Bài viết ánh giá toàn diện việc ứng dụng kỹ thuật FISH và karyotype trên tế bào gai nhau tại bệnh viện Hùng Vương nhằm phục vụ tốt chương trình chẩn đoán tiền sản trong 3 tháng đầu thai kỳ.
Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 Nghiên cứu Y học ỨNG DỤNG KỸ THUẬT FISH VÀ KARYOTYPE TRÊN TẾ BÀO GAI NHAU TRONG THÁNG ĐẦU THAI KỲ Lê Quang Tín*, Nguyễn Vạn Thơng*, Nguyễn Thị Thanh Trúc*, Đặng Lê Dung Nghi*, Phạm Thị Vân Anh*, Vũ Thị Nhung** TÓM TẮT Đặt vấn đề: Chẩn đoán tiền sản thực chủ yếu mẫu nước ối tháng thai kỳ mẫu gai tháng đầu thai kỳ Tuy nhiên, Việt Nam, chẩn đoán tiền sản mẫu nước ối áp dụng rộng rãi chẩn đốn tiền sản mẫu gai lại áp dụng hạn chế nên cần thêm nhiều nghiên cứu để cải thiện Mục tiêu: Đánh giá toàn diện việc ứng dụng kỹ thuật FISH karyotype tế bào gai bệnh viện Hùng Vương nhằm phục vụ tốt chương trình chẩn đoán tiền sản tháng đầu thai kỳ Phương pháp: 67 ca thực sinh thiết gai Mẫu gai sau sinh thiết chia làm phần để làm FISH karyotype gai Kỹ thuật FISH gai sử dụng mẫu dò AneuVysion để chẩn đoán nhanh đột biến lệch bội nhiễm sắc thể 13, 18, 21, X, Y Kỹ thuật karyotype gai kết hợp phương pháp nuôi cấy flask ni cấy in situ để chẩn đốn bất thường số lượng cấu trúc toàn bộ nhiễm sắc thể tế bào gai Kết quả: 62 ca thực FISH với 100% cho kết quả, đồng thời 98,2% trùng khớp với kết karyotype 67 ca thực karyotype với 91% số ca thực thành công, nhiên chất lượng tiêu thấp so với tiêu chuẩn ACMG Tỷ lệ bất thường nghiên cứu 23,9%, thể tam nhiễm 21 chiếm tỷ lệ cao (10,4%) Kết luận: Kỹ thuật FISH gai cho thấy tính hiệu quả, nhiên kỹ thuật karyotype gai chưa đạt thành công mong đợi nên cần phải nghiên cứu thêm để cải tiến kỹ thuật Từ khoá: FISH, karyotype, gai nhau, sinh thiết gai nhau, chẩn đoán tiền sản ABSTRACT THE APPLICATION OF FISH AND KARYOTYPING TECHNIQUES ON CHORIONIC VILLOUS CELLS FOR FIRST TRIMESTER PRENATAL DIAGNOSIS Le Quang Tin, Nguyen Van Thong, Nguyen Thi Thanh Truc, |Dang Le Dung Nghi, Pham Thi Van Anh, Vu Thi Nhung * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Supplement Vol 22 - No 3- 2018: 431- 437 Background: Prenatal diagnosis was primarily performed on samples of amniotic fluid in second trimester or of chorionic villus in first trimester of pregnancy However, in Vietnam, while the prenatal diagnosis on amniotic fluid is applied broadly, the prenatal diagnosis on chorionic villus is applied fairly limited and needs more research to improve Objectives: To evaluate the application of FISH and karyotyping techniques at Hung Vuong Hospital to better serve the prenatal diagnosis program in the first trimester of pregnancy Methods: Chorionic villus sampling was performed on 67 cases Then the samples were divided into parts for FISH and karyotyping techniques FISH technique on chorionic villus used