Tách chiết và tinh sạch fucoxanthin từ chủng tảo nâu undria pinnatifida thu mẫu từ vùng biển thanh hóa

Khóa luận tốt nghiệp Lưu Thị Thày Dương VIỆN DẠI HỌC MỎ HÀ NỘI KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC - C8Ga«ĩ»K)8í> - KHĨA LUẬN TÓT NGHIỆP Dồ tài: TÁCH CHIẾT VÀ TINH SẠCH FUCOXANTHIN TÙ CHÚNG TẢO NÂU UNDRIA FINNATIFIDA THU MẨU TỪ VÙNG BIÊN THANH HÓA Thư viện Viện Đại học Mở Hà Nội Ngưòi hướng dẫn :TS Trịnh Tất Cường TS Đoàn Duy Tiên Sinh viên thực : Lưu Thị Thùy Dưong Lóp :KS CNSH 11.02 Hà Nội - 2015 Khóa luận tốt nghiệp Lưu Thị Thày Dương LỜI CẢM ƠN Trong thời gian nghiên cứu thực khóa luận tốt nghiệp, em hồn thành báo cáo khóa luận tốt nghiệp Trong thời gian này, em nhận động viên, quan tâm, hướng dẫn giúp đờ rat nhiệt tình cúa thầy cơ, gia đình bạn bè Em xin chân thành cảm ơn thầy cô giáo khoa Công nghệ sinh học - Viện Đại học Mỡ Hà Nội, người giăng dạy cho em kiến thức hữu ích trình học cà kiến thức cho sau Em xin gứi lòng cảm ưn sâu sắc đến giáo viên hướng dẫn, TS.Trịnh Tất Cường lận tình hướng dẫn báo em suốt thời gian làm thực nghiệm viết khóa luận TS Đồn Duy Tiên động viên tạo điều kiện cho em suốt trình nghiên cứu Em xin chân thành cảm ơn tới tập thể cán bộ, anh chị nghiên cứu sinh, cao học, sinh viên thuộc phòng Enzyme học Phân tích hoạt tính sinh học thuộc phịng Íhí nghtệhí tfdrfg điểm dông nghẹ Enzyme Protein thuộc trường Khoa học Tự Nhiên - ĐHQGHN động viên, đóng góp ý kiến, tạo điều kiện đê em hồn thành khóa luận Cuối em xin bày tó lịng biết ơn chân thành gia đình bạn bè động viên, khích lệ, chia sẻ, giúp đỡ em nhiều Một lan em xin kính chúc q thay lời chúc sức khỏe, thành công công việc giáng dạy sống Hà Nội, ngày 22 tháng 05 năm 2015 Sinh viên Lưu Thị Thùy Dương Khóa luận tốt nghiệp Lưu Thị Thày Dương MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN MỤC LỤC CÁC TỪ VIẾT TẢT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC HÌNH VẼ MỞ ĐÀU Chưong 1: TÔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giói thiệu tảo 1.1.1 Giói thiệu chung táo 1.1.2 Đặc diêm sinh học tao 1.1.2.1 VỊ trí phân loại phân bố tao tự nhiên ỉ 1.2.2 Đặc điếm dinh dưững ỉ 1.2.3 Đặc điếm sinh trưởng sinh sán 1.1.3 Ưng dụng *Vĩển'ĐaTTiọq KTÕ^ITẩ^ộĩ 1.1.3.1 Ưng dụng công nghiệp thực phàm 1.1.3.2 Sản xuất nhiên liệu sinh học (NLSH) 1.1.3.4 ứng dụng xử lý môi trường 1.2 Tảo nâu Undaria pinnatifida .10 1.2.1 VỊ trí phân loại 10 1.2.2 Đặc điếm hình thái cấu trúc tảo nâu c.pinnatifida 11 1.2.3 Tình hình sử dụng 11 1.2.4 Phăn bố địa lý 12 1.2.5 Thành phần dinh dưững 13 1.3 Fucoxanthin 14 1.3.1 Dặc diem, cấu trúc tính chất Fucoxanthin 14 1.3.2 Cơng dụng sinh học cứa Fucoxanthin 16 Chuông NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 18 2.1 2.1.1 Nguyên liệu hóa chất 18 Nguyên liệu 18 Khóa luận tốt nghiệp Thiết bị thí nghiệm 18 2.1.2 Hóa chất 19 2.1.3 2.2 Lưu Thị Thày Dương Phuong pháp nghiên cún 20 2.2.1 Phương pháp tách chiết 20 2.2.2 Phương pháp sắc ký mỏng 20 2.2.2.1 Giới thiệu phương pháp 20 2.2.2.2 Nguyên