Bài viết Tác dụng bảo vệ phóng xạ của dịch chiết nấm đông trùng hạ thảo Cordyceps militaris đối với tế bào và DNA vi khuẩn Bacillus subtilis tập trung khảo sát ảnh hưởng của dịch chiết nấm C. militaris được nuôi cấy tại Trung tâm Chiếu xạ Hà Nội tới tế bào và DNA của chủng vi khuẩn B. subtilis B5 bị chiếu xạ.
Tiểu ban D3-D4: Ứng dụng kỹ thuật hạt nhân nông nghiệp, ứng dụng công nghệ xạ Section D3-D4: Application of nuclear techniques in agriculture, radiation technology application TÁC DỤNG BẢO VỆ PHĨNG XẠ CỦA DỊCH CHIẾT NẤM ĐƠNG TRÙNG HẠ THẢO Cordyceps militaris ĐỐI VỚI TẾ BÀO VÀ DNA VI KHUẨN Bacillus subtilis RADIOPROTECTIVE EFFECTS OF CORDYCEPS MILITARIS EXTRACTS ON CELLS AND DNA OF BACILLUS SUBTILIS TRẦN XUÂN AN, NGUYỄN THỊ THƠM, HỒNG ĐĂNG SÁNG, NGUYỄN VĂN BÍNH, TRẦN BĂNG DIỆP Trung tâm chiếu xạ Hà Nội, km 12, Đường 32, Minh Khai - Bắc Từ Liêm - Hà Nội Email: ank55b1@gmail.com Tóm tắt: Cordyceps militaris (C militaris) loại nấm giàu axit amin, giàu nguyên tố vi lượng, có hoạt chất chống oxy hóa cao coi chất bảo vệ phóng xạ tiềm Dịch chiết từ nấm C militaris phịng Nghiên cứu Cơng nghệ xạ Trung tâm Chiếu xạ Hà Nội phân lập, nuôi trồng sử dụng chất bảo vệ phóng xạ sử dụng tồn nghiên cứu Ảnh hưởng dịch chiết tới khả làm giảm mức độ tổn thương gây xạ tia gamma tế bào DNA vi khuẩn Bacillus subtilis (B Subtilis) B5 kết luận dựa khảo sát tỷ lệ sống sót tế bào vi khuẩn môi trường nuôi cấy NB có bổ sung dịch chiết nấm C militaris (CM) Ở khoảng liều 0-1000 Gy môi trường NB, số lượng tế bào sống sót giảm từ 10 xuống 106 Trong đó, mơi trường NB có bổ sung dịch chiết CM số lượng tế bào sống sót giảm hơn, từ 109 xuống 107 Để đánh giá mức độ biến đổi DNA vi khuẩn B subtilis sau chiếu xạ, phương pháp khuếch đại kết hợp giải trình tự gen 16S rRNA sử dụng Phân tích tin sinh với trình tự gen 16S rRNA cho thấy liều 300 Gy tỷ lệ biến đổi gen 16S rRNA giảm từ 0,36% xuống 0%, liều 700 Gy tỷ lệ biến đổi từ 1,49% giảm xuống 0% liều 1500 Gy từ 2,56% xuống 0,43% Các kết thu khẳng định tác dụng bảo vệ phóng xạ dịch chiết nấm C militaris tế bào DNA vi khuẩn B subtilis Từ khóa: Cordyceps militaris, Bacillus subtilis, chất bảo vệ phóng xạ Abstract: Cordyceps is an intracellular parasite fungus in the Ascomycota group Cordyceps militaris (C militaris) has currently attracted considerable research attention as a potential source of immune enhancement and anti-radiation, thanks to its high antioxidant activity The extract from Cordyceps militaris isolated and cultivated by the Radiation Technology Research Laboratory - Hanoi Irradiation Center was used as a radioprotector The effects of C militaris extract on reducing cell and DNA damages at irradiated B subtilis was estimated based on the survival rate of bacteria in the medium (NB) supplemented C militaris extract (CM) From 0Gy to 1000Gy, the