AneuVysion probes to rapidly * Bệnh viện Hùng Vương Tác giả liên lạc: CN Lê Quang Tín ** Hội Phụ Sản TP Hồ Chí Minh ĐT: 0908938796 Email: lequangtin264@gmail.com Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật Trường Đại Học Y Khoa Phạm Ngọc Thạch năm 2018 431 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Tập 22 * Số * 2018 detect the aneuploidies of chromosomes 13, 18, 21, X, Y And the karyotyping technique combined methods of flask culturing and in situ culturing to detect chromosomal abnormalities of chorionic vilous cells Results: 62 cases were performed FISH technique with all of them were informative and 98.2% coincided with karyotype results 67 cases were performed karyotyping technique with 91% of them successfully implemented, however the quality of the templates was lower than the new standards of the ACMG Abnormal ratio was 23.9% in the study, including trisomy 21 accounted for the highest proportion (10.4%) Conclusion: FISH technique on chorionic villus has proved effective, however karyotyping technique has not achieved success as expected So it need further research to improve the technology Keyword: FISH, karyotype, chorionic villus, CVS, prenatal diagnosis mẽ rộng khắp toàn giới Trong đó, ĐẶT VẤN ĐỀ chẩn đốn tiền sản chủ yếu thực Sinh đứa khỏe mạnh mẫu nước ối gai Chẩn đoán tiền sản mong muốn lớn tất bậc làm cha mẫu nước ối xét nghiệm phổ biến làm mẹ Tuy nhiên, bất thường thai nhi ưu điểm đơn giản, tiện lợi, nhiên xảy ảnh hưởng đến phát triển thực thai từ 16 tuần trở lên Trong trẻ sau này, đó, bất thường di truyền đó, chẩn đốn tiền sản mẫu gai ln mối quan tâm hàng đầu khơng thể phức tạp có độ rủi ro cao điều trị ảnh hưởng đến suốt đời thực tháng đầu thai kỳ, nhờ đứa trẻ Vì vậy, bậc phụ huynh có nhu cầu việc chấm dứt thai kỳ trở nên đơn giản muốn biết trước liệu thai nhi có bị bất thai bất thường làm giảm tâm lý lo thường di truyền hay khơng để họ lắng cho phụ huynh thai bình thường định nên tiếp tục dưỡng thai hay chấm dứt Tại Việt Nam, chẩn đốn tiền sản chủ yếu thai kỳ Từ đó, xét nghiệm chẩn đoán tiền thực mẫu nước ối Các kỹ thuật sản đời nhằm giúp giải nhu cầu chẩn đoán tiền sản mẫu gai thiết áp dụng hạn chế Riêng bệnh viện Trong chẩn đoán tiền sản, kỹ thuật nhiễm Hùng Vương, chẩn đoán tiền sản chủ yếu sắc thể đồ (karyotype) xem tiêu chuẩn dựa mẫu nước ối với kỹ thuật vàng giúp phát bất thường số FISH karyotype Trong đó, nhiều trường hợp lượng cấu trúc nhiễm sắc thể thai có nguy bất thường NST tháng (NST) thai nhi với độ xác cao (99,4% (6) 99,8%) Tuy nhiên, kĩ thuật phải trải qua đầu thai kỳ hạn chế khó q trình ni cấy tế bào nên thời gian trả kết khăn kỹ thuật chẩn đoán tiền sản mẫu kéo dài khoảng 14 đến 21 ngày(6) Vào đầu gai nên thai phụ đành chờ đến tháng thập niên 1980, kỹ thuật FISH (fluorescence in thai