Bộ kit phát hiện nhanh vi khuẩn e coli

BỘ KIT PHÁT HIỆN NHANH VI KHUẨN E.COLI Sinh viên thực MSSV Nguyễn Quang Anh 2018039 1.1 SƠ LƯỢC VỀ VI KHUẨN E.COLI • Escherichia coli Theeodore Echerich(1857-1911) phát lần đầu năm 1885 • E.coli thành viên hệ vi khuẩn bình thường nguyên nhiều bệnh nhiễm trùng • E.coli sử dụng nhiều cơng nghệ sinh học • Là vi khuẩn nguyên cứu sâu quan tâm, nghiên cứu 1.2 ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC • trực khuẩn Gram âm • kích thước 2-5*0,5(*10^6)m,hầu hết có lơng có khả di động • tính chất nuôi cấy: dễ phát triển nhiệt độ từ 5-40độ C môi trường nuôi cấy thông thường nghèo dinh dưỡng,hiếu hay kị khí tùy ý • có khả lên men nhiều loại đường có sinh • Kháng nguyên: Kháng nguyên O,K,H • Phát triển nhanh, thời gian hệ khoảng từ 20-30 phút 1.3 KHẢ NĂNG GÂY BỆNH Là vi khuẩn đứng đầu gây tiêu chảy,viêm đường tiết niệu, viêm đường mật… Đứng đầu nguyên gây nhiễm khuẩn huyết Là nguyên thường gặp viêm màng não, viêm phổi trẻ sinh 1.4 PHÂN LOẠI Dựa vào vị trí gây bệnh E.coli phân thành hai loại: GÂY BỆNH NGỒI ĐƯỜNG GÂY BỆNH ĐƯỜNG RUỘT RUỘT • EPEC: E.coli gây bệnh đường ruột • MAEC: E.coli gây viêm màng não • ETEC: E.coli sinh độc tố ruột • UPEC: E.coli gây nhiễm khuẩn đường tiết niệu • EIEC: E.coli xâm nhập ruột • EAEC: E.coli ngưng tập ruột • DAEC: E.coli bám dính phân tán • EHEC: E.coli gây xuất huyết ruột Dựa vào cấu trúc kháng nguyên E.coli chia thành loại huyết Các type huyết kí hiệu tên kháng nguyên O K Ví dụ: O86B7: yếu tố kháng nguyên O số 86; yếu tố kháng nguyên K số loại B 1.4 PHÂN LOẠI BỘ KIT PHÁT HIỆN NHANH CÁC VI SINH VẬT GÂY NGỘ ĐỘC THỰC PHẨM Thuật ngữ kit dùng để việc cung cấp hóa chất, công cụ cần thiết để sử dụng cách nhanh chóng, hiệu cho kĩ thuật sinh học phân tử Có loại KIT chẩn đốn nhanh: Loại dựa phản ứng PCR Loại dựa phản ứng Kháng nguyên - Kháng thể PHƯƠNG PHÁP PCR( POLYMERASE CHAIN REACTION) phản ứng chuỗi polymerase Phươn g pháp PRC Phương pháp chạy PCR phát minh Kary Mullis cho phép khuếch đại chọn lọc chuỗi DNA mục tiêu mà không cần sử dụng sinh vật sống để thực nghiên cứu y - sinh học phục vụ nhiều mục đích khác 3.PHƯƠNG PHÁP PCR PHÁT HIỆN VI KHUẨN E.COLI 3.1.Nguyên tắc  Tổng hợp DNA dựa khuôn mẫu trình tự đích DNA ban đầu, khuếch đại, nhân số lượng thành hàng triệu ban nhờ hoạt động enyme Polymerase cặp mồi đặc hiệu cho đoạn DNA 3.2 Môi trường tăng sinh  Sử dụng môi trường tăng sinh pepton đệm có bổ sung kháng sinh cefiximw (0,0125mg/l) vancomycin (8mg/l) => ức chế vi khuẩn Gram dương vi khuẩn sống hoại sinh khác 3.3 Môi trường phân lập  Sử dụng môi trường: MacConkey (MAC), Sorbitol MacConkey (SMAC), Sorbitol MacConkey có bổ sung cefixime (0.05mg/l) tellurite (2,5mg/l) (CTSMAC)  Khoảng 90% E.coli lên men đường lactose, môi trường MAC, e.coli điển hình khuẩn lạc màu đỏ, mơi trường SMAC CT và-SMAC, e.coli không lên men đường sorbitol => cho khuẩn lạc màu trắng, dòng E.coli lên men sorbitol cho KL màu h  Trên loại môi trường, chọn ngẫu nhiên 6-10 khuẩn lạc rời rạc đại diện cho nhóm hình thái, cấy khuẩn lạc chọn thạch ống nghiêng NA  Làm thí nghiệm sinh hóa IMViC cho khuẩn lạc riêng lẻ thuộc nhóm để xác định E.coli ... • MAEC: E. coli gây vi? ?m màng não • ETEC: E. coli sinh độc tố ruột • UPEC: E. coli gây nhiễm khuẩn đường tiết niệu • EIEC: E. coli xâm nhập ruột • EAEC: E. coli ngưng tập ruột • DAEC: E. coli bám dính...Sinh vi? ?n thực MSSV Nguyễn Quang Anh 2018039 1.1 SƠ LƯỢC VỀ VI KHUẨN E. COLI • Escherichia coli Theeodore Echerich(1857-1911) phát lần đầu năm 1885 • E. coli thành vi? ?n hệ vi khuẩn bình thường... tellurite (2,5mg/l) (CTSMAC)  Khoảng 90% E. coli lên men đường lactose, mơi trường MAC, e. coli điển hình khuẩn lạc màu đỏ, môi trường SMAC CT và-SMAC, e. coli không lên men đường sorbitol => cho khuẩn