survival cell count of the bacteria in NB medium decreased from 109 to 106 CFU/ml Meanwhile, the survival cell count of the bacteria in the NB medium supplemented with CM extract decreased from 109 to 107 CFU/ml Besides, modifications in B subtilis DNA after irradiation were investigated by gene amplification and 16S rRNA gene sequencing The bioinformatic analysis of sequencing results showed that at dose of 300Gy, the rate of genetic modification of 16S rRNA dropped from 0.36% to 0% At dose of 700Gy, it decreased from 1.49% to 0% and at dose of 1500Gy, it decreased from 2.56% to 0.43% The results confirmed the protective effects of the C militaris extract on cells and DNA of B subtilis B5 Keywords: Cordyceps militaris, Bacillus subtilis, radioprotectors MỞ ĐẦU Tia gamma nói riêng, tia phóng xạ nói chung biết đến tác nhân gây đột biến cấp độ DNA, tế bào sai sót trình sửa chữa DNA tự nhiên ngun nhân dẫn đến hình thành tế bào ung thư Dưới tác dụng tia gamma đối tượng sinh học chịu nhiều biến đổi cấu trúc, chức năng, dẫn đến nhiều tổn thương, gây hậu nặng nề Vật chất di truyền DNA có số biến đổi chủ yếu như: đứt gãy mạch đơn, đứt gãy mạch kép, tạo nhánh, tạo cầu liên kết phân tử; tạo dimer nucleotide Những biến đổi dẫn đến ngăn cản chép, hình thành đột biến phân tử DNA Tổn thương phân tử dẫn đến tế bào bị tổn thương (tổn thương màng, nhân ) Tế bào chết sau chiếu xạ, tiếp tục phân chia mang nhiều biến đổi vật chất di truyền, khuyết tật cấu trúc chức Những tế bào mang biến đổi, sai khác cấu trúc chức nguyên nhân dẫn đến tăng sinh khơng kiểm sốt hình thành ung thư [1] Nấm Đông trùng hạ thảo (Cordyceps) loại nấm ký sinh nội bào, thuộc nhóm nấm Ascomycota Chủng nấm C militaris biết tới nguồn chất hỗ trợ tăng cường miễn dịch bảo vệ phóng xạ tiềm nhờ giàu axit amin, giàu nguyên tố vi lượng có hoạt chất chống oxy hóa cao, nhiều nhà khoa học quan tâm nghiên cứu [2,3,4,5] Hiện nay, số loài nấm nuôi trồng thành công điều kiện nhân tạo để đáp ứng nhu cầu người dân điều trị bệnh 538 Tuyển tập báo cáo Hội nghị Khoa học Công nghệ hạt nhân toàn quốc lần thứ 14 Proceedings of Vietnam conference on nuclear science and technology VINANST-14 nâng cao sức khỏe [2] Yu HM CS (2006) chứng minh hoạt tính chống oxy hóa polyphenol flavonoid có dịch chiết nấm C militaris nuôi cấy vượt trội so với dịch chiết nấm C sinensis tự nhiên [3], chất có khả loại bỏ gốc tự bảo vệ phóng xạ tốt Yuanhong Liao CS (2015) có nghiên cứu tác dụng Cordycepin (hoạt chất có thành phần C militaris) tổn thương DNA chứng minh hoạt chất làm giảm chu kỳ nghỉ chết theo chu trình tế bào [4] Đặc biệt, Jeong CS (2014) công bố việc sử dụng nấm C militaris chất bảo vệ phóng xạ, dịch chiết Cordyceps militaris có tác dụng bảo vệ chống lại phá hủy DNA xạ gây Theo nhóm tác giả này, dịch chiết C militaris làm tăng hiệu loại