Quản lý Tài nguyên rừng & Môi trường 150 TẠP CHÍ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ LÂM NGHIỆP SỐ 4 2021 THÀNH PHẦN LOÀI NẤM TRONG GỖ TRẦM HƯƠNG (Aquilaria crassna Pierre ex Lecomte) TẠI HUYỆN HƯƠNG KHÊ, TỈNH HÀ T[.]
Quản lý Tài nguyên rừng & Môi trường THÀNH PHẦN LOÀI NẤM TRONG GỖ TRẦM HƯƠNG (Aquilaria crassna Pierre ex Lecomte) TẠI HUYỆN HƯƠNG KHÊ, TỈNH HÀ TĨNH Nguyễn Thành Tuấn1, Bùi Mai Hương1, Nguyễn Thị Mai Lương1, Trần Tuấn Kha1, Nguyễn Thị Thơ1 Trường Đại học Lâm nghiệp TĨM TẮT Trong năm qua có nhiều nghiên cứu tập trung tìm hiểu vai trị vi sinh vật trình tạo trầm hương số lồi thực vật thuộc chi Dó trầm (Aquilaria) Dựa giả thuyết mối liên hệ vi sinh vật nội cộng sinh hình thành trầm hương, phân lập mô tả đặc điểm sinh học chủng nấm cộng sinh từ gỗ Dó bầu (Aquilaria crassna Pierre ex Lecomte) thu huyện Hương Khê, tỉnh Hà Tĩnh Bằng phương pháp phân tích, mơ tả đặc điểm hình thái, xác định chủng nấm gỗ trầm hương nghiên cứu, là: nấm Bào tử lơng roi (Pestalotiopsis sp.) thuộc họ nấm Đĩa đen (Melanconidaceae); nấm Bào tử lưỡi liềm (Fusarium sp.) thuộc họ nấm Bào tử đệm (Tuberculariaceae); nấm Mốc (Mucor sp.) thuộc họ nấm mốc (Mucoraceae); nấm Mốc xanh (Penicillium sp.) thuộc họ nấm Bào sợi (Hyphomycetaceae) nấm Mốc khúc (Apergillus sp.) thuộc họ nấm Bào tử sẫm (Moniliaceae) Kết nghiên cứu góp phần làm rõ đa dạng quần xã vi sinh vật cộng sinh với Dó bầu, cung cấp thêm liệu đặc điểm sinh học lộ vai trò vi sinh vật tạo trầm, qua làm sở khoa học tạo trầm hương rừng trồng Dó bầu chế phẩm sinh học, đồng thời đóng góp định cho vấn đề bảo tồn gỗ quý Việt Nam Từ khóa: Dó bầu, lồi nấm, thành phần, trầm hương ĐẶT VẤN ĐỀ Hiện nước có hàng nghìn Dó bầu, phân bố miền, trồng tập trung tỉnh Hà Tĩnh, Quảng Nam, Kon Tum, Bình Phước Kiên Giang Sự phát triển mạnh mẽ diện tích Dó bầu cho thấy việc nhân giống gây trồng lồi khơng cịn khó khăn, có nhiều phương pháp tạo trầm hương biện pháp giới, dùng hóa chất, dùng nhiệt… vấn đề tác động tạo trầm chất lượng trầm cần quan tâm Sự tạo trầm tự nhiên Dó bầu biến đổi phần từ gỗ tác động vết nứt gẫy, xâm nhập loài nấm xảy cách tự nhiên năm sang năm khác Khi Dó bầu bị tác động vùng tích tụ nhựa đến để tự băng bó vết thương, xem khả tự đề kháng để chống lại vết thương nên tạo trầm Trong tự nhiên, thân Dó có trầm, có bị thương tác động chứa trầm phần lõi thân Trầm hương tìm thấy Dó bầu sau thời gian 10 - 20 năm lâu 150 Trầm hương tinh dầu trầm loại lâm sản ngồi gỗ có giá trị kinh tế cao Do nhu cầu sử dụng lớn chúng lại có phân bố tự nhiên gây trồng số vùng sinh thái định, đặc biệt trình hình thành trầm hương tự nhiên thân địi hỏi phải có điều kiện định khoảng thời gian dài Mặc dù, trầm hương có giá trị kinh tế cao, nơi có cách tạo trầm khác Dó bầu, hiệu khác Để rút ngắn thời