Purification of p24 protein expressed in bacillus subtilis and evaluation of its immunogenicity in mice

11 0 0
Purification of p24 protein expressed in bacillus subtilis and evaluation of its immunogenicity in mice

Đang tải... (xem toàn văn)

Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống

Thông tin tài liệu

Untitled TAÏP CHÍ PHAÙT TRIEÅN KH&CN, TAÄP 20, SOÁ T1 2017 Trang 69 Thu nhận protein p24 được biểu hiện trong Bacillus subtilis và đánh giá khả năng gây đáp ứng miễn dịch trên chuột  Trƣơng Thị Tinh[.]

TẠP CHÍ PHÁT TRIỂN KH&CN, TẬP 20, SỐ T1 - 2017 Thu nhận protein p24 biểu Bacillus subtilis đánh giá khả gây đáp ứng miễn dịch chuột  Trƣơng Thị Tinh Tƣơm  Phan Thị Phƣợng Trang  Nguyễn Đức Hoàng Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, ĐHQG-HCM (Nhận ngày 18 tháng 10 năm 2016, đăng ngày 10 tháng 04 năm 2017) TÓM TẮT p24 protein cấu thành capsid Human immunodeficiency virus (HIV) Trong trình xâm nhiễm, HIV đưa capsid vào tế bào chủ nhằm thực số vai trò quan trọng giai đoạn sống virus tế bào chủ Do đó, protein p24 có tiềm ứng dụng phát triển vaccine ngăn ngừa HIV Với định hướng sử dụng p24 làm vaccine, nghiên cứu tiến hành tạo chủng Bacillus subtilis có khả biểu protein p24 thu nhận protein Đây chủng vi sinh vật an tồn, khơng gây độc cho người động vật, có hệ thống biểu cho phép biểu vượt mức protein tái tổ hợp lên đến 10-30% so với protein tổng số Plasmid tái tổ hợp pHT1537 mang gene gagp24 mã hóa cho protein p24 dung hợp với LysSN-6His dịng hóa thành cơng, cho phép biểu protein p24 B subtilis cảm ứng IPTG Sự diện protein p24 dung hợp kiểm tra phương pháp SDS-PAGE Protein thu nhận cột lực chứa Ni 2+ Đánh giá khả tạo kháng thể kháng protein p24 chuột thử nghiệm ELISA Western blot Từ khóa: HIV, p24, gagp24, protein tái tổ hợp, Bacillus subtilis MỞ ĐẦU HIV gây bùng nổ đại dịch HIV/AIDS năm gần kể từ trường hợp nhiễm phát vào năm 1983, để lại hậu nặng nề như: tác động nghiêm trọng đến kinh tế, trị gia tăng nghèo đói, bất ổn xã hội giảm chất lượng dân số [9] Hiện có nhiều nghiên cứu tiến hành nhằm tìm liệu pháp điều trị HIV như: nghiên cứu gene mã hóa protease virus để ngăn chặn xâm nhiễm từ tế bào qua tế bào khác hay biểu protein P24 để sản xuất kit phát sớm giúp theo dõi trình điều trị HIV [1, 3, 5, 6] Song song với nghiên cứu điều trị sản xuất vaccine để phòng ngừa hạn chế lây nhiễm Trong đó, để ngăn chặn khả lây lan HIV, protein p24 quan tâm nhiều p24 chứng minh kháng nguyên đặc hiệu có tính gây đáp ứng miễn dịch cao thành phần capsid giúp bảo vệ nucleic acid HIV tế bào chủ [4] Gần đây, nhóm tác giả de Souza (năm 2014) sử dụng protein p24 làm kháng nguyên để đánh giá khả tăng đáp ứng miễn dịch chuột sử dụng bào tử B subtilis làm tá dược vaccine [10] Với định hướng nghiên cứu sử dụng vi sinh vật sản xuất kháng nguyên, việc biểu protein p24 tái tổ hợp hệ thống