Khóa luận định lượng eurycomanone trong cây bá bệnh (eurycoma longifoila) bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao HPLC

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƢỢC TRẦN THỊ THU PHƢƠNG ĐỊNH LƢỢNG EURYCOMANONE TRONG RỄ CÂY BÁ BỆNH (Eurycoma Longifolia) BẰNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO HPLC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƢỢC HỌC Hà Nội - 2018 KHOA Y DƢỢC an dP r TRẦN THỊ THU PHƢƠNG ma cy ,V NU ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI ĐỊNH LƢỢNG EURYCOMANONE TRONG RỄ CÂY BÁ BỆNH (Eurycoma Longifolia) BẰNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO HPLC Me Khóa: QH.2013.Y dic ine KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƢỢC HỌC Co py rig ht @ Sc ho ol of Ngƣời hƣớng dẫn: TS Nguyễn Hữu Tùng Hà Nội - 2018 PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma ma cy ,V NU LỜI CẢM ƠN Khóa luận tốt nghiệp đƣợc thực mơn Hóa dƣợc Kiểm nghiệm thuốc thuộc Khoa Y Dƣợc, Đại học Quốc gia Hà Nội Lời đầu tiên, em xin chân thành cảm ơn tất thầy cô Khoa Y Dƣợc, Đại học Quốc gia Hà Nội dạy dỗ truyền đạt kiến thức cho em suốt năm học vừa qua Em xin đƣợc gửi lời cảm ơn tới thầy mơn Hóa dƣợc Kiểm nghiệm thuốc tạo điều kiện cho em hồn thành khóa luận tốt nghiệp an dP r Em xin phép bày tỏ kính trọng lịng biết ơn sâu sắc tới thầy Nguyễn Hữu Tùng nhiệt tình, tận tâm hƣớng dẫn, truyền đạt kinh nghiệm giúp đỡ em hồn thành tốt khóa luận ine Em xin cảm ơn dƣợc sỹ Nguyễn Thị Huệ (QH.2012.Y) bạn nhóm nghiên cứu Thùy, Phƣợng, Chuyên tập thể lớp Dƣợc học khóa (QH.2013.Y) sát cánh, động viên, cổ vũ tinh thần giúp em hồn thành khóa luận cách tốt dic Qua đây, em cảm ơn gia đình, bạn bè động viên, giúp đỡ em suốt q trình hồn thành khóa luận Hà Nội, ngày 25 tháng năm 2018 Sinh viên Trần Thị Thu Phƣơng Co py rig ht @ Sc ho ol of Me Mặc dù nỗ lực, cố gắng để hồn thành khóa luận, song kiến thức kinh nghiệm cịn hạn chế nên khơng thể tránh khỏi thiếu sót Em mong nhận đƣợc cảm thơng góp ý tận tình thầy để khóa luận đƣợc hồn thiện PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma ma cy ,V NU DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT Tiếng Anh Tiếng Việt ACN Acetonitrile Acetonitril DAD Diode array detector Detector mảng điốt HPLC High performace liquid chromatography Sắc ký lỏng hiệu cao IL Interleukin LOD Limit of detection LOQ Limit of quantification LPS Lipopolysaccharide MeOH Methanol RSD Relative standard deviation an dP r Từ viết tắt Giới hạn phát Giới hạn định lƣợng ine Methanol UV Ultra violete VIS Me dic TN Interleukin Độ lệch chuẩn tƣơng đối Thí nghiệm Co py rig ht @ Sc ho ol of Visible PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma ma cy ,V NU DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU Co py rig ht @ Sc ho ol of Me dic ine an dP r ảng 1.1 Thành phần hóa học rễ bá bệnh .5 ảng 3.1 hƣơng trình chạy dung mơi pha động phân tích dịch chiết rễ bá bệnh .20 ảng 3.2 Tính thích hợp hệ thống 23 ảng 3.3 Kết khảo sát khoảng tuyến tính eurycomanone 24 ảng 3.4 Kết độ lặp lại phƣơng pháp .25 ảng 3.5 Kết độ phƣơng pháp 26 ảng 3.6 Kết định lƣợng eurycomanone rễ bá bệnh 27 PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma ma cy ,V NU DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Co py rig ht @ Sc ho ol of Me dic ine an dP r Hình 1.1 Cây bá bệnh (Eurycoma longifolia Jack.) Hình 1.2 Cấu trúc chung nhóm quasinoid Hình 1.3 Cấu trúc hóa học eurycomanone .9 Hình 1.4 Mối quan hệ đại lƣợng thời gian HPLC .13 Hình 2.1 Mẫu bá bệnh (Eurycoma longifolia Jack.) .17 Hình 3.1 Sắc ký đồ dung dịch eurycomanone chuẩn .21 Hình 3.2 Sắc ký đồ mẫu trắng (đánh giá độ đặc hiệu) .22 Hình 3.3 Sắc ký đồ dung dịch chuẩn eurycomanone (đánh