gian tạo trầm Dó bầu hướng có hiệu tạo chế phẩm sinh học từ nấm để kích thích tạo trầm, vừa rút ngắn thời gian, chất lượng trầm hương đánh giá tốt Hiện nay, giới Việt Nam bắt đầu sâu vào nghiên cứu trình tạo trầm hương từ việc phân lập tuyển chọn vi sinh vật có khả kích thích tạo trầm hương Gibson (1977) phân lập nhiều loài nấm từ trầm hương Penicillium citrinum, Aspergillus tamarii, Fusarium solani, Botryodiplodia theobromae, Philophora prasitica Oldfield cộng (1998) cho rằng: chủ sinh nhựa thơm TẠP CHÍ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ LÂM NGHIỆP SỐ - 2021 Quản lý Tài ngun rừng & Mơi trường q trình phản ứng lại với xâm nhiễm nấm Theo Anon (1998), tự nhiên Dó bầu bị nhiễm nhiều loài nấm: Aspergillus spp., Botryodyplodia spp., Diplodia spp., Fusarium oxysporum, Fusarium solani, Penicillium spp., Pythium spp Năm 2003, Tabata cộng thí nghiệm tạo trầm hương nhân tạo với nhiều lồi Dó bầu khác thuộc chi Aquilaria Bekanbaru thuộc Sumatra việc khoan sâu vào thân Dó bầu nhiễm vi nấm, kết cho thấy trầm hương hình thành xung quanh lỗ khoan Tại Việt Nam, Trung tâm nghiên cứu lâm sản (1991) nghiên cứu thăm dò biện pháp kỹ thuật tạo trầm hương lồi Dó bầu (A crassna); Nguyễn Thế Nhã cộng (2019) nghiên cứu ứng dụng công nghệ sản xuất trầm hương theo hướng bền vững Việt Nam kết cho thấy phương pháp sử dụng chế phẩm sinh học có nhiều triển vọng tạo trầm hương rừng trồng Dó bầu Trong báo thông báo kết nghiên cứu thành phần lồi nấm có gỗ trầm hương Dó bầu huyện Hương Khê, tỉnh Hà Tĩnh làm sở khoa học để sản xuất chế phẩm sinh học kích thích tạo trầm hương Số hiệu mẫu HK01 HK02 HK03 HK06 HK08 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Vật liệu Thu thập 20 mẫu gỗ có trầm tự nhiên Dó bầu địa điểm thuộc xã Phúc Trạch, xã Yên Thắng thị trấn Hương Khê, huyện Hương Khê, tỉnh Hà Tĩnh 2.2 Phương pháp nghiên cứu Phân lập nấm từ mẫu gỗ trầm hương tự nhiên Dó bầu khu vực nghiên cứu theo nguyên lý Koch’s Mô tả đặc điểm sinh học nấm phân lập: đặc điểm khuẩn lạc, hình thái đặc trưng sợi nấm, bào tử Đặc điểm hệ sợi, bào tử nấm mô tả dựa theo khóa phân loại He Yun Chun (2008), Lu Jia Yun (2000) Shao Li Ping (1983) KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Thành phần loài nấm có gỗ trầm hương khu vực nghiên cứu Sau phân lập, nuôi cấy chủng nấm Tiến hành mơ tả, xác định đặc điểm hình thái đặc trưng nấm phát triển môi trường PDA, đặc điểm hình thái bào tử, sợi nấm Kết thể bảng 1, hình Bảng Đặc điểm hình thái lồi nấm khu vực nghiên cứu Đặc điểm khuẩn lạc Đặc điểm hình thái bào tử, Lồi nấm mơi trường PDA sợi nấm Thể sợi nấm màu trắng, có Thể sợi nấm khơng có vách ngăn đường kính nhỏ, mọc rải rác Bào tử hình thoi, có vách ngăn, Pestalotiopsis sp khơng theo quy tắc đỉnh có lơng roi Thể sợi nấm thường có điểm Bào tử