Luận án nghiên cứu quá trình tích luỹ đào thải và ảnh hưởng của các kim loại nặng (as, cd, pb) đến hàm lượng cortisol trong cá điêu hồng (oreochromis sp

1 MỞ ĐẦU Hiện nay, gia tăng dân số với phát triển nhanh chóng ngành cơng nghiệp làm gia tăng lượng chất thải môi trường Vì vậy, mơi trường sống ngày bị nhiễm với mức độ nghiêm trọng Sinh vật nhất lồi thuỷ sản sống mơi trường nhiễm bị ảnh hưởng đến sinh trưởng, phát triển Không những vậy, các đợc chất tích tụ thể chúng rất nguy hiểm người ăn phải thức ăn có nhiễm đợc chất Vì thế, vấn đề nghiên cứu tích luỹ và đào thải độc chất ảnh hưởng độc chất đến sinh trưởng phát triển loài thuỷ sản quan trọng và nhà khoa học quan tâm nghiên cứu Trong những thập niên gần đây, các nhà khoa học giới quan tâm nghiên cứu về tích luỹ và đào thải kim loại nặng ảnh hưởng kim loại nặng đến hàm lượng sinh hóa (gluco, cortisol, glutathion, lipit, …) thể sinh vật nhằm phản ánh phản ứng thể trước thay đổi môi trường sống Việt Nam quốc gia phát triển nên vấn đề xử lý chất thải chưa quan tâm mức dẫn đến việc ô nhiễm môi trường không thể tránh khỏi, nhất ô nhiễm kim loại nặng khơng có vai trị sinh học rất độc người Cd, Pb và As Các lồi thuỷ sản sống mơi trường ô nhiễm bị ảnh hưởng đến sản lượng chất lượng Trong loài thuỷ sản, cá Điêu hồng lồi rất ưa cḥng làm thức ăn chất lượng thịt cá giá thành hợp lý Tuy nhiên, việc đánh giá phản ứng cá Điêu hồng ảnh hưởng kim loại Cd, Pb As mơi trường nhiễm tích luỹ, đào thải kim loại này chưa nghiên cứu Do đó, nghiên cứu sinh chọn đề tài: “Nghiên cứu quá trình tích luỹ đào thải và ảnh hưởng của kim loại nặng (As, Cd, Pb) đến hàm lượng cortisol cá Điêu hờng (Oreochromis sp.)” nhằm mục đích giải vấn đề sau: - Tìm ngưỡng đợc cấp tính (LC50 96 giờ) kim loại Cd, Pb As để đánh giá đợc tính kim loại cá Điêu hồng - Tìm ảnh hưởng các kim loại (Cd, Pb, As) nước ô nhiễm đến hàm lượng cortisol cá Đây là yếu tố mức độ căng thẳng sinh lý oxy hóa cá sống nước ô nhiễm kim loại nặng Từ đó có thể đề xuất sử dụng cá làm thị sinh học để phát kịp thời ô nhiễm nguồn nước kim loại nặng - Nghiên cứu quy luật hấp thu và đào thải kim loại nặng (Cd, Pb, As) gan, mang thịt cá Điêu hồng sống môi trường ô nhiễm sở đó khuyến cáo người nuôi cá có hướng ni thích hợp nhằm cung cấp nguồn cá thị trường để đảm bảo sức khoẻ người tiêu dùng Nội dung nghiên cứu của luận án Xác định ngưỡng đợc cấp tính 96 Cd, Pb, As cá Điêu hồng Dựa giá trị LC50 96 giờ, lựa chọn nồng độ kim loại nặng phù hợp để tiến hành các nghiên cứu Nghiên cứu quy luật tích luỹ và đào thải kim loại nặng cá Điêu hồng nuôi nguồn nước ô nhiễm và sau đó nuôi nguồn nước Nghiên cứu ảnh hưởng kim loại nặng nước đến thay đổi hàm lượng cortisol cá Ý nghĩa khoa học - Kết quả nghiên cứu làm sở khoa học lĩnh vực hoá học môi trường, độc chất môi trường, sử dụng thị sinh học để cảnh báo ô nhiễm môi trường và nguy gây hại cho sức khỏe người - Đề tài góp phần xác nhận giá trị sử dụng phương pháp xác định kim loại nặng (Cd, Pb, As) thiết bị phổ nguyên tử và phương pháp xác định cortisol cá thiết bị sắc ký lỏng pha đảo hiệu cao RP- HPLC-UV - Kết quả nghiên cứu đề tài làm sở khoa học cho những nghiên cứu về đợc chất mơi trường, kỹ thuật phân tích mơi trường Ý nghĩa thực tiễn: Kết quả nghiên cứu luận án góp phần cảnh báo những rủi ro, nguy lan truyền kim loại nặng qua thực phẩm CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu kim loại nặng Cd, Pb As 1.1.1 Nguồn gốc