giá độ đặc hiệu) 22 Hình 3.4 Đồ thị biểu diễn mối quan hệ diện tích pic nồng độ eurycomanone 24 PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma ma cy ,V NU MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ HƢƠNG TỔNG QUAN 1.1 TỔNG QUAN VỀ CÂY BÁ BỆNH 1.1.1 Đặc điểm thực vật an dP r 1.1.2 Phân bố sinh thái 1.1.3 Thu hái, chế biến 1.1.4 Thành phần hóa học 1.1.5 Tác dụng dƣợc lý 1.1.6 Tính vị công 1.2 ine 1.1.7 Một số thuốc dân gian từ bá bệnh Tổng quan nhóm quassinoid .8 dic 1.2.1 Khái quát chung quassinoid .8 1.3 Me 1.2.2 Cấu trúc chung phân loại Tổng quan eurycomanone of 1.3.1 Cơng thức hóa học 1.3.2 Tính chất lí hóa 10 Sc ho ol 1.3.3 Tác dụng sinh học Eurycomanone .10 1.3.4 Một số nghiên cứu định lƣợng eurycomanone HPLC .10 1.4 Tổng quan sắc ký lỏng hiệu cao HPL 13 1.4.1 Nguyên tắc HPLC .13 py rig ht @ 1.4.2 Một số thông số đặc trƣng 13 1.4.3 Thẩm định phƣơng pháp HPL 15 HƢƠNG ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN ỨU .17 2.1 ĐỐI TƢỢNG NGHIÊN CỨU .17 Co 2.1.1 Nguyên liệu 17 2.1.2 Dung mơi, hóa chất .17 PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma 2.2 ma cy ,V NU 2.1.3 Máy móc, dụng cụ .17 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN ỨU 17 2.2.1 Phƣơng pháp chiết xuất eurycomanone từ rễ bá bệnh 18 2.2.2 Phƣơng pháp phân tích HPLC 18 2.2.3 Phƣơng pháp xử lý số liệu 19 HƢƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 20 an dP r 3.1 KẾT QUẢ 20 3.1.1 Quy trình chiết rễ bá bệnh .20 3.1.2 Xây dựng quy trình định lƣợng 20 3.2 Thảo luận .28 3.2.1 Đối tƣợng nghiên cứu 28 ine 3.2.2 Xây dựng phƣơng pháp phân tích eurycomanone HPLC 28 3.2.3 Định lƣợng eurycomanone dƣợc liệu bá bệnh 29 dic KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ .30 Me KẾT LUẬN 30 Co py rig ht @ Sc ho ol of KIẾN NGHỊ .30 PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma ma cy ,V NU ĐẶT VẤN ĐỀ Me dic ine an dP r Việt Nam đất nƣớc nhiệt đới gió mùa với nguồn thuốc vô phong phú Từ lâu nhân dân ta sử dụng nhiều cỏ tự nhiên để làm thuốc Ngày nay, với phát triển nhƣ vũ bão khoa học, kĩ thuật nên có nhiều dƣợc liệu tiềm đã, đƣợc nghiên cứu rộng rãi Trong đó, bá bệnh (Eurycoma longifolia Jack.), họ Thanh thất (Simaroubaceae) đƣợc nhân dân ta sử dụng nhiều với số công dụng nhƣ vỏ dùng chữa trƣờng hợp ăn uống không tiêu, đau lƣng, dùng chữa lị Ở ampuchia, ngƣời ta dùng rễ chữa ngộ độc, say rƣợu, trị giun Lá đƣợc dùng để tắm trị ghẻ, lở ngứa Ngồi bá bệnh cịn đƣợc biết đến với công dụng tăng cƣờng sinh lực, hỗ trợ điều trị yếu sinh lí nam giới, kích thích ham muốn [14,15,32] Hơn nữa, bá bệnh đƣợc chứng minh có tính chống viêm, chống sốt rét, chống oxy hóa [11,21,22,28,32,45], điều trị tiểu đƣờng [32], ứng cử viên tiềm điều trị ký sinh trùng đƣờng ruột Blastocystis [17] Trên giới, bá bệnh đƣợc đƣợc đánh giá dƣợc liệu có hiệu lực điều trị tốt đem lại hiệu kinh tế cao Bá bệnh đƣợc gọi Sâm Malaysia đƣợc sử dụng nhƣ loại thuốc bổ sức khỏe chống lão hóa [34,45] py rig ht @ Sc ho ol of Nhóm quassinoid, nhóm hợp chất bá bệnh bao gồm số chất nhƣ eurycomanone, eurycomalactone, eurycomanol, eurycolactone… đƣợc báo cáo góp phần vào tính chất chữa bệnh tăng sức mạnh bắp, sức bền, giảm lo lắng, căng thẳng, diệt vi trùng sốt rét Plasmodium falcifarum kháng thuốc… [1,2,21,32], phòng ngừa điều trị loãng xƣơng nam giới thiếu androgen [19] Trong đó, eurycomanone hợp chất mang lại hiệu cao tác dụng chữa bệnh Tuy nhiên, Việt Nam nghiên cứu eurycomanone – marker bá bệnh cịn hạn chế Ngoài khả nhân giống cộng với tốc độ sinh trƣởng chậm việc khai thác rễ khơng hợp lí khiến cho nguồn dƣợc liệu cạn kiệt Ngoài ra, dƣợc điển Việt Nam chƣa có chuyên luận định lƣợng eurycomanone bá bệnh Bên cạnh đó, việc kiểm nghiệm bá bệnh nhƣ chế