E coli gặp nhiều hạn chế chủng chủ có chứa độc tố dễ tạo thể vùi Chính vậy, cần phải tạo chủng an tồn có khả biểu protein dạng hòa tan Vi Trang 69 Science & Technology Development, Vol 20, No.T1- 2017 khuẩn B subtilis tế bào chủ tiềm với nhiều ưu điểm: (i) vi khuẩn an tồn, khơng gây bệnh, khơng sinh độc tố, (ii) có hệ thống biểu thương mại (iii) protein tái tổ hợp biểu lên đến 10–30 % protein tổng số [2, 8, 8] Nghiên cứu sử dụng vector pHT1055B có chứa promoter mạnh Pgrac100 giúp biểu vượt mức protein p24 B subtilis điều hòa cảm ứng IPTG VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP Vật liệu Các plasmid cung cấp Trung tâm Khoa học Công nghệ Sinh học, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia Thành phố Hồ Chí Minh Trong đó, plasmid pHT1531 mang gene lysSN6his-gagp24 mã hóa protein p24 dung hợp với LysSN-6His sử dụng làm khuôn cho phản ứng PCR plasmid pHT1055B có mang promoter mạnh Pgrac100 vector thoi cho phép tạo dòng E coli biểu protein p24 dung hợp B subtilis Chủng E coli OmniMAX (F′ {proAB+ lacIq lacZΔM15 Tn10(TetR) Δ(ccdAB)} mcrA Δ(mrrhsdRMS-mcrBC) φ80(lacZ)ΔM15 Δ(lacZYA-argF) U169 endA1 recA1 supE44 thi-1 gyrA96 relA1 tonA panD) dùng để dịng hóa Chủng B subtilis 1012 (leuA8 metB5 trpC2 hsdRM1) dùng để biểu gene Các mồi oligonucleotide sử dụng phản ứng PCR thu gene phản ứng PCR khuẩn lạc giải trình tự thiết kế có trình tự Bảng tổng hợp cơng ty Macrogen (Hàn Quốc) Bảng Trình tự mồi sử dụng STT Tên mồi Trình tự mồi (5‟-3‟) Mục đích ON255 GGCCATGGTCTCAGATCTATGAGTCAAGA AGAACATAACCATGAAGAATTGAATGATC Nhân gene ON988 TAGGCGGGCTGCCCCGGGTACCGATATCT TACGCTAATACAC Nhân ON388 ATGCATCCATGGATCCCTGGAAGTACAGG TTCTCACCGC PCR khuẩn lạc ON925 GAATTAGCTTGGTACCAAAGGAGGTAAGG ATCACTAG PCR khuẩn lạc, giải trình tự ON314 TGTTTCAACCATTTGTTCCAGGT Giải trình tự Vị trí bắt cặp mồi lên khuôn thể Hình Trang 70 gene TẠP CHÍ PHÁT TRIỂN KH&CN, TẬP 20, SỐ T1 - 2017 Hình Sơ đồ vị trí mồi bắt cặp lên khn Enzyme Deepvent DNA polymerase Taq DNA polymerase cung cấp công ty New England Biolabs (Mỹ) Enzyme nối T4 DNA ligase cung cấp công ty Fermentas (Đức) Các enzyme cắt giới hạn bao gồm BamHI, SmaI, Eco31I EcoRV cung cấp công ty Fermentas (Đức) Protein p24 chuẩn cung cấp GS Luis Ferreira, Trường Đại học São Paulo, Brazil Chuột Mus musculus có trọng lượng từ 18–20 g/con mua từ Viện Pasteur Thành phố Hồ Chí Minh Phƣơng pháp Tạo dịng vector pHT1537 Thu nhận gene lysSN-6his-gagp24 phản ứng PCR với khuôn plasmid pHT1531 cặp mồi đặc hiệu ON255 ON988 Thành phần phản ứng PCR: 1X Deepvent buffer, 200 µM dNTP, 0,25 pmol mồi; 50 ng pHT1531; U Deepvent DNA polymerase Phản ứng thực 30 chu kỳ gồm bước 95 oC/30s, 55 oC/30s, 72 oC/45s Tinh sản phẩm PCR kit QIAquick PCR purification (Qiagen) Plasmid pHT1055B cắt mở vòng với hai enzyme cắt giới hạn BamHI SmaI, sau nối với gene gagp24 xử lý với Eco31I EcoRV T4 DNA ligase để tạo plasmid tái tổ hợp pHT1537 Sản phẩm nối biến nạp vào tế bào E coli OmniMAX khả nạp Sàng lọc dòng mang plasmid tái tổ hợp phản ứng PCR khuẩn lạc với cặp mồi ON925 ON388 (Sơ đồ mồi thể Hình 1) Thành phần phản ứng PCR khuẩn lạc gồm: X Taq buffer; 200 µM dNTP; 0,25 pmol mồi; U Taq DNA polymerase Phản ứng thực 30 chu kỳ gồm bước 95 oC/30s, 55 oC/30s, 72 oC/45s Khuẩn lạc cho kết dương tính với PCR khuẩn lạc nuôi cấy tách chiết plasmid kit QIAprep Spin Miniprep kit (Qiagen) Đoạn gene chèn plasmid giải trình tự cơng ty Macrogen (Hàn Quốc) Biểu protein p24 B subtilis Biến nạp plasmid tái tổ hợp pHT1537 vào tế bào B subtilis 1012 theo phương pháp biến nạp tự nhiên Các khuẩn lạc mọc mơi trường LB-Agar có bổ sung kháng sinh chloramphenicol (Cm) với nồng độ cuối 10 µg/mL ni cấy hoạt hóa qua đêm 37 o C môi trường LB-Cm cảm ứng biểu IPTG với nồng độ 0,1 mM thời điểm OD600 đạt 0,8 Thời gian thu mẫu sau cảm ứng Kiểm tra biểu protein thông qua phương pháp SDS-PAGE, đối chứng âm chủng B subtilis mang plasmid pHT01 Kiểm tra biểu tan protein p24 Hòa sinh khối tế bào vi khuẩn dung dịch đệm (phosphate 30 mM, imidazole mM glycerol 10 %) Ly giải tế bào sóng siêu âm bồn đá Ly tâm nhẹ 2000 g phút để loại tế bào chưa vỡ Dịch protein tổng ly tâm 13.000 g phút để phân tách thành phân đoạn tủa phân đoạn tan Sử dụng phương pháp SDS-PAGE để Trang 71 Science & Technology Development, Vol 20, No.T1- 2017 kiểm tra tính tan protein mục tiêu phân đoạn Tinh chế protein p24 Tiến hành nuôi cấy vi khuẩn B subtilis mang plasmid pHT1537 lít mơi trường Huyền phù sinh khối với thể tích (so với trọng lượng sinh khối) dung dịch đệm (phosphate 30 mM pH8, imidazole mM, glycerol 10%, mg/mL DnaseI, mM PMSF mg/mL lysozyme) Phá tế bào sóng siêu âm trong bồn đá với cường độ sóng (Amplitude) 70 30 chu kỳ, chu kì gồm 10 giây phá 20 giây nghỉ Ly tâm 13.000 g 30 phút 4ºC, dịch thu cho chảy qua cột Histrap HP 1mL (GE Healthcare), rửa cột dung dịch rửa (phosphate 30 mM, imidazole 10 mM glycerol 10%) với thể tích gấp 20 lần thể tích cột Dung ly protein mục tiêu dung dịch dung ly có thành phần giống dung dịch rửa với nồng độ imidazole theo gradient từ 20150 mM Gây đáp ứng miễn dịch kháng protein p24 chuột đánh giá kháng thể tạo ELISA Trộn protein p24 dung hợp sau tinh chế với tá chất aluminum theo tỉ lệ 1:1 tiêm với nồng độ 50 µg protein/con/lần tiêm vào da chuột Mus musculus có trọng lượng từ 18-20 g/con Mỗi lơ thí nghiệm gồm tiêm tá chất aluminum tiêm protein p24, thực lần tiêm: lần tiêm khởi đầu vào ngày thứ lần tiêm nhắc, lần cách tuần Huyết chuột thu nhận trước tiêm gây đáp ứng miễn dịch lần đầu sau lần tiêm nhắc thứ Đánh giá hiệu gây đáp ứng miễn dịch phương pháp ELISA gián tiếp: gắn protein p24 dung hợp lên giếng ELISA với nồng độ µg/mL, rửa ủ với kháng thể sơ cấp huyết chuột thu được, kháng thể thứ cấp anti IgG mouse có gắn