gây ô nhiễm kim loại nặng nước 1.1.1.1 Nguồn tự nhiên đất Kim loại nặng một những thành phần tự nhiên lớp vỏ trái đất Trong đá, chúng tồn nhiều dạng khác Quặng kim loại nặng có thể dạng sunfua sắt, asen, chì, chì-kẽm, coban, vàng, bạc niken; dạng oxit nhôm, mangan, selen antimon Một số tồn dạng sunfua và oxit sắt, đồng coban Quặng khoáng sản có xu hướng tồn theo kiểu nhóm nguyên tố, theo đó kim loại tồn dạng sulfua chủ yếu với nhau, tương tự các oxit Do đó, sunfua chì, cadimi, asen thủy ngân tự nhiên tìm thấy với sulfua sắt (pyrit, FeS2) và đồng (chalcopyrit, CuFeS2) [1] Các kim loại đất trực tiếp vào môi trường nước thông qua phong hóa đá, bào mòn nước, pH nước thấp là ngun nhân hịa tan mợt số kim loại nặng 1.1.1.2 Từ hoạt động nông nghiệp Quá trình sản x́t nơng nghiệp góp phần gia tăng mợt lượng đáng kể hàm lượng kim loại nặng nước Các loại hóa chất bảo vệ thực vật, loại phân bón, đặc biệt phân lân có chứa kim loại nặng As, Pb, Hg Thuốc bảo vệ thực vật thường chứa nhiều kim loại nặng như: As, Pb, Hg Một số loại thuốc như: CuSO4, Zineb, Macozeb… chứa kim loại nặng Cu, Zn, Mn Thông qua hoạt đợng phun, bón thuốc mà kim loại nặng có mặt nước [2-4] 1.1.1.3 Từ hoạt động cơng nghiệp Sự phát triển công nghiệp vượt quá phát triển sở hạ tầng Hiện nay, ngành công nghiệp đều đổ trực tiếp chất thải chưa xử lý vào môi trường Kim loại nặng và độc tố thành phần đặc trưng chất thải công nghiệp Theo kết quả quan trắc phân tích mơi trường, hàm lượng đồng, chì, cadimi và coban,… các vùng nước ven biển gần thị trấn trung tâm công nghiệp lớn nhiều so với mức tự nhiên chúng nước biển Hơn nữa, khí thải nhà máy nhiệt điện, lị hỏa táng, khí thải phương tiện giao thơng chứa mợt lượng kim loại vào mơi trường khơng khí và sau đó là môi trường nước [2, 5] Hoạt đợng khai thác khốn sản góp phần rất lớn vào việc thải kim loại nặng vào môi trường nước [1, 6] Nước thải ngành khai thác khoán sản chứa một lượng lớn kim loại nặng 1.1.1.4 Nguồn gốc hoạt động sinh hoạt người Một nguyên nhân khác gây nên ô nhiễm là nước thải sinh hoạt người Nước thải sinh hoạt thường trực tiếp thải vào môi trường mà không qua bất kỳ hình thức xử lý Theo nghiên cứu Phan Văn duyệt (2000), một số vùng, nhiều người cho thạch tín xuống những giếng khơng dùng nữa để yểm Tĩnh Thần, tức Thần Giếng Trước đổ đất lấp trũng xây nhà, người ta đổ thạch tín xuống để Yểm Thần Giếng, trấn Thuỷ Tề, Hà Bá Việc này thành một tập tục không rõ từ đời truyền lại, từ đó, asen vào nước ngầm [7] 1.1.2 Độc tính của kim loại nặng Đợc tính các tác nhân sinh vật thể qua các thông số: a) Liều lượng độc: Là đại lượng biểu thị độ lớn tác nhân gây đợc hóa chất, vật lý, sinh học Liều lượng đợc có thể biểu diễn qua đơn vị khối lượng hay thể tích chất độc một đơn vị khối lượng thể sinh vật (mg, g/kg khối lượng thể mL/kg) Nồng đợ khơng khí biểu diễn qua đơn vị khối lượng hay thể tích phần triệu thể tích khơng khí (ppm hay miligam, gam/m3 khơng khí) Nồng đợ nước có thể biểu diễn qua đơn vị ppm, ppb b) Ngưỡng đợc cấp tính ngưỡng đợc tính xác định nồng đợ mợt hóa chất, mợt tác nhân gây đợc lên mợt nhóm sinh vật thử nghiệm thời gian ngộ độc ngắn, điều kiện có kiểm soát Để đánh giá đợc tính cấp và ngưỡng đợc, người ta có thể dùng các đại lượng sau để đánh giá: - LD50 (lethal dose 50%): Liều gây chết trung bình mợt hóa chất một liều đơn Liều lượng gây chết 50% quần thể sinh vật mợt điều kiện thí nghiệm cụ thể một khoảng thời gian xác