Bài giảng thực hành vi sinh vật ứng dụng trong chăn nuôi

Thực hành VSV ứng dụng chăn ni Mục đích: Nắm phương pháp phân lập, nhân giống vi khuẩn, nấm men sử dụng bảo quản, chế biến thức ăn Nắm phương pháp ủ chua thức ăn phương pháp lên men thức ăn với chủng vsv chọn lọc Yêu cầu:  Tham gia đầy đủ thực tập, thiếu  không thi!!!!  Hoàn thành tập thực tập  Tuân thủ nội qui phòng thực tập Bài 1: Sử dụng nấm men chế biến thức ăn gia súc Nội dung: Thí nghiệm lên men với nấm men Sử dụng nấm men để lên men thức ăn tinh bột làm thức ăn cho gia súc I Thí nghiệm lên men với nấm men Mục đích: quan sát trình lên men đường nấm men Vật liệu chuẩn bị: - Nấm men giống: Sử dụng men bánh mì Saccharomyces cerevisiae - Cốc đong 250ml - Bình tam giác 250ml - Đường glucose, rỉ mật đường - Bóng bay - Nước ấm 30-40oC - Thước đo, ống Durham, cân Bình 1: Đường 5g + 200ml nước ấm + 20ml nấm men Bình 2: Đường 10g + 200ml nước ấm + 20ml nấm men Bình 3: Đường 20g + 200ml nước ấm + 20ml nấm men Bình 4: Rỉ mật đường 10g + 200ml nước ấm + 20ml nấm men Cách tiến hành: Cho vào bình tam giác 200ml nước ấm 30-40oC Cho đường nấm men vào, khuấy đến tan hết  Buộc bóng bay vào miệng ống Để vào tủ ấm 35oC Đánh giá kết sau 60 phút  quan sát thay đổi Chuẩn bị thí nghiệm Sau 30 phút Ống (màu đỏ) : Không lên men Ống 2: lên men k sinh khí Ống lên men có sinh CO2 Đánh giá kết quả: Đánh giá tốc độ lên men bình lên men: - Sử dụng thước đo chiều cao cột bọt khí CO2 bình - Sử dụng dây đo đường kính bóng bay  đo lại thước cm - Mô tả biến đổi ống thí nghiệm: Màu sắc, độ đục, sinh hơi, mùi Mơ tả trạng thái bóng bay  Đưa kết luận tốc độ lên men Giải thích chế: - Giải thích q trình lên men - Viết phương trình lên men tổng quát - Sản phẩm trình lên men gì? Yếu tố làm căng bóng bay - Yếu tố biến số thí nghiệm Quan sát kính HV: Lấy giọt dung dịch ống nghiệm, đặt lên lam kính quan sát trực tiếp kính hiển vi, sử dụng vật kính 40x (khơng sử dụng dầu soi) Chỉnh kính hiển vi: Đặt tiêu lên khay kính, xoay vật kính 10x vào trục Giảm đèn đến mức 2Nâng khay kính lên sát vật kính  Chỉnh thấy ảnh  Chuyển vật kính 40xsử dụng ốc vi cấp điều chỉnh độ nét, giảm đèn cho vi trường tối để dễ quan sát  Quan sát tế bào nấm men, tìm tế bào nảy chồi vẽ hình II Sử dụng nấm men lên men thức ăn tinh bột sử dụng chăn nuôi (phương pháp ủ men gia súc) Vật liệu: + Giống: Giống nấm men sử dụng: Saccharomyces sp, Torula sp… Sử dụng ống nuôi cấy nấm men giống Men giống thương mại (Men Vi sinh hoạt tính) + Đường ( rỉ mật đường) + Nước + Tinh bột: Cám gạo bột ngô, bột sắn… + Bình/túi ủ, + Cốc đong, bình tam giác lít, đũa thủy tinh Cách tiến hành a Cách 1: Sử dụng ống nuôi cấy men giống  Bước 1: chuẩn bị “dung dịch men cái”: - Đường 5% + Nước (nước ấm 30-40oC) + ống men giống  khuấy tan, để nhiệt độ 25-30oC/24h Tỉ lệ cấy men giống: 10g-20g men giống/lit môi trường - Cách lấy men giống: Cho vào ống men giống nước cất nước lọc vô trùng  sử dụng đũa thủy tinh đánh nhẹ nhàng bề mặt thạch tế bào nấm men tan hết  đổ vào bình ni cấy  Bước 2: Trộn thức ăn bột với dung dịch men Cho từ từ dung dịch men vào, trộn với bột; bổ sung nước để đảm bảo độ ẩm 55-60% cho vào bình/túi ủ  để nhiệt độ 25-30oC/24h (mùa hè) 48-72h (mùa đông)  Bước 3: Đánh giá: + Quá trình lên men, sinh nhiệt men ủ sờ ấm, khơng dính nhớt + Có mùi rượu nhẹ, lên men tốt có mùi thơm hoa chín, khơng có mùi khó chịu; + TĂ „ mềm” có màu