ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƢỢC TRẦN THỊ THU PHƢƠNG ĐỊNH LƢỢNG EURYCOMANONE TRONG RỄ CÂY BÁ BỆNH (Eurycoma Longifolia) BẰNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO HPLC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƢỢC H[.]
ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƢỢC TRẦN THỊ THU PHƢƠNG ĐỊNH LƢỢNG EURYCOMANONE TRONG RỄ CÂY BÁ BỆNH (Eurycoma Longifolia) BẰNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO HPLC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƢỢC HỌC Hà Nội - 2018 ,V NU ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI an dP rm TRẦN THỊ THU PHƢƠNG ac y KHOA Y DƢỢC ici ne ĐỊNH LƢỢNG EURYCOMANONE TRONG RỄ CÂY BÁ BỆNH (Eurycoma Longifolia) BẰNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO HPLC Me d KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƢỢC HỌC Khóa: QH.2013.Y Co py rig ht @ Sc ho ol of Ngƣời hƣớng dẫn: TS Nguyễn Hữu Tùng Hà Nội - 2018 PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma ,V NU LỜI CẢM ƠN Khóa luận tốt nghiệp đƣợc thực mơn Hóa dƣợc Kiểm nghiệm thuốc thuộc Khoa Y Dƣợc, Đại học Quốc gia Hà Nội rm ac y Lời đầu tiên, em xin chân thành cảm ơn tất thầy cô Khoa Y Dƣợc, Đại học Quốc gia Hà Nội dạy dỗ truyền đạt kiến thức cho em suốt năm học vừa qua Em xin đƣợc gửi lời cảm ơn tới thầy mơn Hóa dƣợc Kiểm nghiệm thuốc tạo điều kiện cho em hồn thành khóa luận tốt nghiệp an dP Em xin phép bày tỏ kính trọng lịng biết ơn sâu sắc tới thầy Nguyễn Hữu Tùng nhiệt tình, tận tâm hƣớng dẫn, truyền đạt kinh nghiệm giúp đỡ em hồn thành tốt khóa luận ici ne Em xin cảm ơn dƣợc sỹ Nguyễn Thị Huệ (QH.2012.Y) bạn nhóm nghiên cứu Thùy, Phƣợng, Chuyên tập thể lớp Dƣợc học khóa (QH.2013.Y) sát cánh, động viên, cổ vũ tinh thần giúp em hồn thành khóa luận cách tốt Me d Qua đây, em cảm ơn gia đình, bạn bè động viên, giúp đỡ em suốt q trình hồn thành khóa luận Hà Nội, ngày 25 tháng năm 2018 Sinh viên Trần Thị Thu Phƣơng Co py rig ht @ Sc ho ol of Mặc dù nỗ lực, cố gắng để hồn thành khóa luận, song kiến thức kinh nghiệm cịn hạn chế nên khơng thể tránh khỏi thiếu sót Em mong nhận đƣợc cảm thơng góp ý tận tình thầy để khóa luận đƣợc hồn thiện PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma ,V NU DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT Tiếng Anh Tiếng Việt ACN Acetonitrile Acetonitril DAD Diode array detector Detector mảng điốt HPLC High performace liquid chromatography Sắc ký lỏng hiệu cao IL Interleukin Interleukin LOD Limit of detection LOQ Limit of quantification LPS Lipopolysaccharide MeOH Methanol RSD Relative standard deviation ici ne rm an dP Giới hạn phát Giới hạn định lƣợng Methanol Độ lệch chuẩn tƣơng đối Thí nghiệm Me d TN ac y Từ viết tắt UV Ultra violete Visible Co py rig ht @ Sc ho ol of VIS PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma ,V NU DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU Co py rig ht @ Sc ho ol of Me d ici ne an dP rm ac y ảng 1.1 Thành phần hóa học rễ bá bệnh .5 