Bài viết Biểu hiện Keratin 4 trong biểu mô bình thường và ung thư tế bào gai niêm mạc miệng trình bày việc xác định tỉ lệ và mức độ biểu hiện Keratin 4 trong ung thư tế bào gai niêm mạc miệng và biểu mô miệng bình thường.
GIẢI PHẪU BỆNH BIỂU HIỆN KERATIN TRONG BIỂU MÔ BÌNH THƯỜNG VÀ UNG THƯ TẾ BÀO GAI NIÊM MẠC MIỆNG NGUYỄN THỊ NGUYỆT ÁNH1, NGUYỄN CHẤN HÙNG2, NGUYỄN VĂN THÁI3, NGUYỄN THỊ HỒNG4 TÓM TẮT Mở đầu: Keratin đóng vai trò quan trọng nhiều chức của tế bào Mỗi loại mô biểu hiện một bộ keratin đặc hiệu Keratin đặc hiệu định hướng giai đoạn biệt hóa sau của biểu mô gai niêm mạc miệng Mục tiêu: Xác định tỉ lệ và mức độ biểu hiện keratin ung thư tế bào gai niêm mạc miệng và biểu mô miệng bình thường Đối tượng và phương pháp: Nghiên cứu cắt ngang 130 ca ung thư tế bào gai niêm mạc miệng được điều trị phẫu thuật tại Bệnh viện Ung Bướu Tp.HCM Nhuộm hóa mô miễn dịch, đánh giá biểu hiện keratin mô ung thư và biểu mô miệng bình thường ở rìa diện cắt của bệnh phẩm phẫu thuật Kết quả: Mô bình thường biểu hiện keratin dương tính mạnh và đồng nhất, với tỉ lệ trung bình 94,1% Mô ung thư giảm keratin rất nhiều so với mô bình thường (p 0,05) Kết luận: Mất biểu hiện keratin ung thư tế bào gai niêm mạc miệng so với biểu mô bình thường gợi ý biểu hiện hóa mô miễn dịch keratin có tiềm sử dụng lâm sàng hỗ trợ chẩn đoán phân biệt niêm mạc miệng lành-ác khách quan về mặt sinh học Từ khóa: Keratin 4, ung thư tế bào gai niêm mạc miệng, biểu mô miệng bình thường ABSTRACT Keratin expression in oral normal epithelium and squamous cell carcinoma Background: Keratins play a major role in several cellular functions Each tissue type expresses a specific set of keratins Keratin is the keratin specific for the final stage of differentiation of oral stratified squamous epithelium Objective: To determine the prevalence and expression levels of keratin in oral squamous cell carcinoma (OSCC) and in normal oral epithelium Materials and methods: The cross-sectional study was conducted on 130 OSCC patients treated by surgery at the Oncology Hospital at Ho Chi Minh city Paraffin-embedded tissue surgical specimens were immunohistochemically stained for keratin The K4 expression in OSCC and normal epithelium at the surgical margin was evaluated Results: In normal epithelium, keratin staining showed a homogenous and strong expression, with the mean value of 94.1% In OSCCs, keratin 4-positivity was significantly decreased when compared to normal oral mucosa (p 0.05) Giảng viên Bộ môn Bệnh Học Miệng, Khoa Răng Hàm Mặt - Đại học Y Dược TP.HCM Chủ tịch Hội Ung thư Việt Nam BSCKI Khoa Giải phẫu bệnh – Bệnh viện Ung Bướu TP.HCM PGS.TS Trưởng Bộ môn, Phụ trách Sau Đại học-Khoa Răng Hàm Mặt - Đại học Y Dược TP.HCM TẠP CHÍ UNG THƯ HỌC VIỆT NAM 131 GIẢI PHẪU BỆNH Conclusions: Loss of