Ảnh hưởng của naocl, môi trường và các chất điều hòa sinh trưởng đến nhân giống sắn km140 sạch bệnh (manihot esculenta crantz) bằng phương pháp in vitro

9 Trường Đại học Nơng Lâm TP Hồ Chí Minh Effect of NaOCl, growth media, and plant growth regulators on in vitro propagation of disease-free KM140 cassava cultivar (Manihot esculenta Crantz) Duyen T T Nguyen1∗ , Nien C Nguyen1 , Thanh T Duong1 , & My T Nguyen2 Crop Science, Nong Lam University, Ho Chi Minh City, Vietnam Department of Mushroom Research and Biotechnology, Hung Loc Agricultural Experimental Research Center, Dong Nai, Vietnam ARTICLE INFO ABSTRACT Research Paper Cassava mosaic disease (CMD) is one of the most dangerous diseases that Received: September 01, 2021 has caused heavy losses in yield and starch content on cassava In vitro propagation using disease-free cassava stakes was an optimal method to Revised: January 28, 2022 Accepted: February 11, 2022 produce healthy seedlings In this study, sodium hypochlorite (NaOCl), growth media (MS, ½ MS and Knudson C) and growth regulators (BA: Benzyl adenine, NAA: Naphthalene acetic acid, GA: Gibberellin) were used to determine an appropriate time for sample sterilization and the suitKeywords able concentration for shoot multiplication and root induction of KM140 cassava cultivar The results showed that sample sterilization at 8% NaOCl Cassava concentration in gave the highest survival rate (71.7%) at 14 d of Growth media culture Cassava explants cultured on MS medium supplemented with Growth regulator mg/L BA gained the highest number of shoots (2.3 shoots), shoot height In vitro propagation (10.3 mm) and the number of leaves (4.2 leaves/shoot) at 50 d of culture The MS medium supplemented with 0.07 mg/L NAA and 0.03 mg/L ∗ Corresponding author GA was applicable for the rooting stage of KM140 cassava cultivar (19.8 roots/plantlet at 60 d of culture) The results of the study were fundamental to in vitro propagation process of disease-free KM140 cassava mulNguyen Thi Thanh Duyen Email: nt- tiplication thanhduyen@hcmuaf.edu.vn Cited as: Nguyen, D T T., Nguyen, N C., Duong, T T., & Nguyen, M T (2022) Effect of NaOCl, growth media, and plant growth regulators on in vitro propagation of disease-free KM140 cassava cultivar (Manihot esculenta Crantz) The Journal of Agriculture and Development 21(1), 9-16 www.jad.hcmuaf.edu.vn Tạp chí Nơng nghiệp Phát triển 21(1) 10 Trường Đại học Nơng Lâm TP Hồ Chí Minh Ảnh hưởng NaOCl, mơi trường chất điều hịa sinh trưởng đến nhân giống sắn KM140 bệnh (Manihot esculenta Crantz) phương pháp in vitro Nguyễn Thị Thanh Duyên1∗ , Nguyễn Châu Niên1 , Dương Tấn Thành1 & Nguyễn Thị Mỵ2 Khoa Nông Học, Trường Đại Học Nơng Lâm TP.HCM, TP Hồ Chí Minh Bộ Mơn Nghiên Cứu Nấm Và Công Nghệ Sinh Học, Trung Tâm Nghiên Cứu Thực Nghiệm Nông Nghiệp Hưng Lộc, Đồng Nai