định thông qua tiếp xúc trực tiếp với chất gây độc LD50 thường sử dụng động vật sống cạn - LC50 (lethal concentration 50%): Nồng độ gây chết 50% q̀n thể sinh vật mợt điều kiện thí nghiệm cụ thể một khoảng thời gian xác định thông qua tiếp xúc trực tiếp với chất gây độc LC50 thường dùng để đánh giá đợc tính chất đợc dạng lỏng hòa tan nước bụi môi trường khơng khí và đo microgram (hoặc mg) tác nhân gây đợc cho lít dung dịch phần triệu (ppm), khơng khí nước LC50 nhỏ, đợc tính hóa chất càng lớn LC50 sử dụng việc so sánh các đợc tính, giá trị LC50 không thể ngoại suy trực tiếp từ một loài này cho một loài khác cho người Giá trị LD50, LC50 thực vòng 24 đến 96 và thử nghiệm một loại chất nhất định để xác định nồng độ Thời gian ghi cùng với liều lượng gây chết: LC50 24 giờ, LC50 48 giờ, LC50 72 giờ, LC50 96 Thơng số ngưỡng đợc cấp tính thường sử dụng nhất cho cá là LC50 96 Để xác định ngưỡng đợc cấp tính, mợt phương pháp thử nghiệm thơng dụng là xây dựng mợt thí nghiệm để tìm mối quan hệ giữa nồng đợ chất thử và phần trăm cá thể bị ngộ độc từ đó xây dựng đường cong nồng độ gây chết Từ đường cong này, LC50 quan sát, tính toán hay nợi suy [8, 9] Các yếu tố môi trường ngoài ảnh hưởng đến đợc tính: - Nhiệt đợ mơi trường: Có thể làm tăng, giảm hay không ảnh hưởng đến độc tính hóa chất tùy tḥc vào loại đợc tố, loài sinh vật và điều kiện tác động cụ thể Ngun nhân, nhiệt đợ tăng làm tăng quá trình ion hóa, giải phóng độc tố dạng ion tự nên dễ xâm nhập qua màng tế bào - Lượng oxi hòa tan: Khi lượng oxi hòa tan nước giảm làm tăng đợc tính đợc chất môi trường nước Nguyên nhân có thể thể thiếu oxi nên chế bảo vệ hiệu quả - pH: pH ảnh hưởng trực tiếp đến dạng tồn ion kim loại nước pH thấp, kim loại tồn dạng ion tự và đợc tính tăng lên 1.1.3 Con đường xâm nhập kim loại nặng vào sinh vật Độc chất xâm nhập vào thể sinh vật từ bộ phận thể tiếp xúc với độc chất, chẳng hạn qua đường tiêu hóa, đường hô hấp, qua da, qua các quan tổn thương - Qua đường tiêu hóa: Các chất độc thức ăn, nước uống vào đường tiêu hóa qua miệng, sau đó đến dày, ṛt non, gan Trong ṛt, những phần tử có kích cỡ nhỏ qua kẽ hở tế bào chất ruột non để vào máu Một phần độc chất vào gan, giải độc chuyển qua mật trở lại đường tiêu hóa để thải qua phân - Qua đường hô hấp: Độc chất môi trường xâm nhập vào thể sinh vật qua đường hô hấp Đây là đường xâm nhập độc tố nhanh nhất vào hệ tĩnh mạnh Đối với động vật cạn, phổi là nơi chất độc dễ xâm nhập nhất qua hệ thống vi mạch máu, màng nhày Đối với động vật nước, chất độc thâm nhập chủ yếu qua mạch máu mang Độc chất theo máu trực tiếp đến bộ phận khác thể mà không qua gan để giải độc mợt phần là hệ tiêu hóa Mang cá tích điện tích âm, ngun nhân mang cá có hệ thống mao mạch lớn, đó điểm đẳng điện amino axít huyết tương ứng với pH khoảng - Qua da: Da bảo vệ thể khỏi tác đợng vật lý, hóa học sinh học Tuy nhiên, đặc điểm cấu tạo da và hàm lượng độc tố môi trường mà độc chất có thể xâm nhập vào thể qua da Nếu da bị tổn thương mức đợ nhiễm đợc càng nhanh Đối với động vật sống nước ô nhiễm, da liên tục tiếp xúc với độc tố nước nên khả nhiễm độc cao 1.1.4 Khả tích lũy sinh học Sau vào máu, độc chất vận chuyển đến tế bào khác bộ phận thể Tại đây, tùy theo đặc điểm lý hóa đợc tố, đặc điểm tế bào một số yếu tố khác mà đợc chất có thể phân bố và tích lũy khác quan khác - Các chất có khả hòa tan nước phân bố dịch thể phân bố khá đồng đều toàn thể Ví dụ các ion: Na+, K+, Li+, - Các