Bài viết Nghiên cứu nâng cao khả năng sinh cellulase của một số chủng nấm sợi bằng xử lý chiếu xạ gamma bước đầu khảo sát ảnh hưởng của bức xạ gamma tới tỷ lệ sống sót và khả năng sinh cellulase của hai chủng nấm Aspergillus spp. và Trichoderma spp.
Tuyển tập báo cáo Hội nghị Khoa học Công nghệ hạt nhân toàn quốc lần thứ 14 Proceedings of Vietnam conference on nuclear science and technology VINANST-14 NGHIÊN CỨU NÂNG CAO KHẢ NĂNG SINH CELLULASE CỦA MỘT SỐ CHỦNG NẤM SỢI BẰNG XỬ LÝ CHIẾU XẠ GAMMA ENHANCEMENT OF CELLULASE PRODUCTION OF SOME FILAMENTOUS FUNGI BY GAMMA IRRADIATION NGUYỄN THỊ THƠM, HOÀNG ĐĂNG SÁNG, TRẦN XUÂN AN, NGUYỄN VĂN BÍNH, HỒNG PHƯƠNG THẢO1, TRẦN MINH QUỲNH, TRẦN BĂNG DIỆP Trung tâm chiếu xạ Hà Nội, km 12, Đường 32, Minh Khai - Bắc Từ Liêm - Hà Nội Email:tranfbangdiepj@yahoo.com Tóm Tắt: Dịch bào tử Aspergillus sp TTG Trichoderma sp VTCC xử lý chiếu xạ dải liều 100-2500 Gy nguồn gamma Co-60 Trung tâm Chiếu xạ Hà Nội Kết cho thấy tỷ lệ bào tử nấm sống sót giảm theo liều chiếu Liều gây chết 90% số lượng bào tử nấm (D10) hai chủng khoảng 400 Gy Số lượng bào tử sống sót Aspergillus sp TTG Trichoderma sp VTCC giảm tới 6,5-7,5 đơn vị Log so với đối chứng liều 2500 Gy Sau chiếu xạ, tiến hành sàng lọc mơi trường PDA có bổ sung CMC (carboxymethyl cellulose) với thị Congo đỏ thu hàng trăm khuẩn lạc có khả thủy phân cellulose (HC) lớn chủng ban đầu Trong đó, khuẩn lạc thể khả thủy phân cellulose cao với giá trị HC tối đa thu khoảng liều 700-1500 Gy Đặc biệt, thể đột biến tiềm bao gồm thể đột biến từ Aspergillus (TTG-700, TTG-1000 TTG-1200) thể đột biến từ Trichoderma (VTCC1000) có hoạt tính CMCase tăng lần (2,25-2,48 lần) hoạt tính FPase tăng 1,8 lần (1,87-2,21 lần) so với chủng gốc Khả sinh CMCase FPase thể đột biến trì ổn định sau hệ liên tiếp, đồng thời khơng có khác biệt tốc độ sinh trưởng hình thái hệ Kết nghiên cứu chứng cho thấy chiếu xạ gamma phương pháp gây tạo đột biến tiềm giúp tăng cường khả sinh cellulase chủng nấm sợi Từ khóa: Aspergillus, bào tử, cellulase, chiếu xa gamma, đột biến, Trichoderma Abstract: The spore suspensions of Aspergillus sp TTG and Trichoderma sp VTCC were irradiated at dose ranging 02500 Gy under gamma Cobalt-60 source at Ha Noi Irradiation Center The results showed that the survival rate of fungi decreases with the increasing dose The radiation dose required to kill 90% of the total number of fungal spores (D10) of these strains was about 400 Gy The number of survival spore decreased by 6.5-7.5 Log unit at the dose of 2500 Gy By screening in PDA medium with the addition of CMC (carboxymethyl cellulose) and Congo red as an indicator of cellulose degradation, hundreds of colonies with higher hydrolysis capacity’s value (HC) compared to the initial strain were observed after irradiation The colonies expressed the highest cellulose hydrolysis capacity with maximum HC value were obtained at dose range of 700-1500 Gy It is important to notice the potential mutants including mutants of Aspergillus (TTG-700, TTG-1000 and TTG-1200) and mutants of Trichoderma (VTCC-1000) demonstrated the higher CMCase and FPase secretion (1.78 – 2.48 times) and (1.87 – 2.21 times), compared to the wild types After generations, the enzyme productions of the mutants were fairly stable and there were no differences in growth rates and morphology of each generation The result of this study is an evidence for using gamma irradiation to improve cellulase production in filamentous fungi Key words: Aspergillus, cellulase, gamma irradiation, mutant, Trichoderma, spore MỞ ĐẦU Cellulose hợp chất cao phân tử trùng hợp (polyme hóa) từ gốc β-D-glucose cầu nối β-1-4-glucoside nguồn cacbon tái tạo dồi giới [1, 2] Cellulose chuyển đổi thành glucose - sản phẩm đa cơng dụng nhờ hệ enzym cellulase có hoạt tính sinh học cao [3] Trong tự nhiên, trình phân hủy hiếu khí cellulose chủ yếu nấm sợi thực Phức hợp cellulase tiết vi sinh vật bao gồm ba loại cellulase ngoại bào hòa tan: 1-4- β-endoglucanase, 1-4β-exoglucanase β-glucosidase, chúng hoạt động hiệp đồng vùng vơ định hình tinh thể cellulose trình chuyển đổi thành glucose [4, 5] Aspergillus spp Trichoderma spp hai loài nấm sợi có mặt hầu hết loại đất nhiều mơi trường tự nhiên Do có khả tạo cellulase phân hủy hiệu cellulose đồng thời nuôi cấy dễ dàng, không tốn nên chúng quan tâm nghiên cứu rộng rãi Sinh khối có chứa enzyme ngoại bào Aspergillus spp Trichoderma spp tiết dễ dàng tách khỏi dịch lọc ni cấy Nhờ đặc điểm mà chúng có lợi so với vi khuẩn trình sản xuất cellulase cơng nghiệp [6] Bức xạ gamma gây đột biến cách làm đứt gãy ADN, thay đổi cấu trúc ADN hình thành hợp chất có hoạt tính khơng ổn định làm biến đổi ADN Ngoài ra, gây đột biến xạ có nhiều ưu điểm trội phổ đột biến rộng, tần suất đột biến cao… làm tăng khả chọn 521 Tiểu ban D3-D4: Ứng dụng kỹ thuật hạt nhân nông nghiệp, ứng dụng công nghệ xạ Section D3-D4: Application of nuclear techniques in agriculture, radiation technology application đột biến mong muốn rút ngắn thời gian sàng lọc [7] Để cải thiện khả sinh cellulase Aspergillus spp Trichoderma spp., có nhiều nghiên cứu tập trung vào việc gây đột biến chủng nấm tia gamma Nghiên cứu Vu cộng cho thấy khả sinh cellulase Aspergillus sp cải thiện xử lý chiếu xạ gamma hai lần lặp lại [8] Chiếu xạ gamma liều 2000 Gy làm tăng khả sinh carboxymethyl cellulase (CMCase) cellulase thủy phân chất giấy lọc (FPase) Aspergillus niger [9] Shahbazi cộng nhận thấy Trichoderma reesei chiếu tia gamma liều 250 Gy sinh lượng cellulase cao so với chủng ban đầu thể đột biến chiếu xạ UV Kết định lượng enzyme cho thấy hoạt tính enzyme thành phần phức hệ cellulase đột biến tạo chiếu xạ gamma tăng khoảng 1,21-1,99 lần [10] Các thể đột biến Trichoderma reesei chiếu tia gamma liều 2000 Gy tiết lượng cellulase nhiều gấp 1,8 lần so với nấm không xử lý [11] Với mục đích sử dụng xạ gamma để tạo chủng nấm sợi đột biến có khả sinh cellulase cao, nghiên cứu bước đầu khảo sát ảnh hưởng xạ gamma tới tỷ lệ sống sót khả sinh cellulase hai chủng nấm Aspergillus spp Trichoderma spp II NỘI DUNG II.1 Đối tượng phương pháp II.1.1 Vật liệu Chủng Aspergillus sp TTG Trichoderma sp VTCC có khả sinh tổng hợp cellulase ngoại bào cao cung cấp Bảo tàng Giống chuẩn vi sinh vật (VTCC), Viện Vi sinh