THƠNG TIN BÀI BÁO TĨM TẮT Bài báo khoa học Bệnh khảm sắn (CMD) bệnh nguy hiểm gây thiệt hại nặng nề suất hàm lượng tinh bột sắn Nhân giống in Ngày nhận: 01/09/2021 vitro từ nguồn giống sắn bệnh phương pháp tối ưu nhằm sản xuất Ngày chỉnh sửa: 28/01/2022 giống bệnh khảm Trong nghiên cứu này, Natri hypoclorit Ngày chấp nhận: 11/02/2022 (NaOCl), loại mơi trường ni cấy (MS, ½ MS Knudson C) chất điều hoà sinh trưởng (BA: Benzyl adenine, NAA: Naphthalene acetic acid, Từ khóa GA: Gibberellin) sử dụng để xác định nồng độ thời gian phù hợp cho trình vào mẫu, nhân chồi tạo rễ giống sắn KM140 Giống sắn KM140 Các tiêu tỷ lệ mẫu sống, mẫu nhiễm, mẫu chết, số chồi, chiều cao in vitro chồi, số rễ chiều dài rễ sắn in vitro đánh giá Kết nghiên cứu cho thấy, khử trùng mẫu nồng độ 8% NaOCl thời gian Kích thích tăng trưởng phút cho tỷ lệ mẫu sống cao (71,7%) 14 ngày sau cấy mẫu Môi trường nuôi cấy sắn KM140 cấy vào mơi trường MS có bổ sung mg/L BA cho số ∗ chồi (2,3 chồi), chiều cao chồi (10,3 mm) số (4,2 lá/chồi) cao Tác giả liên hệ thời điểm 50 ngày sau cấy Môi trường MS bổ sung 0,07 mg/L NAA 0,03 mg/L GA thích hợp cho việc rễ sắn (19,8 rễ/cây 60 Nguyễn Thị Thanh Duyên ngày sau cấy) Kết nghiên cứu sở để hồn thiện quy trình Email: ntnhân giống sắn KM140 bệnh theo phương pháp in vitro thanhduyen@hcmuaf.edu.vn Theo thống kê Cục BVTV (2020), diện tích trồng sắn nước khoảng 421.059 Ở Việt Nam, sắn (Manihot esculenta có 52.180 bị nhiễm bệnh khảm sắn phân Crantz) lương thực quan trọng đứng hàng bố 20 tỉnh, thành phố có chiều hướng lan thứ ba sau lúa ngơ Cây sắn chuyển rộng, khó kiểm sốt Một biện pháp đổi vai trò từ lương thực, thực phẩm thành để hạn chế lây lan thiệt hại bệnh khảm công nghiệp hàng hóa có lợi cạnh tranh sắn cần cung cấp nguồn giống bệnh cao Sản xuất sắn nguồn thu nhập hộ cho người nông dân Phương pháp nhân giống in nông dân nghèo sắn dễ trồng, kén đất, vitro xem phương pháp tối ưu vốn đầu tư, phù hợp sinh thái điều kiện kinh khuyến cáo áp dụng để sản xuất giống bệnh tế nông hộ (Hy & ctv., 2020) Hiện nay, (Hamill, 2014), đặc biệt sắn (Escobar suất chất lượng sắn giảm mạnh & ctv., 2013) Phương pháp thực gây hại nhiều loại dịch hại khác Trong phịng thí nghiệm, hồn tồn tách biệt vecđó, bệnh khảm sắn (Cassava Mosaic Disease tor truyền bệnh Tuy nhiên, chưa có quy trình - CMD) bệnh nguy hiểm cụ thể cho giai đoại nhân giống in vitro giới Việt Nam (Uke & ctv., 2018), sắn KM140 Đồng thời, để nhân giống in vitro làm giảm suất sắn từ 15% - 24% cho giống khác nhau, quy trình khử mẫu Châu Phi (Thresh & ctv., 1997), giảm 50% - 70% môi trường nuôi cấy cho giai đoạn nhân Zambia (Muimba-Kankolongo & ctv., 1997) chồi, tạo rễ khác (Minh, 2005) Vì vậy, Đặt Vấn Đề Tạp chí Nơng nghiệp Phát triển 21(1) www.jad.hcmuaf.edu.vn 11 Trường Đại học Nơng Lâm TP Hồ Chí Minh việc xác định chất khử trùng, môi trường chất điều