chất cư trú xương: Do có ái lực với các mô xương, các cation Ca2+, Ba2+, Sr2+, Be2+, Cd2+ tập trung vào các mô xương - Các chất cư trú các mô mỡ, mô béo: Là những chất phân cực, những ion có thể tạo thành những hợp chất phân cực có lực với mô béo, mô mỡ - Các kim loại nặng (Cd, Pb, Hg ) có lực với nhóm thiol nên ức chế hoạt động enzym Đã có nhiều nghiên cứu cá đánh giá khả tích lũy kim loại quan khác cá Các quan thường dùng để đánh giá là thịt, gan, thận, mang, tim, mỡ Các kết quả nghiên cứu cho thấy, những kim loại khác diện với mức khác các quan khác nhau, khả tích lũy kim loại nặng các loài khác khác [10-15] 1.1.5 Ảnh hưởng của kim loại nặng lên sinh vật Tùy theo đặc điểm đợc chất lồi mà ảnh hưởng đợc chất khác Có những đợc chất có tính đợc loài này mà khơng đợc đợc với lồi khác Có những chất không độc hàm lượng nhỏ gây độc hàm lượng lớn Nhìn chung, vào thể, các độc chất kim loại nặng gây phản ứng khác nhau, từ đó ảnh hưởng đến sinh trưởng phát triển sinh vật Andrea Martini Ribeiro cộng (2014) nghiên cứu cá Prochilodus lineatus sau cho nhiễm Pb có nồng đợ từ 0,7 - 1,7 mg/L, hàm lượng gluco máu tăng đáng kể sau 24 sau đó trở về mức bình thường sau 96 giờ, đó hàm lượng cortisol máu thay đổi không đáng kể Nghiên cứu về trao đổi ion: Hàm lượng Na+ giảm sau 96 giờ, Cl- giảm sau 24 giờ, Ca2+ giảm sau 96 giờ, ngược lại, hàm lượng K+ tăng Về độ hoạt động enzym, sau 24 giờ, enzym Na+/K+-ATPase mang giảm, phục hồi sau 96 giờ, đó enzym cacbonic anhydrase không bị tác động tiếp xúc với Pb [13] 1.1.6 Khả giải độc tính kim loại nặng Tùy theo tính chất hóa học, kích cỡ phân tử đợc chất, trạng thái thể sinh vật mà mức độ nhiễm độc khác Từ đó, đợc chất vào hệ t̀n hồn Sự di chuyển độc chất bên thể phụ tḥc cấu trúc sinh học hóa chất bên thể Trong hệ t̀n hoàn, đợc chất có thể tồn dạng tự liên kết với protein (thường albumin) Hóa chất có thể khỏi đường máu xâm nhập vào mô khác, đây, đợc chất có thể chủn hóa sinh học (ở gan) để đào thải (ở thận) tích tụ (ở mô mỡ) Các phản ứng xảy nhanh hay chậm tùy thuộc vào hàm lượng độc chất bợ phận tiếp xúc, lực hoạt tính riêng độc chất Thận quan bài tiết chủ yếu chất đợc qua đường nước tiểu Ngồi ra, chất đợc cịn có thể tiết qua gan, mật, qua tiết mồ hôi, nước mắt, phân Tốc độ đào thải chất độc khỏi thể phụ thuộc vào tốc đợ chủn hóa tiết chúng Trong thể, chất đợc chủn hóa thành dạng đợc hơn, tính ưa mỡ hơn, dễ hòa tan nước nên dễ tiết Đối với cá Tilapia Nilotica, thí nghiệm cho nhiễm Cd và/hoặc Zn mức nồng độ khác 10 ngày, sau đó ngưng nhiễm 30 ngày, phân tích hàm lượng Cd Zn bộ phận cá, kết quả cho thấy đào thải Cd thể rõ ràng mang cá tất cả nồng độ thử nghiệm, thịt loại bỏ Cd khơng đáng kể Với tất cả nồng đợ thí nghiệm, đào thải đáng kể kẽm mang không thấy bất kỳ loại bỏ đáng kể kẽm thịt sau 30 ngày ngưng ô nhiễm [16] Nghiên cứu cá atlantic salmon atlantic cod, cho cá ô nhiễm As qua thức ăn tháng, sau đó ngưng ô nhiễm tháng Trong giai đoạn ô nhiễm, với cá Atlantic salmon, hàm lượng As tổng tăng đáng kể thịt, gan, thận, Atlantic cod, hàm lượng As tăng đáng kể thịt Trong giai đoạn ngưng ô nhiễm, khả đào thải As loài có khác biệt đáng kể, để đào thải mợt nửa As từ thịt, cá Atlantic cod cần 77 ngày Atlantic salmon cần 37 ngày [17] 10 Theo nghiên cứu Wei Zhang cộng (2016), cá biển Siganus fuscescens cho ô nhiễm As (III) As (V) qua chế độ ăn 21 và 42 ngày Hàm lượng As vơ tích lũy đáng kể ruột, gan thịt Nghiên cứu cho