Bài viết Đặc điểm biểu hiện của dấu ấn miễn dịch Glypican-3 trong ung thư biểu mô tế bào gan trình bày khảo sát đặc điểm biểu hiện của Glypican-3 trên mẫu mô bệnh phẩm ung thư biểu mô tế bào gan và mối liên quan với các đặc điểm lâm sàng, giải phẫu bệnh.
HỘI THẢO KHOA HỌC GIẢI PHẪU BỆNH – TẾ BÀO BỆNH HỌC VIỆT NAM LẦN THỨ 10 ĐẶC ĐIỂM BIỂU HIỆN CỦA DẤU ẤN MIỄN DỊCH GLYPICAN-3 TRONG UNG THƯ BIỂU MÔ TẾ BÀO GAN Lê Ngọc Diệu Thảo1, Phạm Quang Thơng1, Hồng Văn Thịnh1, Lê Minh Huy2 TĨM TẮT 47 Ung thư gan thuộc nhóm ung thư thường gặp giới, nguyên nhân gây tử vong hàng đầu nhóm bệnh u gây Mặc dù có nhiều bước tiến chẩn đốn điều trị, tiên lượng bệnh xấu Dấu ấn Glypican-3 đánh giá có vai trị chẩn đốn ung thư biểu mô tế bào gan Mục tiêu: Khảo sát đặc điểm biểu Glypican-3 mẫu mô bệnh phẩm ung thư biểu mô tế bào gan mối liên quan với đặc điểm lâm sàng, giải phẫu bệnh Đối tượng phương pháp: Nghiên cứu hồi cứu cắt ngang mô tả 132 trường hợp ung thư biểu mơ tế bào gan chẩn đốn sau phẫu thuật cắt gan phương pháp nhuộm hóa mơ miễn dịch bệnh viện Chợ Rẫy Kết quả: Glypican-3 biểu 92/132 (69,7%) trường hợp ung thư biểu mô tế bào gan Có mối liên quan biểu Glypican-3 nhóm ung thư biểu mơ tế bào gan có độ biệt hóa kém, có nồng độ AFP huyết cao ≥ 400ng/ml so với nhóm cịn lại Kết luận: Glypican-3 dấu ấn miễn dịch có tỷ lệ biểu cao tế bào ung thư biểu mô tế Khoa Giải phẫu bệnh, Bệnh viện Chợ Rẫy Bộ môn Mô phôi-Giải phẫu bệnh, Trường Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh Chịu trách nhiệm chính: Lê Ngọc Diệu Thảo Email: thaolengocdieu@gmail.com Ngày nhận bài: 30.09.2022 Ngày phản biện khoa học: 10.10.2022 Ngày duyệt 24.10.2022 330 bào gan thường biểu ung thư biểu mơ tế bào gan có nồng độ AFP huyết cao; độ biệt hóa Từ khóa: ung thư biểu mơ tế bào gan, Glypican-3, hóa mơ miễn dịch SUMMARY EXPRESSION PROFILE OF GLYPICAN-3 IN HEPATOCELLULAR CARCINOMA Background: Hepatocellular carcinoma (HCC) is the most common form of liver cancer, which is the most prevalent cancer worldwide There are several treatment options available for HCC the prognosis may still be poor Glypican-3 (GPC3) has been suggested as a diagnostic and prognostic biomarker for postoperative survival Objectives: This study aimed to determine GPC3 expression rate in HCC patients Materials and methods: A retrospective cross-sectional study based on 132 cases of hepatocellular carcinoma at Cho Ray Hospital Surgically resected tissues from 132 HCC were collected and stained for GPC3 by immunohistochemistry Results: Glypican-3 was expressed in 92/132 hepatocellular