Nghiên cứu thực hiện nhằm đánh giá độc tính lên tế bào gốc trung mô tủy xương người (hBMSCs) của xi măng BiodentineTM bằng phương pháp nuôi cấy tế bào với dịch chiết vật liệu.
Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 BƯỚC ĐẦU SỬ DỤNG MƠ HÌNH NI CẤY TẾ BÀO ĐỂ ĐÁNH GIÁ ĐỘC TÍNH TẾ BÀO CỦA XI MĂNG NHA KHOA Trần Xuân Vĩnh* TÓM TẮT Mục tiêu nghiên cứu: Nghiên cứu thực nhằm đánh giá độc tính lên tế bào gốc trung mô tủy xương người (hBMSCs) xi măng BiodentineTM phương pháp nuôi cấy tế bào với dịch chiết vật liệu Đối tượng phương pháp: hBMSC cung cấp nhóm vật liệu y sinh thuộc trường Đại Học Khoa Học Tự Nhiên Thành Phố Hồ Chí Minh Dịch chiết BiodentineTM chuẩn bị pha loãng theo nồng độ 100%, 50%, 25%, 12,5% 6,25%, sau đưa vào đĩa 96 giếng có hBMSCs Đánh giá độc tính tế bào phương pháp MTT Kết quả: Dịch chiết BiodentineTM chưa pha loãng (nồng độ 100%) độc với tế bào hBMSCs Các nồng độ pha lỗng 50%, 25%, 12,5% 6,25% khơng độc với tế bào Phần trăm tế bào sống tăng nồng độ dịch chiết BiodentineTM pha loãng Kết luận: Từ kết thu được, chúng tơi kết luận việc sử mơ hình ni cấy tế bào với việc pha loãng dịch chiết vật liệu phù hợp để đánh giá độc tính vật liệu lên tế bào Nồng độ 12,5% 6,25% nồng độ lý tưởng sử dụng để thực đánh giá tính tương hợp sinh học khác Từ khố: tế bào gốc trung mô tuỷ xương người, BiodentineTM , độc tính tế bào ABSTRACT INITIATIVE STUDY OF CYTOTOXICITY OF DENTAL CEMENT BY CELL CULTURE MODEL Tran Xuan Vinh * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Supplement Vol 22 - No 2- 2018: 12- 16 Objective: The study was to evaluate the toxicity of BiodentineTM cement to human Bone Marrow Stem Cells (hBMSCs) by cell culture with material extracts Methods: hBMSCs was produced by Ho Chi Minh City University of Science BiodentineTM were prepared, diluted at 100%, 50%, 25%, 12.5% and 6.25%, and added to culture insert plates which was placed into 96 wells containing culture cells Cytotoxicity was assessed using MTT method Results: 100% BiodentineTM extract is toxic to hBMSCs Diluted concentrations of 50%, 25%, 12.5% and 6.25% are not toxic to the cells The percentage of cell vitability increases as the concentration of BiodentineTM extract decreases Conclution: We can conclude that cell culture models with dilution of the material extracts is appropriate to assess the toxicity of the material to the cell Concentrations of 12.5% or 6.25% are ideal for other biocompability evaluations Key words: human Bone Marrow Stem Cells, BiodentineTM, Cytotoxicity Số lượng tế bào bị ảnh hưởng cho biết liều MỞ ĐẦU lượng độc lực hoá chất Thử nghiệm độc Một vật liệu coi “gây độc tế bào” tính lên tế bào thử nghiệm đầu giải phóng lượng hố chất đủ để giết chết tiên tiến trình đánh giá tương hợp sinh học tế bào theo cách trực tiếp gián tiếp thông vật liệu Ba thử nghiệm tế bào chủ yếu qua ức chế đường trao đổi chất sử dụng là: tiếp xúc trực tiếp, khuếch tán *Bộ môn Nha khoa sở, Khoa