Công nghệ sinh học, Đại học Quốc gia Hà Nội Môi trường nuôi cấy vi sinh vật: PDA (Potato Dextro Agar) hãng Diffco cung cấp Các hóa chất: CMC (carboxymethyl cellulose) (Sigma), Congo Red (Sigma), Agar (Hạ long)… đảm bảo độ phân tích Mơi trường ni cấy lỏng bao gồm: g KH2PO4; 13,6 g (NH4)2SO4; 0,8 g CaCl2; 0,6 g MgSO4; 0,1 g pepton; 0,1 g cao nấm men; mg FeSO4.H2O; 0,32 mg MnSO4.2H2O; 0,28 mg ZnSO4.7H2O; 0,4 mg CoCl2.6H2O; 0,25 mg CuSO4.5H2O; g CMC dẫn nước tới 1000 ml II.1.2 Phương pháp II.1.2.1 Bảo quản giữ giống Chủng giống bảo quản theo phương pháp cấy truyền ống thạch nghiêng chứa môi trường PDA, nuôi tủ ấm 28oC 72 bảo quản tối đa 30 ngày 4oC trước cấy truyền đợt II.1.2.2.Chuẩn bị dung dịch bào tử Dung dịch bào tử chuẩn bị theo phương pháp mô tả Darabzadeh cộng (2018) [12] Chủng Aspergillus sp TTG Trichoderma sp VTCC nuối cấy điểm đĩa petri chứa môi trường PDA 28oC Sau ngày, tiến hành gạt toàn số bào tử mọc bề mặt đĩa vào 100 ml dung dịch NaCl 0,9% có bổ sung Tween 80 theo tỷ lệ 1/99 Dung dịch bào tử pha loãng cho mật độ tế bào khoảng 108-109 CFU/ml II.1.2.3 Xử lý chiếu xạ Các ống nghiệm vơ trùng có chứa 10 ml dung dịch bào tử nấm đem xử lý chiếu xạ nguồn gamma Co-60 dải liều 100-2500 Gy (3 ống nghiệm lặp lại cho liều) Liều Gy coi mẫu đối chứng Liều kế Gammachrome YR sử dụng để đo liều hấp thụ II.1.2.4 Xác định số lượng bào tử sống sót sau chiếu xạ Dung dịch bào tử (trước sau chiếu xạ) pha loãng theo dãy thập phân 0,1 ml mẫu độ pha lỗng thích hợp cấy vào đĩa petri chứa môi trường PDA (3 đĩa petri/độ pha loãng) Sử dụng 522 Tuyển tập báo cáo Hội nghị Khoa học Cơng nghệ hạt nhân tồn quốc lần thứ 14 Proceedings of Vietnam conference on nuclear science and technology VINANST-14 que gạt vô trùng dàn dịch cấy bề mặt thạch Tiến hành đếm số khuẩn lạc sau 72 ni cấy 28oC tính số lượng bào tử (Mi) ml mẫu theo cơng thức: Mi (CFU/ml) = Trong đó: Ai số khuẩn lạc trung bình/đĩa; Di độ pha lỗng V thể tích dịch bào tử cấy vào đĩa (ml) II.1.2.5 Sàng lọc đột biến sinh cellulase cao Khả phân hủy cellulose Aspergillus sp TTG Trichoderma sp VTCC xác định định tính phương pháp khuếch tán đĩa thạch PDA có chứa 1% chất CMC, 0,02% chất thị Congo đỏ streptomycin (50 mg/l) [6] Sau chiếu xạ, dung dịch bào tử nấm liều khác cấy trải lên mơi trường PDA có bổ sung CMC congo đỏ Đĩa sau cấy ủ 28 oC 24 Sau 24 nuôi cấy, nhiệt độ ủ nâng lên 37oC đến ngày nhằm hạn chế lan rộng khuẩn lạc thu vòng phân giải CMC tối đa Khả thủy phân cellulose đánh giá thông qua số HC (Hydrolysis Capacity) theo công thức HC = Những khuẩn lạc có số HC lớn 10% so với số HC chủng coi khuẩn lạc đột biến có khả sinh cellulase cao II.1.2.6 Định lượng enzym Hoạt độ cellulase chủng nấm sợi sinh q trình ni cấy định lượng theo TCVN 12104:2018 [13] phương pháp DNS (axit 3,5 dinitrosalicylic) Trong nghiên cứu này, đánh giá hai loại hoạt độ enzyme endoglucanase - CMCase (thủy phân chất CMC) hoạt độ enzyme tổng số-FPase (thủy phân giấy lọc Whatman số 1) II.2 Kết thảo luận II.2.1 Ảnh hưởng xạ gamma đến phát triển nấm sợi Tác động xạ gamma tới phát triển của hai chủng nấm sợi xác định thơng qua số khuẩn lạc sống sót dung dịch bào