thấy As (III) As (V) giảm đợc tính chuyển hóa thành asenobetaine (AsB) (63,3% -91,3% gan; 79,0% - 95,2% thịt) Quá trình chuyển đổi sinh học As bao gồm oxi hóa As (III) thành As (V) khử As (V) thành As (III), methyl hóa thành axit monomethylarsonic (MMA) axit dimethylasinic (DMA) và sau đó chủn hóa thành asenobetaine [18] Mợt số kim loại nặng hạn chế tích lũy các mơ cá hóa chất khác tác đợng Theo nghiên cứu Davar Shahsavani cợng (2011) lồi cá Cyprinus carpio, cá bị gây ô nhiễm Pb nồng độ mg/L 10 ngày với điều kiện có và khơng có allicin (là dược chất trích ly từ tỏi), kết quả phân tích cho thấy hàm lượng Pb tích lũy các mơ khác cá tăng đáng kể so với nhóm đối chứng Nhưng nhóm cá có nhiễm bổ sung allicin hàm lượng Pb tích lũy giảm đáng kể Điều cho thấy tác dụng hiệu quả allicin việc giảm hàm lượng Pb tích lũy Nghiên cứu cho thấy hướng mở việc điều trị ngợ đợc chì, nhiên cần phải nghiên cứu thêm ảnh hưởng dược học allicin đặc tính cải thiện nhiễm đợc chì [19] 1.1.7 Tổng quan asen 1.1.7.1 Đặc điểm kim loại asen Asen nguyên tố tồn nhiều vỏ Trái đất Asen (z=33), có cấu hình điện tử lớp ngồi 4s24p3, có khối lượng nguyên tử là 74,92 đvC Asen vừa mang tính chất mợt phi kim, vừa mang tính chất mợt kim loại Tính kim loại As vượt trợi As xếp chung với nhóm kim loại Asen có nhiều dạng thù hình Asen kim loại tinh khiết có màu xám ghi Tuy nhiên, môi trường tự nhiên, asen thường liên kết với nguyên tố khác oxi, hidro, lưu huỳnh tạo thành dạng asen vô cơ, liên kết với cacbon hidro tạo thành dạng asen hữu [20] 168 Phụ lục 68 Sự sai khác giữa hàm lượng Pb mang cá sau 12 ngày ô nhiễm Multiple Comparisons Dependent Variable: Hàm lượng chì mang cá sau 12 ngày ô nhiễm Dunnett T3 95% Confidence Interval (I) Nồng độ (J) Nồng độ Mean Std Sig Pb ô nhiễm Pb ô nhiễm Difference (I-J) Error Lower Upper Bound Bound Đối chứng 0,12 0,18 0,33 0,12 -3,654000* 0,089213 0,001 -4,22658 -3,08142 0,18 -4,762000* 0,083432 0,000 -5,28573 -4,23827 0,33 -4,994000* 0,048955 0,000 -5,23260 -4,75540 Đối chứng 3,654000* 0,089213 0,001 3,08142 4,22658 0,18 -1,108000* 0,116640 0,003 -1,61873 -0,59727 0,33 -1,340000* 0,095082 0,003 -1,85021 -0,82979 Đối chứng 4,762000* 0,083432 0,000 4,23827 5,28573 0,12 1,108000* 0,116640 0,003 0,59727 1,61873 0,33 -,232000 0,089680 0,270 -0,69842 0,23442 Đối chứng 4,994000* 0,048955 0,000 4,75540 5,23260 0,12 1,340000* 0,095082 0,003 0,82979 1,85021 0,18 0,232000 0,089680 0,270 -0,23442 0,69842 * The mean difference is significant at the 0,05 level 169 Phụ lục 69 Sự sai khác giữa hàm lượng Pb mang cá sau 20 ngày ô nhiễm Multiple Comparisons Dependent Variable: Hàm lượng chì mang cá sau 20 ngày ô nhiễm Dunnett T3 (I) Nồng độ Pb ô nhiễm Đối chứng 0,12 0,18 0,33 (J) Nồng độ Mean Pb ô nhiễm Difference (I-J) Std Error 95% Confidence Interval Sig Lower Bound Upper Bound 0,12 -7,818667* 0,058428 0,000 -8,07580 -7,56153 0,18 -8,117667* 0,124806 0,000 -8,89853 -7,33680 0,33 -8,217000* 0,069243 0,000 -8,54306 -7,89094 Đối chứng 7,818667* 0,058428 0,000 7,56153 8,07580 0,18 -0,299000 0,126460 0,349 -1,05789 0,45989 0,33 -0,398333* 0,072182 0,026 -,72559 -0,07108 Đối chứng 8,117667* 0,124806 0,000 7,33680 8,89853 0,12 0,299000 0,126460 0,349 -0,45989 1,05789 0,33 -0,099333 0,131806 0,950 -0,80921 0,61054 Đối chứng 8,217000* 0,069243 0,000 7,89094 8,54306 0,12 0,398333* 0,072182 0,026 0,07108 0,72559 0,18 0,099333 0,131806 0,950 -0,61054 0,80921 * The mean difference