Biểu hiện của gen NOX4 trên tế bào dây chằng nha chu người dưới tác động của hợp chất dung giải tế bào Porphyromonas gingivalis

Bài viết đánh giá biểu hiện gen NOX4 trên tế bào dây chằng nha chu người dưới tác động của hợp chất dung giải tế bào Porphyromonas gingivalis.

Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 Nghiên cứu Y học BIỂU HIỆN CỦA GEN NOX4 TRÊN TẾ BÀO DÂY CHẰNG NHA CHU NGƯỜI DƯỚI TÁC ĐỘNG CỦA HỢP CHẤT DUNG GIẢI TẾ BÀO PORPHYROMONAS GINGIVALIS Nguyễn Thu Thuỷ*, Sujiwan Seubbuk**, Rudee Surarit** TÓM TẮT Mở đầu: Porphyromonas gingivalis vi khuẩn thường xem tác nhân gây bệnh quan trọng viêm nha chu Gen NOX4 liên quan đến sản xuất gốc oxy tự (ROS) tế bào người Mục tiêu: Đánh giá biểu gen NOX4 tế bào dây chằng nha chu người tác động hợp chất dung giải tế bào Porphyromonas gingivalis Đối tượng - Phương pháp nghiên cứu: Tế bào dây chằng nha chu người (TBDCNCN) Đơn vị cung cấp tế bào nuôi cấy Hoa Kỳ (American Type Culture Collection, ATCC), nuôi môi trường Dulbecco biến đổi (Dulbecco’s Modified Eagle Medum, DMEM) Sau tế bào cấy vào giếng chứa nồng độ hợp chất dung giải tế bào Porphyromonas gingivalis 20 μM 50 μM Thu lại dung dịch tế bào sau 24 để thực real-time PCR đánh giá biểu gen NOX4 Kết quả: Biểu NOX4 tăng lên theo thời gian tiếp xúc với P gingivalis dù nồng độ thấp, khác biệt có ý nghĩa thống kê (p0,05) Kết luận: Dưới tác dụng hợp chất dung giải tế bào P gingivalis, biểu gen NOX4 tế bào dây chằng nha chu người tăng lên, tác động thay đổi theo thời gian phụ thuộc vào nồng độ P gingivalis Từ khoá: NOX4, stress oxy hóa, Porphyromonas gingivalis, tế bào dây chằng nha chu người ABSTRACT EXPRESSION OF NOX4 IN HUMAN PERIODONTAL LIGAMENT CELLS UNDER EFFECT OF PORPHYROMONAS GINGIVALIS LYSATE Nguyen Thu Thuy, Sujiwan Seubbuk, Rudee Surarit * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Supplement Vol 22 - No 2- 2018: - Background: Porphyromonas gingivalis is an important etiologic factor of periodontal diseases NOX4 gene is related to the production of reative oxygen species (ROS) Objectives: The aim of this study was to investigate the expression of NOX4 in human periodontal ligament cells under the effect of Porphyromonas gingivalis lysate Materials and methods: Primary human periodontal ligament cells (HPDLF) was cultured in growth media under P gingivalis lysate treatment in different concentrations for and 24 hours Following incubation, the expression of NOX4 was evaluated by using Real-time PCR Results: The expression of NOX4 increased with time of exposure to P gingivalis, even at low concentrations significantly (p0.05) *Bộ môn Nha chu, Khoa Răng Hàm Mặt, Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh **Bộ môn Sinh học miệng, Khoa Nha, Đại học Mahidol, Thái Lan Tác giả liên lạc: TS Nguyễn Thu Thuỷ ĐT: 01208505265 Email: ngthuthuy20@yahoo.com Chuyên Đề Răng Hàm Mặt Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 Conclusion: Under the effect of P gingivalis lysate, NOX4 gene expression in HPDLF was increased, which depended on time and P gingivalis lysate concentration Key words: NOX4, oxidative stress, Porphyromonas