BÁO cáo THÍ NGHIỆM hóa SINH xác ĐỊNH HOẠT TÍNH AMYLASE

TỔNG LIÊN ĐOÀN LAO ĐỘNG VIỆT NAM TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÔN ĐỨC THẮNG KHOA KHUD – Ngành CNSH BÁO CÁO THÍ NGHIỆM HĨA SINH GVHD: Trần Thị Tuyết Nhung Nhóm C3-N05 Thành viên: Nguyễn Thị Minh Thư - 62101182 Lưu Thảo Linh - 62101132 Đỗ Thị Mỹ Duyên 62101106 THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH, NĂM 2022 0 Bài số ĐIỂM Tên bài: XÁC ĐỊNH HOẠT TÍNH AMYLASE THEO WOHGEMUTH & KHẢO SÁT CÁC YẾU TỐ ẢNH HƯỞNG ĐẾN HOẠT TÍNH AMYLASE Ngày TN: 25/10/2022 I XÁC ĐỊNH HOẠT TÍNH AMYLASE: Nguyên tắc: Enzyme Amylase enzyme thủy phân tinh bột Nó phân cắt amilose amilopectin tinh bột thành dextrin loại đường maltose, glucose… Phương pháp Wohgemuth dựa vào việc tìm nồng độ enzyme thấp để thủy phân tinh bột đến sản phẩm không màu với Iod Đơn vị Wohgemuth lượng enzyme cần thiết để thủy phân 1mg tinh bột sau 30 o phút 37 C có − làm chất hoạt hóa Thực hiện: a) Chuẩn bị dịch chiết Amylase 0 b) Tiến hành Lấy 10 ống nghiệm đánh số thứ tự Cho vào ống 1mL dd NaCl 0,5% Cho vào ống [1] 1mL dịch Sau lấy khỏi tủ thêm ống 1mL H2SO4 + giọt I2/KI, lắc chiết, lắc kỹ Kết quả: a Kết thí nghiệm: Thứ tự ống nghiệm Độ pha loãng Nồng độ enzyme Màu 0 Hình thể 10 ống thí nghiệm (ống đến 10 tính từ trái sang phải) ➔ nhỏ Qua kết ta thấy ố ng nghiệm (ống có màu vàng) có nồng độ enzyme xảy thuỷ phân hoàn toàn tinh bột b Kết tính tốn: ➢ Lượng enzyme cho vào ống [1]: ➢ Một đơn vị Wohgemuth (W): 101.7 n= W= ×5 ➢ = 8×5 = 2,543 (mg) Số đơn vị Wohgemuth có mL dịch chiết enzyme (Nw) 0 Bàn luận: - Cho ống 1mL dd NaCl 0,5% để tạo môi trường cho enzyme phân giải muối NaCl muối acid mạnh nên phân ly hoàn toàn nước tạo thành − ion dung Dịch chiết từ malt chứa nhiều α - amylase Các ống nghiệm có độ pha lỗng dịch tăng theo lần nồng độ enzyme giảm lần (n số thứ tự ống nghiệm) nên ống nghiệm có độ thủy phân tinh bột cao (thủy phân hồn tồn thành maltose) nên dung dịch có màu vàng Iod, ống nghiệm có nồng độ enzyme nhỏ ống nghiệm Và ống nghiệm ống nghiệm có nồng độ enzyme thấp thủy phân hoàn toàn tinh bột Nồng độ enzyme ống nghiệm thủy phân tinh bột thành Achrodextrin phản ứng với Iod tạo thành màu vàng nâu, ống nghiệm tinh bột bị thủy phân thành Eritodextrin phản ứng với Iod cho màu đỏ nâu, tinh bột ống nghiệm bị thủy phân thành Amylodextrin phản ứng với Iod cho màu tím Ở ống nghiệm có màu xanh tím chứng tỏ enzyme α-amylase chưa thủy phân hết lượng tinh bột có mẫu Cịn ống nghiệm 10 nồng độ enzyme khơng cịn nên tinh bột khơng bị thủy phân mà phản ứng với Iod cho màu xanh Qua kết trên, thấy xác định hoạt tính amylase phương pháp Cphương pháp dễ cho kết sai thao tác chiết dịch không lấy mẫu sai nhầm lẫn lúc pha dung dịch qua ống nghiệm II KHẢO SÁT CÁC YẾU TỔ ẢNH HƯỞNG ĐẾN HOẠT TÍNH CỦA AMYLASE: Ảnh hưởng nhiệt độ: a Nguyên tắc: Nhiệt độ tác nhân vật lý ảnh hưởng đến vận tốc hóa học phản ứng enzyme Trong điều kiện sinh lý định, tăng nhiệt độ vận tốc phản ứng tăng o lên Tuy nhiên nhiệt độ 45 C vận tốc enzyme bắt đầu giảm xuống Đa số enzyme có o nhiệt độ tối thích (Topt) vào khoảng 40 – 50 C, nhiệt độ vận tốc phản 0 o o ứng lớn, số enzyme có Topt khoảng 50 – 60 C Khi nhiệt độ 80 C hầu hết enzyme bị biến tính khơng thuận nghịch b Tiến hành: Dùng ống nghiệm tiến hành sau Lưu ý: cần đưa tinh bột dịch enzyme nhiệt độ cần đạt cho ống enzyme vào ống tinh bột phải giữ cố định nhiệt độ Sau thời gian ủ, cần làm nguội nhanh ống nghiệm 65 o C 90oC nhiệt độ phòng, cho dd I2/KI vào I2 thăng hoa nhiệt độ cao Stt ống nghiệm c Kết quả: Hình thể ống nghiệm (nhiệt độ theo thứ tự bảng tính từ trái sang phải) 0 d Giải thích kết quả: o - Ống 1: Ở 90 C, nhiệt độ q cao amylase bị biến tính không thuận nghịch nên thủy phân tinh bột thành dextrin loại đường, tác dụng với I2/KI cho màu xanh -Ống 2: Enzyme amylase thuỷ phân hoàn toàn tinh bột 65 oC nên dung dịch tác dụng với I 2/KI xuất màu vàng Amylase phân cắt amilose amilopectin tinh bột thành dextrin loại đường, sản phẩm tác dụng với I 2/KI giữ nguyên màu vàng Iod → Ở ống nghiệm 2, enzyme amylase malt đại mạch có nhiệt độ tối thích (Topt) 65oC nhiệt độ khảo sát -Ống 3: Ở nhiệt độ phịng, dung dịch ống có màu vàng nâu, nhiên chưa phải nhiệt độ tối thích để phản ứng xảy hồn toàn Ở nhiệt độ tinh bột phân hủy gần hết cịn sản phẩm trung gian đường dextrin dạng achrodextrin nên tác dụng với I2/KI xuất màu vàng nâu o -Ống 4: Khi nhiệt độ C enzim amylase hoạt động yếu, tốc độ thuỷ phân tinh bột diễn chậm thực tế ống nghiệm để tủ lạnh chưa o đạt đến nhiệt độ C nên tinh bột khơng thể bị thủy phân hết được, mà có phân hủy thành đường amylodextrin nên cho tác dụng với I2/KI dung dịch có màu tím nhạt dần nhiệt độ phòng e Bàn luận: Nếu đưa nhiệt độ cao mức nhiệt độ tối ưu, hoạt tính enzyme bị giảm Khi enzyme bất hoạt, biến tính khơng thuận nghịch, khơng cịn khả phục hồi hoạt tính - Nhiệt độ tối ưu enzyme phụ thuộc nhiều vào có mặt chất, kim lọai, pH chất bảo vệ Người ta thường sử dụng yếu tố nhiệt độ để điều 0 ... ĐIỂM Tên bài: XÁC ĐỊNH HOẠT TÍNH AMYLASE THEO WOHGEMUTH & KHẢO SÁT CÁC YẾU TỐ ẢNH HƯỞNG ĐẾN HOẠT TÍNH AMYLASE Ngày TN: 25/10/2022 I XÁC ĐỊNH HOẠT TÍNH AMYLASE: Nguyên tắc: Enzyme Amylase enzyme... enzyme pH thích hợp cho hoạt động enzyme pH tối thích (pHopt) Mỗi enzyme có pH tối thích, ngồi vùng pH tối thích hoạt động enzyme giảm 0 b Tiến hành: Lấy ống nghiệm tiến hành sau (làm thí nghiệm. .. ứng thuỷ phân amylase xảy không mạnh cho thấy độ pH khơng thích hợp cho hoạt động enzyme Ảnh hưởng chất hoạt hóa chất kìm hãm: a Nguyên tắc: Chất hoạt hóa chất có vai trò làm tăng hoạt độ xúc tác