lý tiến hành 21 2.2.2.3 Cách tiến hành chạy sắc ký bủn mỏng định tính Fucoxanthin 22 Phương pháp tinh Fucoxanthin hang sắc ký cột 23 2.2.3 2.2.3.1 Nguyên tắc 23 2.2.3.2 Dụng cụ, thiết bị, hóa chất 23 2.2.3.3 Tiến hành thí nghiệm 23 2.2.4 Phương pháp tạo mẫu đông khô từ dịch chiết tảo 24 2.2.5 Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) 24 2.2.5.1 Giói thiệu phương pháp 24 2.2X2 Nguyên (íta 26 2.2.5.3 Cách tiến hành chạy HPLC định tính định lượng Fucoxanthin 27 Chng KẾT QUẢ VÀ THÁO LUẬN 29 3.1 Quy trình tách chiết tinh Fucoxanthin từ tảo nâu u.pinnatifida 29 3.2 Định tính Fucoxanthin bang phưong pháp sắc ký 30 3.3 Tách chiết Fucoxanthin sắc ký cột 32 3.4 Fucoxanthin có thành phần dịch chiết tảo nâu V.pinnatifida33 KÉT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ .37 TÀI LIỆU THAM KHẢO 38 Khóa luận tốt nghiệp Lưu Thị Thày Dương CÁC TỪ VIẾT TẮT co2 Cacbon đioxit h2o Nước cất HPLC High-performance liquid chromatography (Sắc ký lỏng hiệu cao) NLSH Nhiên liệu sinh học PUFAs Polyunsaturated fatty acids TB Tố bào TLK Trọng lượng khô u.pinnatifida Undaria pinnatifida , v/v Thư V ten Viện Đại học Mở Hà Nội Volume/ volume VK Vi khuẩn w/v Weight/ volume Khóa luận tốt nghiệp Lưu Thị Thày Dương DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Giá trị dinh dưỡng cùa tảo nâu u.pinnatifida 100 gam Bảng 2.1.Đanh sách thiết bị sử dụng thí nghiệm Bảng 2.2 Danh sách hóa chất dùng thí nghiệm Bảng 3.1 Diện tích PIC mẫu thơ với thề tích chạy 50g Thư viện Viện Đại học Mở Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp Lưu Thị Thày Dương DANH MỤC HÌNH VẼ Hình 1.1 Hình thái tảo Lục Hình 1.2 Hình thái cúa tảo Nâu Hình 1.3 Hình thái tảo Đị Hình 1.4 Năm pha sinh trướng cúa tào Hình 1.5 Sân phâm nhựa sản xuất từ tào Hình 1.6 Hệ thống ni tào qui mơ lớn Hình 1.7 Cấu trúc cúa tào nâu u.pinnatifida Hình 1.8 Cấu trúc Fucoxanthin Hình 2.1.Tảo nâu u.pinnatifida Hình 2.2 Máy sắc ký lịng hiệu cao (HPLC) Hình 3.1 Quy trình tách chiết tinh Fucoxanthin từ tào nâu u.pinnatifida w iHnr yj£iLVi&]^i hocMa Hà Nội Hình 3.2 Sân phâm sau tach chiet Fucoxanthin Hình 3.3 Kct kiếm tra Fucoxanthin bang phương pháp sắc ký Hình 3.4 Ket quà kiếm tra fucxanthin phương pháp sắc ký cột Hình 3.7 Fucoxanthin tách chiết từ tão nâu Hình 3.5 Dịch chiết thơ từ mẫu tảo nâu Hình 3.6 Fucoxanthin chuan (Sigma) Hình 3.8 Đường chuẩn Fucoxanthin Hình 3.9 Mầu thơ Fucoxanthin đưa lên đường chuẩn MỎ ĐÀU Tào thực vật bậc thấp nhà khoa học quan tâm nghiên cứu tào biên chứa nhiều hợp chất có lợi cho sức khởe người Đặc biệt tảo cho khả khai thác lượng nhiều, đem lại lợi ích kinh tế cao Các lồi tảo biến cung cấp thành phần có giá trị dinh dường protein, carbohydrate, lipit vitamin Hơn chúng cịn chứa nhiều hợp chất thiên nhiên có hoạt tính sinh học có giá trị, có hợp chất carotenoit [61 Trong số khoáng 600 hợp chất carotenoit tìm thấy tự nhiên, gần hợp chat Fucoxanthin nhà khoa học dành cho nhiều quan tâm có nhiều tác dụng có lợi cho sức khỏe người Các nhà khoa học Nhật Bàn