enzyme horseradish Trang 72 peroxidase Sử dụng chất TMB (-3,3‟,5,5‟Tetramethylbenzidine) để tạo màu, sau dừng phản ứng HCl N Đo màu máy đọc đĩa bước sóng 450 nm Kiểm tra tính đặc hiệu kháng thể kháng protein p24 Western blot Do protein kháng nguyên dạng dung hợp P24 với LysSN nên kháng thể tạo cần kiểm chứng khả gây đáp ứng miễn dịch cho p24 hay LysSN Phương pháp Western blot thực với việc sử dụng protein p24 chuẩn cung cấp GS Luis Ferreira, Trường Đại học São Paulo, Brazil làm mẫu dương có nồng độ 6µg/µL Các mẫu đối chứng âm gồm có tế bào B subtilis mang plasmid pHT01 (không mang gene lysSN-6his-gagp24) pHT364b (mang gene lysSN-6his) Kháng thể sơ cấp huyết chuột tiêm protein LysSN-6HisP24 Kháng thể thứ cấp anti IgG Mouse có gắn enzyme horseradish peroxidase, sử dụng chất TMB KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Kết tạo dịng vector pHT1537 Gene lysSN-6his-gagp24 thu nhận thơng qua phản ứng PCR, có kích thước 1255 bp Gene gắn chèn vào plasmid pHT1055B vị trí cắt BamHI SmaI tạo plasmid tái tổ hợp pHT1537 biến nạp vào E coli OmniMAX khả nạp Sàng lọc dòng mang plasmid tái tổ hợp kháng sinh ampicillin (Amp) PCR khuẩn lạc với cặp mồi đặc hiệu ON388 bắt gene lysSN-6hisgagp24 ON925 bắt plasmid gốc Kết điện di sản phẩm PCR khuẩn lạc Hình cho thấy có khuẩn lạc 5, cho vạch DNA dương tính với kích thước khoảng 667 bp tương ứng với kích thước dự đốn lý thuyết TẠP CHÍ PHÁT TRIỂN KH&CN, TẬP 20, SỐ T1 - 2017 Hình Kết điện di kiểm tra sản phẩm PCR khuẩn lạc gel agarose 1% M: thang chuẩn; 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8: sản phẩm PCR khuẩn lạc từ khuẩn lạc 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, Chọn khuẩn lạc để nuôi cấy, tách chiết plasmid gửi giải trình tự Kết giải trình tự cho thấy có tương đồng 100 % trình tự giải trình tự lý thuyết Như tạo dịng thành cơng plasmid tái tổ hợp pHT1537 Kết kiểm tra biểu protein p24 B subtilis Plasmid pHT1537 mang gene gagp24 dung hợp với gene lysSN nhằm để tăng cường biểu protein mục tiêu B subtilis Plasmid biến nạp vào vi khuẩn B subtilis 1012 Kiểm tra cảm ứng biểu protein tái tổ hợp phương pháp SDS-PAGE Kết điện di gel SDSPAGE cho thấy so với chủng B subtilis 1012 có mang plasmid pHT1537 khơng cảm ứng IPTG (Hình 3, giếng pHT1537 +, -) chứng âm chủng B subtilis 1012 mang plasmid pHT01 không mang gene lysSN-6his-gagp24 chủng B subtilis 1012 mang plasmid pHT1537 sau cảm ứng xuất vạch protein mục tiêu có kích thước khoảng 44,5 kDa (Hình 3, giếng pHT1537 +, +) Kết cho thấy protein p24 dung hợp cảm ứng biểu IPTG có kích thước khoảng 44,5 kDa Trang 73 Science & Technology Development, Vol 20, No.T1- 2017 - 44,5 kDa1 Hình Kết kiểm tra biểu protein P24 B subtilis SDS-PAGE M: thang chuẩn; pHT01 (-, -): chủng B subtilis 1012/pHT01 không chứa gene lysSN-6his-gagp24, không cảm ứng với IPTG; pHT01 (-, +): chủng B subtilis 