nấm hình lưỡi liềm, Fusarium sp màu vàng cam uốn cong, có 3-5 vách ngăn Sợi nấm đơn bào, không màu Thể sợi nấm phát triển khơng Đỉnh sợi nấm có túi bào tử Bào tử Mucor sp theo quy luật, nấm có màu đen hình cầu Thể sợi nấm màu đen Cuống bào tử đính với bào tử Aspergillus sp Thể sợi nấm màu xanh Bào tử hình trịn Penicillium sp Kết cho thấy, số 20 mẫu gỗ phân lập lồi nấm khác nhau, nấm Bào tử lông roi (Pestalotiops sp.); nấm Bào tử lưỡi liềm (Fusarium sp.), nấm Mốc (Mucor sp.), nấm Mốc xanh (Penicillium sp.), nấm Mốc khúc (Aspergillus sp.) Loài nấm phân lập nhiều nấm Bào tử lưỡi liềm (Fusarium sp.) nấm Mốc (Mucor sp.) TẠP CHÍ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ LÂM NGHIỆP SỐ - 2021 151 Quản lý Tài nguyên rừng & Môi trường b a d c e Hình Khuẩn lạc nấm môi trường PDA a) Khuẩn lạc HK01; b) Khuẩn lạc HK02; c) Khuẩn lạc HK03; d) Khuẩn lạc HK06; e) Khuẩn lạc HK08 Từ 20 mẫu gỗ trầm hương lấy Dó bầu xã Phúc Trạch, Yên Thắng thị trấn Hương Khê thời gian nghiên TT Bảng Danh lục chủng vi nấm khu vực nghiên cứu Thời gian xuất Tọa độ lấy Chủng nấm Địa điểm lấy mẫu bào tử (ngày) mẫu Xã Phúc Trạch, thị trấn 18007’51N; Pestalotiopsis sp 28 105045’39E Hương Khê ’ 18 10 35N; 105041’12E 18015’30N; 105041’13E Xã Phúc Trạch, xã Yên Fusarium sp 25 ’ 18 19 15N; Thắng, thị trấn Hương Khê 105040’38E 18007’51N; 105045’39E 18011’50N; Penicillium sp 19 Thị trấn Hương Khê 105040’37E 18015’30N; Mucor sp 21 Thị trấn Hương Khê 105041’13E 18010’35N; Aspergillus sp 23 Thị trấn Hương Khê 105041’12E Kết bảng cho thấy, chủng vi nấm có thời gian hình thành bào tử khác Trong chủng nấm phân lập từ gỗ Dó bầu thời gian xuất bào tử nấm Mốc xanh (Penicillium sp.) sớm 19 ngày, nấm Mốc (Mucor sp.) 21 152 cứu phân lập xác định có chủng vi nấm ngày, nấm Bào tử lưỡi liềm (Fusarium sp.) 25 ngày Thời gian xuất bào tử nấm Bào tử lông roi (Pestalotiopsis sp.) sớm 28 ngày 3.2 Đặc điểm sinh học số lồi nấm có khả tạo trầm TẠP CHÍ KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ LÂM NGHIỆP SỐ - 2021 Quản lý Tài nguyên rừng & Môi trường 3.2.1 Nấm Bào tử lông roi (Pestalotiopsis sp.) Nấm Bào tử lông roi (Pestalotiopsis sp.) thuộc họ nấm Đĩa đen (Melanconidaceae), nấm Đĩa đen (Melanconiales), lớp nấm Bào tử xoang (Coelomycetes), ngành phụ nấm Bất toàn (Deuteromycotina), ngành nấm Thật (Eumycota), giới nấm (Fungi) (Thiệu Lực Bình, 1983) Đặc điểm hình thái: Đặc điểm sinh trưởng khuẩn lạc màu trắng, tạo thành hình bơng hoa với đường trịn đồng tâm, bào tử nấm màu đen mọc môi trường PDA Trên môi trường PDA nuôi cấy, thể sợi nấm có màu trắng, tạo thành hình trịn đồng tâm, bào tử phân bố rải rác hình thành điểm màu đen nhỏ (Hình 2) Bào tử phân sinh hình thoi, thẳng uốn cong, có vách ngăn hình thành tế bào, tế bào màu đen, tế bào hai đầu bào tử không màu Đỉnh