cơng trình nghiên cứu chứng minh fucoxanthin có khả làm giám triệu chứng bệnh béo phì chuột [17,18], Fucoxanthin có nhiều số loài táo nâu, đặc biệt loài tảo nâu thực phâm u.pinnatifida cùa Nhật Bàn có khảo sát số lồi táo nâu Việt Nam Tuy nhiên, đế có hàm lưựngfucoxanthintinh yt, rv.: X4„ II,' -nta;, chất cao cần xây dựng quy trình tách chiết tinh fucoxanthin.Chinh vậy, đề tài“Tách chiết tinh Fucoxanthin từ chúng tào nâu Undaria pinnatifida thu mẫu vùng biển tinh Thanh Hóa” thực nham tách chiết tinh fucoxanthin với hiệu quà cao Nhiệm vụ (Mục tiêu) đặt khóa luận là: Xây dựng quy trình tách chietFucoxanthin từ chùng tảo nâu u.pinnatifida thu mẫu Thanh Hóa Tinh Fucoxanthin Đánh giá độ tinh cùa Fucoxanthin q trình tách chiết Nơi dung nghiên cửu: Xây dựng quy trình tách chiết Fucoxanthin Định tính Fucoxanthin bang phương pháp TLC Tinh Fucoxanthin bàng sẳc ký cột Kiểm tra độ tinh đánh giá hàm lượng Fucoxanthin thu bàng phương pháp HPLC Chương 1: TÔNG QUAN TÀI LIỆU Giới thiệu tảo: 1.1 / 1.1 Giới thiệu chung tảo: Tảo (Algae) thực vật bậc thấp (thực vật có bào tử, the khơng phân chia thành thân, rễ, lá), đa số có cấu trúc đơn giãn Trong tế bào (TB) táo ln có chứa diệp lục nên chủ yếu sống tự dưỡng Một số cộng sinh với nấm thành Địa y Tảo sống chù yếu nước, số sống đất ấm Táo có cấu trúc đa dạng: đơn bào, tập đoàn hay đa bào Hầu hết loại tào sống môi trường nước, từ nước đen nước mặn nước lợ Vai trò cúa tào hệ sinh thái nước tương tự vai trò cùa thực vật bậc cao hệ sinh thái cạn Mặc dù cấu tạo hình dạng, kích thước màu sắc táo khác ngành Tào có số điếm chung như: tào có cơthể dạng tàn chưa phân hóa thành thân, rề, —♦ gọi Tàn thực vật(Thallophyta) chưa có loại mơ dien hình cấu trúc cùa tản Cơ thể tảo gọi tail (thảllus)i vì.thiểu thân,, rễ chúng lại có chlorophylla- sắc tố quang hợp điền hình [3] Táo có vài hình thức sinh sàn mơi trường phân bo gan giống nên người ta thường gộp chúng thành nhóm có ý nghĩa sinh học.Vách tế bào cùa táo bàng cellulose pectin Một vài ngành Tào: Táo silic, Tảo vàng ánh: vách thấm thêm silic, Tâo vịng, Tảo đỏ: vách có thêm canxi cacbonat 1.1.2 Đặc điểm sinh học cùa tảo: 1.1.2.1 Vị trí phân loại phân ho cùa táo tự nhiên : Vi trí Đa phần tào thuộc giới Nguyên sinh (Protisa) Một số lồi tăo lớn lại xếp vào giới Thực vật phân chia thành thực vật bậc thấp Dạng thực vật bậc thấp khơng có phơi, đặc điểm phân biệt giới Nguyên sinh với thực vật bậc cao thông thường Phân loại Hiện giới có nhiều hệ thống phân loại táo cùa nhiều tác già: hệ thống Pascher (1931), hệ thống West & Fritsch (1927) Fritsch (1935), hệ thống cùa Chadefaud (1960), hệ thống Chadefaud Fett sửa đổi (1967) Các hệ thống phân loại dựa vào màu sắc cấu trúc tán đê phân loại Hiện so ngành Táo vần chưa thống nhất.Gần nhiều tác giả thường xếp nhóm táo vào ngành sau tùy thuộc vào thành phần cấu tạo, thành phan sắc to, đặc điếm hình thái, đặc điểm sinh sản [28]: Ngành tảo Lục (Chlorophyta) Ngành tảo Trần (Englenophytà) Ngành tảo Giáp (Pyrophyta) Ngành tào Khuê (Bacillareonphyta) Ngành tào Kim (Chrysophyta) Ngành táo Vàng {Xantdphỳfd)Đ'ậ\ Ngành tào Nâu (Phaecophytá) Ngành tào Đó (Rhodophyta) Ngành tảo Lam (Cyanophytà) học Mơ I Nội Trong đó, ba ngành có giá trị kinh tế cao tảo Lục, tào Nâu, tảo ĐỎ(Tiemey, Croft, & Hayes, 2010) Ngành tảo Lục: có 360 chi 5700 loài, phần lớn sống nước ngọt, nét đặc trưng cùa lồi tảo có màu lục Hình 1.1 Hình thái tảo Lục • Bộ phận tiêm mầu (injection): đế đưa mẫu vào cột phân tích theo phương pháp dịng cháykhơng ngừng Có hai cách lấy mẫu vào cột: bàng tiêm mầu thù công (tiêm bang tay) tiêm mẫu tự động (Autosample) • Cột sắc ký: cột chứa pha tình coi trái tim cùa hệ thống HPLC, cột pha tĩnh thông thường làm bàng thép khơng ri • Detector: phận phát chat khỏi cột cho tín hiệu ghi sắc ký đồ đê định tính định lượng • Bộ phận ghi tín hiệu: đề ghi tín hiệu phát Detector truyền sang: Trong máy hệ cũ sử dụng máy ghi đơn giản có thê vê sắc ký đồ thời gian lưu, diện tích cùa PIC, chiều cao Các máy the hệ dùng phan mem chạy máy tính có thê lưu tất cá thông số, phổ đồ thông số cùa PIC tính đối xứng, hệ số phân giãi Phạm vi ứng dụng cùa 'phựơng pháp HPLC rộng, phân tích hợp chất thuốc trừ sâu, thuốc kháng sinh, chất phụ gia thực phẩm lĩnh vực thực phâm, dược phâm, môi trường [1] 2.2.5.2 Nguyên lý tiến hành • Chuẩn bị dụng cụ máy móc: Máy HPLC phái kiếm chứng theo định kỳ để đâm bảo máy hoạt động tốt cho kết q phân tích có độ đúng, độ lặp lại, tuyến tính, tý lệ dung mơi, tốc độ dịng, lượng đèn Đúng theo yêu cầu thông so máy nhà sán xuất đặt Đặc biệt, cột sắc ký phải kiêm tra số đĩa lý thuyết theo định kỳ hay có nghi ngờ khả tách rữa quy định sau mồi lần chạy sắc ký [ 1J • Chuấn bị dung mơi pha động: Các dung môi cho sắc ký loại tinh khiết HPLC Pha dung mơi đúng, xác theo tỳ lệ nêu, đê ôn định dung môi thời gian theo chuyên luận yêu cầu Lọc dung môi qua màng lọc 0,2- 0,45 pm, siêu âm loại bọt khí 26 • Chuấn bị mẫu đo HPLC: Mau thừ: Xử lý mẫu theo chuyên luận, quy định theo ngun tắc: J Dung mơi phải hịa lan chất hoàn toàn pha động J Phài lọc ly tâm, lọc mẫu qua màng lọc 0,2- 0,45pm J Nồng độ mẫu mức vừa phải, không vượt qua khâ tách cột Mau chuẩn: Pha dung dịch chuẩn có thành phần giong mẫu thử dung môi riêng nồng độ thành phần giống mầu thừ tốt nhất, ngồi dùng nồng độ khác phái nằm khoáng tuyến tính khảo sát cùa thành phần • Cách đo HPLC: Mỗi máy có cách vận hành khác tùy thuộc vào hãng sán xuất, phần mềm sắc ký Tuy nhiên cách vận hành phái theo nguyên tắc 11] sau: Chạy máy với dung môi pha động đề bọt khí có hệ thống ống dẫn trước choTlUtẠí!