Khảo sát in silico gen gly m bd 30k gây dị ứng thực phẩm có nguồn gốc từ đậu nành

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC MỞ TP HCM BÁO CÁO THỰC TẬP TỐT NGHIỆP Tên đề tài KHẢO SÁT IN SILICO GEN GLY M BD 30K GÂY DỊ ỨNG THỰC PHẨM CÓ NGUỒN GỐC TỪ ĐẬU NÀNH KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC CHUYÊN[.]

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC MỞ TP.HCM BÁO CÁO THỰC TẬP TỐT NGHIỆP Tên đề tài: KHẢO SÁT IN SILICO GEN GLY M BD 30K GÂY DỊ ỨNG THỰC PHẨM CÓ NGUỒN GỐC TỪ ĐẬU NÀNH KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC CHUYÊN NGÀNH: Y DƯỢC GVHD :TS Lao Đức Thuận Bình Dương, tháng 03 năm 2022 LỜI CẢM ƠN Đầu tiên, em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến thầy hướng dẫn: TS Lao Đức Thuận giúp đỡ em tận tình, hướng dẫn, truyền đạt kinh nghiệm không học tập, nghiên cứu mà học làm người vô quý báu, tạo điều kiện dạy cho em ngày giúp em hồn thiện trưởng thành Thêm vào đó, em xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến Thầy ln dành thời gian lắng nghe, thấu hiểu dẫn dắt giúp em có động lực nhiệt huyết suốt q trình thực đề tài Bên cạnh đó, em củng xin gửi lời cảm ơn đến Thầy/Cô nhà trường tạo điều kiện cho em có hội học hỏi trải nghiệm thi, hội nghị nghiên cứu khoa học suốt ba năm học tập, để từ mở cho em thêm nhiều kiến thức mới, tầm nhìn học hỏi thêm kiến thức chuyên ngành, nhìn điểm cịn thiếu sót nơi thân em Tiếp đến, em xin gửi lời biết ơn sâu sắc đến gia đình ln chỗ dựa tinh thần vững chắc, quan tâm, động viên hỗ trợ em mặt sống Cuối cùng, em nhắc tới hướng dẫn, giúp đỡ tận tình anh chị bạn phịng thí nghiệm Sinh học Phân tử Đặc biệt lời quan tâm, động viên, khuyến khích người Với tất tình cảm chân thành, cho phép em bày tỏ biết ơn đến Thầy Cô Khoa Công nghệ Sinh học giảng dạy giúp đỡ em suốt năm học tập Đến nay, em hồn thành báo cáo thực tập tốt nghiệp, với tên đề tài: “ KHẢO SÁT IN SILICO GEN GLY M BD 30K GÂY DỊ ỨNG THỰC PHẨM CÓ NGUỒN GỐC TỪ ĐẬU NÀNH” Với điều kiện thời gian, kinh nghiệm thân em hạn chế, em tin báo cáo thực tập tốt nghiệp em tránh khỏi thiếu sót Em xin chân thành cảm ơn! MỤC LỤC DANH MỤC HÌNH ẢNH i DANH MỤC BẢNG BIỂU ii DANH MỤC VIẾT TẮT iii ĐẶT VẤN ĐỀ PHẦN I: TỔNG QUAN TỔNG QUAN 1.1 1.1.1 Dị ứng thực phẩm .2 1.1.2 Dị ứng đậu nành 1.1.3 Các chế nguyên nhân dẫn đến dị ứng đậu nành 1.2 PHÂN TỬ GLY M BD 30K (P34) 1.2.1 Cấu trúc, kích thước phân tử, khối lượng 1.2.2 Chức .7 1.3 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU TRÊN THẾ GIỚI VÀ VIỆT NAM 1.3.1 Các công bố khoa học dị ứng đậu nành giới 1.3.2 Tình hình nghiên cứu Việt Nam 10 1.4 CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐƯỢC SỬ DỤNG ĐỂ PHÁT HIỆN PROTEIN ĐẬU NÀNH ĐÃ ĐƯỢC CÔNG BỐ 11 PHẦN II: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 VẬT LIỆU NGHIÊN CỨU 12 2.1.1 Các công cụ khai thác liệu 12 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 12 2.2.1 Phương pháp khai thác liệu .12 2.2.3 Kiểm tra độ đặc hiệu mồi 13 2.2.4 Tổng hợp liệu phân tử 14 2.2.5 Các bước thực khảo sát mồi .14 PHẦN III: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 3.1 KẾT QUẢ KHẢO SÁT CÁC CƠNG TRÌNH NGHIÊN CỨU TRÊN THẾ GIỚI 15 3.2 KẾT QUẢ KHẢO SÁT BỘ MỒI 17 3.2.1 Kết khảo sát cặp mồi khuếch đại gen Gly m Bd 30K 17 PHẦN IV: THẢO LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 15 4.2 ĐỀ NGHỊ: 24 TÀI LIỆU THAM KHẢO 25 DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 1.1 Phản ứng dị dứng Hình 1.2 Các hoạt động trung gian dưỡng bào (mast cells) dị ứng thực phẩm đậu nành Hình 3.1 Kết gióng cột cặp mồi F R trình tự gen Glycine max Gly m Bd 30K phần mềm Annhyd Hình 3.2 Kết BLAST cặp mồi F R i DANH MỤC BẢNG BIỂU Bảng 3.1 Một số nghiên cứu thực gen P34/ Gly m Bd 30K Bảng 3.2 Các thông số vật lý cặp mồi F R ( Gly m Bd 30K ) ii DANH MỤC VIẾT TẮT IgE Immunoglobin E CRD Chonic Respiratory Disease IL-4 Interleukin-4 IL-5 Interleukin-5 IL-13 Interleukin-13 IL-8 Interleukin-8 MCP-1 Monocyte chemoattractant protein-1 FcRI Fc Receptor I MCP-1 Monocyte Chemoattractant Protein-1 NCBI NationalCenter for Biotechnology Information BLAST Basic Local Alignment Search Tool IDT Integrated DNA Technologies F Forward primer R Reverse primer iii ĐẶT VẤN ĐỀ Dị ứng thực phẩm, cụ thể dị ứng đậu nành vấn đề quan tâm nước giới Đậu nành chứa hàm lượng dinh dưỡng cao nguồn thực phẩm việc cung cấp protein cho người ăn chay làm sữa công thức Bên cạnh lợi ích đậu nành mang lại, tốt cho tim mạch, giảm nguy bệnh tiểu đường, lỗng xương, v.v… củng đậu nành nguồn gây dị ứng ảnh hưởng đến sức khoẻ nghiêm trọng, chí đe dọa đến tính mạng người với triệu chứng liên quan đến hệ miễn dịch phát ban đỏ, hen suyễn, sưng đường hơ hấp, v.v… Do đó, nhằm hạn chế tối đa số lượng trường hợp dị ứng gây đậu nành việc phát thành phần gây dị ứng có nguồn gốc từ đậu nành điều cần thiết Phát thành phần gây dị ứng có nguồn gốc đậu nành giúp cho nhà sản xuất, người sử dụng ghi nhãn hàng sản phẩm Tuy nhiên, Việt Nam, thiết bị kit phát thành phần gây dị ứng cịn chưa phát triển, nghiên cứu xây dựng sở liệu khảo sát cụ thể chất gây dị ứng nên thực Protein Gly m Bd 30K chọn thành phần để làm đối tượng khảo sát chất gây dị ứng có nguồn gốc từ đậu nành chất gây dị ứng miễn dịch tìm thấy nhiều bệnh nhân nhạy cảm với đậu nành