kỳ để chọc ối Để khắc phục tình trạng situ hybridization) đời cho phép rút ngắn thời này, định thực nghiên cứu gian trả kết xuống – ngày Kỹ thuật nhằm đánh giá toàn diện việc ứng dụng kỹ dựa vào tín hiệu huỳnh quang để phát thuật FISH karyotype tế bào gai có mặt vắng mặt đoạn gen bệnh viện Hùng Vương, từ đề giải NST Tuy nhiên, nhược điểm kỹ pháp nhằm hoàn thiện kỹ thuật để phục thuật khảo sát bất thường số vụ tốt chương trình chẩn đốn tiền sản lượng NST thường gặp 13, 21, 18, X, Y tháng đầu thai kỳ bệnh viện Hùng Vương Ngày nay, với tiến khoa học Ngồi ra, nghiên cứu có mục tiêu phụ xác kỹ thuật, chẩn đoán tiền sản phát triển mạnh định tỷ lệ bất thường di truyền thai có 432 Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật Trường Đại Học Y Khoa Phạm Ngọc Thạch năm 2018 Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 Nghiên cứu Y học định làm sinh thiết gai tam cá nguyệt thứ nhỏ không đủ thực xét nghiệm ưu tiên thực karyotype Phương pháp nghiên cứu Kỹ thuật FISH gai bệnh viện Hùng Vương gồm bước chính: xử lý mẫu, trải lam, lai, rửa lai phân tích kết Trước tiên, mẫu gai thu xử lý dung dịch nhược trương sodium citrate dung dịch cố định Carnoy (3 methanol : acid acetic) Dịch sau xử lý trải lên lam nhỏ lượng mẫu dò lên lam (mẫu dò AneuVysion hãng Vysis với loại CEP 18/X/Y lai NST 18, X, Y LSI 13/21 lai NST 13, 21) Tiếp đó, lam biến tính 730C phút lai qua đêm bể ổn nhiệt 420C Sáng hôm sau, lam ngâm với dung dịch rửa lai nhuộm thuốc nhuộm huỳnh quang DAPI, sau phân tích kết kính hiển vi huỳnh quang Mỗi lam khảo sát 100 nhân, trường hợp nghi ngờ thể khảm khảo sát 200 nhân Thiết kế nghiên cứu Báo cáo loạt ca Tiêu chuẩn chọn mẫu Thai phụ có thai từ 11 đến 14 tuần đến khám bệnh viên Hùng Vương có số định sau: Kết sàng lọc quý I thai kỳ cho thấy thai có nguy cao bị tam nhiễm 13, 18 21 (T13 T18, T21 ≥ 1/250); Siêu âm quý I thai kỳ phát số dị dạng có liên quan đến bất thường NST; Chỉ số NT (nuchal translucency) cao (≥ 3,5 mm); Cha mẹ mang bất thường NST cân di truyền cho Các thai phụ chọn lọc tư vấn rõ ràng đồng ý tham gia nghiên cứu thông qua cam kết đồng thuận có chữ ký thai phụ chồng Tiêu chuẩn loại trừ Rối loạn đông máu, giang mai, vị trí khơng phù hợp với sinh thiết qua ngả bụng Cỡ mẫu Chọn mẫu toàn Thời gian nghiên cứu Từ tháng 1/2013 đến tháng 10/2015 Phương pháp tiến hành Kỹ thuật sinh thiết gai bệnh viện Hùng Vương kỹ thuật sinh thiết qua ngả bụng hướng dẫn siêu âm Bác sĩ gây tê vị trí dự định sinh thiết, tiếp dùng kim SpinoCan 25G đâm xuyên qua thành tử cung đến vị trí bánh để lấy lượng nhỏ mẫu gai áp lực âm Mẫu gai thu rửa máu mẹ thực FISH, karyotype Trường hợp lượng mẫu Kỹ thuật karyotype gai bệnh viện Hùng Vương trải qua bước chính: ni cấy gai nhau, thu hoạch, nhuộm phân tích kết Trong đó, q trình ni cấy gai thực qua giai đoạn: nuôi cấy flask (thời gian từ – 15 ngày) nuôi cấy in situ đĩa petri chứa kính (từ – ngày) sử dụng môi trường Aminomax đặc trưng cho tế bào gai tăng sinh Sau đạt mật độ tế bào phù hợp, colcemid thêm vào để ngưng phân bào kỳ Tiếp đó, mẫu gai thu hoạch dung dịch nhược trương sodium citrate dung dịch cố định Carnoy, dán kính lên lam Lam sau thu hoạch nhuộm band G Giemsa trypsin, sau khảo sát phân tích hệ thống kính hiển vi có kết nối với máy vi tính chứa phần mềm Meta System Dựa theo tiêu chuẩn trích Diagnostic Cytogenetics (1999), ca khảo sát (đếm số lượng NST nhận biết NST giới tính) 15 cụm NST phân tích (xếp thành karyotype hoàn chỉnh) cụm NST Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật Trường Đại Học Y Khoa Phạm Ngọc Thạch năm 2018 433 Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Tập 22 * Số * 2018 Nghiên cứu Y học Thu thập phân tích số liệu: Kết thu thập phân tích phần mềm Microsoft Excel Stata SE KẾT QUẢ Tổng cộng có 67 thai phụ tham gia nghiên cứu với đa số thai phụ khoảng 12 tuần tuổi (64,2%) Trong 67 ca thực sinh thiết gai nhau, khơng có trường hợp khơng thu gai khơng có trường hợp gặp tai biến sau sinh thiết Tuy nhiên, có trường hợp lượng gai thu nên đủ làm karyotype Vì vậy, kỹ thuật FISH thực 62 số 67 ca sinh thiết Bảng 1: Kết kỹ thuật FISH gai Kết FISH Số ca Bình thường Bình thường XX Bình thường XY Bất thường Thể tam nhiễm 21 Thể tam nhiễm 18 Thể tam nhiễm 13 Thể đơn nhiễm X Không thực FISH 47 20 27 15 Tỷ lệ (%) N=62 N=67 75,8 70,1 32,3 29,9 43,5 40,3 24,2 22,4 11,3 10,4 4,8 4,5 1,6 1,5 6,5 7,5 Tất ca thực FISH cho kết với 24,2% ca bất thường, thể tam nhiễm 21 chiếm tỷ lệ cao (11,3%) Có trường hợp thể khảm thể đơn nhiễm X/ XY với tỷ lệ khảm 37% (74/200 nhân bất thường) Bảng 2: Kết kỹ thuật karyotype gai Kết karyotype Số ca Bình thường Bình thường XX Bình thường XY Bất thường Bất thường số lượng NST Bất thường cấu trúc NST Không kết 46 20 26 15 14 Tỷ lệ (%) N=61 N=67 75,4 68,7 32,8 29,9 42,6 38,8 24,6 22,4 23 20,9 1,6 1,5 Trong 67 ca thực karyotype, 61 ca cho kết (91%) ca không cho kết (9%) Các trường hợp bất thường số lượng NST thể tam nhiễm 13/18/21 thể đơn nhiễm X Trường hợp bất thường cấu trúc chuyển đoạn NST 11 NST 20: 46,XY,der(11)t(11;20)(q21;q13.1)pat Bảng 3: Tổng hợp kết FISH karyotype gai Kết xét nghiệm gai Bình thường Bình thường XX Bình thường XY Bất thường Thể tam nhiễm 21 Thể tam nhiễm 18 Thể tam nhiễm 13 Thể đơn nhiễm X Bất thường cấu trúc Khơng có kết Tổng (N=67) Tỷ lệ (%) 50 74,6 21 31,3 29 43,3 16 23,9 10,4 4,5 1,5 1,5 1,5 57 ca có kết FISH lẫn karyotype, 56 ca kết FISH karyotpe trùng khớp với (chiếm 98,2%) Chỉ có trường hợp kết FISH karyotype không trùng khớp FISH cho bất thường thể khảm đơn nhiễm X/ XY (37%) karyotype lại cho kết bất thường toàn (9 cụm NST khảo sát) Có ca khơng có kết không