keratin expression in OSCC, in contrast to normal epithelium, suggests that keratin immunohistochemical expression may have clinical potential which enhances in the differential diagnosis between benign and malignant oral mucosa, subjectively Key words: Keratin 4, oral squamous cell carcinoma, normal oral epithelium ĐẶT VẤN ĐỀ Ung thư niêm mạc miệng (UTNMM) bệnh ác tính phổ biến, đa số carcinôm tế bào gai (hơn 90%)12 Điều trị thường không hiệu cao thường xảy tái phát di căn, chí bướu nhỏ Tác hại tác nhân sinh ung thư thuốc lá, rượu, gây mơi trường ung thư hóa khiến cho dễ tái phát xuất ung thư thứ hai Do đó, hiểu rõ chế phân tử bệnh sinh diễn tiến ung thư sẽ giúp cải thiện điều trị bệnh Các keratin (còn gọi cytokeratin) sợi trung gian biểu mô gai, giữ vai trị quan trọng ổn định, hình dạng di cư tế bào, dẫn truyền tín hiệu tế bào4,6 Trong số keratin, keratin (K4) thành phần đặc biệt quan trọng cho giai đoạn biệt hóa sau biểu mơ gai lát tầng niêm mạc miệng4,6 Những nghiên cứu gần cho thấy có giảm biểu keratin (K4) ung thư vùng đầu cổ8,9,12,13 Schaaij-Visser c.s (2009) báo cáo biểu K4 thấp rìa diện cắt liên quan với tái phát chỗ UTNMM10 Enokida c.s (2017) tìm thấy biểu K4 liên quan với giảm thời gian sống bệnh nhân UTNMM3 Để đánh giá tình trạng protein keratin UTNMM người Việt Nam NMMBT (niêm mạc miệng bình thường) rìa diện cắt có thực an toàn mặt sinh học protein keratin 4, tiến hành nghiên cứu với mục tiêu: (1) Xác định tỉ lệ mức độ biểu keratin UTNMM NMMBT, (2) Phân tích liên quan biểu keratin với đặc điểm lâm sàng, giải phẫu bệnh UTNMM ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP Thực kỹ thuật tissue microarray (MTA), microarray chứa 20 mẫu mơ khác có mẫu chứng dương (niêm mạc miệng bình thường biết cho kết K4 dương tính) Sau đó, đúc khối paraffin, cắt lát mỏng µm, trải phiến kính có phủ silane Nhuộm hóa mơ miễn dịch theo kỹ thuật LSAB Labo Bệnh học miệng Đại học Y Nha Tokyo (Nhật Bản), sử dụng kháng thể đơn dòng kháng keratin (Abcam, Hoa Kỳ) (clone [EP1599Y] ab51599, pha loãng 1:500) kit EnVision+Dual link system-HRP (Dako, Đan Mạch) Mỗi đợt nhuộm có chứng dương nội chứng chứng âm (thay kháng thể kháng K4 dung dịch PBS) Mẫu nhuộm đánh giá hai bác sĩ có kinh nghiệm giải phẫu bệnh Sau đánh giá độc lập, hai bác sĩ đối chiếu kết đồng thuận kết cuối cùng, với tỉ lệ thống 100% Tế bào biểu mô biểu K4 dương tính bào tương nhuộm màu nâu DAB phát phức hợp kháng nguyên-kháng thể, K4 âm tính bào tương nhuộm màu xanh Hematoxylin Đánh giá tỉ lệ % xếp loại mức độ K4 theo thang bán định lượng Takashima c.s (2012)123 (Bảng 1) Mơ biểu K4 dương tính có tỉ lệ K4 ≥ 5% (Enokida c.s., 2017)12 Bảng Đánh giá biểu hiện keratin Biểu Keratin 1: Tế bào đáy cận đáy Vị trí 3: Tồn biểu mơ Nghiên cứu cắt ngang mơ tả có phân tích 130 trường hợp ung thư tế bào