Demo Khóa luận tốt nghiệp ngành dược học chiết xuất, phân lập, xác định cấu trúc một số hợp chất trong cây cỏ nhọ nồi (eclipta alba)

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC ĐINH THỊ NGUYỆT ÁNH CHIẾT XUẤT, PHÂN LẬP VÀ XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC MỘT SỐ HỢP CHẤT TRONG CÂY CỎ NHỌ NỒI (Eclipta alba) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP NGÀNH DƯỢC HỌC Hà Nội – 2019 VN U ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI ac y, KHOA Y DƯỢC dP rm Người thực hiện: ĐINH THỊ NGUYỆT ÁNH CHIẾT XUẤT, PHÂN LẬP VÀ ed ici ne an XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC MỘT SỐ HỢP CHẤT TRONG CÂY CỎ NHỌ NỒI M (Eclipta alba) : QH.2014.Y Sc Khóa ho ol of KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP NGÀNH DƯỢC HỌC PGS.TS Dương Thị Ly Hương Co py rig ht @ Người hướng dẫn: Ths Nguyễn Thị Hồng Anh Hà Nội – 2019 PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma VN U LỜI CẢM ƠN Khóa luận kết cho trình học tập, rèn luyện em Khoa Y ac y, Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội trình nghiên cứu, thực hành Khoa Hóa Thực vật – Viện Dược liệu Trong q trình nghiên cứu hồn thành luận văn này, em nhận dP rm nhiều giúp đỡ quý báu từ Thầy, Cô giáo, nhà khoa học Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội Viện Dược Liệu gia đình bạn bè Em xin gửi lời cảm ơn tới toàn thể Ban Giám hiệu Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội Bộ môn Dược lý – Dược lâm sàng tạo điều kiện cho em làm khóa luận tốt nghiệp ed ici ne an Em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Dương Thị Ly Hương, PGS.TS Đỗ Thị Hà, Ths Nguyễn Thị Hồng Anh, TS Trần Thanh Hà cán nghiên cứu Khoa Hóa Thực vật – Viện Dược liệu giúp đỡ em q trình thực khóa luận Hà Nội, ngày 23 tháng năm 2019 Sinh viên Đinh Thị Nguyệt Ánh Co py rig ht @ Sc ho ol of M Em xin chân thành cảm ơn! PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma 13 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân cacbon 13 C-NMR VN U DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton H-NMR ac y, (Cacbon 13 Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy) (Proton Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy) Sắc ký cột (Column Chromatography) DCM Dicloromethan DEPT Distortionless Enhancement by Polarisation Transfer DM Dung môi DMSO Dimethyl sulfoxide DL/DM Tỉ lệ dược liệu/dung môi ESI-MS Phổ khối ion hóa phun mù điện tử ed ici ne an dP rm CC (Electronspray Ionization Mass Spectrum) Etylacetat HMBC Phổ tương tác dị hạt nhân qua nhiều liên kết of M EtOAc (Heteronuclear Multiple Bond Connectivity) Phổ tương tác dị hạt nhân qua liên kết ol HSQC @ MS Sc MeOH ho (Heteronuclear Single Quantum Coherence) ht SKĐ rig TLC Phổ khối lượng (Mass Spectroscopy) Sắc ký đồ Sắc ký lớp mỏng (Thin layer chromatography) Phổ tử ngoại (Ultra violet- Visible) Co py UV-Vis Methanol PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma VN U DANH MỤC CÁC BẢNG, CÁC HÌNH Bảng 3.1 Dữ liệu phổ hợp chất N01 wedelolacton 19 Bảng 3.2 Dữ liệu phổ hợp chất N02 quercetin 20 ac y, Bảng 3.3 Dữ liệu phổ hợp chất N03 methyl gallat 22 dP rm Hình 1.1 Cây Cỏ nhọ nồi (Eclipta alba) Hình 1.2 Cấu trúc hợp chất Alkaloid Hình 1.3 Cấu trúc hợp chất Coumestan Hình 1.4 Cấu trúc hợp chất Flavonoid an Hình 1.5 Cấu trúc hợp chất Sterol ed ici ne Hình 1.6 Cấu trúc hợp chất Saponin triterpen Hình 1.7 Cấu trúc hợp chất Saponin triterpen Hình 1.8 Cấu trúc dẫn xuất thiophen polyacetylen Hình 3.1 Sơ đồ phương pháp chiết xuất phân đoạn Cỏ nhọ nồi 15 M Hình 3.2 Sơ đồ phân lập hợp chất từ cao phân đoạn EtOAc Cỏ nhọ of nồi 16 ol Hình 3.3 SKĐ TLC N01 cao EtOAc 17 ho Hình 3.4 SKĐ TLC N02 cao EtOAc 17 Sc Hình 3.5 SKĐ TLC N03 cao EtOAc 17 Hình 3.6 Cấu trúc hợp chất N01 (Wedelolacton) 18 @ Hình 3.7 Cấu trúc hợp chất N02 (Quercetin) 21 Co py rig ht Hình 3.8 Cấu trúc hợp chất N03 (Methyl gallat) 23 PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma VN U MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT ac y, DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH dP rm ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Vài nét họ Cúc (Asteraceae) 1.2 Tổng quan Cỏ nhọ nồi (Eclipta alba) 1.2.1 Vị trí phân loại Cỏ nhọ nồi (Eclipta alba) an 1.2.2 Đặc điểm thực vật Cỏ nhọ nồi (Eclipta alba) ed ici ne 1.2.3 Thành phần hóa học Cỏ nhọ nồi (Eclipta alba) 1.2.4 Tác dụng sinh học Cỏ nhọ nồi (Eclipta alba) CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 12 2.1 Đối tượng 12 M 2.2 Hoá chất, thiết bị 12 2.2.1 Hoá chất 12 of 2.2.2 Thiết bị 12 2.3 Phương pháp chiết xuất phân lập xác định cấu trúc hợp chất tinh khiết 13 ol 2.3.1 Phương pháp chiết xuất phân lập 13 ho 2.3.2 Phương pháp xác định nhận dạng cấu trúc 14 Sc CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 15 @ 3.1 Chiết phân đoạn Cỏ nhọ nồi phân lập hợp chất từ cao phân đoạn etyl acetat 15 3.1.1 Kết chiết phân đoạn Cỏ nhọ nồi 15 ht 3.1.2 Kết phân lập hợp chất Cỏ nhọ nồi 16 rig 3.2 Biện luận cấu trúc hợp chất phân lập từ Cỏ nhọ nồi 18 Co py 3.2.1 Biện luận cấu trúc N01 18 3.2.2 Biện luận cấu trúc N02 20 3.2.3 Biện luận cấu trúc N03 21 PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma 3.3 Bàn luận 23 VN U 3.3.1 Về chiết xuất 23 3.3.2 Về phân lập xác định cấu trúc hợp chất 23 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 26 ac y, TÀI LIỆU THAM KHẢO Co py rig ht @ Sc ho ol of M ed ici ne an dP rm PHỤ LỤC PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma VN U ĐẶT VẤN ĐỀ Việt Nam quốc gia có khí hậu nhiệt đới thuận lợi cho phát triển ac y, nhiều loại thuốc Với đa dạng, phong phú thuốc tạo nguồn tài nguyên dược liệu vô quý báu cho nước ta Từ xa xưa, ông cha ta sử dụng thuốc cổ truyền từ loại để chữa trị số bệnh thường gặp như: cảm, sốt, chảy máu, đau bụng,… Đó thuốc sử dụng phổ biến dP rm truyền lại từ đời sang đời khác Tuy