SÀNG LỌC VI SINH VẬT NỘI SINH CÂY CAO SU CÓ KHẢ NĂNG KIỂM SOÁT SINH HỌC VI NẤM Corynespora cassiicola

Hồ Chí Minh, *nguyenminhou@gmail.com 2 Viện Nghiên cứu cao su Việt Nam TÓM TẮT: Từ 28 mẫu cành lá và mô gỗ của cây cao su Hevea brasiliensis được thu thập từ thành phố Hồ Chí Minh, tỉnh

SÀNG LỌC VI SINH VẬT NỘI SINH CÂY CAO SU

CÓ KHẢ NĂNG KIỂM SOÁT SINH HỌC VI NẤM Corynespora cassiicola

Nguyễn Văn Minh 1* , Mai Hữu Phúc 1 , Võ Ngọc Yến Nhi 1 ,

Dương Nhật Linh 1 , Nguyễn Anh Nghĩa 2

1

Trường Đại học Mở tp Hồ Chí Minh, *nguyenminhou@gmail.com

2

Viện Nghiên cứu cao su Việt Nam

TÓM TẮT: Từ 28 mẫu cành lá và mô gỗ của cây cao su (Hevea brasiliensis) được thu thập từ thành phố

Hồ Chí Minh, tỉnh Bình Phước và tỉnh Bình Dương, chúng tôi đã tiến hành phân lập và sàng lọc vi sinh

vật nội sinh đối kháng với vi nấm Corynespora cassiicola, tác nhân gây bệnh rụng lá Corynespora trên

cây cao su, kết quả đã phân lập được 21 chủng vi khuẩn nội sinh, 14 chủng vi nấm nội sinh Qua thử

nghiệm đối kháng bằng phương pháp thử nghiệm kép giữa vi sinh vật nội sinh và C casiicola, đã xác định chủng T9 và T16 có kết quả đối kháng với nấm C cassiicola Ở thử nghiệm nồng độ ức chế nấm C

cassiicola bằng dịch lọc vi khuẩn, chủng T9 và T16 ở nồng độ 1:1 ức chế 100% nấm C cassiicola Còn

thử nghiệm khả năng tiêu diệt nấm C cassiicola, sau 3 lần phun dịch nuôi cấy, chủng T9 và T16 đã tiêu diệt được nấm bệnh C cassiicola Các chủng T9 và T6 đã được định danh bằng phương pháp sinh hóa có đặc điểm tương tự như vi khuẩn Bacillus thuringiensis

Từ khóa: Bacillus thuringiensis, Corynespora cassiicola, bệnh rụng lá Corynespora, biện pháp sinh học,

cây cao su, vi khuẩn nội sinh

MỞ ĐẦU

Bệnh rụng lá do vi nấm Corynespora

cassiicola (Berk & Curt.) Wei gây ra trên cây

cao su (Hevea brasiliensis), bệnh được biết đến

lần đầu tiên vào năm 1936 ở cộng hòa Sierra

Leone [25] Ban đầu, C cassiicola được coi là

một tác nhân gây bệnh không đáng kể trên cây

cao su Tuy nhiên, bệnh này ngày càng trở nên

nghiêm trọng và trở thành đại dịch ở nhiều quốc

gia Sau đó, bệnh tiếp tục được ghi nhận ở Ấn

Độ vào năm 1961 [19], Malaysia (1961) [14],

Indonesia (1983) [23], Sri Lanka và Cameroon

(1986) [12], Thái Lan (1987) [17], Banglade

(1988) [18], Việt Nam (1999) [4] và ở Trung

Quốc (2007) [9]