carcinoma patients (69,7%) GPC3 expression was more frequently observed in poorly differentiated HCC, higher AFP levels ≥ 400ng/ml than GPC3-negative patients, the difference in the frequency being statistically significant Conclusions: Glypican-3 expression was highly prevalent in hepatocellular carcinoma TẠP CHÍ Y HỌC VIỆT NAM TẬP 521 - THÁNG 12 - SỐ ĐẶC BIỆT - 2022 patients and more frequent in hepatocellular carcinoma with in poorly differentiated hepatocellular carcinoma, higher AFP levels Keywords: Hepatocellular carcinoma, glypican-3, immunohistochemistry I ĐẶT VẤN ĐỀ Ung thư gan nguyên phát nằm nhóm ung thư thường gặp giới Trong ung thư biểu mơ tế bào gan (UTBMTBG) loại ung thư nguyên phát thường gặp gan Tỷ lệ sống năm sau điều trị thấp khoảng 17%-69%, tỷ lệ tái phát 77-100%[2, 9] Tiên lượng bệnh nhân UTBMTBG phụ thuộc vào nhiều yếu tố khác yếu tố dịch tễ, nguyên nhân sinh bệnh, yếu tố liên quan đến đặc điểm giải phẫu bệnh khối u, chức phần gan lại khả đáp ứng điều trị bệnh nhân Gen quy định biểu Glypican-3 (GPC3) nằm nhiễm sắc thể giới tính (Xp26), mã hóa protein có trọng lượng 70 kDa gồm 580 axít amin Trong q trình phát triển phơi, chức sinh học GPC3 gồm có điều hịa âm tính tăng trưởng tế bào điều biến biệt hóa tế bào tạo hình thơng qua liên kết với protein tín hiệu Wnt, Hedgehog yếu tố tăng trưởng FGF thông qua chuỗi bên HS Việc kích hoạt đường tín hiệu Wnt đường phân tử có liên quan đến phát triển UTBMTBG biết đến nhiều GPC3 chứng minh có tương tác với yếu tố tăng trưởng, hoạt động đồng thụ thể điều chỉnh hoạt động yếu tố tăng trưởng thông qua chuỗi HS cuối kích thích tăng trưởng tế bào Tác giả Akutsu [1] báo cáo làm nhiễu lượng nhỏ RNA GPC3 dẫn đến giảm điều biến loạt yếu tố tăng trưởng mức độ RNA protein UTBMTBG Các nghiên cứu gần cho thấy quan người trưởng thành bình thường khơng biểu GPC3, mRNA protein GPC3 tái xuất suốt q trình chuyển dạng ác tính Năm 1997, tác giả Hsu [6] phát mRNA GPC3 trường hợp ung thư gan lại khơng có mơ gan bình thường kế cận tổn thương gan lành tính Ở cấp độ protein, tác giả Capurro phát GPC3 biểu 72% bệnh nhân UTBMTBG (21/29) phương pháp nhuộm hóa mơ miễn dịch, khơng biểu GPC3 người có gan bình thường hay bệnh gan lành tính (0/38) [3] Các nghiên cứu cho thấy trường hợp bệnh có biểu GPC3 dự hậu xấu hơn, tỷ lệ sống cịn năm thấp hẳn nhóm khơng biểu GPC3 Các nghiên cứu giới xác định vai trò dấu ấn GPC3 chẩn đốn UTBMTBG với tổn thương gan lành tính, vai trò GPC3 dấu ấn có liên quan đến tiên lượng xấu trường hợp UTBMTBG Chúng thực đề tài nhằm khảo sát đặc điểm