^ Viện Đại học Mo Ila Nọi Đạt đầy đủ điều kiện sắc ký sau: J Cấu hình máy J Tý lệ dung mơi pha động J Bước sóng, thành phần mẫu, thơng số q trình phân tích u cầu 2.2.5 ì Cách tiến hành chạy HPLC định tính định lượng Fucoxanthin Các mẫu hóa chất cần chuẩn bị Mau gồm: • Dịch chiết đơng khơ từ tảo • Dịch chiết chưa đơng khơ từ táo Hóa chat: • Dung mơi tách chiết methanol, acetonitrile, ethanol 27 • H20 Phuong pháp tiến hành Bước 1: Chuấn bị dung mơi chạy gồm H2O methanol Bước 2: Hịa Iml dung môi tách chiết với gam bột mẫu ống eppendorf Bước 3: Dùng máy vortex mix Bước 4: Sau phút mang ly tâm với 14000 vòng/ phút; 10°C 15 phút Bước 5: Thu dịch nôi tiến hành cài đặt chạy máy HPLC với tốc độ dòng chày 0,5ml/ phút Cường độ huỳnh quang cùa rửa giải cài đặt bước sóng 229 nm [121 Thư viện Viện Đại học Mở Hà Nội 28 Chuông KÉT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Quy trình tách chiết tinh Fucoxanthin từ tảo nâu u.pinnatifida Hình 3.1 Quy trình tách chiết tinh Fucoxanthin từ tảo nâu v.pinnatifida 29 3.2 Định tính Fucoxanthin phương pháp sắc ký Hình 3.2 Sản phẩm sau tách chiết Để khẳng định tồn tạị cửa Fuc^anfhi.n tropg mầu^phận tích ban đầu nghiên cứu sử dụng phương pháp săc ký băn móng với hệ dung môi acetone: n- hexan với ti lệ 6:4 (v/v) Lượng mẫu chấm vào diem bàn sắc kí lOpl Các mẫu chạy gồm có mẫu tách chiết lần khác với dung môi tách chiết khác Các mẫu có nồng độ 50mg/ml RfClia Fucoxanthin thực tế đo « 0,8 Hình 3.3 Kết kiềm tra Fucoxanthin phương pháp sắc ký Trong đó: - Đường chạy dịch tách chiết Fucoxanthin với dung môi tách chiết ■’1 Ilir Viện Viện Đại HOC MaTIaNỘI Acetonitrile - Đường chạy dịch tách chiết Fucoxanthin với dung môi tách chiết Acetone - Đường chạy 31à dịch tách chiết Fucoxanthin với dung môi tách chiết Etanol - Đường chạy dịch tách chiết Fucoxanthin với dung mơi tách chiết Methanol Nhìn bàn sắc ký, ta thấy cà mẫu tách chiết ban đầu có chứa Fucoxanthin Đường chạy thứ với dung môi tách chiết etanol cho bàn sắc kí có màu đậm Điều chứng tỏ với dung mơi etanol hàm lượng Fucoxanthin cao Đây sở cho việc tiến hành thí nghiệm việc tinh Fucoxanthin 3.3 Tách chiết Fucoxanthin sắc ký cột Sừ dụng sắc ký cột để tách chiết Fucoxanthin mẫu tồng số thu từ tào nâu u.pinnatifida mà chúng tơi thực trước Mầu trước đưa lên cột pha loãng nồng độ 100 mg/ ml lọc qua đế loại bỏ cặn Tiến hành thu lại dịch chảy sau: dịch chảy từ mẫu lên cột mầu ngấm hết, dịch lira đệm mẫu trước chạy sẳc ký cột Các phân đoạn sau kiềm tra bang HPLC với fucoxanthin chuẩn, kết quà thư fucoxanthin nam phân đoạn từ 2den 4phần dịch chảy từ cho mẫu lên cột đến mẫu ngấm hết Hình 3.4 Kết kiểm tra fucxanthin ph pháp sắc ký cột Dịch chiết thô Phân đoạn chứa fucoxanthin sắc ký cột Phân đoạn chứa fucoxanthin sắc ký cột Fucoxanthin chuẩn Kết chi thành công việc tách chiết Fucoxanthin chuẩn Đề đánh giá xác độ tinh xác định hàm lượng Fucoxanthin có mẫu tào nâu mà nhóm nghiên cứu chúng tơi dùng phương pháp HPLC Fucoxanthin có thành phần dịch chiết tảo nâu u.pinnatifida 3.4 Đế phân tích Fucoxanthin chúng tơi sử dụng máy sắc ký lỏng hiệu cao HPLC hãng Shimadzu Sứ dụng hệ dung môi H?o methanol với tốc độ dòng chảy 0,5ml/phút 30 phút Fucoxanthin 0.0 5.0 10.0 15.0 20.0 25.0 Hình 3.5 Dịch chiết thơ từ mẫu tảo nâu Dựa vào tài liệu cơng bố quốc tế chì Fucoxanthin có thời gian lưu phút với độ hấp thụ cực đại bước sóng 229 nm Fucoxanthin Hình 3.6 Fucoxanthin chuẩn (Sigma) Hinh3.7 Fucoxanthin tách