phẩm bá bệnh chủ yếu thực phẩm chức chƣa đƣợc thực Co Trên sở với trang thiết bị đại sở vật chất vốn có phịng thí nghiệm mơn Hóa dƣợc Kiểm nghiệm thuốc, Khoa Y Dƣợc, PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma ma cy ,V NU Đại học Quốc gia Hà Nội đề tài “Định lƣợng eurycomanone bá bệnh (Eurycoma longifoila) sắc ký lỏng hiệu cao HPLC” đƣợc tiến hành Kết đề tài sở cho việc xây dựng tiêu chuẩn kiểm tra chất lƣợng dƣợc liệu bá bệnh nhƣ việc quản lí sản phẩm từ bá bệnh thị trƣờng Các mục tiêu đề tài: Co py rig ht @ Sc ho ol of Me dic ine an dP r Xây dựng phƣơng pháp định lƣợng eurycomanone HPLC thẩm định phƣơng pháp phân tích Xác định hàm lƣợng eurycomanone rễ bá bệnh PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma ma cy ,V NU an dP r ine dic Me of Sc ho ol py rig ht @ Co PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma ma cy ,V NU an dP r ine dic Me of Sc ho ol py rig ht @ Co PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma ma cy ,V NU an dP r ine dic Me of Sc ho ol py rig ht @ Co PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma ma cy ,V NU an dP r ine dic Me of Sc ho ol py rig ht @ Co PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma ma cy ,V NU an dP r ine dic Me of Sc ho ol py rig ht @ Co PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma Sc ho ol of Me dic ine an dP r ma cy ,V NU Phụ lục 02: Sắc ký đồ dung dịch chuẩn eurycomanone – Xây dựng đƣờng hồi quy tuyến tính Co py rig ht @ Hình PL2.1 Sắc ký đồ dung dịch chuẩn eurycomanone 18,75 µg/ml PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma ma cy ,V NU an dP r ine dic Me of Sc ho ol Co py rig ht @ Hình PL2.2 Sắc ký đồ dung dịch chuẩn eurycomanone 25 µg/ml PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma ma cy ,V NU an dP r ine dic Me Co py rig ht @ Sc ho ol of Hình PL2.3 Sắc ký đồ dung dịch chuẩn eurycomanone 37,5 µg/ml PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma ma cy ,V NU an dP r ine dic Me Co py rig ht @ Sc ho ol of Hình PL2.4 Sắc ký đồ dung dịch chuẩn eurycomanone 50 µg/ml PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma ma cy ,V NU an dP r ine dic Me Co py rig ht @ Sc ho ol of Hình PL2.5 Sắc ký đồ dung dịch chuẩn eurycomanone 100 µg/ml PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma ma cy ,V NU an dP r ine dic Me Co py rig ht @ Sc ho ol of Hình PL2.6 Sắc ký đồ dung dịch chuẩn eurycomanone 200 µg/ml PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma Co py rig ht @ Sc ho ol of Me dic ine an dP r ma cy ,V NU Phụ lục 03: Sắc ký đồ dung dịch trắng (MeOH) PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma ma cy ,V NU Co py rig ht @ Sc ho ol of Me dic ine an dP r Phụ lục 04: Sắc ký đồ cao bá bệnh PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma ma cy ,V NU an dP r ine dic Me of Sc ho ol py rig ht @ Co PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma ma cy ,V NU Co py rig ht @ Sc ho ol of Me dic ine an dP r Phụ lục : Độ đồng pic PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma ... ,V NU ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI ĐỊNH LƢỢNG EURYCOMANONE TRONG RỄ CÂY BÁ BỆNH (Eurycoma Longifolia) BẰNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO HPLC Me Khóa: QH.2013.Y dic ine KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH... Nội đề tài ? ?Định lƣợng eurycomanone bá bệnh (Eurycoma longifoila) sắc ký lỏng hiệu cao HPLC? ?? đƣợc tiến hành Kết đề tài sở cho việc xây dựng tiêu chuẩn kiểm tra chất lƣợng dƣợc liệu bá bệnh nhƣ việc... độ cao Đã định lƣợng đƣợc thành phần eurycomanone bá bệnh phƣơng pháp HPL –DAD Kết định lƣợng: hàm lƣợng eurycomanone cao rễ bá bệnh rễ bá bệnh lần lƣợt 0,597% 0,0761% tƣơng đƣơng 5,97 mg/g cao