Nghiên cứu khả năng ức chế Staphylococcus aureus của Lactobacillus acidophilus trên hai môi trường sữa đậu nành và nước chiết thịt – peptone để bảo quản thực

ii LI C  xin gi li cc n Th  Dung  B   sinh hi h H  t nhiu tht,  nhng l t thi gian thc hi   i li cn  Nguy Ti  ThK  Hunh Nguyn Anh Khoa  B  ngh sinh hi h  H  ng ging vi sinh vt s t cn thi  s d   n  m 117  B   sinh hi h H  o nhu kin thun li nht   s dng trang thit b ng c m. Xin c  t thc. t nhng kin th B  sinh hi h H  li nghim. Xin gn mi i nhng li c iii T Staphylococcus aureus nh, ng ln sc khe i. Bng t , lung c ch ca L. acidophilus  n ca S. aureus by S. aureus L. acidophilus    ng dch th: s   c chit tht.  30 0 C, L. acidophilus    c ch S. aureus vi t l c ch t   S. aureus/L. acidophilus = 1/100.  30 0 C, m S. aureus   l 1/100, 1/50, 1/10  i mc 810 7 t          c ch S. aureus   c ch  n sau c . ABSTRACT Staphylococcus aureus is a opportunistic pathogen and a major concern for human health. By determining the amount of staphylococci, the growth inhibitory effect produced by the antimicrobial activity of the Lactobacillus acidophilus strain on the Staphylococcus aureus strain was tested on liquid media, soya milk and meat matrix, that contained a mixture of S. aureus and L. acidophilus. The optimum ratio of S. aureus to effector was 1/100 at 30 0 C. The population of S. aureus at ratios of 1/100, 1/50, 1/10 never attain 810 7 cell per milliliter at 30 0 C. Production of acid lactic appears to inhibit growth of S. aureus in the early but not the late stages of incubation. iv MC LC LI C ii T iii MC LC iv  VIT TT vi DANH MC BNG vii DANH M viii M U 1 U 2 1.1 Gii thiu chung v L. acidophilus S. aureus 2 1.1.1 Vi khun Lactobacillus acidophilus 2 1.1.2 Vi khun Staphylococcus aureus 4 1.2 ng da vi khun lactic 8 1.2.1 Acid lactic ca vi khun lactic 8 1.2.2 Bacteriocin ca vi khun lactic 8 1.3 S S. aureus trong thc phm 8 1.3.1 S  9 1.3.2 S t 11 1.3.3 S troxide (H 2 O 2 ) 13 1.3.4 S cng 13 1.3.5 ng ca t l LAB/S. aureus 14 2T LIU 16 2.1 Vt liu 16 ng ging 16 2.1.2 Nguu 16 2.2 Tim 16 2.2.1  nm 16 v 2.2.2 Ni dung b m 18 m s dng 19 i th 19 m Gram 19 2.3.3 Kh ng th 19  catalase 19 ng chun 20 ng vi sinh vt bm khun lc 21 2.3.7 Kh  22 2.3.8  22  3: KT QU M 23 3.1 S i pH cng si gian 23 3.2 Kt qu khh c ch S. aureus ca L. acidophilus 23 3.2.1 L. acidophilus  c ch S. aureus 23 3.2.2 S c ch c tht mng su  26 3.2.3 T l c ch tS. aureus/L. acidophilus = 1/100 27 3.2.4 T l p  nh  nhau 29 3.2.5 pH thp  t trong nhng yu t c ch kh   n ca S. aureus. 32 3.2.6 Kh c ch ca L. acidophilus ch n nhng  nhnh 35 N NGH 37 T LUN 44 U THAM KHO 45 PH LC vi  VIT TT LAB Lactic Acid Bacteria - vi khun sinh acid lactic CPS Coagulase Positive Staphylococci - stap vii DANH MC BNG Bng 1.1  hong 12 Bng 3.1 Log (t S. aureus/ml) theo thi gian  ng s c chit tht vi m S. aureus u 10 5 t  27 Bng 3.2 ng c ch ca L. acidophilus trong 26 gi ng su  S. aureus u 10 5 t  28 Bng 3.3 ng c ch ca L. acidophilus trong 26 gi c chit tht - peptone, M S. aureus 10 5 t  28 Bng 3.4 ng c ch ca L. acidophilus trong 48 gi c chit tht - peptone, M S. aureus 2.510 6 t  29 Bng 4.1 M t S. aureus ng sc chit tht - peptone theo thi gian 39  4.2 S. aureus  0 C 40 Bng 4.3 T l vi khun lactic cn thi S. aureus  n 810 7 t  41 Bng 4.4 ng ca s b        n ca S. aureus ng APT, 30 0 C) 42 viii DANH M  Lactobacillus acidophilus 4  Staphylococcus aureus 5 nh 1.3 