ảng 3.1 hƣơng trình chạy dung mơi pha động phân tích dịch chiết rễ bá bệnh .20 ảng 3.2 Tính thích hợp hệ thống 23 ảng 3.3 Kết khảo sát khoảng tuyến tính eurycomanone 24 ảng 3.4 Kết độ lặp lại phƣơng pháp .25 ảng 3.5 Kết độ phƣơng pháp 26 ảng 3.6 Kết định lƣợng eurycomanone rễ bá bệnh 27 PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma ,V NU DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Co py rig ht @ Sc ho ol of Me d ici ne an dP rm ac y Hình 1.1 Cây bá bệnh (Eurycoma longifolia Jack.) Hình 1.2 Cấu trúc chung nhóm quasinoid Hình 1.3 Cấu trúc hóa học eurycomanone .9 Hình 1.4 Mối quan hệ đại lƣợng thời gian HPLC .13 Hình 2.1 Mẫu bá bệnh (Eurycoma longifolia Jack.) .17 Hình 3.1 Sắc ký đồ dung dịch eurycomanone chuẩn .21 Hình 3.2 Sắc ký đồ mẫu trắng (đánh giá độ đặc hiệu) .22 Hình 3.3 Sắc ký đồ dung dịch chuẩn eurycomanone (đánh giá độ đặc hiệu) 22 Hình 3.4 Đồ thị biểu diễn mối quan hệ diện tích pic nồng độ eurycomanone 24 PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma ,V NU MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ 1.1 ac y HƢƠNG TỔNG QUAN TỔNG QUAN VỀ CÂY BÁ BỆNH rm 1.1.1 Đặc điểm thực vật 1.1.2 Phân bố sinh thái 1.1.3 Thu hái, chế biến an dP 1.1.4 Thành phần hóa học 1.1.5 Tác dụng dƣợc lý 1.1.6 Tính vị cơng 1.2 ici ne 1.1.7 Một số thuốc dân gian từ bá bệnh Tổng quan nhóm quassinoid .8 1.2.1 Khái quát chung quassinoid .8 1.3 Me d 1.2.2 Cấu trúc chung phân loại Tổng quan eurycomanone of 1.3.1 Cơng thức hóa học 1.3.2 Tính chất lí hóa 10 ol 1.3.3 Tác dụng sinh học Eurycomanone .10 Tổng quan sắc ký lỏng hiệu cao HPL 13 Sc 1.4 ho 1.3.4 Một số nghiên cứu định lƣợng eurycomanone HPLC .10 1.4.1 Nguyên tắc HPLC .13 @ 1.4.2 Một số thông số đặc trƣng 13 ht 1.4.3 Thẩm định phƣơng pháp HPL 15 Co py rig HƢƠNG ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN ỨU .17 2.1 ĐỐI TƢỢNG NGHIÊN CỨU .17 2.1.1 Nguyên liệu 17 2.1.2 Dung mơi, hóa chất .17 PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma 2.2 ,V NU 2.1.3 Máy móc, dụng cụ .17 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN ỨU 17 2.2.1 Phƣơng pháp chiết xuất eurycomanone từ rễ bá bệnh 18 ac y 2.2.2 Phƣơng pháp phân tích HPLC 18 2.2.3 Phƣơng pháp xử lý số liệu 19 rm HƢƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 20 3.1 KẾT QUẢ 20 3.1.1 Quy trình chiết rễ bá bệnh .20 an dP 3.1.2 Xây dựng quy trình định lƣợng 20 3.2 Thảo luận .28 3.2.1 Đối tƣợng nghiên cứu 28 ici ne 3.2.2 Xây dựng phƣơng pháp phân tích eurycomanone HPLC 28 3.2.3 Định lƣợng eurycomanone dƣợc liệu bá bệnh 29 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ .30 Me d KẾT LUẬN 30 Co py rig ht @ Sc ho ol of KIẾN NGHỊ .30 PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma ,V NU ĐẶT VẤN ĐỀ Me d ici ne an dP rm ac y Việt Nam đất nƣớc nhiệt đới gió mùa với nguồn thuốc vô phong phú Từ lâu nhân dân ta sử dụng nhiều cỏ tự nhiên để làm thuốc Ngày nay, với phát triển nhƣ vũ bão khoa học, kĩ thuật nên có nhiều dƣợc liệu tiềm đã, đƣợc nghiên cứu rộng rãi Trong