gai niêm mạc miệng điều trị Bệnh viện Ung Bướu Tp.HCM từ tháng năm 2013 đến tháng năm 2015 Tỉ lệ % Mẫu nghiên cứu gồm 130 trường hợp UTNMM phẫu thuật cắt rộng bướu nguyên phát, 111 trường hợp (84,6%) có diện NMMBT rìa diện cắt bệnh phẩm phẫu thuật Mô bệnh phẩm ngâm cố định formalin đệm pH trung tính, xử lý mơ, đúc khối paraffin, cắt lát mỏng µm, nhuộm Hematoxylin - Eosin (HE) chẩn đốn mơ bệnh học Mức độ 132 2: Tế bào gai Tỉ lệ % số tế bào K4 dương tính tổng số tế bào đếm 10 vi trường ×400 Độ (bảo tồn K4) = 70 100% Độ (trung bình) = 30 - 69% Độ (mất biểu K4) = - 29% Nhập xử lý liệu phần mềm Excel STATA 14.0 Liên quan có ý nghĩa p < 0,05 KẾT QUẢ Đặc điểm mẫu nghiên cứu UTNMM TẠP CHÍ UNG THƯ HỌC VIỆT NAM GIẢI PHẪU BỆNH UTNMM gồm 82 nam 48 nữ, với tỉ lệ nam/nữ 1,7:1; độ tuổi trung bình 56,9 ± 13,5 tuổi, đa số (90%) 40 tuổi, nhỏ 25 tuổi cao 88 tuổi Ung thư thường xảy lưỡi (49,2%) Ở nam thường gặp ung thư lưỡi (43,9%), sàn miệng (28%) nướu (14,6%); nữ thường gặp ung thư lưỡi (58,3%), môi (20,8%) niêm mạc má (12,5%) (Kiểm định xác Fisher, p < 0,001) Bảng Biểu hiện K4 UTNMM và NMMBT Đặc điểm Ung thư Bình thường N=130 N=111 6,3 (12,7) 94,1 (8,4) p Tỉ lệ % K4 Trung bình (độ lệch chuẩn) Trung vị (khoảng tứ vị) (0 - 5) 0,05) Điều cho thấy tính qn tình trạng biểu K4 UTNMM, gợi ý K4 dấu ấn sinh học chẩn đốn UTNMM có tính độc lập cao-bất kể tuổi, giới, thói quen nguy cơ, vị trí, giai đoạn lâm sàng độ ác tính mơ học ung thư Kết gợi ý bất thường K4 xảy sớm trình sinh ung thư, thành ung thư K4 khơng bị ảnh hưởng yếu tố tình trạng di hạch, giai đoạn ung thư Sự định K4 yếu tố thuận lợi để nhận diện ung thư cho dù tình KẾT LUẬN Nghiên cứu tìm thấy biểu keratin ung thư niêm mạc miệng giảm nhiều so với niêm mạc miệng bình thường Nhuộm hóa mơ miễn dịch keratin giúp phân biệt mơ niêm mạc miệng lành-ác mặt sinh học cách khách quan rõ ràng, nhận diện niêm mạc miệng bình thường để xác định rìa diện cắt an tồn Tuy nhiên, cần nhiều nghiên cứu với qui mô lớn hơn, theo dõi sau điều trị nhằm xác định ứng dụng giá trị chẩn đoán tiên lượng keratin thực tế lâm sàng TÀI LIỆU THAM KHẢO Bloor BK, Seddon SV, Morgan PR (2001), “Gene expression of differentiation-specific keratins in oral epithelial dysplasia and squamous cell carcinoma”, Oral Oncol, 37, pp.251-261 136 Depondt J, Shabana AH, Sawaf H, Gehanno P, Forest N (1999), “Cytokeratin alterations as diagnostic and prognostic markers of oral and pharyngeal carcinomas: a prospective study”, Eur J Oral Sci, 107, pp.442-454 Enokida T, Fujii S, Takahashi M, Higuchi Y, Nomura S, Wakasugi T, et al (2017), “Gene expression profiling to predict recurrence of advanced squamous cell carcinoma of the tongue: discovery and external validation”, Oncotarget, 8(37), pp.61786-61799 Fulzele A, Malgundkar SA, Govekar RB, Patil A, Kane