thực FISH đồng thời karyotype thất bại Với trường hợp trên, thai phụ đề nghị chọc ối Kết karyotype có 15 ca bất thường kết tổng hợp lại có 16 ca bất thường trường hợp kết FISH cho thể đơn nhiễm X karyotype lại không cho kết (mẫu bị nhiễm) Thai phụ đề nghị chọc ối kết xét nghiệm nước ối trùng khớp với kết FISH gai Tương tự, kết FISH có 15 ca bất thường kết tổng hợp có 16 ca bất thường trường hợp bất thường cấu trúc phát kỹ thuật FISH mà phát karyotype (chuyển đoạn NST 11 20) Như vậy, tỷ lệ bất thường nghiên cứu 23,9%, đó, thể tam nhiễm 21 bất thường phổ biến với 10,4% (chiếm 43,8% số trường hợp bất thường) 434 Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật Trường Đại Học Y Khoa Phạm Ngọc Thạch năm 2018 Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 BÀN LUẬN Kết sinh thiết gai Trong số 67 ca thực sinh thiết gai bệnh viện Hùng Vương, khơng có trường hợp gặp tai biến sau thủ thuật Đây kết khả quan, nhiên tỷ lệ sẩy thai theo lý thuyết khoảng 1%(5) Vì vậy, muốn chứng minh mức độ an toàn kỹ thuật sinh thiết gai bệnh viện Hùng Vương, cần phải nghiên cứu với cỡ mẫu lớn nhiều Kết FISH gai Kỹ thuật FISH gai nghiên cứu thực 62 ca với 100% số ca cho kết Nếu so với kết karyotype, số 57 ca có kết FISH lẫn karyotype, tỷ lệ tương thích FISH karyotype 98,2% (KTC 95% 0,91 – 0,99) với ca kết FISH không trùng khớp với karyotype Đó trường hợp kỹ thuật FISH cho kết thể khảm đơn nhiễm X/ XY (74/200 nhân bất thường chiếm 37%) karyotype cho bất thường toàn Do karyotype xem tiêu chuẩn vàng chẩn đoán tiền sản nên kết karyotype có độ tin cậy cao Tuy nhiên, xét nghiệm gai nhau, kết có sai lệch mà ngun nhân khơng phải xuất phát từ vấn đề kỹ thuật mà hạn chế xét nghiệm gai Do có khác biệt nguồn gốc thai thai có nguồn gốc từ khối tế bào (ICM: inner cell mass), có nguồn gốc từ khối tế bào lẫn nguyên bào nuôi (trophoblast) giai đoạn blastocyst(10) Vì vậy, nhiều khả kết mặt di truyền thai khác Trong đó, khơng loại trừ khả kết gai bất thường thai bình thường tạo thành tượng khảm khú trú bánh (CPM: confined placental mosaicsm)(3) Do đó, để đảm bảo tính xác kết quả, ca xét nghiệm gai cho kết khảm nên tiếp tục xét nghiệm nước ối để làm đối chứng(3,10) Với trường hợp nghiên cứu, kết chọc ối thể đơn nhiễm X (tồn Nghiên cứu Y học khảm) trường hợp khảm thật Nếu kết chọc ối bình thường trường hợp khảm khu trú bánh loại II III (bất thường tồn tế bào gai nuôi cấy không tồn thai)(3) Đáng tiếc thai phụ định bỏ thai thay chọc ối, ta khơng thể biết xác thai nhi rơi vào trường hợp Dù vậy, với việc thể đơn nhiễm X tồn kết FISH lẫn karyotype, đồng thời phù hợp với kết siêu âm (nang dịch vùng gáy) nên cho thấy độ tin cậy kỹ thuật Nếu so với nghiên cứu khác giới Brydorf (1996), Quilter (2001), Goumy (2004), Toutain (2009) nghiên cứu tương tự nghiên cứu với 100% số ca thực cho kết