nhiên thuốc dựa kinh nghiệm cha ông ta mà chưa có sở khoa học Ngày nay, khoa học kỹ thuật phát triển người sâu vào nghiên cứu làm sáng tỏ thành phần, cấu trúc, tác dụng,… loài thường ed ici ne an sử dụng thuốc dân gian Trong nghiên cứu y dược đại, hợp chất hữu từ thuốc flavonoid, saponin, alkaloid, coumarin,… nguồn cung cấp hợp chất có tiềm để thử hoạt tính sinh học, phục vụ cho nhiều lĩnh vực khoa học, đặc biệt y học of M Một số loài sử dụng phổ biến thuốc cổ truyền cỏ nhọ nồi hay gọi cỏ mực Cỏ nhọ nồi dược liệu nghiên cứu nhiều nước quốc tế Trung Quốc, Nhật Bản, Ấn Độ, Thái Lan,…với nhiều tác dụng kháng viêm, kháng nấm, cầm máu, chống ung thư… sử dụng thuốc cổ truyền để điều trị bệnh như: nôn, chảy máu cam, rụng tóc, suy nhược thần kinh, nấm, viêm loét, lở ngứa, ban chẩn,…[2] Sc ho ol Trước đa dạng cấu trúc lý hóa, hoạt tính sinh học mối tương quan cấu trúc tác dụng, để hiểu rõ vai trị hợp chất có cỏ nhọ nồi đặt sở khoa học cho việc sử dụng thuốc, ta cần tiếp tục tiến hành tách chiết xác định cấu trúc thành phần hóa học đặc biệt thành phần chưa phân lập cây, từ đặt tiền đề để nghiên cứu thêm tác dụng, hoạt tính sinh học hợp chất ht @ Để góp phần nghiên cứu thành phần hóa học Cỏ nhọ nồi, thực đề tài: “Chiết xuất, phân lập, xác định cấu trúc số hợp chất Cỏ nhọ nồi (Eclipta alba)” với mục tiêu: Co py rig Chiết xuất phân lập số hợp chất từ phân đoạn Ethyl acetat Xác định cấu trúc chất phân lập phân đoạn Ethyl acetat PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma CHƯƠNG 1: VN U TỔNG QUAN 1.1 Vài nét họ Cúc (Asteraceae) ac y, Trong lớp Ngọc Lan (Magnoliopsida), họ Cúc (Asteraceae hay Compositae) họ lớn lớp này, với 1.600 chi 23.000 loài Chúng thường tập trung chủ dP rm yếu đồng cỏ thảm thực vật núi, gặp vùng rừng nhiệt đới ẩm với độ cao thấp Họ Cúc họ thực vật bật số loài thực vật sử dụng dân tộc văn hóa địa tất nơi giới, đặc biệt cho mục đích y học [8] Các lồi thuộc họ Cúc có đặc điểm: cụm hoa dạng đầu, bao phấn hữu tính, ed ici ne an chùm lông quả, loại bế tạo thành từ noãn khơng nẻ chín [1] Họ Cúc có chứa chất chuyển hóa thứ cấp phong phú đa dạng, phát triển M hợp chất quan trọng tiến hóa họ Nguồn thơng tin hợp chất có giá trị việc phân loại; xuất vắng mặt hợp chất hóa học cụ thể nhóm hợp chất thường biểu thị mối quan hệ phân loại phân họ cấp thấp [8] ol of 1.2 Tổng quan Cỏ nhọ nồi (Eclipta alba) 1.2.1 Vị trí phân loại Cỏ nhọ nồi (Eclipta alba) ho Cây Cỏ nhọ nồi hay gọi cỏ mực, hạn liên thảo có tên khoa học Eclipta alba Eclipta prostrata (L.), thuộc họ Cúc Asteraceae (Compositae) [1], [2] Sc Theo “Từ điển thuốc Việt Nam” tác giả Võ Văn Chi [1], Cỏ nhọ nồi có vị trí phân loại sau: @ Giới Thực vật: Plantae Co py rig ht Ngành Ngọc lan: Magnoliophyta Lớp Ngọc lan: Magnoliopsida Phân lớp Cúc: Asteridae Bộ Cúc: Asterales Họ Cúc: Asteraceae Loài: Eclipta alba PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma 1.2.2 Đặc điểm thực vật Cỏ nhọ nồi (Eclipta alba) [2] VN U Mô tả: Cây thảo mọc năm, thân cao 10-60 cm, phân nhánh, màu lục, đơi đỏ tía, phủ lơng cứng Lá mọc đối, phiến hình giáo tới bầu dục – thuôn, dài 3-10 cm, rộng 0,5-2,5 cm, mép nguyên khía răng, có lơng tơ dày hai mặt Cụm hoa hình bán cầu, đường kính 1-1,2 cm, cuống dài 1,5 mm, nách ac y, cành Tổng bao gồm hàng bắc hình bầu dục, có lơng tơ mặt lưng Đế hoa lồi, rộng cm Các hoa mép hoa có tràng dạng lưỡi nhỏ, màu Hình 1.1 Cây cỏ nhọ nồi (Eclipta alba) [12] @ Sc ho ol of M ed ici ne an dP rm trắng, đầu có hai thùy; hoa lưỡng tính giữa, hình ống, đầu có 4-5 thùy Quả bế dẹt, có cạnh màu đen Bộ phận dùng: Phần mặt đất Có thể thu hái quanh năm, dùng tươi ht hay phơi khô py rig Phân bố: Ra hoa kết từ tháng đến tháng 11 Mọc hoang chỗ ẩm mát ven làng, đồng ruộng từ vùng thấp lên tới độ cao 1800m Phân bố phổ biến khắp nơi từ Bắc vào Nam phân bố nước nhiệt đới khác thuộc châu Á, châu Co Phi PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma Tính vị, quy kinh: Vị ngọt, chua, tính hàn Quy kinh vào can thận VN U Công dụng: Tư âm bổ thận, lương huyết, bổ huyết, nhiệt giải độc Thường sử dụng để trị nôn máu, chảy máu cam, tử cung xuất huyết; Viêm gan mạn, viêm ruột, lỵ; Trẻ em suy dinh dưỡng; Ù tai, rụng tóc đẻ non, suy nhược thần kinh; Nấm da, vết loét, chảy máu, viêm da Còn dùng làm thuốc viêm dP rm 1.2.3 Thành phần hóa học Cỏ nhọ nồi (Eclipta alba) ac y, họng, ban chẩn, lở ngứa, đau mắt, sưng răng, đau dày, bệnh nấm ngồi da gây rụng tóc Các nghiên cứu khác thành phần hóa học cho thấy cỏ nhọ nồi có chứa nhiều hợp chất hóa học bao gồm coumestans, alkaloids, glycosides, flavonoids, triterpenoids, saponins, lipids, hợp chất polyacetylen, steroids, phytosterol,….Trong ed ici ne an có chứa wedelolactone, demethylwedelolactone, demethylwedelolactone-7glucoside, stigmasterol β-terthienylmethanol Rễ chứa hentriacontanol heptacosanol [15] Phần mặt đất chứa phytosterol, β-amyrin chiết xuất nhexane luteolin-7-glucoside, β- glucoside phytosterol, glucoside axit triterpenic wedelolactone [23] a Alkaloid M Các nghiên cứu thành phần hóa học Eclipta alba cho thấy xuất ol of alkaloid ecliptine nicotine, alkaloid steroid có hoạt tính sinh học verazine, dehydroverazine ecliptalbine Năm 1998, M S Kader cộng (Đại học Quốc gia Virginia, Hoa Kỳ) phân lập từ phần dịch chiết methanol Eclipta ho alba tám hợp chất alkaloid có khung steroid Alkaloid xác định Co py rig ht @ Sc (20S,25S)-22,26-iminocholesta-5,22 (N) -dien-3-β-ol (verazine) (1), (20R)-verazine (2) alkaloid khác xác định 20-epi-3-dehydroxy-3-oxo-5,6-dihydro-4,5 dehydroverazine (3), ecliptalbine [(20R)-20-pyridyl-cholesta-5-ene-3β,23-diol] (4), (20R)-4β-hydroxyverazine (5), 4β-hydroxyverazine (6), (20R)-25β-hydroxyverazine (7) 25β-hydroxyverazine (8) [4] PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma VN U ac y, R1=R2=H dP rm R1=R2=H R1=OH, R2=H R1=OH, R2=H R1=H, R2=OH ed ici ne an R1=H, R2=OH b Coumestan