tử chủng nấm xử lý chiếu xạ dải liều từ 100 đến 2500 Gy Mối tương quan Logarit số lượng bào tử nấm sống sót (CFU/ml) liều xạ biểu diễn Hình Các kết thu cho thấy, khả sống sót chủng nấm bị ảnh hưởng đáng kể xạ gamma, số lượng bào tử sống sót giảm tăng liều xạ Số lượng bào tử giảm mạnh khoảng liều từ 100 đến 1200 Gy, liều cao số lượng bào tử có chênh lệch hơn.Tuy nhiên, kết không cho thấy khác biệt đáng kể tác động xạ Aspergillus sp TTG Trichoderma sp.VTTC Đánh giá tác động xạ gamma Aspergillus niger, Ottenheim cộng nhận thấy D10 (liều gây chết 90% số lượng bào tử nấm) 400 Gy [14] kết tương tự với giá trị D10 số chủng Aspergillus báo cáo tài liệu khác [15, 16] Nghiên cứu ảnh hưởng chiếu xạ gamma tới đặc điểm hình thái tính đối kháng T viride với nấm gây bệnh M phaseona, Baharvand cộng nhận thấy tỷ lệ sống sót T viride 9,7% liều chiếu 400 Gy nhóm tác giả không quan sát nảy mầm bào tử nấm liều 450 Gy [17] Khi xác định liều khử nhiễm số loại nấm gây hại di sản văn hóa loại vật liệu có nguồn gốc tự nhiên (giấy, da thuộc, đồ dệt ), Laura cộng nhận thấy D10 T viride nằm khoảng từ 450 đến 500 Gy [18] Trong nghiên cứu chúng tôi, D10 hai chủng Aspergillus Trichoderma vào khoảng 400 Gy Tỷ lệ sống sót Aspergillus sp TTG Trichoderma sp VTCC liều 500 Gy tương ứng 0,46% 0,78%, số lượng bào tử sống giảm 6,5-7,5 đơn vị Log liều 2500 Gy Những khác biệt kết nghiên cứu nêu giải thích cho yếu tố chủng giống, giai đoạn 523 Tiểu ban D3-D4: Ứng dụng kỹ thuật hạt nhân nông nghiệp, ứng dụng công nghệ xạ Section D3-D4: Application of nuclear techniques in agriculture, radiation technology application sinh trưởng, nhiệt độ, chất mơi trường dạng khí, thành phần hóa học mơi trường ni cấy… điều kiện sinh lý khả tự sửa chữa tế bào nấm ảnh hưởng đến tồn chúng sau chiếu xạ Hình Mối tương quan số lượng bào tử Aspergillus sp TTG Trichoderma sp VTCC sống sót dịch bào tử liều xạ II.2.2 Nâng cao khả sinh cellulase chủng nấm sợi xử lý chiếu xạ II.2.2.1 Khả phân hủy cellulose (giá trị HC) Sau chiếu xạ, khuẩn lạc có số HC lớn 10% so với số HC chủng coi khuẩn lạc kháng xạ có khả sinh cellulase cao Kết cho thấy, khuẩn lạc sinh celluase xuất tất liều chiếu xạ, đồng thời số lượng khuẩn lạc có số HC cao chủng khác liều chiếu xạ Khả phân hủy cellulose khuẩn lạc Aspergillus Trichoderma xử lý chiếu xạ liều khác trình bày Bảng Rõ ràng, hai chủng nấm, khoảng liều chiếu từ 700 đến 1500 Gy thu nhiều khuẩn lạc có số HC cao có số HC cao vượt trội so với liều xử lý lại Điều thể rõ giá trị HC trung bình Tại liều chiếu xạ chúng tơi thu khuẩn lạc có giá trị HC lớn A B Hình Các khuẩn lạc với vòng phân giải CMC bao quanh liều 1000 Gy mơi trường sàng lọc PDA có thị Congo đỏ (A- Các khuẩn lạc Aspergillus sp TTG; B- Các khuẩn lạc Trichoderma sp.VTCC) Bảng Khả phân hủy cellulose khuẩn lạc Aspergillus Trichoderma xử lý chiếu xạ liều khác Khả phân hủy cellulose (Giá trị HC) Liều xạ (Gy) Aspergillus sp TTG Trichoderma sp VTCC Thuần 1,82 1,74 300 2,01 ± 0,06 1,95 ± 0,10 524 Tuyển tập báo cáo Hội nghị Khoa học Cơng nghệ hạt nhân tồn quốc lần thứ 14 Proceedings of Vietnam conference on nuclear science and technology VINANST-14 