THỰC HÀNH DINH DƯỠNG VẬT NUÔI BỘ MÔN DINH DƯỠNG - THỨC ĂN

BỘ MÔN DINH DƯỠNG - THỨC ĂN THỰC HÀNH DINH DƯỠNG VẬT NUÔI HÀ NỘI 2010 ĐỊNH LƯỢNG CHẤT BÉO THƠ Chất béo thơ (chất chiết ête) chất hữu không tan nước tan dung môi hữu Bao gồm: dầu, mỡ, axit béo bay hơi, sắc chất (Xantophyll), carotenoid… I NGUYÊN LÝ: Chất béo chiết khỏi mẫu ête dầu ête êtylic II HĨA CHẤT VÀ DỤNG CỤ: Hóa chất: ➢ Ête dầu (Ether Petroleum) không lẫn nước; ➢ Axit Chlohydric 3N Dụng cụ: ➢ Bộ Soxhlet; ➢ Bếp cách thủy; ➢ Tủ sấy III THỦ TỤC TIẾN HÀNH Chuẩn bị bao giấy: ➢ Dùng giấy lọc mịn khử mỡ, cắt gấp giấy có kích thước tùy thuộc vào kích thước bình chiết lượng mẫu lấy phân tích ➢ Sấy bao giấy cân đến khối lượng không đổi Cách tiến hành: ➢ Cân – 2g mẫu khô, cho vào bao giấy (đã biết khối lượng), gói lại ➢ Đặt gói mẫu vào phận chiết bình Soxhlet ➢ Đổ ête dầu vào ête qua ống cong nhỏ xuống bình cầu Lượng ête bình cầu chiếm khoảng 1/3 dung tích bình ➢ Cho nước lạnh chảy qua phận làm lạnh, tiến hành chiết từ 6-10 Điều chỉnh nhiệt độ nước nồi cách thủy (khoảng 60-70oC) cho ête tuần hoàn từ 4-6 lần / ➢ Sau kiểm tra thấy hết mỡ, lấy mẫu khỏi bình Cách kiểm tra mẫu hết mỡ: ✓ Ête bình chiết khơng màu ✓ Dùng pipet lấy vài giọt ête bình chiết, nhỏ lên kính sạch, cho ête bay hết, khơng để lại dấu vết kính ➢ Để mẫu ngồi khơng khí cho bay hết ête ➢ Đưa vào sấy nhiệt độ 75oC 1,5 giờ; ➢ Sau nâng nhiệt độ lên tới 105oC, sấy ➢ Để nguội bình hút ẩm 25-30 phút; ➢ Cân; ➢ Lặp lại trình sấy cân khối lượng không thay đổi Chú ý: ➢ Mẫu phải khơ nghiền nhỏ ➢ Để đề phịng cháy, nổ, đun cách thủy; ➢ Đầu ống ngưng nên lắp ống thủy tinh dài 0,8-1m, đỉnh ống có chứa Clorua Canxi Mẫu ghi kết Số bao giấy K lượng bao giấy rỗng (g) Tên mẫu K lượng bao giấy +mẫu (g) K.lượng bao giấy +mẫu sau sấy(g) IV TÍNH KẾT QUẢ Hàm lượng mỡ thơ (X), tính phần trăm theo cơng thức: X(%) = m1 - m2 m1 - m0 x 100 Trong đó: -m0 : khối lượng bao giấy rỗng (g) -m1: khối lượng mẫu + bao giấy trước chiết (g) - m2: khối lượng mẫu + bao giấy sau chiết (g) 11 Thay đỡ ngắn cho giá mẫu tiến hành loại chất béo lần với 120ml ete dầu Axeton 12 Sấy khô Capsule tủ sấy 105oC (hoặc 130oC giờ) 13 Để nguội capsule tới nhiệt độ phịng (trong bình hút ẩm khoảng 30 phút) Rồi tiến hành cân 14 Sấy khô cốc sứ, ghi nhãn, cân cốc 15 Đặt capsule vào cốc sứ, nung nhiệt độ 600o C 16 Làm nguội chén sứ đến 20oC bình hút ẩm (khoảng 60 phút), tiến hành cân