of M Hình 1.2 Cấu trúc hợp chất Alkaloid ho ol Coumestan dẫn xuất coumarin tìm thấy nhiều loại thực vật Wedelolactone (9), demethylwedelolactone (10), demethyl-wedelolactone-7- Co py rig ht @ Sc glucosid (11) coumestan phân lập từ cỏ nhọ nồi [33] R=CH3 10 R=H 11 R=Glc Hình 1.3 Cấu trúc hợp chất Coumestan PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma c Flavonoid Sterol VN U Các flavonoid tìm thấy cỏ nhỏ nồi apigenin (12), luteolin (13), luteolin-7-glucoside (14) quercetin (15) Các sterol diện cỏ nhọ nồi an dP rm ac y, phytosterol, glucoside phytosterol, daucosterol (16), β-sitosterol (17), stigmasterol (18) stigmasterol-3-O-glycoside (19) [56] ed ici ne 12 13 R1=H, R2=H 14 R1=Glc, R2=H 15 R1=H, R2=OH 16 R=Glc 18 R=H 17 R=H 19 R=Glc Hình 1.5 Cấu trúc hợp chất Sterol Co py rig ht @ Sc ho ol of M Hình 1.4 Cấu trúc hợp chất Flavonoid PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma d Saponin triterpen VN U Saponin triterpene eclalbatin (20), với α-amyrin, axit ursolic axit oleanolic phân lập từ Eclipta alba [34], [53] Năm 1997, S Yahara cộng thuộc Đại học Kumamoto, Nhật Bản phân lập eclalbasaponin VII-X (2124) [55] Năm 2008, M K Lee công Đại học quốc gia Seoul Hàn Quốc ed ici ne an dP rm ac y, phân lập acid echinocystic (25) dẫn xuất glycosid, eclalbasaponin I-III (26-28) eclalbasaponin V (29) [40] Sc ho ol of M 25 28 R1=Glc, R2=Glc 26 R1=Glc, R2=OH, R3=Glc 29 R1=SO3H, R2=H ht @ 20 R1=Glc, R2=H, R3=Ara Hình 1.6 Cấu trúc hợp chất Saponin triterpen Co py rig 27 R1=Glc, R2=OH, R3=H PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma VN U ac y, dP rm 21 R=H 22 R=H 23 R=SO3H 24 R=SO3 Hình 1.7 Cấu trúc hợp chất Saponin triterpen an e Dẫn xuất thiophen polyacetylen ed ici ne Năm 1966, F Bolhman cộng thuộc Đại học tổng hợp Kỹ thuật Berlin Đức phân lập dẫn xuất thiophen (30, 31) polyacetylen (32) từ khô cỏ nhọ nồi Cùng năm 1966, N R Krishnaswamy cộng Đại học Delhi Ấn Độ xác định cấu trúc α-terthienyl methanol (33) từ Eclipta alba Năm 1985, P Sing cộng Đại học tổng hợp Kỹ thuật Berlin Đức phân lập từ rễ ho ol of M phần mặt đất Eclipta alba thành phần dithienyl acetylen (34) 31 @ Sc 30 33 Co py rig ht 32 34 Hình 1.8 Cấu trúc dẫn xuất thiophen polyacetylen PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma f Tinh dầu VN U Các thành phần tinh dầu bao gồm heptadecane, 6,10,14-trimethyl-2pentadecanone, axit n-hexadecanoic, pentadecane, eudesma-4 (14), 11-diene, phytol, octadec-9-enoic axit diisooctylester, (Z, Z) -9,12- octadecadienoic acid, (Z) -7,11dimethyl-3- methylene-1,6,10-dodecatriene (Z, Z, Z) -1,5, 9,9-tetramethyl-1,4,7- dP rm 1.2.4 Tác dụng sinh học Cỏ nhọ nồi (Eclipta alba) ac y, cycloundecatriene D-dithienylacetylene ester, ecliptal α-terthienyl aldehyd, αterthienyl-metanol α-formylterthienyl [31] a Tác dụng giảm đau, chống viêm Dữ liệu thu từ thí nghiệm cho thấy dịch chiết ethanol alkaloid toàn phần Eclipta alba có hoạt tính