hồ sinh trưởng phù hợp cho q trình vào mẫu, nhân chồi tạo hoàn chỉnh vấn đề cần thiết để tiến tới hoàn thiện quy trình nhân giống in vitro sắn KM140 Vì vậy, nghiên cứu tiến hành nhằm xác định nồng độ thời gian khử trùng mẫu, đồng thời xác định môi trường nuôi cấy nồng độ chất điều hòa sinh trưởng phù hợp cho việc nhân vơ tính giống sắn KM140, giống sắn trồng phổ biến khu vực phía Nam Vật Liệu Phương Pháp Nghiên Cứu không nhiễm CMD dùng thực thí nghiệm với mẫu gộp 10 thu từ 10 mẫu Giếng (-) đối chứng âm (mẫu không nhiễm CMD), giếng (+) đối chứng dương (mẫu nhiễm virus) (phản ứng âm tính với SLCMV - khơng xuất vạch giếng) M: Marker (thang tiêu chuẩn để xác định kích thước vạch) Sản phẩm PCR có kích thước ≈523 bp Từ sắn KM140 bệnh, cắt đoạn chồi sắn để khử trùng mẫu, thực thí nghiệm 2.1 Ảnh hưởng nồng độ NaOCl thời gian khử trùng mẫu thân sắn KM 140 in vitro Quy trình thực Thí nghiệm nhằm đánh giá ảnh hưởng nồng độ NaOCl thời gian khử trùng mẫu, từ xác định nồng độ NaOCl thời gian thích hợp để vào mẫu chồi sắn KM140 Thí nghiệm hai Hình Quy trình thực yếu tố bố trí theo kiểu hồn tồn ngẫu nhiên (CRD), gồm nghiệm thức với lần lặp lại Số thí nghiệm Ư = 27 ô, ô có 20 chai, Vật liệu: Giống sắn KM140 lấy từ vườn chai mẫu Tổng số lượng mẫu 540 mẫu giống Trung tâm Nghiên cứu Thực nghiệm Yếu tố A gồm nồng độ NaOCl (A1: 4%, A2: Hưng Lộc, sau áp dụng kỹ thuật PCR để kiểm 8%, A3: 12%) tra diện virus gây bệnh khảm nhằm Yếu tố B gồm khoảng thời gian (B1: phút; đảm bảo giống không mang mầm bệnh Những mẫu nhiễm SLCMV mẫu có thang DNA B2: 10 phút; B3: 15 phút) 523 bp Quy trình khử trùng: rửa chồi sắn vòi nước sạch, ngâm dung dịch xà phịng có Cặp mồi đặc hiệu cho SLCMV (Uke & ctv., nồng độ 0,5% phút, ngâm cồn 70◦ 2018) sử dụng phản ứng PCR là: 30 giây ngâm mẫu NaOCl theo nồng độ SLCMV - A - F2: thời gian nghiệm thức Sau cắt chồi 5’-TGTGAAGGCCCATGTAAGGT- 3’ với kích thước 1,5 cm (Hình 1) để cấy vào chai SLCMV - A - R3: có chứa mơi trường MS Theo dõi toàn số 5’-CGTATCGTATACAGGRTTAGA- 3’ mẫu cấy với tiêu: tỷ lệ mẫu nhiễm (%), tỷ lệ mẫu chết (%) tỷ lệ mẫu sống (%) thời điểm 21 ngày sau vào mẫu Hình Kết PCR kiểm tra sắn giống khơng mang mầm bệnh Hình 3.Mẫu cấy vào môi trường MS Ghi chú: Sản phẩm PCR chạy điện di gel agarose 2% Giếng - 12 mẫu gộp sắn www.jad.hcmuaf.edu.vn Tạp chí Nơng nghiệp Phát triển 21(1) 12 Trường Đại học Nông Lâm TP Hồ Chí Minh 2.2 Ảnh hưởng mơi trường BA (Benzyl adenine) đến khả nhân chồi sắn in vitro Thí nghiệm thực nhằm xác định loại môi trường nồng độ BA thích hợp cho giai đoạn nhân chồi in vitro Thí nghiệm hai yếu tố bố trí theo kiểu hồn toàn ngẫu nhiên (CRD), gồm 12 nghiệm thức với lần lặp lại Số thí nghiệm 12 Ư = 36 ơ, có 25 bịch, bịch mẫu Tổng số lượng mẫu 900 mẫu Yếu tố A gồm môi trường (A1: MS, A2: MS, A3: Knucdson C) ½ Yếu tố B gồm mức nồng độ BA (B1: 1,0 mg/L; B2: 2,0 mg/L; B3: 