is significant at the 0,05 level 181 Phụ lục 70 Kết quả kiểm định sai khác giữa hàm lượng As cá sau 10 ngày ngưng ô nhiễm Paired Samples Test Paired Differences 95% Confidence Interval of the Difference Sig (2- T df 0,419000 0,134330 0,044777 0,315745 0,522255 9,358 0,000 0,322111 0,099615 0,033205 0,245540 0,398682 9,701 0,000 0,204000 0,096563 0,032188 0,129775 0,278225 6,338 0,000 Mean Std Deviation Std Error Mean Lower tailed) Upper Hàm lượng As thịt cá ngày 20 ô Pair nhiễm - Hàm lượng As thịt cá ngày 10 ngưng ô nhiễm Hàm lượng As gan cá ngày 20 ô Pair nhiễm - Hàm lượng As gan cá ngày 10 ngưng ô nhiễm Hàm lượng As mang cá ngày Pair 20 ô nhiễm - Hàm lượng As mang cá ngày 10 ngưng ô nhiễm 182 Phụ lục 71 Kết quả kiểm định sai khác giữa hàm lượng Cd cá sau 10 ngày ngưng ô nhiễm Paired Samples Test Paired Differences 95% Confidence Std Sig (2- T df 0,117111 0,027922 0,009307 0,095649 0,138573 12,583 0,000 Pair ô nhiễm - Hàm lượng Cd gan cá 0,629667 0,150127 0,050042 0,514269 0,745064 12,583 0,000 9,406 0,000 Mean Std Deviation Error Interval of the tailed) Difference Mean Lower Upper Hàm lượng Cd thịt cá ngày 20 ô Pair nhiễm - Hàm lượng Cd thịt cá ngày 10 ngưng ô nhiễm Hàm lượng Cd gan cá ngày 20 ngày 10 ngưng ô nhiễm Hàm lượng Cd mang cá ngày Pair 20 ô nhiễm - Hàm lượng Cd mang cá ngày 10 ngưng ô nhiễm 0,477444 0,152277 0,050759 0,360394 0,594495 183 Phụ lục 72 Kết quả kiểm định sai khác giữa hàm lượng Pb cá sau 10 ngày ngưng ô nhiễm Paired Samples Test Paired Differences 95% Confidence Std Sig (2- T df 0,121667 0,054642 0,018214 0,079665 0,163668 6,680 0,000 1,058111 0,236226 0,078742 0,876532 1,239690 13,438 0,000 2,112667 0,999654 0,333218 1,344265 2,881069 6,340 0,000 Mean Std Deviation Error Interval of the tailed) Difference Mean Lower Upper Hàm lượng Pb thịt cá ngày 20 ô Pair nhiễm - Hàm lượng Pb thịt cá ngày 10 ngưng ô nhiễm Hàm lượng Pb gan cá ngày 20 ô Pair nhiễm - Hàm lượng Pb gan cá ngày 10 ngưng ô nhiễm Hàm lượng Pb mang cá ngày 20 Pair ô nhiễm - Hàm lượng Pb mang cá ngày 10 ngưng ô nhiễm 184 Phụ lục 73 Kết quả kiểm định sai khác giữa hàm lượng cortisol cá ô nhiễm As so với cá đối chứng Paired Samples Test Paired Differences 95% Confidence Mean Pair Pair Pair Pair Pair Hàm lượng cortisol cá đối chứng ngày – Hàm lượng cortisol cá ô nhiễm 1,0 mgAs/L ngày Hàm lượng cortisol cá đối chứng ngày – Hàm lượng cortisol cá ô nhiễm 1,5 mgAs/L ngày Hàm lượng cortisol cá đối chứng ngày – Hàm lượng cortisol cá ô nhiễm 3,0 mgAs/L ngày Hàm lượng cortisol cá đối chứng ngày 12 – Hàm lượng cortisol cá ô nhiễm 1,0 mgAs/L ngày 12 Hàm lượng cortisol cá đối chứng ngày 12 – Hàm lượng cortisol cá ô nhiễm 1,5 mgAs/L ngày 12 Std Deviation Std Error Mean Interval of the t df -6,530 Difference Lower Sig (2tailed) Upper -11,1667 4,1889 1,7101 -15,5626 -6,7707 0,001 -18,8667 4,5005 1,8373 -23,5897 -14,1437 -10,269 0,000 -26,5500 5,3780 2,1956 -32,1939 -20,9061 -12,093 0,000 -24,5833 3,0446 1,2430 -27,7785 -21,3882 -19,778 0,000 -9,0833 3,6897 1,5063 -12,9554 0,002 -5,2113 -6,030 185 Phụ lục 73 (tiếp theo) Kết quả kiểm định sai khác giữa hàm lượng cortisol cá ô nhiễm As so với cá đối chứng Paired Samples Test Paired Differences 95% Confidence Mean Pair Pair Pair Pair Hàm lượng cortisol cá đối chứng ngày 12 – Hàm lượng cortisol cá ô nhiễm 3,0 mgAs/L ngày 12 Hàm lượng cortisol cá đối chứng ngày 20 – Hàm lượng cortisol cá ô nhiễm 1,0 mgAs/L ngày 20 Hàm lượng