Xác định melamine trong sữa

LOGO BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NƠNG LÂM TP.HCM BỘ MƠN CƠNG NGHỆ HĨA HỌC XÁC ĐỊNH MELAMINE TRONG SỮA Mơn: Phân tích dư lượng độc tố SPNN  GVHD: Phùng Võ Cẩm Hồng Nhóm: – Thứ – Tiết 123 NỘI DUNG I I.TỔNG QUAN VỀ SỮA II.TỔNG QUAN VỀ MELAMINE III.NỒNG ĐỘ AN TOÀN CỦA MELAMINE TRONG THỰC PHẨM IV.PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH V.KẾT LUẬN TÀI LIỆU THAM KHẢO I.TỔNG QUAN VỀ SỮA Một chất lỏng màu trắng đục Các hoạt chất sinh học khác Đường lactose Sữa Giúp cải thiện dinh dưỡng Protein Chất béo II.TỔNG QUAN VỀ MELAMINE  Melamine là một bazo hợp chất hữu tan nước  Có cơng thức hóa học C3H6N6  Danh pháp theo IUPAC là 1,3,5-triazine-2,4,6-triamine  Công thức cấu tạo Melamine: II.TỔNG QUAN VỀ MELAMINE  Melamine Liebig tổng hợp lần vào năm 1834 Đầu tiên canxi cyanamid chuyển thành dicyandiamid sau đun nóng đến nhiệt độ nóng chảy để tạo thành melamin  Tuy nhiên, quy trình sản xuất melamine cơng nghiệp dùng urê theo phương trình phản ứng sau: • Phản ứng diễn giải theo hai bước sau • Đầu tiên urê phân hủy tạo thành axit cyanic và ammoni, là phản ứng thu nhiệt: • Sau axit cyanic polyme hóa tạo thành melamine khí carbon dioxit: • Phản ứng sau là tỏa nhiệt, xét tồn q trình phản ứng thu nhiệt III.NỒNG ĐỘ AN TOÀN CỦA MELAMINE TRONG THỰC PHẨM  Theo tiêu chuẩn Ủy ban luật quốc tế chất lượng an toàn thực phẩm LHQ (CAC) công bố ngày 5/7/2012:  Đối với trẻ em: tối đa 0,15 mg/kg với sữa nước mg/kg với sữa bột   Đối với thức ăn cho động vật thực phẩm khác: 2,5 mg/kg  Các nghiên cứu động vật cho thấy LD50 của melamine chuột > 3000 mg/kg  Bản thân melamine có độc tính thấp, chúng kết hợp với axit cyanuric gây nên sỏi thận tạo thành hợp chất khơng tan melamin cyanurat IV.PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH Dụng cụ Hóa chất Hóa chất thuốc thử  Chất chuẩn: Melamine (99,0%)  Dung môi: Methanol  Dung môi rửa giải: Trifluoroacetic Methanol  Mẫu thử (sữa dạng bột lỏng)  Nước sử dụng cho việc chuẩn bị pha động pha loãng lọc hệ thống Q-pod Millipore Hệ thống sắc ký  Đầu dị UV, cột C18 (150mm x 3.2mm ID, kích thước hạt µm) IV.PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH Pha dung dịch  Dung môi Dung môi 50% methanol (về thể tích) chuẩn bị cách pha thể tích methanol nước  Dung dịch chuẩn Melamine  Cân xác 100 mg melamine vào bình định mức 100 mL, hòa tan với Methanol 50% cách rung bể rung siêu âm 30 phút Lên thể tích 100 mL thu dung dịch có nồng độ melamine 1000 µg/mL  Pha lỗng 5mL melamine (1000 µg/mL) bằng methanol 50% để nồng độ melamine 100 µg/mL  Pha lỗng tiếp 5mL melamine 100 µgmL bằng methanol 50% để nồng độ melamine 10 µg/mL Chuẩn bị mẫu 10 ml (lỏng) 1,0 g (bột) vào bình định mức 100mL Dịch phân tích cho HPLC Thêm 10mL Melamine 1000ppm Lọc lọc 0.45 µm (Acrodisc, 25mm, màng Nylon) Thêm 50mL MeOH 50% siêu âm 30 phút Lấy 5mL dịch định mức lên 50mL MeOH 50% Làm nguội Định mức lên 100mL MeOH 50% Hỗn hợp có nồng độ Melamine 100ppm Lấy phần dich phía Ly tâm 3200 NGUYÊN LÝ  Pha tĩnh: cột C18 (150mm x 3.2mm ID, kích thước hạt µm)  Pha động: 0,1% Trifluoroacetic - TFA / methanol 9:1 bơm với tốc độ dòng 0.3 mL/ phút với đầu dị UV bước sóng 240 nm  Thời gian lưu melamine tách 3,7 phút  Phương trình tuyến tính tương quan diện tích peak với nồng độ melamine tương ứng từ 1,0-80 µg/mL.   Các giới hạn phát (LOD) giới hạn định lượng (LOQ) có giá trị 0,1 µg/mL và 0,2 µg/mL NGUN LÝ Hình 1: Sắc kí đồ Melamine Hình Mối quan hệ tuyến tính nồng độ melamine với diện tích peak Hiệu suất thu hồi phương pháp đạt từ 97,2101,2%  trong khoảng nồng độ từ  5-40 µg/mL V Kết luận  Phương pháp sử dụng hỗn hợp pha động hỗn hợp axit trifluoroacetic (0.10%, pH 2,4) methanol, đem lại lợi tránh việc sử dụng acetonitril đắt tiền pha động  Qua sắc kí đồ khơng có nhiễu tín hiệu melamine phân biệt rõ ràng 3,7 phút Ngồi ra, mẫu pha với 5-40 µg/mL  melamine thu hồi melamine khác nhau, từ 97,2-101,2 với giá trị RSD khác (từ 0,4% đến 2,9%) cho thấy phương pháp xác khoảng nồng độ phân tích TÀI LIỆU THAM KHẢO • http://quantracmoitruong.vn/detail/phuong-phap-xac-dinh-melamine-trongthuc-pham-thuc-an-chan-nuoi-va-sua-bang-sac-ky-long-cao-ap-hplc.html? fbclid=IwAR1QCjKlSNJcbcsP-5i-LwUVBDYA5RcIz0vbJnxjANMjy9pKd7xu vSPAdJE • https://vi.wikipedia.org/wiki/Melamin • https://vi.wikipedia.org/wiki/S%E1%BB%AFa ... DUNG I I.TỔNG QUAN VỀ SỮA II.TỔNG QUAN VỀ MELAMINE III.NỒNG ĐỘ AN TOÀN CỦA MELAMINE TRONG THỰC PHẨM IV.PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH V.KẾT LUẬN TÀI LIỆU THAM KHẢO I.TỔNG QUAN VỀ SỮA Một chất lỏng màu... Dung dịch chuẩn Melamine  Cân xác 100 mg melamine vào bình định mức 100 mL, hịa tan với Methanol 50% cách rung bể rung siêu âm 30 phút Lên thể tích 100 mL thu dung dịch có nồng độ melamine 1000... 0,15 mg/kg với sữa nước mg/kg với sữa bột   Đối với thức ăn cho động vật thực phẩm khác: 2,5 mg/kg  Các nghiên cứu động vật cho thấy LD50 của melamine chuột > 3000 mg/kg  Bản thân melamine có