500 2,06 ± 0,02 1,94 ± 0,05 700 2,17 ± 0,08 2,05 ± 0,09 1000 2,43 ± 0,12 2,21 ± 0,11 1200 2,39 ± 0,10 2,17 ± 0,09 1500 2,32 ± 0,04 2,06 ± 0,14 2000 2,11 ± 0,09 2,01 ± 0,07 2500 2,07 ± 0,10 1,95 ± 0,02 II.2.2.2 Hoạt độ enzyme Những khuẩn lạc có giá trị HC lớn 10% so với chủng nuôi cấy riêng rẽ để chọn khuẩn lạc có giá trị HC cao Sau trình sàng lọc này, thể đột biến tiềm bao gồm thể đột biến Aspergillus sp TTG (TTG-700, TTG-1000 TTG-1200) thể đột biến nấm Trichoderma sp VTCC (VTCC-1000) có giá trị HC cao lựa chọn từ hàng trăm khuẩn lạc chiếu xạ Vòng thủy phân CMC, hoạt độ CMCase FPase thể đột biến trình bày Hình Bảng Aspergillus sp TTG TTG-1000 Trichoderma sp VTCC VTCC-1000 Hình Vịng phân giải CMC chủng thể đột biến tiềm sau nuôi cấy 28 oC ngày ủ 37oC ngày Bảng Hoạt độ CMCase FPase thể đột biến tiềm CMCase Aspergillus sp TTG TTG-700 TTG-1000 TTG-1200 Trichoderma sp VTCC 1,324±0,041 2,979±0,123 3,137±0,051 3,071±0,114 1,107±0,042 VTCC-1000 2,753±0,091 2,48 Chủng nấm Aspergi llus spp Trichod erma spp FPase Tăng so với chủng (lần) 2,25 2,37 2,32 - Hoạt độ (U/ml) Hoạt độ (U/ml) Tăng so với chủng (lần) 0,254±0,011 0,503±0,016 0,561±0,014 0,521±0.009 0,195±0,007 1,98 2,21 2,05 - 0,365±0,010 1,87 Một số nghiên cứu cho thấy hiệu xạ tia gamma việc tạo đột biến sinh tổng hợp cellulase cao Aspergillus spp Trichoderma spp [8 - 11] Trong nghiên cứu này, số thể đột biến tiềm có hoạt tính CMCase tăng lần (2,25-2,48 lần) hoạt tính FPase tăng 1,8 lần (1,87-2,21 lần) so với chủng gốc sàng lọc khoảng liều 700-1500 Gy Đánh giá tính bền thể đột biến sau chiếu xạ việc cấy truyền liên tiếp đĩa PDA Sau hệ, hoạt độ CMCase FPase ổn định với hệ số biến động không 5%, đồng thời khơng có khác biệt tốc độ sinh trưởng hình thái hệ (số liệu khơng trình bày báo cáo này) 525 Tiểu ban D3-D4: Ứng dụng kỹ thuật hạt nhân nông nghiệp, ứng dụng công nghệ xạ Section D3-D4: Application of nuclear techniques in agriculture, radiation technology application III KẾT LUẬN Tỷ lệ sống sót hai chủng nấm sợi Aspergillus sp TTG Trichoderma sp VTCC giảm dần theo tăng dần liều chiếu D10 hai chủng nấm khoảng 400 Gy số lượng bào tử giảm 6,5-7,5 đơn vị Log liều 2500 Gy Khoảng liều 700-1500 Gy phù hợp để sàng lọc chủng sau chiếu xạ có khả sinh cellulase cao Sau chiếu xạ, sàng lọc 04 khuẩn lạc có khả sinh cellulase cao vượt trội Hoạt độ CMCase FPase khuẩn lạc cao chủng tương ứng 2,25-2,48 lần 1,872,21 lần ổn định sau hệ Các kết nghiên cứu cho thấy xạ gamma tác nhân hiệu việc nâng cao khả sinh cellulase chủng nấm sợi *Nghiên cứu thực từ nguồn kinh phí Bộ Khoa học Công nghệ Việt Nam cấp theo đề tài ĐTCB.01/ 18/TTCX TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Gardner KH, Blackwell J (1974) The structure of native cellulose Biopolymers 13: 1975-2001 [2] Jarvis M (2003) Cellulose stacks up Nature, 426 (6967): 611–612 [3] Gupta P, Samant K, Sahu A (2012) Isolation of cellulose- degrading bacteria and determination of their cellulolytic potential Int J Microbiol 6: 1-5 [4] Henrissat B (1994) Cellulases and their interaction with cellulose Cellulose 1: 169–196 [5] Wang FXJ, Chen S, Qiu W, Yu Z, Zhao H, Xing X, Li