3,0 mg/L; B4: 4,0 mg/L) Các bước tiến hành: Sử dụng mẫu cấy thí nghiệm để làm vật liệu cho thí nghiệm Cắt mẫu cấy với kích thước 1,5 cm có mang mắt mầm, cấy vào bịch với môi trường nghiệm thức tương ứng Chỉ tiêu theo dõi: Chọn 10 mẫu/lần lặp lại nghiệm thức để theo dõi tiêu: số chồi/mẫu (chồi), chiều cao chồi (cm) số lá/chồi (lá) 2.3 Ảnh hưởng nồng độ GA (Gibberellin) NAA (Naphthalene acetic acid) lên khả tạo rễ sắn in vitro Thí nghiệm thực nhằm xác định nồng độ GA NAA thích hợp cho giai đoạn tạo rễ in vitro Thí nghiệm hai yếu tố bố trí theo kiểu hồn tồn ngẫu nhiên (CRD), gồm nghiệm thức với lần lặp lại Số thí nghiệm Ư 3=27 ơ, có 25 bịch, bịch mẫu Số lượng mẫu 675 Yếu tố A gồm nồng độ GA (0,03 mg/L, 0,05 mg/L, 0,07 mg/L) Yếu tố B gồm nồng độ NAA (0,01 mg/L; 0,02 mg/L; 0,03 mg/L) Cách tiến hành: Sử dụng môi trường tốt từ thí nghiệm để làm mơi trường cho thí nghiệm Sử dụng mẫu cấy thí nghiệm thí nghiệm để cấy vào bịch với nghiệm thức tương ứng Chỉ tiêu theo dõi: Chọn 10 mẫu/lần lặp lại nghiệm thức để theo dõi tiêu số rễ (rễ/cây) với chiều dài rễ (cm), theo dõi 10 ngày lần Tạp chí Nơng nghiệp Phát triển 21(1) Kết Quả Thảo Luận 3.1 Ảnh hưởng nồng độ NaOCl thời gian khử trùng mẫu sắn KM140 in vitro Số liệu Bảng cho thấy: Ở thời điểm 14 ngày sau cấy (NSC), khử trùng mẫu chồi sắn KM140 NaOCl với nồng độ khác cho kết tỷ lệ mẫu sống khác biệt có ý nghĩa thống kê Trong khử trùng mẫu với nồng độ 8% cho kết tỷ lệ mẫu sống cao đạt 57,8% Và khử trùng mẫu thời gian dài tỷ lệ mẫu sống giảm, tỷ lệ mẫu sống cao khử trùng thời gian phút đạt 56,7% Tuy nhiên khác biệt tương tác nồng độ mức thời gian khơng có ý nghĩa thống kê nghiệm thức Khi mẫu khử trùng với nồng độ NaOCl 8% thời gian 15 phút cho tỷ lễ mẫu sống cao (71,7%), tỷ lệ mẫu nhiễm thấp (28,3%) (Hình 2) khơng có mẫu chết Tỷ lệ mẫu nhiễm tăng thời gian khử trùng mẫu ngắn, khử trùng mẫu thời gian phút có tỷ lệ mẫu nhiễm cao (40,0%) khác biệt có ý nghĩa thống kê khử trùng mẫu thời gian 15 phút Đồng thời tăng nồng độ NaOCl tăng thời gian khử trùng mẫu tỷ lệ mẫu nhiễm giảm dần tỷ lệ chết lại tăng lên Mẫu khử trùng với thời gian 15 phút có tỷ lệ mẫu chết cao (38,9%) tỷ lệ mẫu chết đạt 38,3% khử trùng mẫu với nồng độ NaOCl 12% khác biệt nghiệm thức có ý nghĩa thống kê Sự tương tác hai yếu tố nồng độ thời gian khử trùng mẫu có khác biệt có ý nghĩa thống kê nghiệm thức tỷ lệ mẫu nhiễm tỷ lệ mẫu chết Nhìn chung, tăng nồng độ NaOCl kéo dài thời gian khử mẫu tỷ lệ mẫu nhiễm giảm tỷ lễ mẫu chết tăng (63,3%) nghiệm thức khử trùng mẫu NaOCl 12% thời gian 15 phút khác biệt có ý nghĩa so với nghiệm thức lại) Điều phù hợp với kết nghiên cứu Maruthi & ctv (2019), sử dụng NaOCl với nồng độ thấp (5%) có bổ sung 0,1 mL/L Tween 20 khử trùng mẫu sắn thời gian lâu 20 - 30 phút Một nghiên cứu khác Sessou & ctv (2020) cho thấy sử dụng nồng độ NaOCl (3,25%) cần có