chiết từ tảo nâu Ket q chạy cho thay khơng có khác biệt lớn Fucoxanthin tách chiết Fucoxanthin chuân (Sigma) Ket quã chứng minh rang nhóm nghiên cứu thành công việc tách chiết tinh Fucoxanthin với hiệu suất cao Để xác định hàm lượng fucoxanthin có mẫu táo nâu chúng tơi tiến hành dựng đường chuẩn Fucoxanthin Hình3.8 Đường chuẩn Fucoxanthin Sau lập đường chuấn cùa fucoxanthin tinh khiết, pha fucoxanthin tổng số với nồng độ 100mg/.l mlH20 chạy HPILC với thể tích 50pl, áp hai kết thu Hình 3.9 Khi diện tích cùa dịch tống số pha gần trùng với diem thứ đường chuẩn Hình 3.9 Mau thơ Fucoxanthin đưa lên đưịng chuẩn Bảng 3.1 Diện tích PIC mẫu thơ vói thể tích chạy 50^1 Level Cone Mean Area 10 %RSD SD Areal Area2 3219017 3219017 20 5274064 5274064 30 9300059 9300059 40 16234916 16369840 16099992 50 17520146 190811.1 1.175313 17520146 Dựa vào kết trôn xác định hàm lượng Fucoxanthin mẫu thu là: 0,0078g/lgram mẫu tương ứng với 0,78% Thư viện Viện Đại học Mở Hà Nội 36 KÉT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Xây dựng thành cơng quy trình tách chiết tinh Fucoxanthin từtăo nâu Undaria pinnatifida Kiêm tra dược độ tinh cùa Fucoxanthin xác định dược hàm lượng Fucoxanthin mẫu tăo nâu 0,78% Kiến nghị Nghiên cửu đánh giá tác động Fucoxanthin, đặc biệt việc điều trị béo phì mơ hình chuột Nghiên cứu nâng cao hiệu quà tách chiết xây dựng quy trình tách chiết Fucoxanthin quy mô công nghiệp Thư viện Viện Đại học Mở Hà Nội 37 TÀI LIỆU THAM KHẢO *Tài liệu tiếng Việt Cao Ngọc Minh Trang, "Sac ký lòng phân bố hiệu cao ”, Đe tài khoa học trường Đại hợc dân lập Văn Lang Dương Đức Tiến, Võ Văn Chi (1978) Phân loại học thực vật - thực vật bậc thấp NXB ĐH THCN, Hà Nội Đặng Đình Kim, Đặng Hồng Phước Hiền (1999) Công nghê sinh học vi tào, NXB Nông nghiệp Hà Nội HV, theo Cleantech 2- 2013 Tạp chí CN Hoá chất, sổ 8/2013 Tạ Thành Văn, Nguyễn Thị Phương Thúy (2006), "Khảo sát tác dụng hạ đường huyết dịch chiết dừa cạn (Catharanthus coseus) chuột nhắt trang bình thường chuột gây đái tháo đường bang streptozocin”, Tạp chí Y học Việt Nam, 320 Trần Đình Toại Châu Văn Minh Rong biến dược liệu Việt Nam, NXB Khoa học Kỹt^uậtịL2pO5.' jện 0ại ]1ỌC ]ỷjơ Ị ]\[ộj *Tài liệu tiếng Anh Bourrelly p (1970) Les Algues d'eau douce Initiation la Systèmatique Eugleniens, Peridi-nies, Algues rouges et Algues bleues Editinos N Boubèe, Paris D’Orazio N, et alFucoxantin: a treasure from the sea Mar Drugs (2012) Douglas A Skoog, F.James Holler, Stanley R Crouch, Principles of Instrumental Analysis, sixedition, Canada, 2007 10 Fucoxanthin restrains oxidative stress induced by retinol deficiency through modulation of Na(+)K(+)-ATPase [corrected] 11 Heo SJ, et al "Evaluation of anti-inflammatory' effect offucoxanthin isolated from brown algae in lipopolysaccharide-stimulated" RAW 264.7 macrophages Food Chern Toxicol (2010) 12 Hirotaka Oishi, Hiroko Nomiyama, Kazuo Nomiyama, and Katsumaro 38 Tomokuni (1996), Fluorometric HPLC Determination of AAminolevulinic Axit (ALA) in the Plasma