biểu vai trò Glypican-3 bệnh nhân UTBMTBG Việt Nam II ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Đối tượng nghiên cứu 132 trường hợp chẩn đoán UTBMTBG khoa Giải phẫu bệnh, bệnh viện Chợ Rẫy từ tháng 01/2017 đến 08/2017 Tiêu chuẩn chọn lựa Các mẫu bệnh phẩm phẫu thuật xử lý vùi nến, chẩn đoán xác định UTBMTBG qua tiêu nhuộm HE thường qui 331 HỘI THẢO KHOA HỌC GIẢI PHẪU BỆNH – TẾ BÀO BỆNH HỌC VIỆT NAM LẦN THỨ 10 Người bệnh có hồ sơ bệnh án đầy đủ gồm: Xét nghiệm AFP huyết trước phẫu thuật, xét nghiệm Anti HCV, HBsAg Kết hình ảnh học (CT scan/ MRI) trước phẫu thuật: có số lượng u có đo kích thước u Tiêu chuẩn loại trừ Bệnh phẩm bệnh nhân ung thư đa quan Khối mơ vùi nến khơng cịn u để đánh giá bị hư hỏng, không thực phương pháp nhuộm HE hóa mơ miễn dịch Phương pháp nghiên cứu Nghiên cứu hồi cứu cắt ngang mô tả Các biến số nghiên cứu Ghi nhận từ hồ sơ bệnh án thơng tin: tên, tuổi, giới tính; nồng độ AFP huyết trước phẫu thuật; tình trạng nhiễm viêm gan siêu vi (Anti HCV, HBsAg) Quy trình nghiên cứu Trích lọc liệu BN đến khám bệnh viện Chợ Rẫy khoảng thời gian 01/2017 đến 08/2017, thỏa tiêu chí chọn mẫu Thu thập mẫu vùi nến/ tiêu nhuộm HE và/hoặc tiêu hóa mơ miễn dịch bệnh nhân Kiểm tra mẫu mô vùi nến, loại bỏ mẫu không đạt yêu cầu Tiến hành nhuộm hóa mơ miễn dịch dấu ấn GPC3 mẫu vùi nến máy nhuộm tự động Đọc tiêu nhuộm HE kết hợp tiêu hóa mơ miễn dịch Độ biệt hóa UTBMTBG đánh giá theo Tổ chức y tế giới (2010) Độ mô học đánh giá theo tác giả Edmondson-Steiner Đánh giá biểu GPC3 tế bào u dựa theo nghiên cứu tác giả Joen [7], 332 dựa vào tỷ lệ tế bào u biểu với dấu ấn miễn dịch: tế bào u không bắt màu nâu 50% tế bào u bắt màu Kiểu hình biểu tế bào u: bắt màu nâu màng tế bào, bào tương vừa bắt màu nâu màng tế bào bào tương Điền thông tin thu thập vào mẫu phiếu thu thập liệu Dữ liệu thơ quản lý mã hóa phần mềm Microsoft Excel Dữ liệu sau mã hóa xử lý phần mềm thống kê SPSS, phiên 20 Y đức nghiên cứu Nghiên cứu hội đồng y đức trường Đại Học Y Dược Tp Hồ Chí Minh chấp thuận theo định số 69/ĐHYDHĐĐĐ ngày 12/03/2019 III KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU Biểu GPC3 tế bào u Trong 132 trường hợp UTBMTBG nhuộm dấu ấn GPC3, kết cho thấy 92/132 (69,7%) trường hợp có biểu dương tính với GPC3 tế bào gan ung thư Trong 92 trường hợp dương tính tế bào u, số trường hợp có tế bào u dương tính 50% chiếm tỷ lệ cao (44,7%) Số trường hợp có 5-50% tế bào u dương tính chiếm tỷ lệ 25% Biểu GPC3 mô gan xung quanh u Chúng khảo sát biểu GPC3 mô gan xung quanh khối u Kết cho thấy: 0/74 trường hợp mô gan