cortisol cá đối chứng ngày 20 – Hàm lượng cortisol cá ô nhiễm 1,5 mgAs/L ngày 20 Hàm lượng cortisol cá đối chứng ngày 20 – Hàm lượng cortisol cá ô nhiễm 3,0 mgAs/L ngày 20 Std Deviation Std Error Mean Interval of the t df Difference Lower Upper Sig (2tailed) -4,8667 4,8702 1,9882 -9,9776 0,2443 -2,448 0,058 6,4167 3,9179 1,5995 2,3051 10,5282 4,012 0,010 9,03333 3,72433 1,52045 5,12488 12,94178 5,941 0,002 5,06099 2,06614 4,80548 15,42785 4,896 0,004 10,1166 186 Phụ lục 74 Kết quả kiểm định sai khác giữa hàm lượng cortisol cá ô nhiễm Cd so với cá đối chứng Paired Samples Test Paired Differences 95% Confidence Mean Pair Pair Pair Pair Pair Hàm lượng cortisol cá đối chứng ngày – Hàm lượng cortisol cá ô nhiễm 0,66 mgCd/L ngày Hàm lượng cortisol cá đối chứng ngày – Hàm lượng cortisol cá ô nhiễm 1,0 mgCd/L ngày Hàm lượng cortisol cá đối chứng ngày – Hàm lượng cortisol cá ô nhiễm 2,0 mgCd/L ngày Hàm lượng cortisol cá đối chứng ngày 12 – Hàm lượng cortisol cá ô nhiễm 0,66 mgCd/L ngày 12 Hàm lượng cortisol cá đối chứng ngày 12 – Hàm lượng cortisol cá ô nhiễm 1,0 mgCd/L ngày 12 Std Deviation Std Error Mean Interval of the t df Difference Lower Sig (2tailed) Upper 17,2333 1,3456 0,5493 15,8212 18,6455 31,371 0,000 21,4000 0,8532 0,3483 20,5046 22,2954 61,436 0,000 22,3333 2,1210 0,8659 20,1075 24,5592 25,792 0,000 26,3333 1,1535 0,4709 25,1228 27,5439 55,917 0,000 27,8000 0,6261 0,2556 27,1429 28,4571 108,762 0,000 187 Phụ lục 74 (tiếp theo) Kết quả kiểm định sai khác giữa hàm lượng cortisol cá ô nhiễm Cd so với cá đối chứng Paired Samples Test Paired Differences 95% Confidence Mean Pair Pair Pair Pair Hàm lượng cortisol cá đối chứng ngày 12 – Hàm lượng cortisol cá ô nhiễm 2,0 mgCd/L ngày 12 Hàm lượng cortisol cá đối chứng ngày 20 – Hàm lượng cortisol cá ô nhiễm 0,66 mgCd/L ngày 20 Hàm lượng cortisol cá đối chứng ngày 20 – Hàm lượng cortisol cá ô nhiễm 1,0 mgCd/L ngày 20 Hàm lượng cortisol cá đối chứng ngày 20 – Hàm lượng cortisol cá ô nhiễm 2,0 mgCd/L ngày 20 Std Deviation Std Error Mean Interval of the t df Difference Lower Sig (2tailed) Upper 30,5333 1,2078 0,4931 29,2659 31,8008 61,926 0,000 32,8000 1,1171 0,4561 31,6276 33,9724 71,919 0,000 35,5667 1,0671 0,4356 34,4468 36,6865 81,643 0,000 37,9667 1,1183 0,4566 36,7930 39,1403 83,159 0,000 188 Phụ lục 75 Kết quả kiểm định sai khác giữa hàm lượng cortisol cá ô nhiễm Pb so với cá đối chứng Paired Samples Test Paired Differences Mean Pair Pair Pair Pair Pair Hàm lượng cortisol cá đối chứng ngày – Hàm lượng cortisol cá ô nhiễm 0,12 mgPb/L ngày Hàm lượng cortisol cá đối chứng ngày – Hàm lượng cortisol cá ô nhiễm 0,18 mgPb/L ngày Hàm lượng cortisol cá đối chứng ngày – Hàm lượng cortisol cá ô nhiễm 0,33 mgPb/L ngày Hàm lượng cortisol cá đối chứng ngày 12 – Hàm lượng cortisol cá ô nhiễm 0,12 mgPb/L ngày 12 Hàm lượng cortisol cá đối chứng ngày 12 – Hàm lượng cortisol cá ô nhiễm 0,18 mgPb/L ngày 12 Std Deviation Std Error Mean 95% Confidence Interval of the t df Difference Lower Sig (2tailed) Upper 2,4333 2,4873 1,0154 -0,1769 5,0436 2,396 0,062 8,3333 3,7071 1,5134 4,4430 12,2237 5,506 0,003 10,4667 2,9656 1,2107 7,3545 13,5789 8,645 0,000 14,1667 1,1877 0,4849 12,9202 15,4131 29,217 0,000 24,9000 0,9274 0,3786 23,9268 25,8732 65,770 0,000 189 Phụ lục 75 (tiếp theo) Kết quả kiểm định sai khác giữa hàm lượng cortisol cá ô nhiễm Pb so với cá đối chứng Paired Samples Test Paired Differences 95% Confidence Mean