thời gian khử trùng mẫu 15 phút Vì vậy, việc sử dụng nồng độ NaOCl 8% thời gian phút thích hợp để khử trùng mẫu chồi www.jad.hcmuaf.edu.vn Trường Đại học Nơng Lâm TP Hồ Chí Minh 13 sắn KM140 3.2 Ảnh hưởng môi trường BA đến khả nhân chồi sắn KM140 Mẫu sắn KM140 cấy vào môi trường khác cho số chồi khác biệt có ý nghĩa thống kê thời điểm 50 NSC Trong đó, cấy mẫu vào mơi trường MS cho số chồi cao 2,0 (chồi) khác biệt có ý nghĩa so với mẫu cấy vào môi trường 1/2MS Kundson C Tuy nhiên, khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê bổ sung nồng độ BA khác tương tác môi trường nồng độ BA Môi trường MS môi trường cho kết chiều cao chồi cao (6,8 cm) Khi bổ sung nồng độ BA khác nhau, có khác biệt có ý nghĩa chiều cao chồi nghiệm thức Ở nồng độ mg/L, chồi sắn có chiều cao chồi cao (6,4 cm) không khác biệt thống kê so với mẫu cấy vào mơi trường có bổ sung mg/L (5,0 cm) khác biệt có ý nghĩa so với nghiệm thức cịn lại Sự tương tác môi trường nồng độ BA ảnh hưởng có ý nghĩa đến chiều cao chồi số chồi Trong đó, kết hợp mơi trường MS có bổ sung mg/L BA cho kết chiều cao chồi cao thời điểm 50 NSC (10,3 cm) Và số lá/chồi đạt kết cao cấy vào môi trường (4,2 lá/chồi) (Bảng 2) Kết nghiên cứu tương tự với nghiên cứu Alla & ctv (2013) cho thấy, mơi trường MS có bổ sung 1,0 mg/L BA + 0,05 mg/L NAA thích hợp với việc nhân chồi sắn Và nhiều nghiên cứu khác sử dụng môi trường MS để nhân chồi giống sắn (Mapayi & ctv., 2013; Abdoulaye & ctv., 2015) Ngoài ra, Fletcher & ctv (2011) sử dụng phương pháp tạo sẹo từ lá, cuống chồi để nhân chồi giống sắn môi trường MS có bổ sung mg/L 2,4 D cho kết tỷ lệ sẹo hình thành cao 75% 3.3 Ảnh hưởng nồng độ GA NAA lên khả tạo rễ sắn KM140 in vitro Hình Mẫu chồi sắn bị nhiễm (A: Mẫu nhiễm nấm; B: Mẫu nhiễm khuẩn) mơi trường có mức nồng độ GA khác Các mức nồng độ NAA bổ sung vào môi trường khác cho kết số rễ khác khác biệt có ý nghĩa thống kê Khi bổ sung nồng độ 0,03 mg/L NAA vào mơi trường cho số rễ trung bình cao (15,5 rễ/cây) khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê với số rễ/cây nồng độ 0,01 mg/L NAA có ý nghĩa so với số rễ/cây mức nồng độ 0,02 mg/L NAA Và tương tác nồng độ GA nồng độ NAA có tác động có ý nghĩa đến số rễ chiều dài rễ sắn KM140 in vitro Trong đó, cấy vào mơi trường MS có bổ sung 0,07 mg/L GA 0,03 mg/L NAA cho kết số rễ nhiều nhất, đạt 19,8 rễ/cây khác biệt có ý nghĩa so với nghiệm thức lại Và bổ sung 0,05 mg/L GA 0,03 mg/L NAA vào môi trường MS cho kết tốt chiều dài rễ (171,8 cm) khác biệt khơng có ý nghĩa so với mơi trường MS có bổ sung 0,07 mg/L GA 0,03 mg/L NAA Vì vậy, mơi trường xác định thích hợp cho việc tạo rễ sắn KM140 in vitro Nghiên cứu ảnh hưởng NAA GA việc tạo rễ sắn in vitro hạn chế Tuy nhiên ảnh hưởng NAA GA nhân giống in vitro số trồng khác nghiên cứu khoai lang (Noh & ctv., 2010), nghiên cứu kết hợp NAA GA mơi trường ni