đó, bá bệnh (Eurycoma longifolia Jack.), họ Thanh thất (Simaroubaceae) đƣợc nhân dân ta sử dụng nhiều với số công dụng nhƣ vỏ dùng chữa trƣờng hợp ăn uống không tiêu, đau lƣng, dùng chữa lị Ở ampuchia, ngƣời ta dùng rễ chữa ngộ độc, say rƣợu, trị giun Lá đƣợc dùng để tắm trị ghẻ, lở ngứa Ngồi bá bệnh cịn đƣợc biết đến với công dụng tăng cƣờng sinh lực, hỗ trợ điều trị yếu sinh lí nam giới, kích thích ham muốn [14,15,32] Hơn nữa, bá bệnh đƣợc chứng minh có tính chống viêm, chống sốt rét, chống oxy hóa [11,21,22,28,32,45], điều trị tiểu đƣờng [32], ứng cử viên tiềm điều trị ký sinh trùng đƣờng ruột Blastocystis [17] Trên giới, bá bệnh đƣợc đƣợc đánh giá dƣợc liệu có hiệu lực điều trị tốt đem lại hiệu kinh tế cao Bá bệnh cịn đƣợc gọi Sâm Malaysia đƣợc sử dụng nhƣ loại thuốc bổ sức khỏe chống lão hóa [34,45] rig ht @ Sc ho ol of Nhóm quassinoid, nhóm hợp chất bá bệnh bao gồm số chất nhƣ eurycomanone, eurycomalactone, eurycomanol, eurycolactone… đƣợc báo cáo góp phần vào tính chất chữa bệnh tăng sức mạnh bắp, sức bền, giảm lo lắng, căng thẳng, diệt vi trùng sốt rét Plasmodium falcifarum kháng thuốc… [1,2,21,32], phịng ngừa điều trị lỗng xƣơng nam giới thiếu androgen [19] Trong đó, eurycomanone hợp chất mang lại hiệu cao tác dụng chữa bệnh Tuy nhiên, Việt Nam nghiên cứu eurycomanone – marker bá bệnh cịn hạn chế Ngồi khả nhân giống cộng với tốc độ sinh trƣởng chậm việc khai thác rễ không hợp lí khiến cho nguồn dƣợc liệu cạn kiệt Ngồi ra, dƣợc điển Việt Nam chƣa có chun luận định lƣợng eurycomanone bá bệnh Bên cạnh đó, việc kiểm nghiệm bá bệnh nhƣ chế phẩm bá bệnh chủ yếu thực phẩm chức chƣa đƣợc thực Co py Trên sở với trang thiết bị đại sở vật chất vốn có phịng thí nghiệm mơn Hóa dƣợc Kiểm nghiệm thuốc, Khoa Y Dƣợc, PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma ,V NU Đại học Quốc gia Hà Nội đề tài “Định lƣợng eurycomanone bá bệnh (Eurycoma longifoila) sắc ký lỏng hiệu cao HPLC” đƣợc tiến hành Kết đề tài sở cho việc xây dựng tiêu chuẩn kiểm tra chất lƣợng dƣợc liệu bá bệnh nhƣ việc quản lí sản phẩm từ bá bệnh thị trƣờng ac y Các mục tiêu đề tài: Co py rig ht @ Sc ho ol of Me d ici ne an dP rm Xây dựng phƣơng pháp định lƣợng eurycomanone HPLC thẩm định phƣơng pháp phân tích Xác định hàm lƣợng eurycomanone rễ bá bệnh PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma 1.1 ,V NU CHƢƠNG TỔNG QUAN TỔNG QUAN VỀ CÂY BÁ BỆNH 1.1.1 Đặc điểm thực vật ac y Theo phân loại thực vật học bá bệnh thuộc: Hình 1.1 Cây bá bệnh (Eurycoma longifolia Jack.) [http://thaoduocquy.org/cay-mat-nhan-ba-benh] ht @ Sc ho ol of Me d ici ne an dP rm Giới: Plantae Ngành: Magnolio phyta Lớp: Magnoliopsida Bộ: Sapindales Họ: Simaroubaceae Chi: Eurycoma Loài: E.longifolia Bá bệnh (Eurycoma longifolia Jack., họ Thanh thất Simaroubaceae) đƣợc gọi bách bệnh, mật nhơn, mật nhân, hậu phác nam, Tongkat Ali (Malaysia), Antong sar (Campuchia), Tho nan (Lào), Pasak Bumi Bedara Pahit (Indonesia) [45] Co py rig Cây nhỡ, cao 2-8 m, cao 15-18 m [39] phân cành, có