gingivalis, human periodontal ligament cells biến đổi (Dulbecco’s Modified Eagle Medum, MỞ ĐẦU DMEM) chứa 90% DMEM, 10% huyết Bệnh nha chu ảnh hưởng đến 10-15% dân số phơi thai bò (Fetal Bovine Sreum, FBS), 1% giới lý hàng đầu kháng sinh Cấy chuyển mật độ tế bào dày gây răng(1) Viêm nha chu đặc, tế bào kết dính với bệnh viêm, bắt đầu màng sinh học Chuẩn bị nướu thay đổi phản ứng viêm/miễn dịch TBDCNCN gieo vào bảng mẫu siêu cá nhân bất thường(4) Các bạch cầu đa nhân nhỏ 96 giếng với mật độ 3x10 tế bào/giếng (BCĐN) tế bào viêm nguyên phát Các bảng mẫu sau ủ ấm máy ủ nướu mô nha chu(11,12) Trong viêm nha chu, CO2 (37o C, 5% CO2, độ ẩm 100%) 24 BCĐN tự nhiên có khả sản xuất gốc oxy để đạt 80% mức bão hoà, sau đổi mơi tự (ROS) cho kích hoạt chức trường ni cấy sang DMEM khơng có huyết làm tăng sản xuất ROS(5) Nhiều nghiên chứa nồng độ hợp chất dung giải tế cứu gần bệnh nha chu bào Porphyromonas gingivalis 20 µM 50 µM mạn tính có liên quan với bạch cầu trung tính H2O2 50 µM dùng làm nhóm chứng dương phóng thích với sản xuất ROS gia tăng để đáp mơi trường ni cấy khơng huyết dùng ứng kích thích thụ thể Fc-gamma(2,7,3,9,10) làm nhóm chứng âm Thu lại dung dịch tế bào Porphyromonas gingivalis vi khuẩn thường sau 24 để thực thí nghiệm xem tác nhân gây bệnh quan trọng đối với viêm nha chu(11) Nghiên cứu nhằm đánh giá biểu gen NOX4 liên quan đến sản xuất ROS tế bào dây chằng nha chu người tác động hợp chất dung giải tế bào Porphyromonas gingivalis nồng độ khác ĐỐITƯỢNG–PHƯƠNGPHÁPNGHIÊNCỨU Đối tượng nghiên cứu Tế bào dây chằng nha chu người (TBDCNCN) Đơn vị cung cấp tế bào nuôi cấy Hoa Kỳ (American Type Culture Collection, ATCC), nuôi môi trường Dulbecco biến đổi (Dulbecco’s Modified Eagle Medum, DMEM) chứa 90% DMEM, 10% huyết phơi thai bò (Fetal Bovine Sreum, FBS), 1% kháng sinh Phương pháp nghiên cứu Nuôi cấy tế bào TBDCNCN Đơn vị cung cấp tế bào nuôi cấy Hoa Kỳ (American Type Culture Collection, ATCC), nuôi môi trường Dulbecco Tách chiết RNA tổng hợp cDNA RNA tổng số được tách chiết Trizol (Invitrogen, Hoa Kỳ) tách chiết RNA (PureLink RNA Mini Kit, Invitrogen, Hoa Kỳ), với loại bỏ DNA DNaseI (On-column PureLink DNase, Invitrogen, Hoa Kỳ) Các mẫu RNA được kiểm tra nồng độ máy đo quang phổ (Biotek, Hoa Kỳ) trước µg RNA tổng được dùng để tổng hợp cDNA tổng hợp cDNA (Invitrogen, Hoa Kỳ) Quy trình thao tác thực theo hướng dẫn nhà sản xuất Real-time PCR định lượng phân tích kết Tổng thể tích phản ứng Real-time PCR định lượng 22 µl, bao gồm SYBR Green PCR Master Mix (Thermo Scientific, Hoa Kỳ), khuôn cDNA một cặp primer thiết kế đặc hiệu cho NOX4 Các phản ứng (lặp lại mẫu cho thiết kế thí nghiệm) thực máy Realplex Eppendorf (Đức) Chu trình chạy phản ứng bao gồm phút 50°C, 15 phút 95°C 40 chu kỳ Chuyên Đề Răng Hàm Mặt Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 Nghiên cứu Y học 90°C (15 giây) 60°C (1 phút) Để kiểm tra số Nghiên cứu cho thấy biểu sản phẩm được khuếch đại phản ứng, phân NOX4 tăng lên theo thời gian tiếp xúc với P tích đường cong nóng chảy DNA (dissociation gingivalis dù nồng độ thấp, khác biệt có ý melting curves) thực cách giữ nhiệt nghĩa thống kê (p