S. aureus ng th 7 2.1 m 17   th biu din s i pH si gian khi mt  L. acidophilus  7 t  23   th biu din s i m t S. aureus theo thi gian  nhng t l S. aureus/L. acidophilus  24   th biu din s i pH cng theo thi gian  nhng t l S. aureus/L. acidophilus  30 4  th th hin m gi t ng s S. aureus  5 t  32 5  th th hin m gi t ng c chit th S. aureus  5 t  33 6  th th hin m gi t ng c chit th S. aureus 10 5 t  34 1 M U S. aureus  u ki vi sinh v c thc phm. Thc phm ch bin sn ho sn phm s ng lo nhic do S. aureus nht. Ti Ving nhim c S. aureus  mc cao. Mt kho  cho thy 25% mu thng   ph H m S. aureus nh ca B Y t [5, 57]. o qun ch yu hi d cht ph gia.  dit khun, mt s sn xut  - m ch - thc phm [57]. Vi khumt thay th ticho lot bo qu. sinh ra   c ch s n ca S. aureus     n sc kh  i. Mt trong s   L. acidophilus, vi khun c bin rv n xut n phm s    n ca L. acidophilus   u  nhic ng dn xut bacteriocin [45]. Trong u kin   thy rng, viu kh  c ch Staphylococcus aureus ca Lactobacillus acidophilus    ng sa c chit tht  peptone  bo qun thc phm  ht sc cn thit. Lu c thc hin vi mu kin tc c ch Staphylococcus aureus bng Lactobacillus acidophilus, to ti  cho vic ng dng bo qun thc phu t nh: 1. T l tL. acidophilus c ch S. aureus mnh nht. 2. T l L. acidophilus c ch S. aureus  m chp nhc trong ng gn vt. Chương 1: Tổng quan tài liệu 2 : TU 1.1 Gii thiu chung v Lactobacillus acidophilus Staphylococcus aureus 1.1.1 Vi khun Lactobacillus acidophilus 1.1.1.1 Lactobacillus acidophilus   L. acidophilus   [27, 33].  L. acidophilus .   L. acidophilus. 1.1.1.2  L. acidophilus:      Lactobacillus acidophilus [28] 1.1.1.3  L. acidophilus      ,    0.5 - 1       -  45 0 C [28]. 1.1.1.4  Chương 1: Tổng quan tài liệu 3 L. acidophilus     . L. acidophilus               , saccharose, maltose, ma     ol, arabinose, xylose, rhamnose, sorbitol, glycerin.         L. acidophilus        , lactacin B, acid[2, 28]. 1.1.1.5  L. acidophilus (5% CO 2 , 10% H 2  85% N 2 37 0  3.8 - 6.5. L. acidophilus  acid, tryptone , monooleate (Tween-80), sodium acetat magnesium .  L. acidophilus -0.15-1% oxgall) [4]. 1.1.1.6 L. acidophilus       ,L. acidophilus  ,.       L. acidophilus     . [...]... i hai giờ trƣớc khi sữa đậu nành đông tụ Qua đó khảo sát khả năng ức chế của L acidophilus lên S aureus vào thời gian trƣớc đông tụ, đánh giá có thể ứng dụng khả năng ức chế để bảo quản sữa đậu nành dạng lỏng hay không 3.2 Kết quả khả hả năng ức chế S aureus c a L acidophilus 3.2.1 L acidophilus ó hả năng ức chế S aureus Kết quả khảo sát khả năng ức chế S aureus của L acidophilus đƣợc biểu diễn trên. .. 5 105, 106, 2.5 106 và 5 106 tế bào/ml Định lƣợng S aureus bằng phƣơng pháp đếm gián tiếp số khuẩn lạc trên môi trƣờng Mannitol Salt Agar Ghi nhận lƣợng tế bào cực đại ở m i thí nghiệm Gi i n4 Nghiên cứu khả năng ức chế S aureus của L acidophilus Khảo sát khả năng ức chế S aureus của L acidophilus trên môi trƣờng sữa đậu nành và nƣớc chiết thịt – peptone theo các tỷ lệ S aureus/ L acidophilus = 1/100,... Agar (NA)  Môi trƣờng giữ giống và tăng sinh giống vi khuẩn Lactobacillus acidophilus: môi trƣờng MRS và MRS Agar  Môi trƣờng sữa đậu nành, môi trƣờng nƣớc chiết thịt – peptone để khảo sát khả năng ức chế Staphylococcus aureus của Lactobacillus acidophilus  Môi trƣờng Mannitol Salt Agar để phân lập Staphylococcus aureus Thành phần các loại môi trƣờng này đƣợc trình bày ở Phụ lục 7 2.2 Tiến ình hí nghiệm... 