lơng nhiều phận Lá kép hình lơng chim lẻ, mọc so le, gồm 21-25 chét không cuống, mọc đối, hình mác bầu dục, gốc thn, đầu nhọn, mặt xanh sẫm bóng, mặt dƣới có lơng màu trắng xám, cuống màu nâu đỏ Lá non có lơng mịn, trƣởng thành PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma rm ac y ,V NU khơng có lơng Cụm hoa mọc thành chùm kép chùy rộng, cuống hoa có lơng màu gỉ sắt, hoa có màu đỏ nâu, đài hoa đƣợc chia thành năm thùy hình tam giác có tuyến lƣng, tràng hoa năm cánh hình thoi có tuyến, nhị năm có lơng dày hai vảy gốc, đầu nhụy rời Chỉ nhị màu đỏ có lơng Hoa bao hoa phủ đầy lơng Nụ hoa nhỏ, hình trứng Quả hạch, hình trứng, nhẵn, có rạch dọc, chín có màu vàng đỏ, chứa hạt Trên mặt hạt có nhiều lơng ngắn Quả non màu xanh, có lơng sét nâu, già chuyển màu hồng nhạt, thịt mềm, ngọt, ăn đƣợc Quả chín màu đỏ tƣơi chuyển sang đỏ nâu, trơn nhẵn [1,2] Me d ici ne an dP 1.1.2 Phân bố sinh thái Bá bệnh gặp chủ yếu nƣớc Đông Nam Á: Việt Nam, Lào, Campuchia, Thái Lan, Malaysia, Indonesia…Lồi cịn xuất Nam Trung Quốc Ấn Độ Cây mọc phổ biến nƣớc ta đặc biệt miền Trung, Tây Nguyên [1,2] Cây thƣờng mọc hoang rừng thƣa, dƣới tán gỗ lớn Cây chịu đƣợc bỏng nên mọc cánh rừng nguyên sinh, rừng thú sinh Cây mọc vùng đồi có thấp mọc dƣới tán rừng cao 5-7 m Bá bệnh nhiều hoa nhƣng lƣợng đƣợc tái sinh từ hạt khơng nhiều rụng vào mùa mƣa lũ bị trôi Tuy nhiên, khả tái sinh cao dễ dàng bắt gặp chồi sau bị chặt phá Dù vậy, nhƣng bá bệnh quý, cần đƣợc bảo tồn phát triển ol of 1.1.3 Thu hái, chế biến Có thể dùng tồn để làm thuốc nhƣng chủ yếu rễ trụ tuổi Rễ đắng đƣợc coi có giá trị Sau thu hoạch rễ, rửa sạch, thái lát, phơi khô thu đƣợc dạng gỗ màu vàng ngà, vị đắng đặc biệt ho 1.1.4 Thành phần hóa học - Trong vỏ gỗ bá bệnh, ngƣời ta chiết đƣợc số hợp chất sau [1]: Sc Các hợp chất quassinoid, có khoảng 150 loại: @ Eurycomalactone, longilactone, eurycomanol, Eurycomanone, 5,6 – dehydro – eurycomalactone… Co py rig ht Từ rễ phân lập đƣợc quassinoid: Eurycomanol, 2-O-β-D glucopyranosid 13β,18-dihydroeurycomanol Các hợp chất triterpen: niloticin, dihydroniloticin, piscidinol A, melianon… Các alkaloid loại canthin-6-on đƣợc phân lập từ vỏ gỗ: 9,10-dimethoxy-6-on, 10-hydroxy-9-methoxy-canthin-6-on, … PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma ,V NU Ngồi cịn có alkaloid carbolin ac y Từ vỏ bách bệnh miền Đông Nam ộ Việt Nam xác định đƣợc thành phần chất đắng: eurycomalacton (chiếm tỷ lệ cao nhất) 2,6 dimethoxybenzoquinon (một sắc tố màu vàng) Ngồi cịn campestrol β-sitosterol [1,2] - Trong rễ bá bệnh xác định đƣợc số hợp chất sau [37] rm ảng 1.1 Thành phần hóa học rễ bá bệnh Bộ phận Dung môi chiết Nƣớc an dP - Quassinoids: Eurycolactones A-E,eurycomalides A-B, eurycomalactone, 6α - hydroxyeurycomalactone, 7α - Hydroxyeurycomalactone, eurycomanone, 13α(21)-epoxyeurycomanone, 12,15diacetyl-13α(21)-epoxyeurycomanone, 12-acetyl-13,21dihydroeurycomanone, 15-acetyl13α(21)-epoxyeurycomanone, 3,4εdihydroeurycomanone, 13,21dihydroeurycomanone, eurycomanol… - Canthin-6-one