thường có - lơng roi (Hình 3, hình 4) Hình Khuẩn lạc nấm Bào tử lông roi (Pestalotiopsis sp.) phát triển môi trường PDA Hình Chi nấm Bào tử lơng roi (Pestalotiopsis) (1) Bào tử; (2) Đĩa bào tử (Theo Barnett et al., 1980) 3.2.2 Nấm Bào tử lưỡi liềm (Fusarium sp.) Nấm Bào tử lưỡi liềm (Fusarium sp.) thuộc họ nấm Bào tử đệm (Tuberculariaceae), nấm Bào tử đệm (Tuberculariales), lớp nấm Bào sợi (Hyphomycetes), ngành phụ nấm Bất toàn (Deuteromycotina), ngành nấm Thật (Eumycota), giới nấm (Fungi) Hình Nấm Bào tử lơng roi (Pestalotiopsis sp.) Đặc điểm hình thái: Bào tử nấm có loại: (1) Bào tử phân sinh nhỏ, hình trứng hình viên trụ ngắn, không màu, đơn bào bào tử nối liền Bào tử đơn bào có - vách ngăn; (2) Bào tử phân sinh lớn, bào tử uốn cong, hình lưỡi liềm, màu trắng, có nhiều vách ngăn (thường từ - vách ngăn), đầu bào tử TẠP CHÍ KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ LÂM NGHIỆP SỐ - 2021 153 Quản lý Tài nguyên rừng & Môi trường đột ngột co thắt lại Bào tử sinh từ cuống bào tử Một vài bào tử lớn tách rời khơng gắn cuống bào tử (Hình 5) (Hạ Vận Xuân, 2008) Bào tử phân sinh lúc nhỏ mọc đỉnh cuống bào tử, bào tử hình trứng, hình viên trụ ngăn, đơn bào Bào tử hình thành trực tiếp sợi nấm thành đĩa bào tử phân sinh, thành chùm Bào tử phân sinh lớn hình lưỡi liềm, uốn cong, thường có - vách ngăn (1 - vách ngăn) Trên môi trường PDA, đĩa bào tử phân sinh có màu vàng cam (Hình 6, hình 7) Sợi nấm có vách ngăn Trên môi trường PDA, sợi nấm phát triển nhanh, tập trung với mật độ dày đặc, có màu trắng giống dạng sợi bơng, sau thời gian sản sinh sắc tố màu vàng Hình Chi nấm Bào tử lưỡi liềm (Fusarium) (1) Bào tử cuống bào tử không phân nhánh; (2) Bào tử cuống bào tử phát triển; (3) Phân chia cuống bào tử; (4) Bào tử lớn, bào tử nhỏ (Theo Barnett et al.,1980) Hình Sợi nấm bào tử nấm lưỡi liềm (Fusarium sp.) phát triển môi trường PDA a b c Hình Nấm Bào tử lưỡi liềm (Fusarium sp.) (a Bào tử nhỏ; b Bào tử lớn; c Bào tử cuống bào tử) 3.2.3 Nấm mốc (Mucor sp.) Nấm mốc (Mucor sp.) thuộc họ nấm mốc (Mucoraceae), nấm Mốc (Mucorales), lớp nấm Tiếp hợp (Zygomycetes), ngành phụ nấm Tiếp hợp (Zygomycotina), ngành nấm Thật (Eumycota), giới nấm (Fungi) (Hạ Vận Xuân, 2008) Đặc điểm hình thái: Trên mơi trường PDA, 154 khuẩn lạc có màu trắng xám, xanh đen (Hình 8) Nấm Mốc chi họ nấm Mốc, họ có khoảng 20 chi 122 lồi Thể sợi nấm phát triển dài, khơng có vách ngăn rễ giả Túi bào tử hình thành đỉnh sợi nấm (Bào nang) Bào tử đơn bào, khơng màu, có dạng hình trịn (Hình 9) TẠP CHÍ KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ LÂM NGHIỆP SỐ - 2021 Quản lý Tài nguyên rừng & Môi trường Hình Nấm Mốc phát triển mơi trường PDA Hình Sợi nấm, bào tử bào nang nấm Mốc 3.2.4 Nấm mốc xanh (Penicillium sp.) Nấm mốc xanh (Penicillium sp.) thuộc họ nấm Bào sợi (Hyphomycetaceae), nấm Bào sợi (Hyphomycetales), lớp nấm Bào sợi (Hyphomycetes), ngành phụ nấm Bất toàn (Deuteromycotina), ngành nấm Thật (Eumycota), giới nấm (Fungi) (Lục Gia Vân, 2000) a Hình 10 Chi nấm mốc xanh (Penicillium) (1) Các loại cuống bào tử phân sinh; (2) Bào tử cuống bào tử phân sinh (Theo Barnett Hunter, 1980) Khuẩn lạc phát triển mơi trường PDA thường có dạng vịng, mốc xanh Sợi nấm khơng có túi bào tử Bào tử phân sinh hình cầu, đơn bào, có màu xanh lục Bào tử thường nối liền (Hình 10, hình 11) Những lồi nấm thuộc chi phần lớn nấm ký sinh gây mục b Hình 11 Nấm Mốc xanh (Pinicillium sp.) (a Khuẩn lạc nấm Mốc xanh; b Bào tử nấm Mốc xanh) TẠP CHÍ KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ LÂM NGHIỆP SỐ - 2021 155 Quản lý Tài nguyên rừng & Môi trường 3.2.5 Nấm mốc khúc (Apergillus sp.) Nấm mốc khúc (Apergillus sp.) thuộc họ nấm Bào tử sẫm (Moniliaceae), nấm Bào sợi (Hyphomycetales), lớp nấm Bào sợi (Hyphomycetes), ngành phụ nấm Bất toàn (Deuteromycotina), ngành nấm Thật (Eumycota), giới nấm (Fungi) (Thiệu Lực Bình, 1983) Đặc điểm hình thái: Sợi nấm phân nhánh Sợi nấm hình thành cuống bào tử phân sinh, không màu, không vách ngăn Bào tử phân sinh hình trịn, đơn bào, khơng màu Sợi nấm khơng màu, phân nhánh, có vách ngăn, cuống bào tử hình chai Bào tử hình cầu, màu đen Khuẩn lạc lúc đầu trắng, sợi nấm xốp màu trắng xám, sinh trưởng nhanh (Hình 12, hình 13) Hình 12 Chi nấm mốc khúc (Aspergillus) (1) Bào tử cuống bào tử; (2) Chuỗi bào tử phân sinh; (3) Bào tử phân sinh đính cuống bào tử (Theo Bernett Hunter, 1980) a b Hình 13 Nấm Mốc khúc (Apergillus sp.) khu vực nghiên cứu (a Khuẩn lạc; b Bào tử sợi nấm) KẾT LUẬN Trong 20 mẫu gỗ trầm hương thu thập huyện Hương Khê, tỉnh Hà Tĩnh phân lập, xác định chủng vi nấm nấm Bào tử lông roi (Pestalotiopsis sp.), nấm Bào tử lưỡi liềm (Fusarium sp.), nấm Mốc (Mucor 156 sp.), nấm Mốc xanh (Penicillium sp.) nấm Mốc khúc (Apergillus sp.) Các chủng nấm có thời gian hình thành bào tử khác Thời gian xuất bào tử nấm Mốc xanh (Penicillium sp.) sớm (19 ngày), nấm Mốc (21 ngày), nấm Bào tử TẠP CHÍ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ LÂM NGHIỆP SỐ - 2021 ... sinh học có nhiều triển vọng tạo trầm hương rừng trồng Dó bầu Trong báo thông báo kết nghiên cứu thành phần lồi nấm có gỗ trầm hương Dó bầu huyện Hương Khê, tỉnh Hà Tĩnh làm sở khoa học để sản xuất... 13 Nấm Mốc khúc (Apergillus sp.) khu vực nghiên cứu (a Khuẩn lạc; b Bào tử sợi nấm) KẾT LUẬN Trong 20 mẫu gỗ trầm hương thu thập huyện Hương Khê, tỉnh Hà Tĩnh phân lập, xác định chủng vi nấm nấm... Hương Khê, huyện Hương Khê, tỉnh Hà Tĩnh 2.2 Phương pháp nghiên cứu Phân lập nấm từ mẫu gỗ trầm hương tự nhiên Dó bầu khu vực nghiên cứu theo nguyên lý Koch’s Mô tả đặc điểm sinh học nấm phân lập: