Bài viết Khảo sát tỷ lệ nhiễm HPV ở phụ nữ có kết quả tế bào học cổ tử cung bất thường với hai phương pháp Aptima HPV và realtime PCR HPV trình bày xác định tỷ lệ nhiễm HPV ở phụ nữ có kết quả tế bào học cổ tử cung bất thường theo 2 phương pháp (Atipma HPV và Realtime PCR HPV).
TẠP CHÍ Y HỌC VIỆT NAM TẬP 519 - THÁNG 10 - SỐ CHUYÊN ĐỀ - 2022 KHẢO SÁT TỶ LỆ NHIỄM HPV Ở PHỤ NỮ CÓ KẾT QUẢ TẾ BÀO HỌC CỔ TỬ CUNG BẤT THƯỜNG VỚI HAI PHƯƠNG PHÁP APTIMA HPV VÀ REALTIME PCR HPV Lưu Nguyễn Trung Thông*, Nguyễn Thị Băng Sương*/**, Huỳnh Giang Châu***, Ngô Quốc Đạt**, Lê Nguyễn Thảo Phương****, Nguyễn Hữu Huy*, Lê Minh Khơi */** TĨM TẮT Đặt vấn đề: Ngun nhân gây nên hiểm họa UTCTC vi rút u nhú người (HPV – Human Papilloma Virus), tác nhân lây truyền qua đường tình dục Hiện có nhiều phương pháp để phát nhiễm vi rút HPV Các xét nghiệm sinh học phân tử mở cách mạng nghiên cứu chẩn đoán lâm sàng, nhiên việc phát HPV DNA cho thấy tình trạng nhiễm vi rút thống qua, khơng có nghĩa tiền ung thư UTCTC Vì vậy, số phương pháp xét nghiệm dựa việc phát mRNA từ gen gây ung thư E6/E7 HPV týp nguy cao phát triển, xét nghiệm Atipma HPV Mục tiêu nghiên cứu: Xác định tỷ lệ nhiễm HPV phụ nữ có kết tế bào học cổ tử cung bất thường theo phương pháp (Atipma HPV Realtime PCR HPV) Phương pháp nghiên cứu: Nghiên cứu cắt ngang mô tả 104 bệnh nhân nữ đến khám Bệnh viện Hùng Vương, từ tháng 03/2020 tới *Bệnh viện Đại học Y Dược TP.HCM **Đại học Y Dược TP.HCM ***Bệnh viện Hùng Vương ****Trường THPT chuyên Lê Hồng Phong TP.HCM Chịu trách nhiệm chính: Nguyễn Thị Băng Sương Email: suong.ntb@umc.edu.vn Ngày nhận bài: Ngày phản biện khoa học: Ngày duyệt bài: tháng 07/2020 có kết tế bào học cổ tử cung Thinprep bất thường Kết quả: Xét nghiệm Aptima HPV phát 53 ca dương tính /104 ca có kết tế bào học bất thường (chiếm tỷ lệ 51,0%) Realtime PCR HPV phát 64 ca dương tính /104 ca có kết tế bào học bất thường (chiếm tỷ lệ 61,5%) Kết luận: Xét nghiệm Realtime PCR HPV có tỷ lệ dương tính cao Aptima HPV nhóm phụ nữ có tế bào học cổ tử cung bất thường, nhiên nguy mắc tổn thương cổ tử cung mức ASC-US xét nghiệm HPV mRNA dương tính cao so với xét nghiệm HPV DNA dương tính Từ khóa: Ung thư cổ tử cung, Human Papilloma Virus, Atipma HPV, Realtime PCR HPV SUMMARY DETERMINATION OF HPV IN WOMEN WITH ABNORMAL CERVICAL CYTOLOGY RESULTS WITH TWO METHODS APTIMA HPV AND REALTIME PCR HPV Background: The main cause of cervical cancer is the human papilloma virus (HPV), a sexually transmitted agent Currently, there are many methods to detect HPV infection Molecular biology tests have ushered in a new revolution in clinical research and diagnosis, but detection of HPV DNA may indicate transient viral infection, not premalignant or cervical cancer Therefore, a method based on the detection of mRNA from the E6/E7 oncogenes of 39 HỘI NGHỊ KHOA HỌC LẦN THỨ XXV CỦA HỘI HÓA SINH Y HỌC HÀ NỘI VÀ CÁC TỈNH PHÍA BẮC high-risk HPV types have been developed, namely the Atipma HPV test Objective: The aim of the study was to determine HPV infection rate in women with abnormal cervical cytology