alkaloids - Triterpene - Một số khác: Natri, Kali… ol of Me d ici ne Rễ Thành phần hóa học @ Sc ho Methanol Eurycolactones A-F,eurycomalides A-B, eurycomalactone, 6α-hydroxyeurycomalactone, 6-hydroxy5,6-dehydroeurycomalactone, 5,6dehydroeurycomalactone, eurycomanone, ht 13β,21-dihydroxyeurycomanol, 14,15βdihydroxyklaineanone… rig py Co - Quassinoids: - Triterpenes: eurylene, hỗn hợp β-sitosterol stigmasterol Ethanol Quassinoids: eurycomanone, longilactone, PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma Ethanol Quassinoids: lonilactone, 6-dehydro lonilactone,11dehydroklaineanone… ,V NU 13,21dihydroeurycomanone, eurycomalactone, 13α(21)epoxyeurycomanone… ac y Lá 50% rm 1.1.5 Tác dụng dƣợc lý Một số tác dụng dƣợc lý bá bệnh đƣợc nghiên cứu chứng minh nhƣ sau: Cao chiết từ bá bệnh có tác dụng kháng kí sinh trùng sốt rét thí nghiệm nuôi cấy in vitro [1,2,11,21,28,32] an dP Nghiên cứu in vitro in vivo cho thấy dịch chiết rễ bá bệnh có khả chống ung thƣ dòng tế bào K-562 [16] ici ne Cao chiết methanol rễ tơ rễ tự nhiên Bá bệnh có khả ức chế (q trình) sản xuất cytokine gây viêm IL-6 kích thích LPS (1 µg/ml) dòng tế bào ngƣời THP-1 [12] Me d Bá bệnh có tác dụng tăng dục, hoạt tính kích thích sinh dục nam lƣợng nội tiết tố sinh dục nam huyết tƣơng có mối tƣơng quan với [1,15] Thân rễ bá bệnh làm tăng lƣợng testosteron nhiều thân [1] Bá bệnh cịn có tác dụng kháng khuẩn, kháng nấm, kháng virus [20,22,32] @ Sc ho ol of Một chế phẩm thuốc gồm dƣợc liệu: bá bệnh, trâm bầu xấu hổ có độc tính cao độc tính trƣờng diễn thấp Thuốc có tác dụng lợi mật rõ rệt không làm thay đổi thành phần mật chuột lang Thuốc làm tăng thải trừ BSP gan thỏ so với đối chứng [1] Chế phẩm thuốc có tác dụng làm chậm q trình hƣ biến gan chuột cống trắng gây nên carbon tetreclorid Nó làm tăng tái tạo tế bào gan chuột nhắt trắng mơ hình gây thƣơng tổn gan thực nghiệm [1] Một số quassinoid nhƣ eurycomanol, eurycomalactone có tác dụng làm giảm lipopolysaccharide gây sốt chuột sau có khả mạnh aspirin Co py rig ht Áp dụng bệnh nhân có định điều trị lợi mật, chế phẩm gồm bá bệnh, trâm bầu xấu hổ làm giảm bilirubin máu cách có ý nghĩa [1] PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma ,V NU Nghiên cứu in vitro in vivo chứng minh bá bệnh có tác dụng chống ung thƣ tiền liệt tuyến ngƣời [13] Dịch chiết nƣớc từ rễ mật nhân có khả kháng oxi hoá nhƣng hoạt lực tƣơng đối yếu [9,12,22] an dP rm ac y Trên địa động vật giảm sinh dục cao rễ bách bệnh thể tác dụng làm tăng hàm lƣợng testosteron huyết, tăng trọng lƣợng quan sinh dục đực tác dụng thể rõ động vật bình thƣờng liều cao Trên hai mơ hình chuột bình thƣờng chuột bị gây giảm sinh dục, hàm lƣợng protein toàn phần huyết tƣơng tăng có khuynh hƣớng làm tăng trọng lƣợng nâng hậu môn, nhƣng không làm tăng thể trọng thể [10] Tác dụng tăng cƣờng chức sinh dục cho nam giới tác dụng chủ yếu nhất, đƣợc sử dụng nhiều nhất, đƣợc dùng sớm nhất, đƣợc nghiên cứu nhiều Trong vịng 20 năm (1994-2014) có 