Pair Pair Pair Pair Hàm lượng cortisol cá đối chứng ngày 12 – Hàm lượng cortisol cá ô nhiễm 0,33 mgPb/L ngày 12 Hàm lượng cortisol cá đối chứng ngày 20 – Hàm lượng cortisol cá ô nhiễm 0,12 mgPb/L ngày 20 Hàm lượng cortisol cá đối chứng ngày 20 – Hàm lượng cortisol cá ô nhiễm 0,18 mgPb/L ngày 20 Hàm lượng cortisol cá đối chứng ngày 20 – Hàm lượng cortisol cá ô nhiễm 0,33 mgPb/L ngày 20 Std Deviation Std Error Mean Interval of the t df Difference Lower Sig (2tailed) Upper 29,5667 2,0057 0,8188 27,4619 31,6715 36,109 0,000 25,2833 2,8053 1,1453 22,3394 28,2273 22,077 0,000 36,9167 0,9642 0,3936 35,9048 37,9285 93,785 0,000 43,0333 2,1342 0,8713 40,7937 45,2730 49,392 0,000 190 Phụ lục 76 Kết quả kiểm định sai khác giữa hàm lượng cortisol cá sau 10 ngày ngưng ô nhiễm As Paired Samples Test Paired Differences Mean Std Deviation Std 95% Confidence Interval Error of the Difference Mean Lower Upper t df Sig (2tailed) Hàm lượng cortisol cá ô nhiễm 1,0 Pair mgAs/L ngày thứ 20 – Hàm lượng cortisol -0,4667 3,7087 1,5141 -4,3587 3,4254 -0,308 0,770 0,7000 6,2351 2,5455 -5,8433 7,2433 0,275 0,794 Pair mgAs/L ngày thứ 20 – Hàm lượng cortisol 13,2500 6,5256 2,6641 6,4018 20,0982 4,974 0,004 cá ngày 10 ngưng ô nhiễm Hàm lượng cortisol cá ô nhiễm 1,5 Pair mgAs/L ngày thứ 20 – Hàm lượng cortisol cá ngày 10 ngưng ô nhiễm Hàm lượng cortisol cá ô nhiễm 3,0 cá ngày 10 ngưng ô nhiễm 191 Phụ lục 77 Kết quả kiểm định sai khác giữa hàm lượng cortisol cá sau 10 ngày ngưng ô nhiễm Cd Paired Samples Test Paired Differences Mean Std Deviation Std Error Mean 95% Confidence Interval of the Difference Lower t df Sig (2tailed) Upper Hàm lượng cortisol cá ô nhiễm 0,66 Pair mgCd/L ngày thứ 20 – Hàm lượng cortisol cá ngày 10 ngưng ô nhiễm -5,8000 0,8198 0,3347 -6,6603 -4,9397 -17,331 0,000 -1,5333 0,2066 0,0843 -1,7501 -1,3166 -18,183 0,000 -0,7333 0,4033 0,1647 -1,1566 -0,3101 -4,454 0,007 Hàm lượng cortisol cá ô nhiễm 1,0 Pair mgCd/L ngày thứ 20 – Hàm lượng cortisol cá ngày 10 ngưng ô nhiễm Hàm lượng cortisol cá ô nhiễm 2,0 Pair mgCd/L ngày thứ 20 – Hàm lượng cortisol cá ngày 10 ngưng ô nhiễm 192 Phụ lục 78 Kết quả kiểm định sai khác giữa hàm lượng cortisol cá sau 10 ngày ngưng ô nhiễm Pb Paired Samples Test Paired Differences Mean Std Deviation Std Error Mean 95% Confidence Interval of the Difference Lower Upper t df Sig (2tailed) Hàm lượng cortisol cá ô nhiễm 0,12 Pair mgPb/L ngày thứ 20 – Hàm lượng -3,0167 1,9467 0,7947 -5,0596 -0,9737 -3,796 0,013 2,5097 1,0246 -7,0671 -1,7995 -4,327 0,008 1,4511 0,5924 -3,9395 -0,8938 -4,079 0,010 cortisol cá ngày 10 ngưng ô nhiễm Hàm lượng cortisol cá ô nhiễm 0,18 Pair mgPb/L ngày thứ 20 – Hàm lượng -4,4333 cortisol cá ngày 10 ngưng ô nhiễm Hàm lượng cortisol cá ô nhiễm 0,33 Pair mgPb/L ngày thứ 20 – Hàm lượng -2,4167 cortisol cá ngày 10 ngưng ô nhiễm 193 ... các nghiên cứu về tích luỹ và đào thải kim loại nặng lên cá Điêu hồng, chưa có công trình khoa học nghiên cứu ảnh hưởng kim loại nặng đến thành phần sinh hoá cá Điêu hồng Năm 2016,... phát triển cá Điêu hồng sống nước ô nhiễm kim loại nặng (Cd, Pb, As), tìm quy luật phân bố, tích luỹ và khả đào thải kim loại nặng, ảnh hưởng kim loại nặng đến hàm lượng cortisol huyết... - Độ lặp lại thí nghiệm là (n = 3) 2.2.3 Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ Cd, Pb và As nước đến cá Điêu hồng 2.2.3.1 Nghiên cứu tích lũy Cd, Pb, As cá Điêu hồng Theo dõi thay đổi hàm lượng Cd,