cấy có tác động tích cực đến q trình rễ mơ Kết Bảng cho thấy GA NAA có tác động đến trình tạo rễ sắn KM140 in vitro Khi sắn cấy vào môi trường MS có bổ sung 0,07 mg/L GA cho số rễ trung bình Kết Luận cao 17,7 rễ/cây, khác biệt có ý nghĩa Nghiên cứu quy trình nhân giống in vitro thống kê với số rễ chồi sắn nuôi cấy sắn nhằm sản xuất giống bệnh, phục vụ www.jad.hcmuaf.edu.vn Tạp chí Nông nghiệp Phát triển 21(1) 14 Trường Đại học Nơng Lâm TP Hồ Chí Minh Bảng Ảnh hưởng nồng độ NaOCl khoảng thời gian đến tỷ lệ mẫu sống, mẫu nhiễm mẫu chết sắn KM140 thời điểm 14 ngày sau cấy Mức thời gian TB NaOCl Ngày sau cấy Nồng độ NaOCl (%) 10 15 4% 56,7 63,3 46,7 55,6a Tỷ lệ 8% 71,7 58,3 43,4 57,8a 12% 41,7 28,3 25,0 31,7b mẫu sống a ab b TB TG 56,7 50,0 38,3 (%) CV(%) = 9,0 FNaOCl = 25,9∗∗ FTG = 11,0∗∗ FNaOCl × TG = 1,6ns 4% 43,3a 30,0ab 38,3a 37,2 ab a 8% 28,3 41,7 18,3b 29,4 Tỷ lệ 12% 48,3a 30,0ab 11,7b 30,0 mẫu nhiễm TB TG 40,0a 33,9a 22,8b (%) CV(%) = 13,5 FNaOCl = 2,8ns FTG = 9,8∗∗ FNaOCl × TG = 5,5∗∗ e d 4% 0,0 6,7 15,0c 7,2b e b 8% 0,0e 0,0 38,3 12,8b Tỷ lệ cd b a 12% 10,0 41,7 63,3 38,3a mẫu chết c b a TB TG 3,3 16,1 38,9 (%) CV(%) = 13,5 FNaOCl = 90,8∗∗ FTG = 122,8∗∗ FNaOCl × TG = 12,3∗∗ Trong nhóm giá trị trung bình, số có kí tự kèm thể khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (P < 0,05), ∗∗ : khác biệt có ý nghĩa mặt thống √ kê (P < 0,01), ns: khơng có khác biệt thống kê; TG: thời gian; TB: trung bình Số liệu chuyển đổi công thức x + 0, để phân tích thống kê Bảng Ảnh hưởng mơi trường nồng độ BA (Benzyl adenine) đến số chồi, chiều cao chồi số sắn KM140 thời điểm 50 ngày sau cấy Nồng độ BA (mg/L) TB MT Ngày sau cấy Môi trường MS 2,3 1,8 2,0 2,1 2,0a 1,4 1,3 1,1 1,0 1,2b MS Số chồi Knuckson C 1,0 1,0 1,6 1,0 1,1b (chồi) TB BA 1,5 1,4 1,6 1,3 CV(%) = 17,1 FMT = 44,9∗∗ FBA = 1,8ns FMT × BA = 2,4ns MS 10,3a 5,0bc 6,7b 5,1bc 6,8a bc bc c c 4,8 4,5 3,7 3,0 4,0b MS Chiều cao bc bc bc c Knuckson C 4,2 4,0 4,5 3,0 3,9b chồi (mm) a b ab b TB BA 6,4 4,5 5,0 3,7 MS 4,2a 2,2bc 2,4b 1,9bc 2,7a bc b bc bc 2,2 2,6 2,1 1,7 2,1b MS Số bc c bc d Knuckson C 1,9 1,3 2,0 0,2 1,3c (lá/chồi) TB BA 2,7a 2,1b 2,2b 1,3c CV(%) = 19,1 FMT = 33,9∗∗ FBA = 21,4∗∗ FMT × BA =7,3∗∗ Trong nhóm giá trị trung bình, số có kí tự kèm thể khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (P < 0,05), ∗∗ : khác biệt có ý nghĩa mặt thống kê ( P < 0,01), ns : khơng có khác biệt thống kê; MT: mơi trường; TB: trung bình Tạp chí Nơng nghiệp Phát triển 21(1) www.jad.hcmuaf.edu.vn 15 Trường Đại học Nơng Lâm TP Hồ Chí Minh Bảng Ảnh hưởng nồng độ GA (Gibberellin) NAA (Naphthalene acetic acid) đến số rễ, chiều dài rễ sắn KM140 thời điểm 60 ngày sau cấy Nồng độ NAA TB GA Ngày sau cấy Nồng độ GA 0,01 0,02 0,03 0,03 12,6e 15,7c 16,2bc 10,8c f d b 0,05 10,0 14,0 17,2 15,5b Số rễ f bc a 0,07 9,9 16,8 19,8 17,7a (rễ/cây) a b a