Bệnh rụng lá gây ra hậu quả nghiêm trọng,

làm ảnh hưởng đến sự sinh trưởng và năng suất

cho mủ của cây cao su Việc sử dụng quá nhiều

thuốc trừ bệnh có nguồn gốc hóa học có thể dẫn

đến suy thoái đất và hiện tượng kháng thuốc Để

đối phó với vấn đề này, việc kiểm soát sâu bệnh

bằng biện pháp sinh học ngày càng được chú ý

đến và đã có nhiều nghiên cứu được thực hiện

trong thời gian gần đây [15] Vi sinh vật nội sinh

được xem là một trong những đối tượng quan

trọng, được phân lập và sàng lọc để làm chế

phẩm sinh học dùng cho việc phòng trừ các loại

nấm bệnh Lợi dụng đặc tính vi sinh vật sống nội sinh trong tế bào mô thực vật đã rút ngắn được thời gian thích nghi của chế phẩm sinh học Vi sinh vật nội sinh có thể tạo nhiều chất kháng sinh đối với nấm bệnh, kích thích sự sinh trưởng cho cây và đồng thời không ảnh hưởng đến môi trường, sức khỏe cộng đồng [11, 22]

Mục tiêu của nghiên cứu này là tìm ra những vi sinh vật nội sinh có khả năng kiểm

soát sinh học vi nấm C cassiicola

VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

Vi sinh vật nội sinh được phân lập từ 28 mẫu cây cao su khỏe mạnh, được thu thập từ các vườn cao su tại huyện Củ Chi, tp Hồ Chí Minh; huyện Bến Cát, tỉnh Bình Dương; huyện Chơn Thành và thị xã Đồng Xoài, tỉnh Bình Phước

Vi nấm Corynespora cassiicola được phân

lập từ 5 mẫu lá của cây cao su bị bệnh, được thu thập từ các vườn cao su tại 3 địa phương nói trên

Phân lập vi sinh vật nội sinh

Vi sinh vật nội sinh được tiến hành phân lập

từ các lá và mô thân sống của cây cao su khỏe mạnh, không sâu bệnh Mẫu được tiến hành

phân lập trong vòng 6 giờ sau khi được thu

thập Mẫu được rửa sạch phần mô và lá dưới vòi

nước mạnh, cắt thành các đoạn nhỏ 2-4 cm để

dễ thao tác, sau đó được khử trùng bề mặt mẫu,

thực hiện lần lượt theo từng bước sau: ethanol

70% (5 phút), dung dịch sodium hypochlorite

2% (5 phút) và ethanol 70% (30 giây) Rửa lại

5 lần với nước cất vô trùng Sau khi khử trùng

bề mặt mẫu, tiến hành dùng dụng cụ đã khử

trùng cắt nhỏ hay nghiền lá, mô và phân lập trên

TSA ủ 37oC trong vài ngày để cho vi khuẩn nội

sinh phát triển, trên môi trường PDA có bổ sung

kháng sinh Chloramphenicol 0,05% và bọc kín

parafilm ủ ở 27±2oC từ vài ngày cho đến 2

tháng để cho vi nấm nội sinh phát triển [6, 7,

11]

Phân lập vi nấm gây bệnh

Các mẫu thu thập được rửa sạch bằng nước,

sau đó tiến hành khử trùng bề mặt mẫu qua các

bước: rửa nhanh mô bệnh bằng ethanol 70%,

ngâm trong hỗn hợp dung dịch natri

hypochlorite 1% và ethanol 10% (1-5 phút), rửa

lại mô bệnh với nước cất Cắt nhỏ mô bệnh 2×2

mm sau đó đặt lên môi trường PDA ủ ở nhiệt độ

27±2oC trong vài ngày để cho nấm bệnh phát

triển [2, 3]

Thử nghiệm đối kháng giữa vi sinh vật nội sinh

và nấm bệnh

Sử dụng phương pháp thử nghiệm kép, nấm

bệnh và vi sinh vật nội sinh được nuôi cách

nhau 3 cm trên đĩa môi trường PDA (đường

kính 90 mm) ở 27oC trong 6 ngày Nếu vi sinh

vật nội sinh có có khả năng ức chế nấm bệnh sẽ

thấy vùng xung quanh khuẩn lạc vi sinh vật nội

sinh, sợi nấm bệnh không sinh trưởng hoặc sinh

trưởng yếu Còn nếu vi sinh vật nội sinh không

có khả năng ức chế sự phát triển của nấm bệnh

sẽ thấy nấm bệnh phát triển bình thường [8]