and Urine of Lead Workers: Biological Indicators of Lead Exposure, Tochigi-ken 329-04, Japan 13 Imbs TI, et al “Isolation of Fucoxanthin and Highly Unsaturated Monogalactosyldiacylglycerol from Brown Alga Fucus evanescens c Agardh and In Vitro Investigation of Their Antitumor Activity’” Mar Biotechnol (NY) (2013) 14 Kang SI, et alPetalonia binghamiae extract and its constituent fucoxanthin ameliorate high-fat diet-induced obesity by activating AMP- activated protein kinase J Agric Food Chern (2012) 15 Kim SM, et alA potential commercial source offucoxanthin extracted from the microalga Phaeodactylum tricornutum Appl Biochem Biotechnol (2012) 16 Kristina Turner (1996) The Self-Healing Cookbook: A Macrobiotic Primerfor Healing Body, Minds and Moods with Whole Natural Foods 17 Maeda H, Hosokawa1 ắầshináàiJr PtÍTiaýama K Miyashita K, Fucoxanthin from edible seaweed, Undaria pinnatifida, shows antiobesity effect through UCPl expression in white adipose tissues Biochem Biophys Kes Commun.,2005, 332(2), 392-397 18 Maeda H Tsukui T, Sashima T, Hosokawa M Miyashita K Seaweed carotenoid, fucoxanthin, as a multi-functional nutrient Asia PacJ Clin Nutr, 2008 17 Suppl 1,196-9 19 Maeda H, et alEffect of medium-chain triacylglycerols on anti-obesity’ effect offucoxanthin J Oleo Sci (2007) 20 Maoka T “Carotenoids in marine animals ” Mar Drugs (2011) 21 Nishino H et alAnti-neoplastic effect of halocynthiaxanthin, a metabolite offucoxanthin Anticancer Drugs (1992) 22 Õrdog V, Szigeti J, Pulz o (1996) Proceedings of the conference on progress in plant sciences from plant breeding to growth regulation 39 Pannon University, Mosonmagyarovar 23 Quitain AT, et alSupercritical Carbon Dioxide Extraction of Fucoxanthin from Undaria pinnatifida J Agric Food Chem (2013) 24 Rajauria G, Abu-Ghannam N “isolation and Partial Characterization of Bioactive Fucoxanthin from Himanthalia elongata Brown Seaweed: A TLC-Based Approach” Int J Anal Chern (2013) 25 Ravi Kumar s, Narayan B, Vallikannan B; Eur J Nutr; 2008 Dec 26 Xia s, et alProduction, characterization, and antioxidant activity of fucoxanthin from the marine diatom Odontella aurita Mar Drugs (2013) 27 http://vietsciences.free.fr/khaocuu/nguyenlandung/vitaoO htm 28 http://thuviensinhhoc.com/Baigiang/PLTV/NOIDUNG/Chuong4.nhomtao /4 l.NHOMTAO.htm Thư viện Viện Đại học Mở Hà Nội 40 ... quy trình tách chiết tinh fucoxanthin. Chinh vậy, đề tài? ?Tách chiết tinh Fucoxanthin từ chúng tào nâu Undaria pinnatifida thu mẫu vùng biển tinh Thanh Hóa? ?? thực nham tách chiết tinh fucoxanthin. .. Chuông KÉT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Quy trình tách chiết tinh Fucoxanthin từ tảo nâu u .pinnatifida Hình 3.1 Quy trình tách chiết tinh Fucoxanthin từ tảo nâu v .pinnatifida 29 3.2 Định tính Fucoxanthin. .. (Mục tiêu) đặt khóa luận là: Xây dựng quy trình tách chietFucoxanthin từ chùng tảo nâu u .pinnatifida thu mẫu Thanh Hóa Tinh Fucoxanthin Đánh giá độ tinh cùa Fucoxanthin q trình tách chiết Nơi dung