Bên cạnh đó, chưa tìm thấy công bố quốc tế chế hoạt động chức cụ thể gen Gly m Bd 30K hướng nghiên cứu tiềm lĩnh vực Chính vậy, nghiên cứu với tên đề tài: “ KHẢO SÁT IN SILICO GEN GLY M BD 30K GÂY DỊ ỨNG THỰC PHẨM CÓ NGUỒN GỐC TỪ ĐẬU NÀNH ” thực với mục tiêu là: phát xác diện gen Gly m Bd 30K gây dị ứng thực phẩm có nguồn gốc từ đậu nành phương pháp in silico PHẦN I: TỔNG QUAN 1.1 TỔNG QUAN 1.1.1 Dị ứng thực phẩm Dị ứng thực phẩm phản ứng hệ miễn dịch xảy sau ăn phải loại thực phẩm đó, triệu chứng có hại nghiêm trọng Dị ứng thực phẩm tượng mẫn loại 1, ảnh hưởng đến 10% dân số nói chung [6] thường dẫn đến sốc phản vệ, lượng nhỏ thức ăn gây dị ứng củng gây dấu hiệu triệu chứng vấn đề tiêu hoá, phát ban sưng đường hô hấp Dị ứng thực phẩm ảnh hưởng từ 6-8% trẻ em tuổi lên đến 3% người lớn Đối với số người, phản ứng dị ứng thực phẩm gây vấn đề sức khoẻ nghiêm trọng chí đe doạ đến tính mạng Dị ứng thực phẩm cho thông qua trung gian IgE chế không qua trung gian IgE [39] Phản ứng dị ứng cấp tính liên quan đến thực phẩm chiếm tới 49% tất ca cấp cứu liên quan đến sốc phản vệ bệnh nhân xuất viện bị sốc phản vệ, 54% tiêm epinephrine vòng năm [23] Branum Lukacs đưa báo cáo thực từ nghiên cứu phân tích liệu dựa câu trả lời việc Khảo sát Phỏng vấn Y tế Quốc gia Hoa Kỳ từ năm 2005 đến năm 2007 cho thấy tỷ lệ dị ứng thực phẩm lâm sàng thay đổi theo loại thực phẩm nhóm tuổi tổng thể cho thấy sau: sữa 3,8%; đậu nành 1,4%; trái 1,2%; đậu phộng 0,6%; lúa mì 0,5% Đặc biệt, tượng mẫn với đậu nành gia tăng năm gần mức tiêu thụ sản phẩm có nguồn gốc từ đậu nành cao [41] 1.1.2 Dị ứng đậu nành Đậu nành dường nguồn nguyên liệu phổ biến có đa dạng loại thực phẩm nguyên liệu sử dụng sản xuất sữa công thức, chất thay cà phê, sữa tươi, sữa đặc, bánh kẹo nước sốt, salad, nhiều thực phẩm chế biến sẵn Việc sử dụng sản phẩm có nguồn gốc từ đậu nành ngày nhiều nguyên nhân phổ biến dẫn đến dị ứng đậu nành Phản ứng dị ứng báo cáo người tiêu dùng sau sử dụng đậu nành công nhân làm nhà máy ... tài: “ KHẢO SÁT IN SILICO GEN GLY M BD 30K GÂY DỊ ỨNG THỰC PH? ?M CÓ NGUỒN GỐC TỪ ĐẬU NÀNH ” thực với m? ??c tiêu là: phát xác diện gen Gly m Bd 30K gây dị ứng thực ph? ?m có nguồn gốc từ đậu nành phương... pháp in silico PHẦN I: TỔNG QUAN 1.1 TỔNG QUAN 1.1.1 Dị ứng thực ph? ?m Dị ứng thực ph? ?m phản ứng hệ miễn dịch xảy sau ăn phải loại thực ph? ?m đó, triệu chứng có hại nghi? ?m trọng Dị ứng thực ph? ?m tượng... tử gen có thực ph? ?m, điển hình Gly m Bd 30K Vì vậy, hướng khảo sát tính biểu hiện, phát diện Gly m Bd 30K có đậu nành hướng nghiên cứu ti? ?m năng, m? ?? t? ?m nhìn bao quát dị ứng đậu nành Việt Nam