gần tất trùng khớp với karyotype(1,2,7,9) Kết nghiên cứu cho thấy độ nhạy độ đặc hiệu kỹ thuật FISH gai gần tuyệt đối, khơng có trường hợp dương tính giả hay âm tính giả ghi nhận Do đó, khẳng định FISH gai cơng cụ chẩn đốn nhanh, hiệu xác Trong số xét nghiệm tiền sản nhanh nay, bên cạnh kỹ thuật FISH, kỹ thuật QF-PCR (Quantitative Fluorescence Polymerase Chain Reaction) đời muộn ngày trở nên phổ biến nhờ ưu điểm đơn giản, tự động hố, lượng mẫu sử dụng ít, trả kết ngày Tuy nhiên, kỹ thuật đòi hỏi hệ thống PCR hệ thống điện di mao quản đắt tiền kỹ thuật FISH cần hệ thống kính hiển vi huỳnh quang thường có trung tâm tế bào di truyền(6) Bên cạnh đó, kỹ thuật FISH có hiệu chẩn đoán trường hợp thể khảm khảo sát nhân tế bào nên cho cụ thể tỷ lệ bất thường Số lượng nhân tế bào khảo sát trường hợp thể khảm tăng lên (khoảng 200 nhân) tỷ lệ bất thường xác, điều mà kỹ thuật QF-PCR khó để xác định Vì vậy, kỹ thuật FISH đóng vai trò quan trọng, đặc biệt trung tâm di truyền vừa nhỏ(6) Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật Trường Đại Học Y Khoa Phạm Ngọc Thạch năm 2018 435 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Tập 22 * Số * 2018 Kết karyotype gai Trong số 67 ca thực karyotype, có 56 ca đạt tiêu chuẩn (chiếm 83,6%), 11 ca khơng đạt tiêu chuẩn, có ca khơng có tế bào Trong ca lại, có ca có kết bất thường ca trùng với kết FISH nên trả kết Tổng cộng có 61 ca cho kết karyotype ca không cho kết Như vậy, tỷ lệ thành công karyotype gai nghiên cứu 91% (KTC 95% 0,82 – 0,97) Trong số ca thực thành công, kết cụm khảo sát trùng khớp với trùng khớp với kết FISH (khơng tính trường hợp thể khảm) Trong số ca thất bại có ca khơng làm FISH, khơng có kết để trả thai phụ đề nghị chọc ối Trong ca lại, có ca thai phụ muốn chọc ối làm xét nghiệm ca kết trùng khớp với kết FISH gai Trong số ca thất bại, có ca bị nhiễm khuẩn, ca tế bào không phát triển ca không đủ số lượng cụm NST để trả kết Trường hợp bị nhiễm sơ suất q trình thao tác Ngun nhân tế bào khơng phát triển lượng mẫu thu q ít, khơng thể phân biệt gai màng rụng mẹ Do đó, nhiều khả mẫu cấy gai nên tế bào tăng sinh môi trường nuôi cấy Với ca có số lượng cụm NST (12, 13, 10 cụm NST), không phù hợp với tiêu chuẩn đề (15 cụm) nên trả kết Nếu so với nghiên cứu Iqbal (1998), Sikkema- Raddatz (2000), Jorge (2014) kết karyotype nghiên cứu thấp so với nghiên cứu khác giới (mức độ thành công 99,6; 99,7 93,7%)(4,5,8) Đồng thời, theo tiêu chuẩn ACMG công bố năm 2009, karyotype gai nên khảo sát 20 cụm NST đến từ nuôi cấy độc cao tiêu chuẩn phòng Tuy nhiên, điều kiện bệnh viện Hùng Vương khó để áp dụng tiêu chuẩn mà nguyên nhân chủ yếu trang thiết bị hạn chế Khác với ni cấy tế bào ối, ni cấy gai khó khăn nhiều đồng thời có đòi hỏi cao trang thiết bị hóa chất sử dụng Bên cạnh đó, vấn đề giá thành ca ni