giảm đau tốt dùng với liều 150mg/kg, an 250 mg/kg 500 mg/kg theo đường uống Tác dụng giảm đau có hiệu đau trung tâm ngoại biên [47] ed ici ne Khả chống viêm dịch chiết methanolic cỏ nhọ nồi M nghiên cứu mơ hình gây phù chân chuột carrageenin lòng trắng trứng Sử dụng liều 100 200 mg/kg dịch chiết methanol cỏ nhọ nồi đường uống cho thấy hoạt động chống viêm đáng kể mơ hình gây phù chân chuột carrageenin lòng trắng trứng so sánh với indomethacin (10mg/kg) of cyproheptadine (8 mg/kg) [9] b Tác dụng kháng khuẩn, chống nấm ho ol Nhiều nhà khoa học nghiên cứu tiềm chống vi khuẩn Eclipta alba Eclipta alba có đặc tính kháng khuẩn Các nghiên cứu cho thấy Sc hợp chất thu từ Eclipta alba cho hoạt động tốt chống lại Staphylococcus aureus, Eclipta Coli, Staphylococcus cholermidis Salmonella typhimurium [18] @ Cỏ nhọ nồi có tác dụng chống lại chủng nấm: Aspergillus niger, Aspergillus fumigatus, Fusarium solani Aspergillus flavus Hoạt tính kháng nấm Co py rig ht in vitro dịch chiết Eclipta alba nghiên cứu chống lại nấm Candida tropicalis, Rhodotorula glutinis Candida albicans [29] PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma c Tác dụng bảo vệ gan VN U Dịch chiết ethanol/nước (1:1) Eclipta alba ức chế tác dụng CCl4 điều chỉnh enzyme chuyển hóa thuốc microsome gan (amidopyrine-N- ac y, demethylase glucose-6-phosphatase liên kết màng) Nghiên cứu cho thấy hoạt động bảo vệ gan Eclipta alba điều chỉnh mức độ enzyme chuyển hóa thuốc microsome gan Các dịch chiết methanol dịch chiết chloroform rễ Eclipta alba cho thấy hoạt động tương ứng làm giảm 72,8% dP rm 47,96% enzyme lysosomal Từ dịch chiết methanol lá, triterpenoid eclabasaponin làm giảm 78,78% alkaloid làm giảm 60,65% lượng CCl4 làm tăng enzyme lysosomal máu Coumestan saponin triterpenoid từ dịch chiết chloroform rễ tương ứng làm giảm 75,6% 52,41% nồng độ CCl4 Eclipta alba báo an cáo có tác dụng bảo vệ tổn thương gan cấp tính CCl4, cách làm giảm hoại tử, thối hóa tế bào nhu mô gan [48], [50] ed ici ne d Tác dụng lên thần kinh chống độc Các nghiên cứu liên quan dịch chiết Eclipta alba với liều 300 mg/kg cho thấy hoạt động chất cải thiện khả hoạt động hệ thần kinh chuột [51] M Chiết xuất ethyl acetate Eclipta alba wedelolactone chứng minh hoạt tính chống tăng huyết áp chống lại nọc độc rắn Malaya Pit Viper [44] ol of Hoạt tính chống sốt rét dịch chiết từ Eclipta alba đánh giá chống lại chủng Plasmodium berghei ANKA chuột [10] ho e Hoạt động diều hòa miễn dịch @ Sc Các nghiên cứu sơ cho thấy hoạt động điều hòa miễn dịch dịch chiết methanol Eclipta alba Wedelolactone demethylwedelolactone, phân lập từ Eclipta alba chứng minh tác dụng ức chế trypsin Cả hai hợp chất cho thấy hoạt động mạnh mẽ với giá trị IC50 2,9 3,0 μg/ml, tương ứng Eclipta alba có tác py rig ht dụng bảo vệ mơ thần kinh hoạt động điều hòa miễn dịch Eclipta alba Do đó, Eclipta alba phục vụ điều biến nhớ tiềm Thử nghiệm thực để đánh giá hoạt tính điều