vàng nâu nhẹ (cám) /vàng rơm (ngơ), khơng có mốc b.Cách 2: Sử dụng chế phẩm Men thương mại (Men vi sinh hoạt tính) Bước 1: - Đường 5% + Nước (nước ấm 30-40oC) + men giống  trộn đều, để nhiệt độ 25-30oC/24h - Cụ thể: Trộn bột với men giống, trộn lượng nhỏ sau trộn lượng lớn  Bổ sung nước ấm, trộn đều, đảm bảo độ ẩm 55-60%  cho vào thùng/bình/túi ủ  để nhiệt độ 25-30oC/24h (mùa hè) 48-72h (mùa đông) - Cách kiểm tra độ ẩm nhanh: nắm chặt bột trộn lòng bàn tay sau thả tay ra: Nếu nắm bột rời tơi  TĂ khơ, chưa đủ ẩm; Nếu có nước dính lịng bàn tay nước rỉ kẽ ngón tay  Quá ướt, bổ sung thêm bột; Nếu nắm bột tạo thành khn, khơng dính ướt  đủ ẩm  Bước 2: Đánh giá chất lượng lên men Như cách Phương pháp ủ ẩm Ủ men ướt Sử dụng nấm men ủ vỏ gấc Máy trộn thức an ủ men Bài Xác định số hoạt tính sinh học vi sinh vật  Xác định khả phân giải tinh bột nấm men  Xác định khả sản sinh axit latic vi khuẩn lactic Nguyên vật liệu Chủng giống vsv: - Giống vk Saccharomyces cerevisiae Lactobacillus Môi trường: - Môi trường tinh bột tan Pepton: 5g; Tinh bột tan: 10g Thạch:20g; Nước cất: 1000ml - Môi trường MRS (de Man’s Rogosa and Sharpe):  Peptone 10g Cao thịt 10g  Cao nấm men 5g D-glucose 20g  Tween 80 0.1g K2HPO4 2g  Sodium acetate 5g Triammonium citrate 0.2g  MgSO4.7H2O 0.2g MnSO4.4H2O 0.05g  Nước cất 1000ml  Điều chỉnh pH =6,2 - 6,6; hấp tiệt trùng 121oC/15 - 20 phút Hóa chất: NaOH 0,1N, dd Phenolphatalein Xác định khả phân giải tinh bột  Chuẩn bị môi trường tinh bột tan  Nuôi cấy nấm men Saccharomyces cerevisiae mơi trường thạch đĩa có bổ sung tinh bột tan Cấy dạng điểm Nuôi cấy tủ ấm 37oC/24h  Đánh giá kết quả:  Sau 24h, lấy đĩa vk mọc Nhỏ dung dịch lugol khắp bề mặt đĩa  Nếu vk có khả phân giải tinh bột  xung quanh khuẩn lạc có vịng phân giải suốt  đo đường kính vịng phân giải Phân giải tinh bột dương tính Phân giải tinh bột âm tính Xác định khả sinh axit lactic  Cấy vk Lactobacillus vào môi trường sữa Nuôi cấy     32oC/24h Chuẩn độ: Dùng phương pháp chuẩn độ Therner để xác định khả sinh axit lactic chủng vi khuẩn Lactic Lấy 10ml dịch lên men, bổ sung 20ml nước cất thêm – giọt Phenolphtalein 1% Chuẩn độ NaOH 0,1N đến xuất màu hồng nhạt bền 30 giây dừng lại Theo tiêu chuẩn A.O.A.C 1990: 1ml NaOH 0,1N chuẩn độ tương đương với 9,008mg axit lactic Khả đơng vón sữa  Sử dụng sữa tươi tiệt trùng tách bơ, cho vào ống nghiệm      ống 7-8ml Cấy vi khuẩn lactic vào Theo dõi 3035oC/24 Đánh giá kết quả: Đơng vón mức +++: casein bị đơng vón nhanh sau 6h ni cấy Sữa đơng đặc thành khối đồng Đơng vón ++: casein bị đơng vón từ 12-24 ni cấy Sữa đơng đặc thành khối đồng đơng thành khối phía có dung dịch Đơn vón +: Casein bị đơng vón chậm sau 20-24h ni cấy, sữa có dạng bã đậu, có nhiều dung dịch Âm tính: Sữa dạng dung dịch đồng trước nuôi cấy Have fun! ... tiếp kính hiển vi, sử dụng vật kính 40x (khơng sử dụng dầu soi) Chỉnh kính hiển vi: Đặt tiêu lên khay kính, xoay vật kính 10x vào trục Giảm đèn đến mức 2Nâng khay kính lên sát vật kính  Chỉnh... bột sử dụng chăn nuôi (phương pháp ủ men gia súc) Vật liệu: + Giống: Giống nấm men sử dụng: Saccharomyces sp, Torula sp… Sử dụng ống nuôi cấy nấm men giống Men giống thương mại (Men Vi sinh hoạt... tính sinh học vi sinh vật  Xác định khả phân giải tinh bột nấm men  Xác định khả sản sinh axit latic vi khuẩn lactic Nguyên vật liệu Chủng giống vsv: - Giống vk Saccharomyces cerevisiae Lactobacillus