1012/pHT01 không chứa gene lysSN-6his-gagp24, cảm ứng với 0,1 mM IPTG 37○C; pHT1537 (+, -): chủng B subtilis 1012/pHT1537 có mang gene lysSN-6his-gagp24 không cảm ứng với IPTG; pHT1537 (+, +): chủng B subtilis 1012/pHT1537 có mang gene lysSN-6hisgagp24 cảm ứng với 0,1 mM IPTG 37 ○C - 44,5 kDa Hình Kết kiểm tra tính tan protein p24 B subtilis M: thang chuẩn, tổng: protein tổng số có tế bào B subtilis 1012/pHT1537, tủa: protein phân đoạn tủa, tan: protein phân đoạn tan Trang 74 TAÏP CHÍ PHÁT TRIỂN KH&CN, TẬP 20, SỐ T1 - 2017 Kết kiểm tra biểu tan protein p24 Kết điện di phân đoạn protein p24 dung hợp Hình cho thấy vạch protein tái tổ hợp có kích thước 44,5 kDa diện pha: tổng, tủa tan, phần lớn protein mục tiêu nằm pha tan Vậy, protein p24 biểu tế bào B subtilis dạng hịa tan chiếm tỉ lệ cao, tinh chế protein tái tổ hợp từ pha tan theo phương pháp khơng biến tính Kết tinh chế protein p24 Do đa phần protein p24 biểu B subtilis dạng tan nên sử dụng phương pháp tinh chế khơng biến tính để thu nhận protein Kết sau tinh chế kiểm tra SDS-PAGE Kết phân tích Hình cho thấy dịch protein sau cho qua cột gắn Ni2+, vạch protein mục tiêu giảm nhiều so với trước qua cột Điều chứng tỏ protein p24 dung hợp gắn lên cột Phân đoạn sau dung ly với nồng độ imidazole 50 mM, thu vạch protein mục tiêu kích thước tương ứng Như vậy, thu nhận thành công protein p24 dung hợp với LysSN-6His có độ tinh cao Protein sử dụng làm kháng nguyên để đánh giá khả gây đáp ứng miễn dịch - 44,5 kDa Hình Kết tinh chế protein p24 B subtilis M: thang chuẩn; trước cột: protein trước qua cột; sau cột: protein sau qua cột; dung ly: protein sau dung ly khỏi cột dung dịch đệm chứa 50 mM imidazole Kết gây đáp ứng miễn dịch kháng protein p24 chuột Protein p24 dung hợp tiêm vào chuột Mus musculus để đánh giá khả gây đáp ứng miễn dịch, kết ELISA gián tiếp (Hình 6) kháng huyết chuột sau lần tiêm nhắc với protein p24 cho thấy giá trị OD450 nm chuột sau tiêm cao nhiều so với chuột tiêm tá chất chuột trước tiêm protein p24 độ pha loãng kháng huyết chuột 10.000, 30.000 50.000 lần Giá trị OD450 nm giảm dần theo độ pha loãng kháng huyết Điều chứng tỏ huyết chuột thí nghiệm có gia tăng cách đáng kể kháng thể đặc hiệu kháng protein p24 dung hợp Như vậy, trình gây đáp ứng miễn dịch chủ động chuột với kháng nguyên p24 hiệu Trang 75 Science & Technology Development, Vol 20, No.T1- 2017 Hình Kết ELISA đánh giá hiệu gây đáp ứng miễn dịch kháng protein p24 chuột Kết kiểm tra kháng thể kháng protein p24 phƣơng pháp Western blot Kết đánh giá khả gây đáp ứng miễn dịch chuột với protein p24 ELISA cho kết tốt Tuy nhiên, chưa xác định xác kháng thể chuột tạo đặc hiệu cho vùng protein p24 hay protein LysSN-6His protein p24 dung hợp Phương pháp Western blot nhằm xác nhận lại xác kháng thể chuột tạo kháng protein p24 Kết Hình cho thấy xuất vạch tín hiệu vị trí có kích