Răng Hàm Mặt, Đại học Y Dược Tp.HCM Tác giả liên lạc: TS Trần Xuân Vĩnh ĐT: 0946920818 Email: vinhdentist@yahoo.com 12 Chuyên Đề Răng Hàm Mặt Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 qua agar tách chiết (còn gọi pha loãng dịch chiết) Việc lựa chọn thử nghiệm tùy thuộc vào đặc tính vật liệu, lí tiến hành thử nghiệm khuynh hướng sử dụng vật liệu BiodentineTM xi măng có thành phần calcium silicate phát triển nhằm cải thiện hạn chế MTA(8) BiodentineTM có thời gian đơng cứng ngắn khoảng 12 phút, đặc tính học cải thiện, dễ thao tác(12) dùng lĩnh vực chữa răng-nội nha che tủy trực tiếp, chất thay ngà bên vật liệu trám…Nhiều nghiên cứu thực nhằm đánh giá độc tính BiodentineTM dòng tế bào khác nguyên bào sợi tủy người(5), tế bào gốc tủy người(1,9), tế bào tủy chuột(14) Mặc dù BiodentineTM đề nghị dùng điều trị trám ngược, thủng sàn tủy số lượng nghiên cứu đánh giá tác động BiodentineTM lên vùng quanh chóp hạn chế Năm 2014, Lee B.N cộng tiến hành đánh giá độc tính BiodentineTM, MTA Bioaggregate tiếp xúc với tế bào dòng C3H10T1/2(8) Gần đây, có nghiên cứu đánh giá độc tính tế bào hBMSCs BiodentineTM MM – MTA, MTA(10) Tuy nhiên nghiên cứu đánh giá vật liệu độc hay không độc, mà chưa xác định nồng độ gây độc với tế bào hBMSCs Vì chúng tơi thực đánh giá độc tính BiodentineTM tế bào hBMSCs Nghiên cứu Y học phương pháp nuôi cấy tế bào với dịch chiết vật liệu có nhiều nồng độ khác ĐỐITƯỢNG-PHƯƠNGPHÁPNGHIÊNCỨU Nghiên cứu In vitro thực hBMSC tiếp xúc với dịch chiết BiodentineTM Tạo khối pha loãng nồng độ dịch chiết Trộn BiodentineTM theo quy định nhà sản xuất, cho vật liệu vào khuôn (4x1mm), chờ khối vật liệu đông, ngâm khối vật liệu vào môi trường DMEM/F12 Sau 24 thu dịch chiết Tỷ lệ diện tích khối vật liệu: thể tích mơi trường DMEM/F12 300mm2: 1ml (theo tiêu chuẩn ISO 10993-12:2012) Thu dịch chiết có nồng độ 100% pha lỗng dịch chiết với nồng độ 50%, 25%, 12,5% 6,25% Đánh giá độc tính tế bào phương pháp MTT Cấy hBMSCs (P4) đĩa 96 giếng Mỗi giếng có khoảng 5x103 tế bào Sau 24 giờ, thay môi trường DMEM/F12 dịch chiết nồng độ 100%, 50%, 25%, 12,5% 6,25% Gồm nhóm: nhóm tiếp xúc dịch chiết BiodentineTM nhóm chứng âm nhóm chứng dương Tiến hành xác định % tế bào sống nồng độ dịch chiết Xử lý phân tích số liệu Số liệu nhập xử lý chương trình Microsoft Excel 2010 với phép kiểm Anova yếu tố, t-test KẾT QUẢ Bảng Phần trăm tế bào sống tiếp xúc với BiodentineTM (BD), chứng âm chứng dương theo nồng độ Loại vật liệu BD (-) (+) Chưa pha lỗng 19,500 (±1,162) 100,000 (±9,760) 4,583 (±0,264) Trung bình(± Độ lệch chuẩn) Nồng độ 50% Nồng độ 25% Nồng độ12,5% 70,700 (±3,460) 86,700 (±3,525) 97,500 (±13,011) 100,000 (±9,760) 100,000 (±9,760) 100,000 (±9,760) 4,583 (±0,264) 4,583 (±0,264) 4,583 (±0,264) Nồng độ 6,25% 100,900 (±2,877) 100,000 (±9,760) 4,583 (±0,264) BD: BiodentineTM, (-): chứng âm, (+): chứng dương Dịch chiết BiodentineTM nồng độ chưa pha loãng (100%) độc với tế bào hBMSCs (phần trăm tế bào sống