Thử nghiệm tỷ lệ ức chế của dịch lọc vi khuẩn

nội sinh với nấm bệnh

Vi khuẩn được nuôi tăng sinh trong 50 mL

môi trường PD (Potato Dextrose Broth), lắc ở

150 vòng/phút ở 37oC trong 48 giờ Dịch nuôi

cấy sẽ được ly tâm 9.000 vòng/phút trong 15

phút ở 4oC Sau đó đem lọc qua màng lọc 0,2

µm Dịch khuẩn đã chuẩn bị được pha với môi

trường PGA (45oC) theo các tỷ lệ: 1:1, 1:2, 1:4,

1:8, 1:16 và được đổ lên đĩa petri (đường kính

90 mm) Hút 20 µL dịch nấm bệnh có nồng 106 CFU/mL bơm vào giữa đĩa petri đã chuẩn bị ở trên Nuôi ủ ở nhiệt độ phòng trong 6 ngày và xác định tỷ lệ ức chế theo công thức: I(%)=(C-E)/C100%, trong đó: I là tỷ lệ ức chế (%), C là đường kính nấm mốc trên đĩa đối chứng (mm),

E là đường kính nấm mốc trên đĩa chứa dịch lọc

vi khuẩn (mm) Vi khuẩn xem như có khả năng

ức chế nấm khi I≥20% Nếu I<20%, vi khuẩn không có giá trị trong khả năng kháng nấm mốc [3]

Thử nghiệm khả năng ức chế nấm bệnh của dịch lọc vi sinh vật nội sinh

Quá trình nuôi cấy tăng sinh chuẩn bị dịch lọc vi khuẩn được thực hiện tương tự như mục thử tỷ lệ ức chế nấm bệnh Dịch khuẩn phun thử nghiệm được pha với nước cất theo các nồng độ sau: 1 (dịch nguyên), 1:2, 1:4, 1:8 và 1:16 Tiến hành phun các nồng độ dịch khuẩn lên các đĩa nấm rụng lá đã được nuôi cấy trên môi trường PDA trong thời gian 4 ngày Thể tích dịch khuẩn được phun là 2 mL Đánh giá khóm nấm bệnh sau 2 ngày phun Quá trình trình phun dịch khuẩn được tiến hành 3 lần Mỗi lần cách nhau 2 ngày

Sau lần đọc kết quả thứ 3, nấm từ các đĩa được phun dịch khuẩn được cấy sang môi trường PDA ủ ở 27±2oC trong 5 ngày để kiểm tra khả năng sống sót của nấm bệnh Nếu nấm bệnh không mọc chứng tỏ dịch vi khuẩn có khả năng tiêu diệt nấm bệnh

Định danh

Những chủng có hoạt tính ức chế và tiêu diệt

nấm C cassiicola được định danh bằng phương

pháp sinh hóa theo khóa phân loại Cowan & Steel [1]

KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Phân lập vi sinh vật nội sinh

Từ 28 mẫu cành lá và mô gỗ cây cao su thu thập được, chúng tôi phân lập được 21 chủng vi khuẩn nội sinh và 14 chủng vi nấm nội sinh (dữ liệu không trình bày ở đây)

Phân lập nấm bệnh

Từ những mẫu bệnh thu thập được, chúng

tôi tiến hành phân lập và nhận thấy, nấm bệnh

phân lập từ mẫu thu thập tại Bình Phước có

những đặc điểm tương tự như nấm

C cassiicola (Berk & Curt.) Wei, được mô tả

trước đây bởi các tác giả Kwon et al (2001)