SV, Chaturvedi P, et al (2013), “Proteomic profile of keratins in cancer of the gingivo buccal complex: consolidating insights for clinical applications”, J Proteomics, 91, pp.242-258 Karantza V (2011), “Keratins in health and cancer: more than mere epithelial cell markers”, Oncogene, 30, pp.127-138 Moll R, Divo M, Langbein L (2008), “The human keratins: biology and pathology”, Histochem Cell Biol, 129, pp.705-733 Ohkura S, Kondoh N, Hada A, Arai M, Yamazaki Y, et al (2005), “Differential expression of the keratin-4, -13, -14, -17 and transglutaminase genes during the development of oral squamous cell carcinoma from leukoplakia”, Oral Oncol, 41, pp.607-613 Sakamoto K, Aragaki T, Morita K, Kawachi H, Kayamori K, et al (2011), “Down-regulation of keratin and keratin 13 expression in oral squamous cell carcinoma and epithelial dysplasia: a clue for histopathogenesis”, Histopathology, 58, pp.531-542 Schaaij-Visser TB, Bremmer JF, Braakhuis BJ., Heck AJ, Slijper M, et al (2010), “Evaluation of cornulin, keratin 4, keratin 13 expression and grade of dysplasia for predicting malignant progression of oral leukoplakia”, Oral Oncol, 46, pp.123-127 10 Schaaij-Visser TB, Graveland AP, Gauci S, Braakhuis BJ, Buijze M, et al (2009), “Differential proteomics identifies protein biomarkers that predict local relapse of head and neck squamous cell carcinomas”, Clin Cancer Res, 15, pp.7666-7675 11 Scully C, Bagan J (2009), “Oral squamous cell carcinoma overview”, Oral Oncol, 45, pp.301– 308 12 Takashima M, Kawachi H, Yamaguchi A, Nakajima Y, Kitagaki K, et al (2012), “Reduced TẠP CHÍ UNG THƯ HỌC VIỆT NAM GIẢI PHẪU BỆNH expression of cytokeratin and 13 is a valuable marker for histologic grading of esophageal squamous intraepithelial neoplasia”, J Med Dent Sci, 59, pp.17-28 13 Van der Velden LA, Schaafsma HE, Manni JJ, Ruiter DJ, Ramaekers FCS, Kuijpers W (1997), “Cytokeratin and vimentin expression in normal epithelium and squamous cell carcinomas of the TẠP CHÍ UNG THƯ HỌC VIỆT NAM larynx”, European Archives Laryngology, 254, pp.376-383 of Oto-Rhino- 14 Warnakulasuriya S (2009), “Global epidemiology of oral and oropharyngeal cancer”, Oral Oncol, 45, pp.309-316 137 ... (2013 )4 Trong mô ung thư, hầu hết tế bào ung thư âm tính K4 đơi có vài ổ ung thư với tế bào biểu K4 phân tán Chỉ có trường hợp bảo tồn K4 90% (độ 1) carcinơm tế bào gai grad Nhờ có khả bảo tồn K4,... (6,1%) biểu K4 từ 30-50% (độ 2) ca (0,8%) bảo tồn K4 tỉ lệ 90% (độ 1) Trong mô ung thư cịn biểu dương tính K4, biểu khơng đồng nhất, phân tán vài chỗ mô bướu, chủ yếu trung tâm ổ tế bào ung thư, tế. .. 40 tuổi, nhỏ 25 tuổi cao 88 tuổi Ung thư thường xảy lưỡi (49 ,2%) Ở nam thư? ??ng gặp ung thư lưỡi (43 ,9%), sàn miệng (28%) nướu ( 14, 6%); nữ thư? ??ng gặp ung thư lưỡi (58,3%), môi (20,8%) niêm mạc