với độ xác 0,1mg IV TÍNH KẾT QUẢ Hàm lượng xơ thơ (X), tính phần trăm theo cơng thức: X(%) = (W – W 1) – (W –W 4) W2 Trong đó: ➢ W 1: khối lượng capsule + nắp rỗng (g) ➢ W 2: khối lượng mẫu (g) ➢ W : khối lượng capsule sau chiết (g) ➢ W : khối lượng chén nung rỗng (g) ➢ W : khối lượng chén + mẫu sau nung (g) x 100 ĐỊNH LƯỢNG PROTEIN THÔ Nguyên lý: - Dùng axit sunfuric đặc với chất xúc tác để phân huỷ chất hữu mẫu Mẫu Chất xúc tác + H2SO4 (NH4)2SO4 + 2NaOH CO2↑ + H2O + (NH4)2SO4 2NH4OH + Na2SO4 to NH4OH NH3 + H2O ❖ Cất amoniac vào dung dịch axit; ❖ Xác định hàm lượng nitơ tổng số chuẩn độ amoniac ❖ Tính hàm lượng protein thơ cách nhân lượng Nitơ với hệ số 6,25 Hoá chất dụng cụ 2.1 Hoá chất ➢ Axit sunfuric đặc 0,1N ➢ Natri hydroxit (NaOH) 30-50% 0,1N ➢ Chất xúc tác (10 phần CuSO4 + 100 phần K2SO4 + phần Se) ➢ Methyl đỏ ➢ Phenolphtalein 2.2 Dụng cụ ➢ Ống đốt bình đốt Kjeldahl ➢ Hệ thống công phá mẫu bếp điện; ➢ Hệ thống cất đạm; ➢ Bình tam giác 100-250 cm3 ➢ Burrette 25 - 50 cm3 (2 cái) Cách tiến hành 3.1 Chưng mẫu ❖ Cân 0,3-2g mẫu trạng thái khơ khơng khí 5-10 g mẫu trạng thái tươi (lượng mẫu tuỳ thuộc vào hàm lượng Nitơ mẫu) ❖ Cho vào bình Kjeldahl lần lượt: ➢ Mẫu cân; ➢ Hỗn hợp chất xúc tác (3g chất xúc tác /1g mẫu) ➢ Axit sunfuric đậm đặc (10cm3 axit /1g mẫu) ❖ Đem chưng hệ thống công phá mẫu ❖ Khi đun khoảng 15 phút lắc bình lần đến mẫu khơng cịn sủi bọt thơi ❖ Tăng nhiệt độ cho sơi Chưng đến mẫu trở nên có mầu xanh 3.2 Cất mẫu ❖ Cho 20cm3 dung dịch H2SO4 0,1 N vào bình nhận (bình tam giác 100cm3) – V1; ❖ Thêm giọt thị màu (Methyl đỏ); ❖ Đưa bình nhận vào cuối ống sinh hàn cho đầu cuối ngập dung dịch axit; ❖ Chuyển bình Kjeldahl có chứa mẫu chưng vào máy cất; ❖ Đặt chương trình cho máy chạy ❖ Tiến hành cất khoảng phút ❖ Sau đó, hạ thấp bình nhận xuống cho đầu cuối ống sinh hàn không tiếp xúc với dung dịch; ❖ Tráng đầu ống nước cất ❖ Thử xem hết NH3 chưa giấy quỳ giấy lọc có thấm phênolphtalein (nếu không chuyển màu được) 3.3 Chuẩn độ ❖ Đem bình nhận chuẩn độ dung dịch NaOH 0,1N đến dung dịch chuyển từ màu hồng tím sang màu vàng rơm ❖ Lượng dung dịch NaOH 0,1N dùng để chuẩn độ V2 Tính kết Hàm lượng Nitơ tính % theo công thức: %N= 0,0014 x (V1 - V2) m x 100 Trong đó: ❖ V1: thể tích H2SO4 0,1N lấy vào bình nhận (cm3) ❖ V2 : thể tích NaOH 0,1N dùng chuẩn độ (cm 3) ❖ m : khối lượng mẫu, tính g Tính %Protein thơ: % Protein thơ = % N * 6,25