bỏ gốc tự giảm đứt gãy DNA plasmid gây xạ thử nghiệm in vitro [5] Nghiên cứu tập trung khảo sát ảnh hưởng dịch chiết nấm C militaris nuôi cấy Trung tâm Chiếu xạ Hà Nội tới tế bào DNA chủng vi khuẩn B subtilis B5 bị chiếu xạ Các kết thu lần khẳng định tác dụng bảo vệ phóng xạ dịch chiết nấm tế bào DNA vi khuẩn nói riêng xa tác dụng bảo vệ phóng xạ tế bào, DNA loài sinh vật khác người NỘI DUNG 2.1 Đối tượng phương pháp 2.1.1 Nguyên vật liệu hóa chất Nấm C militaris ni cấy phịng Nghiên cứu Cơng nghệ Bức xạ - Trung tâm Chiếu xạ Hà Nội Chủng vi khuẩn B subtilis B5 cung cấp Viện Công nghệ Sinh học Công nghiệp thực phẩm – Đại học Bách khoa Hà Nội Một số hóa chất tách chiết, điện di, PCR giải trình tự DNA Thermo Fisher Scientific, Merck Máy móc, thiết bị ni cấy vi sinh nguồn chiếu xạ gamma Co-60 Trung tâm Chiếu xạ Hà Nội 2.1.2 Phương pháp Chuẩn bị mẫu xử lý chiếu xạ Đường cong sinh trưởng chủng B subtilis B5 khảo sát môi trường nuôi cấy NB môi trường NB bổ sung dịch chiết CM nồng độ mg/ml điều kiện lắc 120 vòng/phút, 37°C thời điểm 0, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 36 cách đo mật độ quang bước sóng 550 nm Dựa vào kết độ hấp thụ xây dựng đường cong mật độ quang chủng B subtilis B5 theo thời gian Các ống nghiệm (10 ml/ống) chứa dịch nuôi cấy tế bào vi khuẩn B subtilis B5 pha Log (OD550 = 0,6-0,7) đem xử lý chiếu xạ dải liều 0-2000 Gy nguồn gamma Co-60 Trung tâm Chiếu xạ Hà Nội (3 ống nghiệm lặp lại) Liều kế Gammachrome YR sử dụng để đo liều hấp thụ tất mẫu chiếu xạ Xác định số lượng tế bào vi khuẩn Dung dịch nuôi cấy tế bào vi khuẩn (trước sau chiếu xạ) pha loãng theo mũ thập phân 0,1 ml mẫu nồng độ pha lỗng thích hợp cấy vào đĩa petri chứa mơi trường NA (3 đĩa petri/ độ pha loãng) Sử dụng que gạt vô trùng dàn dung dịch bề mặt thạch Tiến hành đếm số lượng khuẩn lạc sau 24 ni cấy nhiệt độ 37°C tính số lượng tế bào (Mi) 1ml mẫu theo công thức: Mi (CFU/ml) = Ai x Di/V Trong đó: Ai số khuẩn lạc trung bình/ đĩa; Di độ pha lỗng V thể tích dung dịch cấy vào đĩa (ml) Khuếch đại gen phương pháp PCR Sử dụng máy luân nhiệt khuếch đại nhiều DNA mồi đặc hiệu Cặp mồi sử dụng cho phản ứng khuếch đại gen: 539 Tiểu ban D3-D4: Ứng dụng kỹ thuật hạt nhân nông nghiệp, ứng dụng công nghệ xạ Section D3-D4: Application of nuclear techniques in agriculture, radiation technology application Mồi xuôi M27F: 5‘-GAGTTTGATCCTGGCTCAG-3‘ Mồi ngược 1527R: 5‘-AGAAAGGAGGTGATCCAGCC-3‘ Thành phần phản ứng chu trình nhiệt phản ứng PCR sau: Bảng Thành phần phản ứng PCR Thành phần Mẫu (µl) dH2O 35.5 Taq Buffer 10X dNTPs (2 mM loại) 16S mồi xi (10 µM) 16S mồi ngược(10 µM) DNA (100 pg/µl) Taq DNA polymerase 0.5 Tổng số 50 Bảng Chu trình nhiệt phản ứng PCR chu kỳ 94°C / phút 94°C / 30 giây 50°C / 30 giây 72°C / phút 72°C / phút 30 chu kỳ chu kỳ Sản phẩm PCR kiểm tra phương pháp điện di DNA gel