200 cơng trình nghiên cứu tác dụng bá bệnh ici ne Ở Lào, bá bệnh đƣợc dùng để chữa bệnh cao huyết áp, dùng cho phụ nữ sau sinh [23] of Me d Shuid cộng (2011) nghiên cứu mơ hình chuột 12 tháng tuổi gây loãng xƣơng Thực đồng thời nhóm Một nhóm cho uống Eurycoma longifolia nhóm sử dụng testosterone thấy sau tuần nhóm cho hiệu ngăn chặn canxi chuột Vì bá bệnh có tiềm điều trị loãng xƣơng ngƣời thiếu hụt androgen [33] Sc ho ol Năm 2006, Đại học Dƣợc Hà Nội nghiên cứu tác dụng dƣợc lý bá bệnh Dƣơng Thị Ly Hƣơng, Trịnh Thị Kim Anh, Nguyễn Thị Hải Hà nghiên cứu hoạt tính androgen chuột cống trắng với dịch chiết nƣớc rễ bá bệnh Kết cho thấy với liều 10 mg/kg thể trọng trọng lƣợng quan sinh dục, tinh hoàn, túi tinh tăng Co py rig ht @ 1.1.6 Tính vị công Theo y học cổ truyền, bá bệnh có tính mát, vị đắng, có tác dụng nhiệt, tiêu viêm, lợi thấp, lợi tiểu, lƣơng huyết, lỵ dùng để chữa tiểu tiện máu, ăn không tiêu, đầy hơi, chƣớng bụng… Rễ chữa ngộ độc tẩy giun Lá chữa ghẻ lở Theo kinh nghiệm dân gian, ngƣời dân lấy rễ làm thuốc hạ sốt, nhanh lên da non chỗ da bị nhiễm trùng, tổn thƣơng Ở ampuchia, ngƣời ta dùng rễ để chữa vàng da Ở Malaysia Indonesia bá bệnh đƣợc biết đến thần dƣợc kích dục nam giới, điều trị tăng PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma ,V NU huyết áp, đau mỏi bắp, nâng cao sức khỏe Theo kinh nghiệm dân gian Indonesia, nƣớc sắc vỏ thân bá bệnh vị thuốc cổ truyền tốt chữa sốt rét Hiệu lực tƣơng đƣơng viên nén cloroquin điều trị sốt rét [1] Co py rig ht @ Sc ho ol of Me d ici ne an dP rm ac y 1.1.7 Một số thuốc dân gian từ bá bệnh [1] Bài 1: Chữa phong tê, liệt nửa ngƣời Bá bệnh g, rễ xấu hổ g, dây đau xƣơng g, đậu chiều g, trâu cổ g, rễ đinh lăng g, hồ tiêu trắng g, quế chi g, gừng sống g Tất thái nhỏ, phơi khô, sắc với 400 ml nƣớc 100 ml, uống lần ngày Bài 2: Tƣ bổ âm huyết thang, chữa âm huyết suy kém, tê bại nửa ngƣời bên phái, nóng ran Bách bệnh g, đậu đen 12 g, hà thủ ô đỏ 12 g, dây gùi g, huyết rồng g, rau muống biển g, rễ nhàu g, rễ ô môi g, rễ cỏ xƣớc g, tang chi g, dây kí ninh g Sắc nƣớc uống Bài 3: Bá ứng tiêu hạ tán, chữa đau bụng, ăn không tiêu, đầy chƣớng bụng Bá bệnh 50 g, vỏ quýt 100 g, hoắc hƣơng 100 g, củ bồ bồ 100 g, dây mơ 100 g, dây rơm 100 g, cam thảo nam 100 g, hậu phác 100 g, củ sả 50 g, củ gấu 50 g, tiêu lốt 50 g Các vị tán nhỏ, ngày uống 12 gam (ngƣời lớn), trẻ em thùy theo tháng tuổi mà quy định liều 1.2 Tổng quan nhóm quassinoid 1.2.1 Khái quát chung quassinoid Quassinoid triterpenoid thứ cấp, giàu oxy có vị đắng, thành phần họ Thanh thất Simaroubaceae an đầu, chúng đƣợc gọi Quassin Các nghiên cứu quassinoid cho thấy loại hợp chất giàu tiềm điều trị bệnh nhƣ tác dụng kháng khối u, kháng virus, kháng viêm, kháng amib, sốt rét, kháng vi trùng lao, chán ăn [35,42] Ngoài ra, nghiên cứu, nhiều quassinoid có tác dụng gây độc tế bào ung thƣ phổi, tế bào ung thƣ cổ tử cung [24] bảo vệ dày [36] 1.2.2 Cấu trúc chung phân loại Đến có khoảng 150 chất thuộc nhóm quassinoid đƣợc chiết