thước khoảng 25 kDa giếng chứa protein p24 chuẩn, so với chứng âm chủng B Trang 76 subtilis 1012 có mang plasmid pHT01 không mang gene lysSN-6his-gagp24 plasmid pHT364b chứa gene lysSN-6his khơng xuất vạch lai Như kháng thể thu nhận từ chuột bắt đặc hiệu với protein P24 chuẩn mà không bắt với protein LysSN6His LysSN-6His protein có nguồn gốc từ Bacillus, không gây độc với người động vật, không gây đáp ứng miễn dịch người chuột Trong p24 kháng ngun đặc hiệu có tính gây đáp ứng miễn dịch cao nên chuột ưu tiên tạo kháng thể kháng lại kháng ngun lạ TẠP CHÍ PHÁT TRIỂN KH&CN, TẬP 20, SỐ T1 - 2017 Hình Kết Western blot xác nhận kháng thể chuột sinh đặc hiệu cho protein P24 M: thang chuẩn, pHT01: chủng B subtilis 1012 mang plasmid pHT01 không mang gene lysSN-6his-gagp24, pHT364b: chủng B subtilis 1012 mang plasmid pHT364b chứa gene lysSN-6his, P24 chuẩn: protein p24 chuẩn có nồng độ 6µg/µl KẾT LUẬN Chúng tơi tạo dịng thành công plasmid pHT1537 mang gene lysSN-6his-gagp24 cho phép biểu protein P24 dung hợp chủng vi khuẩn B subtilis 1012 Plasmid cho phép biểu protein p24 dung hợp cảm ứng với IPTG Thu nhận thành công protein p24 dung hợp với LysSN-6His tạo kháng thể chuột đặc hiệu cho protein kháng nguyên Kết làm tiền đề cho định hướng nghiên cứu sản xuất vaccine cho virus HIV Lời cảm ơn: Chúng chân thành cảm ơn giáo sư Luis Ferreira, Trường Đại Học São Paulo, Brazil cung cấp protein p24 chuẩn Nghiên cứu tài trợ Quỹ Phát Triển Khoa Học Và Công Nghệ Quốc Gia (Nafosted) đề tài mã số 106-nn.022015.24 đề tài cấp trường năm 2016 với mã số t2016-27 Trang 77 Science & Technology Development, Vol 20, No.T1- 2017 Purification of p24 protein expressed in Bacillus subtilis and evaluation of its immunogenicity in mice  Truong Thi Tinh Tuom  Phan Thi PhuongTrang  Nguyen Duc Hoang University of Science, VNU-HCM ABSTRACT p24 protein is a component of the HIV particle Plasmid pHT1537 was cloned successfully, capsid It plays an essential role in HIV to infect into containing lysSN-6his-gagp24 gene to encode p24 the host cell and in the cycle life of virus Therefore, protein fused with LysSN protein and to allow the this protein can be used in the orientative study “to expression of p24 protein in B subtilis by IPTG create and produce HIV’s vaccine” This study inducer The target protein in the cell was cheked by created the new Bacillus subtilis strain which SDS-PAGE The p24 fused protein was parified from expressed p24 protein B subtilis a safety and nonHis Trap column which contained Ni2+ Evaluation of toxic bacteria strain for humans and animals, has the ability to produce antibody against p24 protein in system expression to allow over expression mice by ELISA and Western blot was caried out recombinant protein up to 10-30 % of total proteins Keywords: Bacillus subtilis, protein P24, pHT system, gene gagp2, HIV, LysSN