Agarose 2.1 Kết bàn luận Đường cong sinh trưởng B subtilis B5 Với mục đích chọn thời điểm sinh trưởng, phát triển phù hợp cho trình xử lý chiếu xạ, đường cong sinh trưởng chủng B subtilis B5 ni cấy hai loại mơi trường có (NB+CM) không (NB) bổ sung dịch chiết CM nồng độ mg/ml khảo sát thời điểm khác 0-36 Bằng cách đo mật độ quang OD550 nm, xây dựng đường cong sinh trưởng chủng B subtilis B5 theo thời gian (hình 1) Hình Đường cong mật độ quang hai mơi trường nuôi cấy chủng B subtilis B5 theo thời gian Hình cho thấy tương quan mật độ quang dịch nuôi cấy vi khuẩn hai môi trường NB có khơng bổ sung dịch chiết CM Ở hai loại môi trường, cho thấy giai đoạn vi khuẩn tăng trưởng 540 Tuyển tập báo cáo Hội nghị Khoa học Công nghệ hạt nhân toàn quốc lần thứ 14 Proceedings of Vietnam conference on nuclear science and technology VINANST-14 mạnh - pha log khoảng 2-6 Trong giai đoạn này, chủng vi khuẩn B5 mơi trường có bổ sung dịch chiết CM có tốc độ sinh trưởng cao so với mơi trường khơng bổ sung dịch chiết, nhiên khác biệt không đáng kể, OD550 tương ứng thời điểm 1,13 so với 0,95 Tốc độ sinh trưởng vi khuẩn chậm giai đoạn bước vào pha cân (8-18 giờ) Do hạn chế phương pháp đo mật độ quang không phân biệt tế bào sống-chết, đồ thị có chiều hướng lên gần đường thẳng Ở giai đoạn này, tốc độ tế bào sống tăng lên tế bào chết khơng có khác biệt lớn giá trị OD mơi trường có bổ sung dịch chiết CM môi trường không bổ sung dịch chiết Giai đoạn suy vong tính từ 18 trở Đồ thị giai đoạn nằm ngang dung dịch tồn tế bào chết, khơng có tăng thêm số lượng tế bào sống Thậm chí, tế bào kết lại thành đám làm giá trị OD550 giảm thời điểm 36 xuống 1,57 1,68 Các kết cho thấy chủng B subtilis B5 mơi trường có bổ sung dịch chiết CM có tốc độ suy thối chậm so với chủng B5 môi trường không bổ sung dịch chiết Tuy nhiên mức độ khác không đáng kể dịch chiết thêm vào bổ sung lượng nhỏ chất dinh dưỡng Dựa vào đường cong mật độ quang chủng B subtilis B5 theo thời gian, xác định thời điểm phù hợp để chiếu xạ OD550 nằm khoảng 0,6-0,7, tướng ứng với thời gian nuôi cấy lắc khoảng Khả sống sót B subtilis B5 sau chiếu xạ Tác động xạ gamma tới tỷ lệ sống sót vi khuẩn B subtilis B5 hai loại môi trường đánh giá phương pháp đếm khuẩn lạc sống sót phương pháp nhỏ trực tiếp dịch ni cấy lên đĩa thạch (hình 2, hình 3) Tác động xạ chủng vi khuẩn B5 biểu diễn hàm logarit tế bào vi khuẩn sống sót (CFU/ml) với liều xạ gamma Dựa vào đồ thị hình ta thấy, hai loại mơi trường có khơng bổ sung dịch chiết, số lượng tế bào vi khuẩn sống sót giảm đáng kể theo chiều tăng liều chiếu xạ (giảm từ 109 xuống 104 liều tăng từ 0-2000 Gy) Sự kết hợp vi khuẩn để hình thành cụm lớn trình chiếu xạ làm tăng khả kháng xạ B subtilis liều xử lý cao [6] Nghiên cứu khả sống sót bào tử vi khuẩn B subtilis sp 79-23, Yoon Ki Hong CS nhận thấy tỷ lệ sống