results by methods (Atipma HPV and Realtime PCR HPV) Methods: A descriptive cross-sectional study was conducted with 104 female patients who visited Hung Vuong Hospital from March 2020 to July 2020 and had abnormal Thinprep cervical cytology results Result: Aptima HPV test detected detected 53 positive cases / 104 cases with abnormal cytology results (51.0%) and Realtime PCR HPV detected 64 positive cases /104 cases with abnormal cytology results (61.5%) Conclusion: Realtime PCR HPV test has a higher positive rate than Aptima HPV in women with abnormal cervical cytology, but the risk of cervical lesions above ASC-US level with positive HPV mRNA test result is higher than positive HPV DNA test result Key words: Cervical cancer, Human Papilloma Virus, Atipma HPV, Realtime PCR HPV I ĐẶT VẤN ĐỀ Theo Tổ chức Y tế Thế giới, Ung thư cổ tử cung (UTCTC) loại ung thư phổ biến đứng hàng thứ tư nữ giới Nguyên nhân gây nên hiểm họa UTCTC vi rút u nhú người (HPV – Human Papilloma Virus), tác nhân lây truyền qua đường tình dục Việc phát HPV DNA cho thấy tình trạng nhiễm vi rút thống qua, khơng có nghĩa tiền ung thư UTCTC [3], [4] Vì vậy, xét nghiệm Aptima HPV dựa việc phát mRNA từ gen gây ung thư E6/E7 HPV týp nguy cao phát triển nhằm góp phần giảm gánh nặng bệnh tật chi phí chăm sóc sức khỏe liên quan đến soi cổ tử cung [6] Nghiên cứu tiến hành nhằm so sánh 40 tỷ lệ dương tính với xét nghiệm Aptima HPV xét nghiệm Realtime PCR HPV nhóm phụ nữ có phát bất thường tế bào học cổ tử cung Mục tiêu nghiên cứu: Xác định tỷ lệ nhiễm HPV phụ nữ có kết tế bào học cổ tử cung bất thường theo phương pháp (Atipma HPV Realtime PCR HPV) II ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Bệnh nhân nữ đến khám Bệnh viện Hùng Vương, từ tháng 03/2020 tới tháng 07/2020 có kết tế bào học cổ tử cung Thinprep bất thường Tiêu chuẩn nhận vào - Bệnh nhân 18 tuổi đến khám bệnh viện Hùng Vương có kết tế bào học Thinprep bất thường - Bệnh nhân có định làm xét nghiệm Aptima HPV - Bệnh nhân đồng ý tham gia nghiên cứu Tiêu chuẩn loại trừ - Bệnh nhân mang thai - Bệnh nhân điều trị đốt khoét chop, cắt cổ tử cung - Bệnh nhân từ chối tham gia nghiên cứu Phương pháp nghiên cứu Thiết kế nghiên cứu: Nghiên cứu cắt ngang mô tả Cỡ mẫu: Cỡ mẫu ước lượng theo công thức: Nhiều nghiên cứu giới có khác biệt tỷ lệ p (55- 75%) Ở Việt Nam, nghiên cứu năm 2016 tác giả Nguyễn Ngọc Lâm thực bệnh viện Đại học Y Dược sở đối tượng cho tỷ lệ 63,2% [1] Do đó, nghiên cứu lựa chọn p = 0,632, d = 0,1 Kết tính N = 90 Phương pháp lấy mẫu: Thu thập thông tin từ phiếu định xét nghiệm, hồi cứu kết xét nghiệm HPV Aptima tế bào học cổ tử TẠP CHÍ Y HỌC VIỆT NAM TẬP 519 - THÁNG 10 - SỐ CHUYÊN ĐỀ - 2022 cung Thinprep, thực xét nghiệm Realtime PCR HPV Thu thập xử lý số liệu Sau thu thập số liệu, tiến hành tổng hợp, phân tích, xử lý số liệu viết báo cáo Các số liệu nhập xử lý số liệu phần mềm SPSS phiên 20.0 Giấy phép Y đức Nghiên cứu thông qua Hội đồng Đạo đức nghiên cứu Y sinh học Đại học Y Dược TP.HCM, số 758/HĐĐĐĐHYD ngày 24/10/2020 Chấp thuận Ban Giám đốc BV PSQTSG theo Quyết