xuất, phân lập mơ tả cấu trúc Có thể chia thành khung nhƣ sau 18-, C19-, C20-, C22- C25-quassinoid Có số tác giả cịn gọi tên khung khung laurycolactan (C18), khung cedrolidan (C19), khung quassolidan (C20), khung picrolemman (C22) khung simarolidan (C25-quassinoid) Trong đó, thƣờng thấy PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma Me d ici ne an dP rm ac y ,V NU nhóm chức chứa oxy nhƣ ceton, ester, lacton, hydroxy, methoxy Nhóm 20 thấy nhiều với 76% nhóm chức chứa oxy Nhóm C19 chiếm 19%, C18 chiếm 3%, cịn C22 C25 chiếm ít, khoảng 1% [24] of Hình 1.2 Cấu trúc chung nhóm quasinoid Co py rig ht @ Sc ho ol 1.3 Tổng quan eurycomanone 1.3.1 Công thức hóa học Hình 1.3 Cấu trúc hóa học eurycomanone Công thức phân tử: C20H24O9 [42] PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma ,V NU Vị trí: eurycomanone thuộc C20-quassinoid Tên khoa học: (1 β, 11 β, 12 α, 15 β) -1,11,12,14,15-pentahydroxy-11,20epoxypicrasa-3,13 (21)-diene-2,16-dion Phân tử lƣợng: 408,02 g/mol [42] rm ac y 1.3.2 Tính chất lí hóa Eurycomanone chất rắn, màu trắng, không mùi, điểm cháy -20◦ , điểm nóng chảy 251-253oC [42] Tỉ trọng 1,6 g/cm3 1.3.3 Tác dụng sinh học Eurycomanone Eurycomanone thành phần có hoạt tính góp phần vào tác dụng sinh học bá bệnh ici ne an dP Eurycomanone quassinoid rễ mật nhân, có khả làm tăng nội tiết tố testosterone lƣợng tinh dịch chuột đực, có tác dụng chống lại estrogen chuột trƣởng thành Theo công bố vào năm 2008, eurycomanone cịn có khả gây độc tế bào tế bào ung thƣ, có khả gây độc tế bào dịng tế bào gây ung thƣ phổi 54, dòng tế bào K có hoạt tính chống sốt rét mạnh [9] Me d Trong nghiên cứu tiến hành 126 ngƣời Nhật Bản độ tuổi trung niên đƣợc thực tuần Có nhóm, nhóm uống dịch chiết thân rễ bá bệnh 200 mg/ngày, nhóm dùng giả dƣợc thấy uống dịch chiết giúp tăng cƣờng hệ miễn dịch nam nữ độ tuổi trung niên [25] Sc ho ol of Một thử nghiệm lâm sàng khác nhấn mạnh chứng minh đƣợc vai trò eurycomanone nhƣ chất chống lại rối loạn sức khỏe tình dục nam giới bao gồm rối loạn chức cƣơng dƣơng, vơ sinh, ham muốn tình dục thấp hay ảnh hƣởng đến hormon nam Eurycomanone tiềm làm sức sống tình dục, tăng cƣờng khả sinh dục cho nam giới [26] @ Eurycomanone ức chế biểu dấu hiệu khối u ung thƣ phổi cách ức chế gia tăng tế bào ung thƣ phổi [27,46] gây độc dòng tế bào ung thƣ vú (M F-7) [45] rig ht Ngồi ra, eurycomanone cịn có tác dụng sinh học chống sốt rét Plasmodium falciparum [28,41,42,45] Co py 1.3.4 Một số nghiên cứu định lƣợng eurycomanone HPLC Trên giới có số nghiên cứu định lƣợng eurycomanone dƣợc liệu bao gồm phƣơng pháp truyền thống nhƣ phƣơng pháp đại HPLC PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma Me d ici ne an dP rm ac y ,V NU phƣơng pháp đại đƣợc sử dụng phổ biến Dƣới vài nghiên cứu định lƣợng eurycomanone a Định lượng eurycomanone rễ Tongkat Ali (Eurycoma longifoila) [31] - Cột: Dionex C18 (5 µm x 4,6 mm x 50 mm) Acclaim Polar C18 (5 µm x 4,6 mm x 250 mm) - Detector: UV (254 nm) - Pha động: nƣớc tinh khiết (A), methanol (B) acetonitrile (C) - Tốc độ dòng: ml/phút - Nhiệt độ cột: 37oC - Đƣờng chuẩn: R2 = 0,8923 b Định lượng eurycomanone rễ Eurycoma longifolia RP-HPLC [30] - Cột: SPE C18 - Pha động: Nƣớc tinh khiết (A), methanol (B) acetonitril (C) - Detector: UV (254 nm) - Tốc độ dòng: ml/phút - Nhiệt độ cột: 20oC - Độ tuyến tính: nồng độ 5-50 µg/ml, R2 = 0,997 - LOD = 2,7 µg/ml, LOQ = 9,1 µg/ml - Thời gian lƣu có RSD < 2,5%, diện tích pic có RSD < 5% rig ht @ Sc ho ol of c Sử dụng RP-HPLC để kiểm định eurycomanone bá bệnh chế phẩm bá bệnh [38] - Cột: Phenomenex, Luna C18 (150 mm × 4,6 mm, µm) - Nhiệt độ cột: 40oC - Thể tích tiêm mẫu: 20 µl - Pha động: N ( ) acid formic nƣớc 0,1% (B) - Tốc độ dòng: ml/phút - Detector: UV (254 nm) Eurycomanone hấp thụ mạnh khoảng 248-255 nm - Độ tuyến tính: 0,1-50 µg/ml - LOD = 0,29 ± 0,1 µg/ml, LOQ = 0,887 ± 0,30 µg/ml Co py d Định lượng eurycomanone bá bệnh chế phẩm HPLCDAD/ELSD [29] - Cột: Kinetex EVO C18 100 Å (150 × 4,6 mm; μm) PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma ac y rm e an dP - ici ne f Me d g Sc ho ol of - Co py rig ht @ h - Pha động: 0,02% trifluoroacetic acid ( ) acetonitrile ( ) Nhiệt độ cột: 30◦C Thể tích tiêm mẫu: 10 µl Detector: UV (254 nm) Độ tuyến tính: phƣơng trình hồi quy tuyến tính y = 1827,4x + 5,928 với R2 = 0,9991 LOD = 0,04 mg/ml LOQ = 0,11 mg/ml Độ lặp lại có RSD = 0,53% Phát định lượng eurycomanone chế phẩm [40] Cột: Xbridge (Supelcosil µm, 250×4,6 mm) Pha động: isocratic acetonitrile (86:14) Tốc độ dịng: 0,8 ml/phút Độ tuyến tính: 0,01325-0,5 mg/ml, R2 = 0,999 LOD = 0,0227 mg/ml, LOQ = 0,069 mg/ml Dùng HPLC để định lượng số thành phần bá bệnh [41] Cột: Metaphase KR I00-5-C18 (5 µm, 250 x 4,6 mm) Pha động: isocratic Me N nƣớc (26: 74) Tốc độ dòng: ml/phút Thể tích tiêm mẫu: 20 µl Detector: UV (238 m) Dùng HPLC để phân tích eurycomanone [43] Cột: Phenomenex C18 (250 mm ì 4,6 mm ì àm) Pha ng: acetonitrile 0,05% orthophosphoric acid (24:76, v/v) Tốc độ dòng: 1,5 ml/phút Detector: UV (245 nm) Thể tích tiêm mẫu: 10 µl Độ tuyến tính: R2 = 0,971 Định lượng eurycomanone Tongkat Ali [44] Cột: Synerg 4u Fusion-RP80A (150 x 4,60 mm, µm) Pha động: Acid phosphoric 0,05% ACN (85:15) Tốc độ dòng: ml/phút Detector: UV (254 nm) Thể tích tiêm mẫu: 20 µl ,V NU - PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma ... ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI an dP rm TRẦN THỊ THU PHƢƠNG ac y KHOA Y DƢỢC ici ne ĐỊNH LƢỢNG EURYCOMANONE TRONG RỄ CÂY BÁ BỆNH (Eurycoma Longifolia) BẰNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO HPLC Me d KHÓA LUẬN... www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma ,V NU Đại học Quốc gia Hà Nội đề tài ? ?Định lƣợng eurycomanone bá bệnh (Eurycoma longifoila) sắc ký lỏng hiệu cao HPLC? ?? đƣợc tiến hành Kết đề tài sở cho việc... 1.3.3 Tác dụng sinh học Eurycomanone .10 Tổng quan sắc ký lỏng hiệu cao HPL 13 Sc 1.4 ho 1.3.4 Một số nghiên cứu định lƣợng eurycomanone HPLC .10 1.4.1 Nguyên tắc HPLC .13 @ 1.4.2