sót bào tử vi khuẩn giảm theo cấp số nhân Ở liều xạ 3000 5000 Gy số lượng tế bào lại sấp sỉ 5% 1% [7] Hình 14 Tỷ lệ sống sót chủng vi khuẩn B subtilis B5 ni cấy mơi trường có khơng bổ sung dịch chiết CM sau chiếu xạ Tuy nhiên, thấy rõ khác biệt tỷ lệ sống sót vi khuẩn ni cấy hai mơi trường khoảng liều 1000 Gy Ở khoảng liều này, môi trường nuôi cấy NB 106, môi trường nuôi cấy NB có bổ sung dịch chiết CM có lượng tế bào sống sót giảm từ 10 xuống 107 Kết cho thấy hiệu tương đối rõ ràng tác động dịch chiết tới tỷ lệ sống sót vi khuẩn sau chiếu xạ Tác động tia gamma liều chiếu khác tới chủng vi khuẩn B subtilis B5 đánh giá định tính phương pháp nhỏ trực tiếp dịch nuôi cấy sau chiếu xạ lên đĩa thạch (hình 3) Dịch ni cấy hai loại mơi trường có khơng bổ sung dịch chiết CM xử lý liều chiếu khác 541 Tiểu ban D3-D4: Ứng dụng kỹ thuật hạt nhân nông nghiệp, ứng dụng công nghệ xạ Section D3-D4: Application of nuclear techniques in agriculture, radiation technology application nhỏ lên đĩa môi trường NA, nuôi cấy 37°C quan sát sau 24 Kết cho thấy với lượng dịch tế bào, thấy khác biệt mật độ tế bào mẫu chiếu xạ không chiếu xạ, có khơng bổ sung dịch chiết CM Mật độ tế bào giảm dần theo chiều tăng liều chiếu Hình 15 Dịch ni cấy chủng B subtilis B5 nhỏ trực tiếp đĩa thạch a) Không bổ sung dịch chiết; b) Có bổ sung dịch chiết Ở liều chiếu, so sánh với môi trường không bổ sung dịch chiết, mật độ tế bào mơi trường có bổ sung dịch chiết dày đặc Ở liều 1000 Gy, nhỏ trực tiếp dịch nuôi cấy không bổ sung dịch chiết lên đĩa thạch NA, xuất khoảng trống quần thể khuẩn lạc, điều chứng tỏ mật độ tế bào không cao Tuy nhiên, không nhận thấy điều tương tự nhỏ trực tiếp dịch ni cấy có bổ sung dịch chiết CM lên đĩa thạch NA, quần thể khuẩn lạc mọc dày thành đám, không xuất khoảng trống Khuếch đại gen sử dụng mồi đặc hiệu Với mục đích khuếch đại gen để giải trình tự gen 16S rRNA, tiến hành phản ứng khuếch đại gen PCR với mẫu: mẫu (mẫu không chiếu xạ, không bổ sung dịch chiết); 3, (mẫu chiếu xạ liều 300 Gy, khơng có bổ sung dịch chiết); 5, (mẫu chiếu xạ liều 700 Gy, không có bổ sung dịch chiết); 7, (mẫu chiếu xạ liều 1500 Gy, khơng có bổ sung dịch chiết) Sau phản ứng PCR kết thúc, kết phản ứng PCR kiểm tra gel agarose 1,5%, sử dụng marker 100 bp Hình Điện di đồ sản phẩm PCR Hình ảnh điện di cho thấy đường giếng điện di cho băng nhất, băng sáng rõ ràng, khơng có băng phụ, chứng tỏ mồi sử dụng phù hợp, nhân đặc hiệu gen 16S rRNA Các băng có độ sáng tương đương nhau, chưa kết luận có đột biến hay khơng phương pháp điện di gel agarose không phân biệt tỷ lệ đột biến nhỏ Tuy nhiên, để tiến hành thí nghiệm giải trình tự gen, tiến hành tinh sản phẩm PCR, trước gửi giải trình tự gen cơng ty 1st-Base Singapore 542 Tuyển tập báo cáo Hội nghị Khoa học Cơng nghệ hạt nhân tồn quốc lần thứ 14 Proceedings of Vietnam