cấy gai cần phù hợp với kinh tế người dân Việt Nam Nếu theo tiêu chuẩn này, số 67 ca thực karyotype, có 32 ca đạt chuẩn số lượng cụm NST chiếm tỷ lệ 47,8% Vì vậy, trước mắt chúng tơi chưa thể áp dụng tiêu chuẩn ACMG Tuy nhiên, tiếp tục nghiên cứu cải tiến nhằm hướng đến tiêu chuẩn mà ACMG vừa cơng bố Tóm lại, hạn chế trang thiết bị hóa chất, chất lượng karyotype gai chưa đạt thành cơng mong đợi Vì vậy, chúng tơi tiếp tục nghiên cứu cải tiến cho kỹ thuật karyotype gai cho chất lượng tốt điều kiện sở vật chất thiết bị phòng xét nghiệm di truyền bệnh viện Hùng Vương Như vậy, tổng hợp kết FISH lẫn karyotype gai nhau, số 67 ca nghiên cứu, có 50 ca bình thường chiếm tỷ lệ 74,6% 16 ca bất thường chiếm 23,9%, thể tam nhiễm 21 có số lượng nhiều (chiếm 43,8% ca bất thường) Điều phù hợp với y văn thể tam nhiễm 21 bất thường di truyền phổ biến nhất(1,9) Nhìn chung, tỷ lệ bất thường ca làm sinh thiết gai cao nhiều so với ca chọc ối (vốn chiếm từ – 5% theo số liệu từ phòng Di truyền – Bệnh viện Hùng Vương) Nguyên nhân nhiều trường hợp bất thường NST tam cá nguyệt thứ sẩy thai trước bước qua tam cá nguyệt thứ Do đó, số ca bất thường NST phát tam cá nguyệt thứ cao tam cá nguyệt thứ Bên cạnh ca có định sinh thiết gai thường có tỷ lệ bất thường siêu âm cao so với định chọc ối 436 Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật Trường Đại Học Y Khoa Phạm Ngọc Thạch năm 2018 Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 Nguy nhiễm tế bào mẹ Nhiễm tế bào mẹ vấn đề lớn chẩn đốn tiền sản làm sai lệch kết Trong xét nghiệm gai nhau, màng rụng máu nguồn tế bào mẹ mẫu nhau(10) Tuy nhiên, vấn đề không nghiêm trọng xét nghiệm nước ối mẫu thu kỹ thuật sinh thiết gai trải qua trình tách máu màng rụng trước xét nghiệm(2) Nếu trình phân tách ban đầu tốt tế bào mẹ sót lại nằm khoảng từ 1,8 – 4%, không ảnh hưởng nhiều đến kết KẾT LUẬN Qua 67 trường hợp thực sinh thiết gai bệnh viện Hùng Vương, tỷ lệ bất thường 23,9%, thể tam nhiễm 21 chiếm tỷ lệ cao (10,4%) Kỹ thuật FISH cho thấy tính hiệu với 100% số ca cho kết quả, đồng thời tương thích kết FISH karyotype gai 98,2% (KTC 95% 0,91 – 0,99) Kỹ thuật karyotype gai có tỷ lệ thành công 91% (KTC 95% 0,82 – 0,97) thấp so với nhiều nghiên cứu khác giới, đồng thời chất lượng tiêu thấp so với tiêu chuẩn ACMG Do đó, cần tiếp tục nghiên cứu với số lượng mẫu lớn nhằm cải tiến quy trình karyotype gai để nâng cao chất lượng kỹ thuật Nghiên cứu Y học Goumy C, Bonnet-Dupeyron M, Cherasse Y, Laurichesse H, Jaffray J, Lacroute G, Geneix A, Lemery D, Vago P (2004), "Chorionic villus sampling (CVS) and fluorescence in situ hybridization (FISH) for a rapid first-trimester prenatal diagnosis", Prenatal Diagnosis, 24 (4), 249-256 Grati F, Grimi B, Frascoli G, Di Meco A, Liuti R, Milani S, Trotta A, Dulcetti F, Grosso E, Miozzo