H (2011) Strain improvement for enhanced production of cellulase in Trichoderma viride Appl Biochem Microbiol 47 (1): 53-58 [6] Miklaszewska B, Macko D, Kłosowski G, Mikulski D (2016) Application of semi-quantitative and quantitative methods for the selection of cellulolytic filamentous fungi isolated from pulp mill materials Bio Technologia 97 (3): 169-178 [7] Hoe PCK, Rahim KA, Saud HM (2016) A review on microbial mutagenesis through gamma irradiation for agricultural applications Jurnal Sains Nuklear Malaysia 28(2): 20-29 [8] Vu VH, Pham TA, Kim (2009) Fungal strain improvement for cellulase production using repeated and sequential mutagenesis Mycobiol 37(4): 267-271 [9] Mostafa AA (2014) Effect of gamma irradiation on Aspergillus niger DNA and production of cellulase enzymes J American Sci 10(5):152-160 [10] Shahbazi S, Ispareh K, Karimi M, Askari H, Ebrahimi M A (2014) Gamma and UV radiation induced mutagenesis in Trichoderma reesei to enhance cellulases enzyme activity Intl J Farm & Alli Sci 3(5): 543-554 [11] Masao T, Noboru K, Isao K (1987) Effects of gamma-ray irradiation on cellulase secretion of Trichoderma reesei Ferment Technol 65 (6): 703-705 [12] Darabzadeh N, Hamidi-Esfahani Z, Hejazi P (2018) Improvement of cellulase production and its characteristics by inducing mutation on Trichoderma reesei 2414 under solid state fermentation on rice by-products Appl Food Biotechnol (1): 11-18 [13] TCVN 12104: 2018, Xác định hoạt độ xenlulaza vi sinh vật phân giải xenlulo, 2018 [14] Ottenheim C, Werner KA, Zimmermann W, Wu JC (2015) Improved endoxylanase production and colony morphology of Aspergillus niger DSM 26641 by γ-ray induced mutagenesis Biochem Engin J 94: 9-14 [15] Blank G and Corrigan D (1995) Comparision of resistance of fungal spore to gamma and electron beam radiation Int J Food Microbiol 26: 269-277 [16] Saleh YG, Mayo MS, Ahearn DG (1988) Resistance of some common fungito gamma irradiation Appl Environ Microbiol 54(8): 2134-2135 [17] Baharvad A, Shahbazi S, Afsharmanesh H, Ebrahimi MA, Askari H (2014) Investigation of gamma irradiation on morphological characteristics and antagonist potential of Trichoderma viride against M.phaseolina Int J Farm & Alli Sci: 1157-1164 [18] Laura T, Florina LZ, Mioara A, Mihaela E, Mihai C, Alexandru A, Mihalis C, Ovidui I, Rodica IS (2014) Radioresistance of biodegradation fungi and its importance in establishing the decontamination dose ICAMS 20145th International Conference on Advanced Materials and Systems 526 ... nhiều nghiên cứu tập trung vào việc gây đột biến chủng nấm tia gamma Nghiên cứu Vu cộng cho thấy khả sinh cellulase Aspergillus sp cải thiện xử lý chiếu xạ gamma hai lần lặp lại [8] Chiếu xạ gamma. .. chiếu tia gamma liều 2000 Gy tiết lượng cellulase nhiều gấp 1,8 lần so với nấm không xử lý [11] Với mục đích sử dụng xạ gamma để tạo chủng nấm sợi đột biến có khả sinh cellulase cao, nghiên cứu. .. Hình Mối tương quan số lượng bào tử Aspergillus sp TTG Trichoderma sp VTCC sống sót dịch bào tử liều xạ II.2.2 Nâng cao khả sinh cellulase chủng nấm sợi xử lý chiếu xạ II.2.2.1 Khả phân hủy cellulose