conference on nuclear science and technology VINANST-14 Giải trình tự phân tích tin sinh Kết giải trình tự hiển thị dạng đỉnh màu Mỗi đỉnh đại diện cho nucleotide, bốn màu khác đại diện cho bốn loại nucleotide (adenine, cytosine, guanine, thymine) Hình Một phần kết giải trình tự gen 16S rRNA mẫu không chiếu xạ Khi sử dụng phần mềm so sánh kết giải trình tự mẫu B subtilis B5 chiếu xạ liều 300 Gy 700 Gy, kết giải trình tự mẫu DNA gen 16S rRNA cho thấy nhiều điểm sai khác so với mẫu DNA gen đối chứng Với liều 300 Gy, kết so sánh cho tỷ lệ tương đồng 1403/1408 (99,64%), cho thấy 0,36% bị biến đổi tác động xạ gamma lên phân tử DNA gen 16S rRNA Với liều 700 Gy, kết so sánh cho tỷ lệ tương đồng 1387/1408 (98,51%), cho thấy tỷ lệ biến đổi 1,49% cao so với liều 300 Gy, điều hoàn toàn phù hợp với tính tốn lý thuyết mức độ biến đổi tăng dần so với chiều tăng liều chiếu Để chứng minh ảnh hưởng dịch chiết C militaris CM đến gen vi khuẩn B subtilis, gen 16S rRNA vi khuẩn nuôi cấy môi trường bổ sung dịch chiết CM giải trình tự Kết giải trình tự khơng cho thấy điểm sai khác so với mẫu DNA gen đối chứng Điều thể kết so sánh mẫu đối chứng mẫu có bổ sung dịch chiết sau chiếu xạ liều 300 Gy 700 Gy cho kết tương đồng 100% Điều đồng nghĩa với việc giảm tỷ lệ đột biến xuống 0% Cho thấy hiệu tốt dịch chiết tới DNA vi khuẩn bị chiếu xạ Bảng Tỷ lệ biến đổi gen 16S rRNA mẫu nghiên cứu Liều chiếu Dịch chiết CM2 Tương đồng so với mẫu đối chứng 99,64% 300 Gy + 100% 300 Gy 98,51% 700 Gy + 100% 700 Gy 97,44% 1500 Gy + 99,57% 1500 Gy *+ Có bổ sung dịch chiết CM; - Khơng bổ sung dịch chiết CM; Mẫu đối chứng DNA B subtilis không bị chiếu xạ Tỷ lệ biến đổi so với mẫu đối chứng 0,36% 0% 1,49% 0% 2,56% 0,43% Kết so sánh trình tự mẫu B subtilis B5 chiếu xạ liều 300 Gy, 700 Gy, 1500 Gy cho thấy trình tự mẫu DNA gen 16S rRNA có nhiều điểm sai khác so với mẫu DNA gen đối chứng Với liều 300 Gy, 700 Gy 1500 Gy, kết so sánh cho tỷ lệ tương đồng 99,64%, 98,51% 97,44%, cho thấy biến đối tác động xạ gamma lên phân tử DNA gen 16S rRNA tăng dần so với liều chiếu Những biến đổi chưa gây chết tế bào nhiên gây ảnh hưởng đến cấu trúc chức gen, gây cản trở số hoạt động tế bào Trong nghiên cứu tương tự, đối tượng DNA dạng plasmid (dạng vòng, sợi đôi), Min-Ho Jeong CS (2014) kết luận C militaris chất bảo vệ phóng xạ tiềm dịch chiết chủng nấm làm giảm tỷ lệ đứt gãy sợi đôi tác dụng chiếu xạ [5] KẾT LUẬN Khi bổ sung dịch chiết CM vào môi trường nuôi cấy NB, chủng vi khuẩn khơng bị tác động kích thích hay kìm hãm sinh trưởng, việc bổ sung dịch chiết vào môi trường nuôi cấy không ảnh hưởng đến kết đánh giá khả sống sót chủng vi khuẩn sau chiếu xạ Dịch chiết có tác dụng bảo vệ tế bào: khoảng liều 1000 Gy, môi trường ni cấy NB có lượng tế bào sống sót giảm từ 109 xuống 106, môi trường nuôi cấy NB có bổ sung dịch chiết CM2 