây khai (Coptosapelta Flavescens Korth.) xiv CHƯƠNG TỔNG QUAN Ngày nay, thuốc có nguồn gốc tự nhiên ngày sử dụng rộng rãi phịng ngừa điều trị bệnh tật tính an toàn, dễ tiếp cận Theo tổ chức Y tế giới (WHO) đánh giá 80% dân số giới dựa vào y học cổ truyền để đáp ứng cho nhu cầu chăm sóc sức khoẻ ban đầu, chủ yếu thuốc từ cỏ thực vật Sự quan tâm hệ thống y học cổ truyền đặc biệt loại thuốc dược thảo, thực tế ngày gia tăng nước phát triển phát triển hai thập kỷ qua Các thị trường dược thảo quốc gia toàn cầu tăng trưởng nhanh chóng, mang lại nhiều lợi nhuận kinh tế Tuy nhiên trước nguy nạn phá rừng khai thác nguồn tài nguyên mức nhiều quốc gia giới, nhiều vị thuốc hay, thuốc quý dân gian có nguy bị tuyệt chủng không bảo tồn, khai thác đầu tư nghiên cứu hợp lý Trong đó, Dây khai (Coptosapelta flavescens Korth.) loài phân bố đặc hữu khu vực Đông Nam Á với nhiều giá trị sinh học, tác dụng sinh học báo cáo thông qua ghi nhận thực tế sử dụng Việc dùng dây Khai để tạo sản phẩm có cơng dụng hỗ trợ sức khỏe mang tên “Cao Khai” từ lâu người dân địa tiến hành truyền tay sử dụng Nhưng sử dụng sản phẩm Cao Khai loại thuốc điều trị dựa kinh nghiệm cảm quan sử dụng ẩn chứa nhiều rủi ro tính an tồn, ảnh hưởng đến sức khỏe người bệnh Song song đó, chưa có sách kiểm sốt, quản lý việc lưu hành sản phẩm Cao Khai dẫn đến việc khai thác dây khai trở nên kiểm sốt Về lâu dài khơng bảo tồn có khả làm đứt đoạn nguồn nguyên liệu quý giá tự nhiên Do đó, cần thiết có nghiên cứu chuyên sâu sản phẩm Cao Khai, để từ mặt khẳng định giá trị sản phẩm này, mặt khác sở để đề xuất quy trình kiểm sốt, chuẩn hóa việc sản xuất sản phẩm từ khâu khai thác đến khâu sản xuất có kế hoạch gây giống, bảo tồn loại dược liệu quý giá tương lai 1.1 TỔNG QUAN VỀ NGUYÊN LIỆU Tên khoa học: Coptosapelta flavescens Korth., họ Cà phê (Rubiaceae) Tên đồng danh: Coptosapelta tomentosa (Blume) Vahl ex Heyne var dongnaiensis (Pit.) Phamh, Coptosapelta flavescens var dongnaiensis Pierre ex Pit Tên Việt Nam: Dây khai, Vàng hoan, Dây cổ rùa, Dây họng trâu [5, 6] Vị trí bảng phân loại thực vật: Giới: Thực vật (Plante) Ngành: Ngọc lan (Magnoliophyta) Lớp: Hai mầm (Magnoliopsida) Bộ: Long đởm (Gentianales) Họ: Cà phê (Rubiaceae) Chi: Coptosapelta Loài: Coptosapelta flavescens Korth Đặc điểm thực vật học: Dây khai có dạng dây leo gỗ, dài 5-7m Cành trịn màu nâu sẫm, lúc non có lơng, sau nhẵn Lá mọc đối, có cuống ngắn dài 3-12mm, phiến mỏng, hình bầu dục hình trứng, dài 4,5-11cm, rộng 2,5-6cm, gốc gần trịn, đầu có mũi nhọn ngắn, mặt màu xanh lục, mặt nhạt, có lơng nhỏ gân Lá kèm hình tam giác hẹp, dài khoảng 3-6mm, rụng sớm Cụm hoa xim hay kẽ đầu cành, dài 6-8cm, có lơng mang nhiều hoa màu trắng đến vàng nhạt, mùi thơm hắc Nụ hoa hình trụ, dài 14-18mm Phần đài hình ống, thùy đài có hình trịn hay tam giác, dài khoảng 1mm; có ống tràng ngắn thùy tràng, thùy xòe rộng cong Nhị 5, đính họng tràng Bầu ơ, cao 2,5mm, vịi nhụy dài 7-9mm, thị ngồi ống tràng Quả nang hình cầu có núm nhọn đầu, đường kính 6-8mm, có ơ, chín nứt thành 2-3 mảnh, chứa nhiều hạt nhỏ, dẹt, có cánh Mùa hoa tháng 9-12, mùa vào tháng 1-4 Rễ chặt có mùi khai nồng, khó chịu nên có người cịn gọi Rễ khai [5] Hình 1.1 Dây khai (Coptosapelta tomentosa (Blume) Valeton ex K Heyne) Hiện nay, giới, Chi Coptosapelta gồm có 16 lồi chủ yếu phân bố nước Châu Á Trung Quốc, Indonesia, Nhật Bản, Lào, Malaysia, Myanma, Phillipin, Thái Lan Việt Nam Dây khai (Coptosapelta tomentosa (Blume) Valeton ex K Heyne) thuốc quý sử dụng từ lâu đời nhiều dân tộc giới Ở Malaysia, rễ Dây khai dùng loại kem dưỡng da thuốc đắp cho trẻ nhỏ Thuốc sắc từ rễ có tác dụng điều trị nhiễm trùng giun sán, đau bụng, sốt viêm loét mũi [6-7] Ở Sumatra, rễ Dây khai luộc chín, nghiền thành bột, chà xát khắp thể giúp chống lại sốt thấp khớp [8] Tuy nhiên, phân bố đặc hữu, cịn nghiên cứu lồi 1.2 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU THUỘC LĨNH VỰC CỦA ĐỀ TÀI 1.2.1 Ngoài nước Năm 2000, S Jansen đồng công bố nghiên cứu đánh giá khả tích lũy nhơm khảo sát 251 mẫu thực vật thuộc số chi họ Cà phê (Rubiaceae) Kết cho thấy nhôm tích lũy nhiều số lồi thuộc chi Coptosapelta [9] Năm 2014, nghiên cứu sàng lọc in vitro 21 mẫu dược liệu dùng y học dân tộc Thái Lan để chữa tiêu chảy, kiết lị, dịch chiết aceton C flavescens có hoạt tính mạnh mơ hình thử nghiệm với E histolistica G intestinalis Từ cao aceton này, nhóm nghiên cứu Thái Lan phân lập dẫn chất anthraquinon: 1-hydroxy-2hydroxymethylanthraquinon Ở nồng độ thử nghiệm 20 µg/ml, chất có khả ức chế phát triển E histolistica tương đương Metroninazol (2,5 µg/ml) đặc biệt với nồng độ 2,5 µg/ml, 1-hydroxy-2hydroxymethylanthraquinon cho khả ức chế mạnh Metronidazol G instestinalis sau ủ 12 [10] Một năm sau, nhóm nghiên cứu tìm chế tác động 1-hydroxy-2-hydroxymethylanthraquinon G intestinalis giá trị IC50 = 0,42 µg/ml, chất gây biến đổi màng tế bào cảm ứng apoptosis sau lô thử với Metronidazol chưa có thay đổi đáng kể [11] Năm 2014, nhóm nghiên cứu Wipapan Kongyen cộng Thái Lan phân lập dẫn chất Anthraquinon dẫn chất Naphtoquinon từ dịch chiết aceton rễ C flavescens Dựa các phương pháp phổ, cấu trúc hóa học chất xác định 1,4-dimethoxy2-methylanthraquinon (4), 2-amino-3-methoxycarbonyl-1,4-naphtho-quinon (5), 1-hydroxy-2-hydroxymethyl-anthraquinon (6), 1-hydroxy-2methoxycarbonyl-anthraquinon (7) 2-methoxycarbonyl-anthraquinon (8) Bên cạnh đó, chất tiến hoạt tính sinh học bao gồm: kháng khuẩn (với Staphylococcus aureus Staphylococcus aureus kháng methicillin), chữa kiết lỵ độc tế bào (trên dòng tế bào ung thư thận – Vero cell) Kết cho thấy, dẫn chất anthraquinon, bao gồm: (5), (6), (7) cho tác động mức trung bình, đặc biệt (6) có hoạt tính ức chế Giardia intestinalis với giá trị MIC 2,5 µg/ml tương đương với chứng dương Metronidazol Điều hợp lý dân gian, loài dùng để chữa kiết lỵ trẻ em [12] R1 R2 R3 (4) OMe Me OMe (6) OH CH2OH H (7) OH COOMe H (8) H COOMe H Hình 1.2 Các hợp chất phân lập từ rễ C flavescens Năm 2017, dịch chiết Methanol thân C flavescens chứng minh có khả hạ huyết áp Kết cơng bố vào năm 2017 nhóm nghiên cứu thuộc Indonesia [13] Theo nghiên cứu này, dịch chiết methanol thân C flavescens có tác dụng làm dãn mạch mơ hình gây co mạch với phenylephedrin chuột Nghiên cứu cịn cho tác dụng gây polyphenol saponin có thân C flavescens kích hoạt phóng thích NO nội sinh gây dãn mạch Năm 2018, khả kháng viêm in vitro in vivo dịch chiết methanol rễ C flavescens chứng minh qua nghiên cứu Indonesia Cụ thể, kết nghiên cứu in vitro cho thấy EC50 chiết xuất methanol 1,905 ± 0,119 mg/ml, thấp so với indomethacin (10,288 ± 0,212 mg/ml) thử nghiệm kháng viêm màng hồng cầu Cịn mơ hình gây phù chân chuột carragenan, liều thử 1200 mg/kg cao methanol cho khả kháng viêm tương đương 20 mg/kg Indomethacin [14] Năm 2018, nhằm cung cấp thêm thông tin sâu hợp chất có hoạt tính Dây khai, Fitriyana cơng tiến hành sử dụng rễ chiết dung môi với độ phân cực tăng dần hexan, ethyl acetat ... thực sản phẩm Cao Khai sở cho việc sử dụng sản phẩm việc hỗ trợ sức khỏe, học viên tiến hành đề tài ? ?Nghiên cứu đánh giá thành phần hóa học, hoạt tính sinh học tác dụng chăm sóc sức khỏe sản phẩm. .. KHOA HỌC VÀ ĐÀO TẠO VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - Phạm Trí Nhựt NGHIÊN CỨU ĐÁNH GIÁ THÀNH PHẦN HÓA HỌC, HOẠT TÍNH SINH HỌC VÀ TÁC DỤNG CHĂM SĨC SỨC KHỎE CỦA... SĨC SỨC KHỎE CỦA SẢN PHẨM “CAO KHAI? ?? SẢN XUẤT TỪ DÂY KHAI (Coptosapelta flavescens Korth. ) Chuyên ngành: Hóa hữu Mã số: 8440114 LUẬN VĂN THẠC SĨ: HÓA HỮU CƠ NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: Hướng dẫn