định số 57/11/QĐ-TCBV.20 ngày 27/11/2020 III KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU Trên 104 mẫu nghiên cứu, nhóm tế bào học cổ tử cung ASC-US cao nhất, gồm 67/104 ca (chiếm 64,4%), nhóm LSIL cao thứ hai gồm 29/104 ca (chiếm 27,9%) nhóm có bất thường từ mức HSIL trở lên thấp nhất, gồm 8/104 ca (chiếm 7,7%) Tỷ lệ đối tượng có bất thường tế bào học cổ tử cung mức ASC-US 37/104 ca (chiếm 35,6%) Khi thực hai phương pháp xét nghiệm phát vi rút HPV, ghi nhận 53/104 ca dương tính với xét nghiệm Aptima HPV (chiếm 51,0%) 64/104 ca dương tính với xét nghiệm Realtime PCR HPV (chiếm 61,5%) Trong đó, có 01 trường hợp xét nghiệm Aptima HPV cho kết dương tính Realtime PCR cho kết âm tính, 14 trường hợp Aptima HPV âm tính Realtime PCR dương tính Bảng 1: Mối liên quan các bất thường TBH CTC và xét nghiệm phát HPV mRNA HPV mRNA TBH CTC Âm tính Dương tính Giá trị p PR KTC 95% n % n % ASC-US 41 80,4 26 49,1 ≥ LSIL 10 19,6 27 50,9 0,001 4,26 1,24 – 10,23 Tổng cộng 51 100,0 53 100,0 Với kết trên, chúng tơi nhận thấy đối tượng có không phát HPV mRNA mẫu bệnh phẩm, khác biệt bất thường TBH CTC có ý nghĩa thống kê với kiểm định Chi bình phương p = 0,001 < 0,05 Nguy mắc tổn thương mức ASC-US tăng gấp 4,26 lần xét nghiệm phát mRNA HPV dương tính Bảng 2: Mối liên quan bất thường TBH CTC xét nghiệm phát HPV DNA HPV DNA TBH CTC Âm tính Dương tính Giá trị p PR KTC 95% n % n % ASC-US 32 80,4 35 54,7 ≥ LSIL 19,6 29 45,3 0,009 3,31 1,32 – 8,30 Tổng cộng 40 100,0 64 100,0 41 HỘI NGHỊ KHOA HỌC LẦN THỨ XXV CỦA HỘI HÓA SINH Y HỌC HÀ NỘI VÀ CÁC TỈNH PHÍA BẮC Giữa đối tượng có khơng phát HPV DNA mẫu bệnh phẩm, khác biệt bất thường TBH CTC có ý nghĩa thống kê với kiểm định Chi bình phương p = 0,009 < 0,05 Nguy mắc tổn thương mức ASC-US tăng gấp 3,31 lần xét nghiệm phát HPV DNA dương tính IV BÀN LUẬN Bảng 3: Tỷ lệ dương tính với HPV DNA các nhóm bất thường TBH CTC sử dụng phương pháp Realtime PCR số nghiên cứu Tỷ lệ dương tính Realtime PCR HPV DNA nhóm bất thường TBH CTC (%) Tên tác giả nơi nghiên cứu ASC-US LSIL ≥ HSIL Nghiên cứu 52,2 79,3 75,0 Nguyễn Ngọc Lâm (Việt Nam, 46,3 85,7 100,0 2016) [1] Al‐Awadhi (Kuwait, 2013) [2] 46,0 89,0 74,0 Salimovic Irma (Bosnia 45,2 63,2 75,6 Herzegovina, 2013) [7] Trong nghiên cứu chúng tôi, xét nhóm ≥ HSIL 74% [2] Trong năm nghiệm Realtime PCR tìm HPV DNA với 2013, tác giả Irma Salimovic cộng đoạn mồi GP5+/GP6+ cho kết dương công bố tỷ lệ nhiễm HPV 147 đối tượng tính 64/104 mẫu nghiên cứu Tỷ lệ nhiễm có bất thường TBH CTC phương pháp HPV nhóm ASC-US chiếm 52,2%, nhóm Realtime PCR Các nhóm ASC-US, LSIL, LSIL 79,3% nhóm ≥ HSIL 75% So HSIL nghiên cứu có tỷ lệ dương tính sánh với nghiên cứu sử dụng kỹ HPV DNA 45,2%, 63,2% thuật Realtime PCR, kết có tương 75,6% [7] Đối với nghiên cứu phụ đồng Tại Việt Nam, nghiên cứu tác giả nữ có bất thường TBH CTC sử dụng Nguyễn Ngọc Lâm năm 2016 cho thấy tỷ lệ phương pháp phát HPV DNA khác, kết dương tính HPV DNA nhóm ASC-US, khơng có nhiều thay đổi Mức độ bất LSIL, HSIL 46,3%, 85,7% thường TBH CTC cao tỷ lệ nhiễm 100% [1] Nghiên cứu Al‐Awadhi năm HPV tăng