TB NAA 14,8 13,7 15,5 CV(%) = 3,4 FGA = 26,9∗∗ FNAA = 424,5∗∗ FGA × NAA = 30,6∗∗ 0,03 132,5de 160,9ab 157,3ab 150,2 e bc 0,05 120,6 151,9 171,8a 148,1 Chiều dài 0,07 140,7cd 133,7de 159,3ab 144,6 rễ (mm) TB NAA 131,3c 148,8b 162,8a CV(%) = 4,1 FGA = 1,9ns FNAA = 58,7∗∗ FGA × NAA =13,0∗∗ Trong nhóm giá trị trung bình, số có kí tự kèm thể khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (P < 0,05), ∗∗ : khác biệt có ý nghĩa mặt thống kê (P < 0,01), ns : khơng có khác biệt thống kê; TB: trung bình Tài Liệu Tham Khảo (References) Abdoulaye, F A Y E., Sagna, M., Kane, P D., & Djibril, S A N E (2015) Effects of different hormones on organogenesis in vitro of some varieties of cassava (Manihot esculenta Crantz) grown in Senegal African Journal of Plant Science 9(8), 305-312 https://doi.org/10.5897/AJPS2014.1243 Alla, N A A., Ragab, M E., El-Miniawy, S E M., & Taha, H S (2013) In vitro studies on cassava plant micropropagation of cassava (Manihot esculenta Crantz) Journal of Applied Sciences Research 9(1), 811-820 Hình A Chồi sắn cấy môi trường MS bổ sung mg/L BA thời điểm 50 ngày sau cấy; B Số rễ chiều dài rễ sắn môi trường MS bổ sung 0,07 mg/L GA 0,03 mg/L NAA thời điểm 60 ngày sau cấy sản xuất trọng Kết nghiên cứu quy trình nhân giống in vitro giống sắn KM140 cho thấy sử dụng Natri hypochlorite (NaOCl) nồng độ 8% phút để khử trùng mẫu chồi sắn KM140 đạt tỷ lệ sống 73,3% sau 21 ngày Môi trường MS bổ sung mg/L BA đạt hệ số nhân chồi 2,3, chiều cao chồi 10,3 mm số đạt 4,2 lá/chồi sau 50 ngày nuôi cấy Môi trường MS bổ sung 0,07 mg/L NAA 0,03 mg/L GA thích hợp cho việc tạo rễ sắn KM140, sau 60 ngày nuôi cấy, số rễ /cây đạt 19,8 rễ Lời Cam Đoan Chúng cam đoan báo nhóm tác giả thực khơng có mâu thuẫn tác giả www.jad.hcmuaf.edu.vn Escobar, R H., Restrepo, J., Tohme, J., & Roca, W M (2013) Use of tissue culture in cassava for rural households in Colombia In: Ruane, J., Dargie, J D., Mba, C., Boettcher, P., Makkar, H P S., Bartley, D M., & Sonnino, A (Eds) Biotechnologies at work for smallholders: Case studies from developing countries in crops, livestock and fish (1st ed., 56-62) Rome, Italy: Food and Agriculture Organization of the United Nations Fletcher, E K., Amoako, T N., & Twumasi, P (2011) Effect of 2, 4-D, explants type and cultivar on the callogenesis expression of cassava (Manihot esculenta Crantz) in Ghana African Journal of Biotechnology 10(46), 9396-9401 https://doi.org/10.5897/AJB10.2115 Hamill, S D (2014) Processes, costs and traits of plants produced in tissue culture must be considered to develop effective crop production systems In Lambardi, M., Hamill, S and Drew, R (Eds.), XXIX International Horticultural Congress on Horticulture: Sustaining Lives, Livelihoods and Landscapes (IHC2014): 1113 (85-92) Brisbane, Australia: ISHS https://doi.org/10.17660/ActaHortic.2016.1113.12 