có lượng 543 Tiểu ban D3-D4: Ứng dụng kỹ thuật hạt nhân nông nghiệp, ứng dụng công nghệ xạ Section D3-D4: Application of nuclear techniques in agriculture, radiation technology application tế bào sống sót giảm từ 109 xuống 107 Dịch chiết có tác dụng bảo vệ DNA: bổ sung dịch chiết nấm đông trùng hạ thảo vào môi trường nuôi cấy chủng vi khuẩn B subtilis, sau chiếu xạ giảm 100% tỷ lệ biến đổi gen 16S rRNA liều 300 Gy 700 Gy (từ biến đổi 0,36% 1,49% xuống khơng cịn biến đổi); giảm 83,2% tỷ lệ biến đổi gen 16S rRNA liều 1500 Gy (từ 2,56% xuống 0,43% biến đối) LỜI CẢM ƠN Nghiên cứu thực với hỗ trợ kinh phí đề tài cấp sở Trung tâm Chiếu xạ Hà Nội, Viện Năng lượng Nguyên tử Việt Nam mã số CS/20/08-1 TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Tindall K.R., Stein J., and Hutchinson F., (1988) “Changes in DNA Base Sequence Induced by Gamma-Ray Mutagenesis of Lambda Phage and Prophage” Genetics, 118(4), pp 551–560 [2] Sung G-H., Hywel-Jones N.L., Sung J-M., Luangsaard J.J., Shrestha B., and Spatafora J W., (2007) “Phylogenetic classification of Cordyceps and the clavicipitaceous fungi”, Studies in Mycology, vol 57, pp 5–59 [3] Yu H.M., Wang B.S., Huang S.C., and Duh P.D (2006) “Comparison of protective effects between cultured Cordyceps militaris and natural Cordyceps sinensis against oxidative damage”, Journal of Agricultural and Food Chemistry, 54(8): pp 3132-3138 [4] Yuanhong L., Jianya L., Guoying Z., Fengjun L., Shengce T., Zeguang H., Saijuan C., Zhu C., and Huangying L., (2015) “Cordycepin induces cell cycle arrest and apoptosis by inducing DNA damage and up-regulation of p53 in Leukemia cells”, Cell Cycle, 14(5): pp 761–771 [5] Jeong M.H., Park Y.S., Jeong D.H., Lee C.G., Kim J.S., Oh S.J., Jeong S.K., Yang K., and Jo W.S., ( 2014) “In vitro evaluation of Cordyceps militaris as a potential radioprotective agent”, International Journal of Molecular Medicine, 34 (5), pp 1349-1357 [6] Yazdi S., Ardekani A.M., (2012) “Bacterial aggregation and biofilm formation in a vortical flow”, Biomicrofluidics [7] Yoon K.H., In-Kyung S., Kyung H.J., Seung-Hwan P., (1999) “Hyper-CMCase-producing mutants of Bacillus sp 7923 induced by gamma-radiation, J Microbiol Biotechnol 9(4) pp 518 544 ... hưởng dịch chiết nấm C militaris nuôi cấy Trung tâm Chiếu xạ Hà Nội tới tế bào DNA chủng vi khuẩn B subtilis B5 bị chiếu xạ Các kết thu lần khẳng định tác dụng bảo vệ phóng xạ dịch chiết nấm tế bào. .. sót giảm từ 109 xuống 107 Dịch chiết có tác dụng bảo vệ DNA: bổ sung dịch chiết nấm đông trùng hạ thảo vào môi trường nuôi cấy chủng vi khuẩn B subtilis, sau chiếu xạ giảm 100% tỷ lệ biến đổi... chiết nấm tế bào DNA vi khuẩn nói riêng xa tác dụng bảo vệ phóng xạ tế bào, DNA loài sinh vật khác người NỘI DUNG 2.1 Đối tượng phương pháp 2.1.1 Nguyên vật liệu hóa chất Nấm C militaris ni cấy