[11], Vallad (2011) [24], Jayasuriya &

Thennakoon (2007) [8] Chủng nấm phân lập đã

được gửi đến bộ môn Bảo vệ thực vật thuộc

Viện Nghiên cứu Cao su Việt Nam định danh

và được kết luận là nấm C cassiicola gây bệnh

rụng lá trên cây cao su (hình 1&2)

Thử đối kháng giữa vi sinh vật nội sinh và

nấm C cassiicola

Trong 21 chủng vi khuẩn nội sinh và 14

chủng vi nấm nội sinh, các chủng T9 và T16 có

khả năng kháng được nấm C cassiicola Các

chủng còn lại không thấy dấu hiệu kháng Nghiên cứu của Philip (2004) [16] cũng cho thấy các chủng vi khuẩn phân lập từ cây cao su cũng cho kết quả kháng được vi nấm

C cassiicola

Tỷ lệ ức chế nấm C cassiicola của vi sinh vật nội sinh

Sau 6 ngày thử nghiệm, tỷ lệ ức chế nấm C

casiicola theo nồng độ dịch khuẩn: 1:1, 1:2,

1:4, 1:8 và 1:16 của chủng T9 lần lượt là 100,00±0,00%, 96,01±1,81%, 68,13±3,29%, 64,35±0,76%, 57,47±2,19%; của chủng T16 lần lượt là: 100,00±0,00%, 84,32±1,39%, 72,12±1,90%, 54,06±1,84%, 45,31±2,34% Qua thử nghiệm nhận thấy, nồng độ dịch khuẩn giảm dần, khả năng ức chế nấm giảm dần (hình 2, 3)

Hình 1 Đặc điểm đại thể (a) và vi thể × 40 (b) của nấm C cassiicola trên PDA

Hình 2 Tỷ lệ ức chế nấm C cassiicola của

các chủng T9 và T16 ở các dạng nồng độ Hình 3 Nồng độ ức chế nấm C cassiicola

Phun dịch nuôi cấy vi sinh vật nội sinh ức

chế nấm bệnh

Sau 10 ngày thử nghiệm, kết hợp với quan

sát và đo đường kính tăng trưởng của nấm bệnh,

chúng tôi thu được kết quả (bảng 1, 2), ở cả 2

chủng T9 và T16 nồng độ nguyên và nồng độ 1:2, sợi nấm khô và không có dấu hiệu tăng trưởng Các nồng độ còn lại 1:4, 1:8, 1:16 đều có dấu hiệu tăng trưởng nhưng hạn chế (bảng 1, 2

và hình 4)

Kiểm tra sự sống sót của nấm bệnh, sau 5

ngày thu được kết quả như sau: sợi nấm cấy từ

các đĩa phun dịch của 2 chủng T9 và T16 ở các

nồng độ 1:1 không phát triển Nồng độ 1:2, sợi

nấm phát triển trở lại nhưng chậm hơn so với

mẫu nấm đối chứng Từ kết quả đó, chúng tôi có

thể kết luận rằng: ở nồng độ dịch nguyên của 2 chủng vi khuẩn T9 và T16 có khả năng tiêu diệt

được nấm C salmonicolor Nồng độ dịch khuẩn

giảm dần (nồng độ 1:2, 1:4, 1:8 và 1:16), khả

năng ức chế nấm C cassiicola giảm dần

Bảng 1 Kết quả thử nghiệm phun dịch khuẩn tiêu diệt nấm C cassiicola của chủng vi khuẩn T9

Nồng độ pha loãng

Trước

phun

(ngày 4)