lành biểu với GPC3, 0/33 trường hợp nghịch sản độ thấp biểu với GPC3 3/25 (12%) trường hợp nốt nghịch sản độ cao biểu GPC3 TẠP CHÍ Y HỌC VIỆT NAM TẬP 521 - THÁNG 12 - SỐ ĐẶC BIỆT - 2022 B C D Hình 1: Sự biểu Glypican-3 tế bào u UTBMTBG A Tế bào u biểu GPC3 bắt màu nâu bào tương màng tế bào với tỷ lệ 50% (Tiêu D11024, x400) B Tế bào u biểu GPC3 bắt màu nâu khoảng 5%-50% Mũi tên: đám tế bào u biểu GPC3 (*): tế bào u không biểu GPC3 (Tiêu D3404, x200) C Tế bào u UTBMTBG không biểu GPC3 (Tiêu D394, x200) D Tế bào u biểu GPC3 bắt màu nâu (*): tế bào gan lành tính khơng biểu GPC3 (Tiêu D9604, x400) Bảng 1: Bảng số liệu nghiên cứu Glypican-3 Âm tính (n=40) Dương tính (n=92) p Dịch tễ Tuổi 58,3 (±10,49) 54,99 (±9,79) Giới tính Nam 37 (92,5%) 78 (84,7%) 0,075 Tình trạng nhiễm VGSV HBV 27 (67,5%) 69 (75%) 0,089 HCV (17,5%) 13 (14,1%) 0,09 AFP huyết thanh≥400ng/mL (20%) 45 (48,9%) 0,02 Đặc điểm đại thể 333 HỘI THẢO KHOA HỌC GIẢI PHẪU BỆNH – TẾ BÀO BỆNH HỌC VIỆT NAM LẦN THỨ 10 Kích thước u≥5cm Số lượng u≥2 21 (52,5%) 64 (69,6%) 13 (32,5%) 28 (30,4%) Cấu trúc mô học Bè 15 (37,5%) 38 (41,3%) Giả tuyến (17,5%) 12 (13%) Đặc (22,5%) 31 (33,7%) Xơ hóa (2,5%) (0%) Hỗn hợp (20%) 11 (12%) Dạng tế bào Cổ điển 22 (55%) 47 (51,1%) Đa dạng (15%) 16 (17,4%) Tế bào sáng (15%) 13 (14,1%) Tế bào nhân kính mờ (5%) (9,8%) Tế bào biến đổi mỡ (7,5%) (4,3%) Tế bào hình thoi (0%) (1,1%) Hỗn hợp (2,5%) (2,2%) Phân loại độ mô học theo tác giả Edmondson-Steiner I (2,5%) (0%) II 18 (45%) 21 (22,8%) III 16 (40%) 50 (54,3%) IV (12,5%) 21 (22,8%) Phân loại độ biệt hóa theo WHO Biệt hóa cao (2,5%) (0%) Biệt hóa trung bình 25 (62,5%) 31 (33,7%) Biệt hóa dạng khơng 14 (35%) 61 (66,3%) biệt hóa IV BÀN LUẬN Nghiên cứu 132 trường hợp UTBMTBG, tuổi trung bình dân số nghiên cứu 55,99 tuổi Độ tuổi mắc bệnh UTBMTBG thay đổi từ 32 tuổi đến 80 tuổi Nhóm tuổi thường gặp 50-59 tuổi Trong 132 trường hợp UTBMTBG có 115 nam 17 nữ, tỷ lệ nam:nữ 7,8:1 (115:17) Ở hai giới, nhóm tuổi mắc bệnh thường gặp khoảng 50-59 tuổi Theo số nghiên cứu, tác giả cho nam giới tiếp xúc với nhiều yếu tố nguy tác động nữ giới sử dụng rượu bia, hút thuốc 334 0,076 0,814 0,259 0,936 0,022 0,001 lá, tình trạng viêm gan siêu vi, xơ gan Tỷ lệ dương tính Glypican-3 Nghiên cứu nhằm khảo sát tỷ lệ biểu GPC3 UTBMTBG mối liên quan biểu GPC3 đặc điểm lâm sàng giải phẫu bệnh UTBMTBG Kết cho thấy GPC3 biểu dương tính tế bào u 69,7% (92/132) trường hợp UTBMTBG, khoảng tỷ lệ dương tính báo nghiên cứu trước 52,5%-100% [1, 4, 7-9] Nghiên cứu cho thấy có 3/25 (12%) trường hợp nốt gan nghịch sản độ cao biểu với TẠP CHÍ Y HỌC VIỆT NAM TẬP 521 - THÁNG 12 - SỐ ĐẶC BIỆT - 2022 GPC3, hoàn tồn khơng biểu mơ gan lành tính Theo y văn, tỷ lệ biểu GPC3 thay đổi từ 6%-75% nốt nghịch sản độ cao, từ 0%-25% nốt nghịch sản độ thấp Nghiên cứu Yaumachi cho thấy GPC3 biểu 2/8 (25%) trường hợp nốt gan nghịch sản độ thấp, 6/8 (75%) trường hợp nốt gan nghịch sản độ cao Ngược lại, tỷ lệ biểu GPC3 nốt gan nghịch sản theo tác giả DiTommason [5] thấp: 0/15 (0%) trường hợp nốt gan nghịch sản độ thấp, 2/22 (9,1%) trường hợp nốt gan nghịch sản độ cao Tác giả Coston [4] ghi nhận 14% trường hợp tăng sản tế bào gan dạng nốt khu trú biểu GPC3 Gợi ý biểu GPC3 tế bào u dấu chứng đáng tin cậy giúp phân biệt CTBG tổn thương gan lành tính Gần đây, việc kết hợp ba dấu ấn GPC3, protein sốc nhiệt 70 (HS70) glutamine synthetase (GS) giúp ích chẩn đốn phân biệt UTBMTBG với tổn thương gan không tân sinh (độ nhạy đặc hiệu đến 72% 100%) [5] Nghiên cứu chúng tơi đánh giá GPC3 dương tính dựa tỷ lệ tế bào u bắt màu thuốc nhuộm tiêu nhuộm hóa mơ miễn dịch Với ngưỡng giá trị đánh giá biểu GPC3 mô u, tỷ lệ biểu GPC3 nghiên cứu tương đồng với tác giả Joen [7]và tác giả Wang [8] Chúng chọn tỷ lệ >5% tế bào u bắt màu thuốc nhuộm GPC3 ngưỡng đánh giá GPC3 dương tính tiêu nhuộm hóa mơ miễn dịch theo nghiên cứu trước Một số nghiên cứu tập trung vào phân tích kiểu hình biểu GPC3 Ví dụ, cường độ bắt màu thuốc nhuộm tế bào u, vị trí bắt màu thuốc nhuộm tế bào u, kết hợp tỷ lệ tế bào u bắt màu vị trí bắt màu tế bào u Tác giả Yorita cho thấy việc đánh giá kiểu hình biểu GPC3 tế bào u giúp ích cho việc tiên lượng bệnh nhân UTBMTBG Có khác biệt tỷ lệ dương tính nghiên cứu giới Điều nhà nghiên cứu lý giải khác chọn giá trị biểu dương tính GPC3 sử dụng nghiên cứu khác nhau, loại kháng thể sử dụng nghiên cứu, khác biệt yếu tố dịch tễ khác biệt chế bệnh sinh UTBMTBG vùng địa lý khác nhau, cỡ mẫu nghiên cứu, loại mô học, giai đoạn bệnh Các trường hợp UTBMTBG có biểu GPC3 dương tính chia thành mức độ biểu theo kiểu bán định lượng (hình 1) Chúng tơi tìm thấy mối liên quan có ý nghĩa thống kê trường hợp UTBMTBG có GPC3 dương tính với nhóm có nồng độ AFP huyết ≥ 400ng/ml Nồng độ AFP huyết tăng 400 ng/ml giá trị ngưỡng thường sử dụng phác đồ chẩn đoán UTBMTBG Nếu dựa vào AFP huyết ≥ 400 ng/ml, nghiên cứu phát khoảng 53 trường hợp UTBMTBG Các nghiên cứu trước cho thấy việc kết hợp AFP huyết GPC3 huyết giúp cải thiện tỷ lệ chẩn đoán UTBMTBG giai đoạn sớm Ở bệnh nhân ung thư gan, mức độ tăng GPC3 huyết cao AFP huyết (88% so với 55%), đặc biệt ở bệnh nhân UTBMTBG có khối u