M, Maggi F, Simoni G (2006), "Confirmation of mosaicism and uniparental disomy in amniocytes, after detection of mosaic chromosome abnormalities in chorionic villi", European Journal of Human Genetics, 14 (3), 282–288 Iqbal M, Manko G, Trabin J, Virelles C, Jackson L (1998), "Cytogenetic evaluation of 1000 cases of chorionic villus sampling", Annals of Saudi Medicine, 18 (6), 506-510 Jorge P, Mota-Freitas M, Santos R, Luz Silva M, Soares G, Fortuna A (2014), "A 26-Year Experience in Chorionic Villus Sampling Prenatal Genetic Diagnosis", Journal of Clinical Medicine, (3), 838-848 Nguyễn Vạn Thông, Khổng Hiệp, Hoàng Hiếu Ngọc, Phạm Hùng Vân (2011), "Ứng dụng kinh nghiệm sử dụng kỹ thuật chẩn đoán nhanh (FISH, MLPA QF-PCR) bất thường lệch bội nhiễm sắc thể thường gặp chẩn đốn trước sinh", Tạp chí Y Học Thành Phố Hồ Chí Minh, 15 (2), 39-44 Quilter C, Holman S, Al-Hammmandi R, Theodorides D, Hasting R, Delhanty J (2001), "Aneuploidy screening in direct chorionic villus samples by flourescence in situ hybridisation: the uses of commercial probes in a clinical setting", British Journal of Obstetrics and Gynaecology, 108 (2), 215-218 Sikkema-Raddatz B, Bouman K, Verschuuren-Bemelmans C, Stoepker M, Mantingh A, Beekhuis J, de Jong B (2000), "Four years' cytogenetic experience with the culture of chorionic villi", Prenatal Diagnosis, 20 (12), 950-955 Toutain J, Epiney M, Begorre M, Dessuant H, Vandenbossche F, Horovitz J, Saura R (2010), "First-trimester prenatal diagnosis performed on pregnant women with fetal ultrasound abnormalities: The reliability of interphase fluorescence in situ hybridization (FISH) on mesenchymal core for the main aneuploidies", European Journal of Obstetrics & Gynecology and Reproductive Biology, 149, 143-146 TÀI LIỆU THAM KHẢO Bryndorf T, Christensen B, Vad M, Parner J, Carelli M, Ward B, Klinger K, Bang J, Philip J (1996), "Prenatal detection of chromosome aneuploidies in uncultured chorionic villus samples by FISH", Am J Hum Genet, 59 (4), 918-926 Ngày nhận báo: /10/2017 Ngày phản biện nhận xét báo: /10/2017 Ngày đăng: 20/04/2018 Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật Trường Đại Học Y Khoa Phạm Ngọc Thạch năm 2018 437 ... gian trả kết khăn kỹ thuật chẩn đoán tiền sản mẫu kéo dài khoảng 14 đến 21 ngày(6) Vào đầu gai nên thai phụ đành chờ đến tháng thập niên 1980, kỹ thuật FISH (fluorescence in thai kỳ để chọc ối Để... thực nghiên cứu gian trả kết xuống – ngày Kỹ thuật nhằm đánh giá toàn diện việc ứng dụng kỹ dựa vào tín hiệu huỳnh quang để phát thuật FISH karyotype tế bào gai có mặt vắng mặt đoạn gen bệnh viện... 74,6 21 31 ,3 29 43, 3 16 23, 9 10,4 4,5 1,5 1,5 1,5 57 ca có kết FISH lẫn karyotype, 56 ca kết FISH karyotpe trùng khớp với (chiếm 98,2%) Chỉ có trường hợp kết FISH karyotype không trùng khớp FISH