48,33±0,67 50,67±0,67 46,33±1,67 51,67±0,88 47,00±1,52 56,00±2,31 Lần 1

(ngày 6) 50,67±0,67 58,67±0,67 59,00±1,00 65,67±0,66 58,00±3,46 73,00±1,15

ĐK 2,34±0,00e 8,00±0,00d 12,67±0,67bc 14,00±0,22b 11,00±1,94c 17,00±1,16a Lần 2

(ngày 8) 51,67±0,33 60,33±0,33 61,67±1,33 69,00±1,00 61,33±2,96 81,33±1,67

ĐK 1,00±0,34c 1,66±0,34c 2,67±0,33b 3,33±0,78b 3,33±0,50b 8,33±0,52a Lần 3

(ngày 10) 52,00±0,00 60,67±0,33 62,33±1,20 70,03±1,67 64,00±2,64 88,67±0,33

Kết

quả

đường

kính

nấm

(mm)

ĐK 0,33±0,33c 0,34±0,00c 0,66±0,87c 1,03±0,67bc 2,67±2,14b 7,34±0,19a

ĐK Đường kính tăng trưởng; trong cùng một cột, các giá trị trung bình với chữ cái giống nhau không có sự khác biệt ở mức 95%

Bảng 2 Kết quả thử nghiệm phun dịch khuẩn tiêu diệt nấm C cassiicola của chủng vi khuẩn T16

Nồng độ pha loãng

Trước

phun

(ngày 4)

46,00±1,00 46,67±0,67 43,67±1,86 45,33±1,45 52,00±4,36 56,00±2,31 Lần 1

(ngày 6) 52,33±0,88 56,00±3,06 55,00±2,31 55,33±2,19 63,00±4,58 73,00±1,15

ĐK 6,33±0,12c 9,33±2,39b 11,33±0,45b 10,00±0,74b 11,00±0,22b 17.00±1,16a Lần 2

(ngày 8) 57,67±0,67 56,67±2,40 57,00±1,73 56,67±2,40 64,33±4,91 81,33±1,67

ĐK 0,00±0,00e 0,67±0,01d 2,00±0,58b 1,34±0,21c 1,33±0,33c 8,33±0,52a Lần 3

(ngày 10) 57,67±0,67 57,00±2,64 57,33±2,02 57,33±2,91 65,33±4,84 88,67±0,33

Kết

quả

đường

kính

nấm

(mm)

ĐK 0,00±0,00d 0,33±0,24cd 0,33±0,29cd 0,66±0,51bc 1,00±0,07b 7,34±0,19a

ĐK Đường kính tăng trưởng; trong cùng một cột, các giá trị trung bình với chữ cái giống nhau không có sự khác biệt ở mức 95%

Định danh

Dựa vào khóa định loại của Cowan và Steel,

các chủng T9 và T16 có đặc điểm tương tự như

loài Bacillus thuringiensis với hệ số tương đồng

là 85,18% (23/27 thử nghiệm sinh hóa) Do điều

kiện phòng thí nghiệm, 4 thử nghiệm nhận biết

vỏ capsule, kết tinh tinh thể độc, ONPG, tách

chiết phage Y không được thực hiện Trong nghiên cứu của Suzuki et al (2008) [22], vi

khuẩn Bacillus thuringiensis là vi sinh vật nội

sinh phân lập được từ cây mía, còn theo

Reyes-Ramírez et al (2004) [20], vi khuẩn Bacillus

thuringiensis cũng được xem là đối tượng kiểm

soát sinh học nấm bệnh

Hình 4 Kết quả phun dịch khuẩn ở nồng độ 1:1 của chủng T9 trên nấm C cassiicola

Bảng 3 Kết quả quan sát đại thể vi thể của 2 chủng B thuringiensis T9 và T16

chủng

Hình dạng, màu sắc,

bề mặt Cách bắt màu Hình dạng Cách sắp xếp

9 T9 Tròn, tâm nhô, trắng đục,

ứớc nhày, nhăn nheo

Tím, Gram (+) Trực,có bào

tử

Riêng lẻ

16 T16 Tròn, viền răng cưa ,

trắng đục, khô xù xì

Tím, Gram (+) Trực,có bào

tử

Riêng lẻ

Hình 5 Đặc điểm đại thể (a) và vi thể (b)

của B thuringiensis T9

Hình 6 Đặc điểm đại thể (a) và vi thể (b)

của B thuringiensis T16

Đặc điểm của 2 chủng B thuringiensis T9 và

T16 nội sinh

Đặc điểm đại thể và vi thể của chủng

B thuringiensis T9 và T16 được trình bày trong

bảng 3, hình 5 và 6

KẾT LUẬN

Với những kết quả thực nghiệm đã trình bày

trên, chúng tôi đã phân lập được 21 chủng vi

khuẩn nội sinh và 14 chủng vi nấm nội sinh từ

cây cao su Các chủng T9 và T16 có khả năng

ức chế và tiêu diệt được vi nấm Corynespora

cassiicola ở nồng độ dịch nguyên Kết quả

định danh cho thấy, 2 chủng T9 và T16 có

những đặc điểm tương tự như loài Bacillus

thuringiensis

TÀI LIỆU THAM KHẢO

1 Barrow G I., Feltham R K A., 1993 Cowan and Steel's manual for the identification of medical bacteria Cambridge University Press

2 Burgess L W., Knight T E., Tesoriero L., Phan H T., 2008 Diagnostic manual for plant diseases in Vietnam ACIAR Monograph, 129 ACIAR: Canberra

3 Chang W T., Chen Y C., Jao C L., 2007 Antifungal activity and enhancement of

plant growtn by Bacillus cereus grown on

shellfish chitin wastes Bioresour Technol., 98(6): 1224-1230

4 Dung P T., Hoan N T., 1999 Corynespora

leaf fall on rubber in Vietnam, a new record

In: Proceeding of IRRDB Symposium,

October 1999, HaiKou, Hainan, China

Hainan Publishing House, 273-275

5 Gazis R., Chaverri P., 2010 Diversity of

fungal endophytes in leaves and stems of

wild rubber trees (Hevea brasiliensis) in

Peru Fungal Ecology, 3: 240-254

6 Gazis R., Miadlikowska J., Lutzoni F.,

Arnold A E., Chaverri P., 2012

Culture-based study of endophytes associated with

rubber trees in Peru reveals a new class of

Pezizomycotina: Xylonomycetes Molecular

Phylogenetics and Evolution, 65: 294-304

7 Gong M., Wang J D., Zhang J., Yang H.,

Lu X F., Pei Y., Cheng J Q., 2006 Study

of the Antifungal Ability of Bacillus subtilis

Strain PY-1 in Vitro and Identification of its

Antifungal Substance (Iturin A) Acta

Biochimica et Biophysica Sinica, 38(4):

233-240

8 Jayasuriya K E., Thennakoon B I., 2007

First report of Corynespora cassiicola on

Codiaeum variegatum (Croton) in Sri

Lanka, Cey J Sci (Bio Sci.), 36(2):

138-141

9 Jinji P., Xin Z., Yangxian Q., Yixian X.,

Huiqiang Z., He Z., 2007 First record of

Corynespora leaf fall disease of Hevea

rubber tree in China Australian Plant

Disease Notes, 2: 35-36

10 Khan R., 2007 Isolation, identification and

cultivation of endophytic fungi from

medicinal plants for the production and

characterization of bioactive fugal

metabolites, department of microbiology

University of Karachi, Pakistan

11 Kwon J H., Kang S W., Kim J S., Park

C S., 2001 First report of Corynespora leaf

spot in pepper caused by Corynespora

cassicola in Korea Plant Pathology Journal,

17(3): 180-183

12 Liyanage A S., Jayasinghe C K., Liyanage

N I S., Jayaratne A H R., 1986

Corynespora leaf spot disease of rubber

(Hevea brasiliensis): a new record Journal

of the Rubber Research Institute of Sri

Lanka, 65: 47-50

13 Narayanan C., Mydin K K, 2012 Breeding

for disease resistance in Hevea spp - Status,

potential threats and possible strategies General Technical report PSW-GTR-240

14 Newsam S., 1961 Pathology division report Rubber Research Institute of Malaysia, 63-70

15 Nguyen N A., Kadir J., Sunderasan E.,

2008 Morphological and inter simple seqquencerepeat (ISSR), markers analyses

of Corynespora cassiicola isolatesfrom

Rubber plantions in Malaysia, Mycopathologia, 166(4): 189-201

16 Philip M., 2004 Association of microflora

with rubber (Hevea brasiliensis) and their

beneficial roles, Plant Pathology Division, Rubber Research Institute of India

17 Pongthep K., 1987 Corynespora disease of

Hevea in Thailand In: Proceeding of

IRRDB symposium on pathology of Hevea

brasiliensis, The International Rubber Research and Development Board, 1-5

18 Rahman M A., 1988 Diseases of Hevea

brasiliensis in Bangladesh Bano Biggyyan

Patrika, 17: 73-79

19 Ramakrishnan T S., Pillay R., 1961 Leaf

spot of rubber caused by Corynespora

cassiicola (Berk & Curt.) Wei Rubber

Board Bulletin, 5: 32-35

20 Reyes R A., Escudero A B I., Aguilar U G., Hayward J P M., Eleazarbaraboza C J.,

2004 Antifungal activity of Bacillus

thuringiensis chitinase and its potential for

the biocontrol of phytopathogenic fungi in soybean seeds Journal of Food Science, 69(5): 131-134

21 Shivas R., Beasley D., 2005 Management

of plant pathogen collections, Commonwealth

22 Suzuki M T., Hernández R C S., de Araújo W L., Ferré J., 2008

Characterization of an endophytic Bacillus

thuringiensis strain isolated from sugar

cane Abstract of 41st annual meeting of the society for invertebrate pathology and 9th international conference on Bacillus

thuringiensis University of Warwick,

Coventry, UK

23 Teoh C H., 1983 Corynespora leaf fall of

Hevea in West Java Malaysian Plant

Protection Society, Newsletter, 7(2): 12-13

24 Vallad G., 2011 Initial Characterization of

Corynespora cassiicola affecting Florida

Tomatoes, Tomato Disease Workshop, Ithaca, New York

25 Wei C T., 1950 Notes on Corynespora CMI Kew, Surrey, London, UK Mycological paper, 34

SCREENING OF ENDOPHYTES FROM RUBBER TREES (Hevea brasiliensis)

FOR BIOLOGICAL CONTROL OF Corynespora cassiicola

Nguyen Van Minh 1 , Mai Huu Phuc 1 , Vo Ngoc Yen Nhi 1 ,

Duong Nhat Linh 1 , Nguyen Anh Nghia 1

1

Open University, Ho Chi Minh City

2

Rubber research institute of Vietnam

SUMMARY

With 28 samples of foliage and sapwood of Hevea brasiliensis collected from Ho Chi Minh city, Binh

Phuoc province, Binh Duong province (Vietnam), we isolated and screened endophytes antagonistic to

Corynespora cassiicola Berk & Curt, the agent of Corynespora Leaf Fall disease As a result, 21 strains of

endophytic bacteria, 14 strains of endophytic fungi and Corynespora cassiicola pathogenic fungus were isolated Through resistance testing by dual testing method between endophytes and C cassiicola, the results showed that T9 and T16 strains have inhibited C cassiicola In the C cassiicola-inhibited concentration testing by bacterial filtrate, T9 and T16 strains inhibited C cassiicola at the rate of 100% at the concentration

of 1:1 In the testing of ability to kill C cassiicola, T9 and T16 strains killed C cassiicola after 3 times of

spraying bacterial filtrate T9 and T6 strains were identified by biochemical methods, having similar

characteristics to Bacillus thuringiensis

Keywords: Bacillus thuringiensis, Corynespora cassiicola, Hevea brasiliensis, biological control,

corynespora leaf fall, endophtytes

Ngày nhận bài: 15-7-2013