hịa miễn dịch dịch chiết metanol toàn Eclipta alba năm mức liều từ 100 đến 500 mg/kg làm tăng Co đáng kể số thực bào hiệu giá kháng thể tỷ lệ F số thực bào số lượng bạch cầu tăng [32] 10 PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma f Hoạt động chống ung thư VN U Dịch chiết methanol Eclipta alba đánh giá hoạt động chống ung thư chống lại Ehrlich Ascites Carcinoma (EAC) chuột bạch tạng Hoạt động chống ung thư kiểm tra cách xác định khối lượng khối u, số lượng tế bào khối u, số lượng tế bào khối u sống, số lượng tế bào khối u sống, thời học so với chuột mang EAC [25] dP rm ac y, gian sống trung bình tăng tuổi thọ mơ hình động vật thí nghiệm Dịch chiết làm tăng tuổi thọ chuột điều trị EAC khôi phục thông số huyết Coumestans biết hoạt động phytoestrogen Ở nhiều nước, sử dụng chế độ ăn uống đóng vai trị tác nhân phịng ngừa hóa học ung thư vú tuyến tiền liệt Dasyscyphin-C (saponin) hợp chất phân lập từ Eclipta alba báo cáo với hoạt tính chống ung thư - gây độc tế bào [40] an g Ngăn rụng tóc, kích thích mọc tóc ed ici ne Eclipta alba sử dụng chế phẩm dưỡng tóc thúc đẩy mọc tóc trì độ đen tóc 10% w/v Eclipta alba thành phần việc điều chế công thức thảo dược hỗ trợ cho phát triển tóc M Eclipta Alba loại thảo dược phổ biến để kích thích phát triển tóc Dịch chiết ether dịch chiết ethanol phối hợp vào dạng kem (nước ol of dầu) bơi chỗ da bị bong tróc chuột bạch tạng thử nghiệm Thời gian cần thiết để bắt đầu phát triển tóc hồn thành chu kỳ tăng trưởng tóc ghi lại Dung dịch Minoxidil 2% áp dụng chỗ đóng vai trò chứng dương để so sánh Kết điều trị với dịch chiết ether 2% 5% tốt so với ho minoxidi 2% (chứng dương) [46] Sc h Tác dụng hạ đường huyết @ Về tác dụng hạ đường huyết, sử dụng Eclipta alba qua đường uống tháng chứng minh làm giảm glucose máu, glycosylated hemoglobin Co py rig ht HbA1c, giảm hoạt động glucose-6-phosphatase fructose-1,6-bisphosphatase, tăng hoạt động hexokinase gan Eclipta alba chứng minh có hoạt động trị tiểu đường lợi tiểu cách tác động lên tuyến tụy nhờ phục hồi tái tạo hoạt động tế bào β tụy [8] 11 PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma CHƯƠNG 2: 2.1 VN U ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Đối tượng ac y, Dược liệu nghiên cứu cỏ nhọ nồi Eclipta alba thu hái từ tỉnh Thanh Hóa, tháng 06/2018 Dược liệu thu sấy khô nhiệt độ 50-600C đạt độ dP rm ẩm khoảng 5%, thái nhỏ xay nhỏ bảo quản túi polymer để nơi khơ ráo, tránh ẩm 2.2 Hóa chất, thiết bị 2.2.1 Hóa chất an - Dung mơi cơng nghiệp dùng chiết xuất: methanol, ethanol, n-hexan, ethyl acetat, dicloromethan, aceton ed ici ne - Dung dịch thuốc thử H2SO4 10% ethanol đốt nóng để phát viết chất mỏng - Bản mỏng tráng DC-Alufolien 60G F254 (Merck) (silica gel, 0,25 mm) mỏng pha đảo RP-18 F254 (Merck, 0,25 mm) M - Bột silica gel pha thường (0,040-0,063 mm, Merck) of - Chất chuẩn wedelolacton, quercetin, methyl gallat đạt tinh khiết 98% ol 2.2.2 Thiết bị ho - Máy cất quay Rotavapor R-220 (Buchi) Sc - Máy cất quay Buchi dung tích bình cất 250ml, 500ml, 1000ml - Tủ sấy Memmert, Binder-FD115 @ - Máy siêu âm Power sonic 405 ht - Bếp điện, bếp cách thủy Memmert rig - Máy sắc ký lỏng hiệu cao HPLC Shimadzu Detector Diode array Co py - Cân kĩ thuật Precisa BJ 610C, cân phân tích Precisa 262SMA-FR, Máy đo hàm ẩm - Đèn UV- Vilber lourmat, máy chụp ảnh UV 12 PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma - Dụng cụ thủy tinh: Bình gạn 1000ml, bình nón 250ml, bình cầu dung 2.3 VN U tích 250ml, 500ml, 1000ml, cột sắc ký loại, phễu thủy tinh, ống đong, ống nghiệm kích thước,… Phương pháp nghiên cứu ac y, 2.3.1 Phương pháp chiết xuất, phân lập - Cỏ nhọ chiết xuất phương pháp chiết nóng với methanol, sau lọc loại bã dược liệu gộp dịch chiết Tiếp theo cất thu hồi dung môi áp dP rm suất giảm thu cao đặc toàn phần - Cao toàn phần phân tán nước chiết phân đoạn với dung mơi có độ phân cực tăng dần n-hexan, ethyl acetat thu phân đoạn tương ứng ed ici ne an - Phân lập hợp chất phương pháp sắc ký cột với chất hấp phụ silica gel pha thường (0,040-0,063 mm, Merck) kết hợp với phương pháp kết tinh lại dung mơi Tiến hành q trình sắc ký cột: + Khảo sát cao tổng sắc ký lớp mỏng với nhiều hệ dung môi khác nhau, chọn hệ dung mơi có khả tách tốt để làm dung mơi rửa giải M + Chuẩn bị cột: cột sắc ký khô, sạch, lắp thẳng đứng giá cố định Nhồi lớp xuống đáy cột Cân lượng chất nhồi cột thích hợp vào cốc có mỏ, ol of thêm dung mơi thích hợp vào khuấy cho hết bọt khí Đưa từ từ hỗn hợp chất nhồi cột lên cột, gõ nhẹ, tránh bọt khí Sau đó, tiếp tục cho dung môi chảy liên tục qua cột đến cột ổn định ho + Nạp mẫu: trộn chất hấp phụ với dung dịch mẫu phân tích, làm bay Sc dung môi đến bột tơi mịn đưa mẫu lên cột, rải thành lớp mặt cột Sau đó, đặt miếng lên để bảo vệ bề mặt cột @ + Rửa giải: sử dụng hệ dung mơi thích hợp để rửa giải py rig ht - Theo dõi phân đoạn sắc ký lớp mỏng, tiến hành mỏng tráng sẵn DC-Alufolien 60G F254 (Merck), RP-18 (Merck) Phát chất đèn tử ngoại hai bước sóng 254 nm, 366 nm dùng thuốc thử dung dịch H2SO4 10% ethanol Co - Thu gom phân đoạn có sắc ký đồ giống Kiểm tra độ chất phân lập sắc ký lớp mỏng với hệ dung môi phù hợp 13 PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma ... học Cỏ nhọ nồi, thực đề tài: ? ?Chiết xuất, phân lập, xác định cấu trúc số hợp chất Cỏ nhọ nồi (Eclipta alba)? ?? với mục tiêu: Co py rig Chiết xuất phân lập số hợp chất từ phân đoạn Ethyl acetat Xác. .. Kết chiết phân đoạn Cỏ nhọ nồi 15 ht 3.1.2 Kết phân lập hợp chất Cỏ nhọ nồi 16 rig 3.2 Biện luận cấu trúc hợp chất phân lập từ Cỏ nhọ nồi 18 Co py 3.2.1 Biện luận cấu trúc N01 ... ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI ac y, KHOA Y DƯỢC dP rm Người thực hiện: ĐINH THỊ NGUYỆT ÁNH CHIẾT XUẤT, PHÂN LẬP VÀ ed ici ne an XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC MỘT SỐ HỢP CHẤT TRONG CÂY CỎ NHỌ NỒI M (Eclipta alba)