TÀI LIỆU THAM KHảO [1] P.J Bugelski, J.M Kaplan, T.K Hart, J Miller, , J.T Laydon, J.C Lee, G.B Dreyer, R Kirsh, Effect of a human immunodeficiency virus protease inhibitor on human monocyte function, AIDS research and human retroviruses, 8(12), 1951–1958 (1992) [2] C.R Harwood, Bacillus subtilis and its relatives: molecular biological and industrial workhorses, Trends in Biotechnology, 10, 247–256 (1992) [3] W.J Lech, G Wang, Y.L Yang, Y Chee, K Dorman, D McCrae, L.C Lazzeroni, J.W Erickson, J.S Sinsheimer, A.H Kaplan, In vivo sequence diversity of the protease of human immunodeficiency virus type 1: Presence of protease inhibitor-resistant variants in untreated subjects, Journal of Virology, 70(3), 2038–2043 (1996) Trang 78 [4] T.Y Li, N.Y Jin, H.W.Wang, Z.R Guo, , H.H Fang, R.G An, Z Yin, Expression and characterization of HIV-1 Gag p17-p24 protein”, Sheng Wu Gong Cheng Xue Bao = Chinese Journal of Biotechnology, 16, 1, 65–68 (2000) [5] B McRae, J.A Lange, M.S Ascher, F de Wolf, , H.W Sheppard, J Goudsmit, J.P Allain, , Immune response to HIV p24 core protein during the early phases of human immunodeficiency virus infection, AIDS Research and Human Retroviruses, 7, 8, 637–643(1991) [6] M Nijhuis, et al., A novel substrate-based HIV-1 protease inhibitor drug resistance mechanism, PLoS medicine, 4, 1, e36 (2007) [7] T.T.P Phan, H.D.Nguyen, W Schumann, Novel plasmid-based expression vectors for intra- and extracellular production of recombinant proteins TẠP CHÍ PHÁT TRIỂN KH&CN, TẬP 20, SỐ T1 - 2017 in Bacillus subtilis, Protein Expression and Purification, 46, 2, 189–195 (2006) [8] M Schallmey, A Singh, O.P Ward, Developments in the use of Bacillus species for industrial production, Canadian Journal of Microbiology, 50,1, 1–17 (2004) [9] P.M Sharp, B.H Hahn, Origins of HIV and the AIDS pandemic, Cold Spring Harbor Perspectives in Medicine, 1(1), a006841 (2011) [10] R.D de Souza, M.T Batista, W.B Luiz, , R.C.M Cavalcante, J.H Amorim, R.S.P Bizerra, E.G Martins, L.C de S Ferreira, Bacillus subtilis spores as vaccine adjuvants: further insights into the mechanisms of action, PloS One, 9(1), e87454 (2014) Trang 79 ... 2017 Purification of p24 protein expressed in Bacillus subtilis and evaluation of its immunogenicity in mice  Truong Thi Tinh Tuom  Phan Thi PhuongTrang  Nguyen Duc Hoang University of Science,... host cell and in the cycle life of virus Therefore, protein fused with LysSN protein and to allow the this protein can be used in the orientative study “to expression of p24 protein in B subtilis. .. expressed p24 protein B subtilis a safety and nonHis Trap column which contained Ni2+ Evaluation of toxic bacteria strain for humans and animals, has the ability to produce antibody against p24 protein

Ngày đăng: 19/02/2023, 21:41

Tài liệu cùng người dùng

Tài liệu liên quan