6) 26 Chương 3: Kết quả thí nghiệm Kết quả cho thấy, yếu tố môi trƣờng có ảnh hƣởng đến khả năng ức chế S .aureus của L acidophilus Sự ức chế diễn ra trong môi trƣờng nƣớc chiết thịt – peptone thuận lợi hơn trong môi trƣờng sữa đậu nành Bảng 3.1 Log (tế bào S aureus/ ml) theo thời gian ở môi trƣờng sữa đậu nành và nƣớc chiết thịt với mật độ S aureus ban đầu 105 tế bào/ml Tỷ lệ Thời gian 1/100 (h) M1 1/50... hợp Khảo sát ảnh hƣởng của những tỷ lệ nuôi cấy Staphylococcus aureus/ Lactobacillus acidophilus khác nhau lên khả năng sinh trƣởng của S aureus Thí nghiệm trên môi trƣờng sữa đậu nành và môi trƣờng nƣớc Khảo sát sự thay đổi pH môi trƣờng đồng nuôi cấy theo thời gian chiết thịt - peptone Hình 2.1 Qui trình thí nghiệm Toàn bộ quá trình thí nghiệm nhằm hai mục tiêu: tìm ra tỷ lệ nuôi cấy Staphylococcus aureus/ Lactobacillus. .. Khảo sát một số đặc tính của Lactobacillus acidophilus nhƣ khả năng làm đông tụ sữa, khả năng sinh acid lactic Gi i n3 Khảo sát sự thay đổi pH của môi trƣờng sữa đậu nành có bổ sung L acidophilus theo thời gian đến khi sữa bắt đầu đông tụ Lƣợng L acidophilus ban đầu 107 tế bào/ml Tiến hành đo pH sau m i 20 phút Khảo sát tốc độ sinh trƣởng của S aureus trong môi trƣờng nƣớc chiết thịt ở các mật độ ban... quan đến phản ứng của S aureus với các stress do môi trƣờng khác [55] Môi trƣờng acid là kết quả của lên men lactic t LAB đƣợc xem là yếu tố chính liên quan đến sự ức chế S aureus Ảnh hƣởng của acid lên sự phát triển của S aureus là một thông số lý hóa trong nhiều nghiên cứu Vài nghiên cứu cho thấy rằng có một mối liên quan trực tiếp giữa acid trong môi trƣờng và khả năng ức chế S aureus (tác động lên... (3.4 105 và 4.2 105 tế bào/ml) Dựa vào những kết quả nêu trên, có thể kết luận rằng ở 300C, trong vòng 20 giờ, S aureus có thể bị ức chế hoàn toàn bởi L acidophilus (với mật độ nhiễm khuẩn S aureus ban đầu trong môi trƣờng sữa đậu nành là 105 tế bào/ml, trong môi trƣờng nƣớc chiết thịt - peptone lần lƣợt là 105 và 2.5 106 tế bào/ml) 3.2.2 Sự ức chế ng i ƣờng nƣớc thịt m nh hơn ng i ƣờng sữa ậ nành Trong... aureus ban đầu trong môi trƣờng quyết định khả năng ức chế Điều này đƣợc khẳng định trong nhiều nghiên cứu sử dụng môi trƣờng pha sẵn, trong sữa, hoặc trong chất nền phô mai và thịt Kết quả của Haines và Harmon đã cho thấy, ở môi trƣờng giàu dinh dƣỡng (APT), khi mật độ S aureus nhiều hơn L lactis (tỷ lệ 10/1, S aureus 105 cfu/ml và S lactis 104 cfu/ml), mật độ của S aureus trong môi trƣờng đồng nuôi... cấy chuyền và giữ trên môi trƣờng NA Giống vi khuẩn Lactobacillus acidophilus đƣợc cấy chuyền và giữ trên môi trƣờng MRS Kiểm tra đại thể bằng cách trải đĩa Kiểm tra vi thể bằng cách nhuộm Gram và quan sát hình thái tế bào dƣới kính hiển vi Giai n2  Dựng đƣờng chuẩn của Staphylococcus aureus trên môi trƣờng NB  Dựng đƣờng chuẩn của Lactobacillus acidophilus trên môi trƣờng MRS dịch thể  Khảo sát một . acidophilus  Staphylococcus aureus, Salmonella typhimuriumE. coli.  1.1 Lactobacillus acidophilus [59] 1.1.2 Vi khun Staphylococcus aureus Staphylococcus aureus p. strain on the Staphylococcus aureus strain was tested on liquid media, soya milk and meat matrix, that contained a mixture of S. aureus and L. acidophilus. The optimum ratio of S. aureus to effector. ca S. aureus by S. aureus L. acidophilus    ng dch th: s   c chit tht.  30 0 C, L. acidophilus    c ch S. aureus