Hy, N H., Reinhardt, H., Nhan, P T., & Buu, B C (2020) Cassava science Ha Noi, Vietnam: Agricultural Publishing House Tạp chí Nơng nghiệp Phát triển 21(1) 16 Mapayi, E F., Ojo, D K., Oduwaye, O A., & Porbeni, J B O (2013) Optimization of in-vitro propagation of cassava (Manihot esculenta Crantz) genotypes Journal of Agricultural Science 5(3), 261 https://doi.org/10.5539/jas.v5n3p261 Maruthi, M N., Whitfield, E C., Otti, G., Tumwegamire, S., Kanju, E., Legg, J P., Mkamilo, G., Kawuki, R., Benesi, I., Zacarias, A., & Munga, T (2019) A method for generating virus-free cassava plants to combat viral disease epidemics in Africa Physiological and Molecular Plant Pathology 105, 77-87 https://doi.org/10.1016/j.pmpp.2018.09.002 Minh T V (2005) Plant cell technology (1st ed.) Ha Noi, Vietnam: Vietnam Academy of Science and Technology Muimba-Kankolongo, A., Chalwe, A., Sisupo, P., & Kang, M S (1997) Distribution, prevalence and outlook for control of cassava mosaic disease in Zambia Roots 4(1), 2-7 Noh, S A., Lee, H S., Huh, E J., Huh, G H., Paek, K H., Shin, J S., & Bae, J M (2010) SRD1 is involved in the auxin-mediated initial thickening growth of Tạp chí Nơng nghiệp Phát triển 21(1) Trường Đại học Nơng Lâm TP Hồ Chí Minh storage root by enhancing proliferation of metaxylem and cambium cells in sweet potato (Ipomoea batatas) Journal of Experimental Botany 61(5), 1337-1349 https://doi.org/10.1093/jxb/erp399 Sessou, A F., Kahia, J W., Houngue, J A., Ateka, E M., Dadjo, C., & Ahanhanzo, C (2020) In vitro propagation of three mosaic disease resistant cassava cultivars BMC Biotechnology 20(1), 1-13 https://doi.org/10.1186/s12896-020-00645-8 Thresh, J M., Otim-Nape, G W., Legg, J P., & Fargette, D (1997) Africa cassava mosaic disease: What is the magnitude of the problem In Thro, R M and Akoroda, M P.(Eds), Proceedings of The Cassava Biotechnology Network Third International Scientific Meeting Ibadan, Nigeria: International Society for Tropical Root Crops - Africa Branch (ISTRC-AB) Uke, A., Hoat, T X., Quan, M V., Liem, N V., Ugaki, M., & Natsuaki, K T (2018) First report of Sri Lankan cassava mosaic virus infecting cassava in Vietnam Plant Disease 102(12), 2669 https://doi.org/10.1094/PDIS-05-18-0805-PDN www.jad.hcmuaf.edu.vn ...10 Trường Đại học Nơng Lâm TP Hồ Chí Minh Ảnh hưởng NaOCl, môi trường chất điều hòa sinh trưởng đến nhân giống sắn KM140 bệnh (Manihot esculenta Crantz) phương pháp in vitro Nguyễn... đồng thời xác định môi trường nuôi cấy nồng độ chất điều hòa sinh trưởng phù hợp cho việc nhân vơ tính giống sắn KM140, giống sắn trồng phổ biến khu vực phía Nam Vật Liệu Phương Pháp Nghiên Cứu... mẫu chồi www.jad.hcmuaf.edu.vn Trường Đại học Nông Lâm TP Hồ Chí Minh 13 sắn KM140 3.2 Ảnh hưởng mơi trường BA đến khả nhân chồi sắn KM140 Mẫu sắn KM140 cấy vào môi trường khác cho số chồi khác