Điều cho thấy rõ 2013 Kuwait có kết tương đồng vai trò HPV biến đổi tiền ung với tỷ lệ nhiễm HPV DNA nhóm ASC-US thư UTCTC 46% Tỷ lệ nhóm LSIL 89% 42 TẠP CHÍ Y HỌC VIỆT NAM TẬP 519 - THÁNG 10 - SỐ CHUYÊN ĐỀ - 2022 Bảng 4: Tỷ lệ dương tính với HPV mRNA các nhóm bất thường TBH CTC sử dụng phương pháp Aptima HPV số nghiên cứu Tỷ lệ dương tính Aptima HPV mRNA nhóm bất Tên tác giả nơi nghiên thường TBH CTC (%) cứu ASC-US LSIL ≥ HSIL Nghiên cứu 36,0 75,9 62,5 Ge Yimin (Hoa Kỳ, 2017) [5] 51,0 63,0 97,0 Stoler (Hoa Kỳ, 2013) [8] (chỉ 42,0 nhóm ASC-US) Xét nghiệm Aptima HPV phát mRNA HPV nghiên cứu chúng tơi cho kết dương tính 53/104 mẫu nghiên cứu (51,0%) Tỷ lệ dương tính với HPV nhóm ASC-US 36%, nhóm LSIL 75,9% nhóm ≥ HSIL 62,5% Kết thấp so với nghiên cứu tác giả Stoler năm 2013 đối tượng có bất thường TBH ASC-US cho tỷ lệ dương tính nhóm 42% [8] Năm 2017, tác giả Yimin Ge phân tích xét nghiệm Aptima HPV 175 đối tượng Tỷ lệ dương tính HPV mRNA nhóm ASC-US, LSIL, ≥ HSIL 51%, 63% 97% [5] Ngoài ra, nghiên cứu cho thấy nguy mắc tổn thương mức ASCUS tăng gấp 4,26 lần xét nghiệm phát mRNA HPV dương tính (Bảng 1) Tỷ lệ cao so với xét nghiệm Realtime PCR HPV 3,31 lần (Bảng 2) Điều hợp lý xét nghiệm mRNA HPV dương tính giai đoạn biểu gen E6/E7 vi rút, giúp phân biệt trường hợp nhiễm dai dẳng kèm biến đổi tế bào cổ tử cung V KẾT LUẬN Qua kết nghiên cứu cho thấy: − Xét nghiệm Aptima HPV phát 53 ca dương tính /104 ca có kết tế bào học bất thường (chiếm tỷ lệ 51,0%) Realtime PCR phát 64 ca dương tính /104 ca có kết tế bào học bất thường (chiếm tỷ lệ 61,5%) − Nguy mắc tổn thương mức ASC-US xét nghiệm HPV mRNA dương tính cao so với xét nghiệm HPV DNA dương tính TÀI LIỆU THAM KHẢO Nguyễn Ngọc Lâm, (2016), "Kỹ thuật PCR xác định kiểu gen Human Papiloma Virus mối tương quan với phết tế bào cổ tử cung bất thường", Tạp Chí Y học TP Hồ Chí Minh, 14 (2), tr 45 - 47 Al‐Awadhi R, Chehadeh W, Jaragh M, Al‐Shaheen A, et al, (2013), "Distribution of human papillomavirus among women with abnormal cervical cytology in Kuwait", Diagnostic cytopathology, 41 (2), pp 107114 Bulkmans N, Berkhof J, Rozendaal L, Van Kemenade F, et al, (2007), "Human papillomavirus DNA testing for the detection of cervical intraepithelial neoplasia grade and cancer: 5-year follow-up of a randomised controlled implementation trial", The Lancet, 370 (9601), pp 1764-1772 Cuzick J, Clavel C, Petry K U, Meijer C J, et al, (2006), "Overview of the European and 43 ... nghiên cứu: Xác định tỷ lệ nhiễm HPV phụ nữ có kết tế bào học cổ tử cung bất thường theo phương pháp (Atipma HPV Realtime PCR HPV) II ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Bệnh nhân nữ đến khám Bệnh... quan đến soi cổ tử cung [6] Nghiên cứu tiến hành nhằm so sánh 40 tỷ lệ dương tính với xét nghiệm Aptima HPV xét nghiệm Realtime PCR HPV nhóm phụ nữ có phát bất thường tế bào học cổ tử cung Mục tiêu... kèm biến đổi tế bào cổ tử cung V KẾT LUẬN Qua kết nghiên cứu cho thấy: − Xét nghiệm Aptima HPV phát 53 ca dương tính /104 ca có kết tế bào học bất thường (chiếm tỷ lệ 51,0%) Realtime PCR phát 64