Nghiên cứu tách chiết, xác định cấu trúc và hoạt tính chống loãng xương của một số hợp chất tách được từ cây vót vàng nhạt (viburnum lutescens blume)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ Lê Đức Thiện NGHIÊN CỨU TÁCH CHIẾT, XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC VÀ HOẠT TÍNH CHỐNG LỖNG XƯƠNG CỦA MỘT SỐ HỢP CHẤT TÁCH ĐƯỢC TỪ CÂY VÓT VÀNG NHẠT (Viburnum lutescens Blume) LUẬN VĂN THẠC SĨ: HÓA HỌC Hà Nội - 2021 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ Lê Đức Thiện NGHIÊN CỨU TÁCH CHIẾT, XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC VÀ HOẠT TÍNH CHỐNG LỖNG XƯƠNG CỦA MỘT SỐ HỢP CHẤT TÁCH ĐƯỢC TỪ CÂY VÓT VÀNG NHẠT (Viburnum lutescens Blume) Chuyên ngành: Hóa hữu Mã số: 8440114 LUẬN VĂN THẠC SĨ: HÓA HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: Hướng dẫn 1: TS Nguyễn Phượng Minh Hướng dẫn 2: TS Nguyễn Hải Đăng Hà Nội - 2021 i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan rằng, số liệu kết nghiên cứu luận văn trung thực chưa sử dụng cơng trình khác Tơi xin cam đoan rằng, giúp đỡ việc hoàn thành luận văn cảm ơn thơng tin trích dẫn luận văn ghi rõ nguồn gốc Tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm số liệu luận văn Hà Nội, 3/2021 Lê Đức Thiện ii LỜI CẢM ƠN Luận văn hoàn thành Viện Hóa sinh biển, Viện Hàn lâm Khoa học Cơng nghệ Việt Nam Để hồn thành luận văn tốt nghiệp này, bên cạnh cố gắng nỗ lực thân, nhận động viên giúp đỡ lớn nhiều cá nhân tập thể Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới TS Nguyễn Phượng Minh - Viện Hóa học Mơi trường qn sự, BTL Hóa học, BQP; TS Nguyễn Hải Đăng Trường Đại học Khoa học Công nghệ Hà Nội Cán thuộc Phòng Nghiên cứu cấu trúc, Viện Hoá sinh biển tạo điều kiện, hướng dẫn giúp đỡ tơi suốt q trình nghiên cứu hồn thiện luận văn Tơi xin chân thành cảm ơn Ban lãnh đạo, Phòng Đào tạo thầy, cô giáo Học viện Khoa học Công nghệ đào tạo giúp đỡ suốt thời gian học tập trường Tôi trân trọng biết ơn sâu sắc tới gia đình bạn bè động viên giúp đỡ vượt qua khó khăn suốt thời gian qua Cuối Tơi xin cảm ơn đề tài: “Nghiên cứu tìm kiếm hợp chất có hoạt tính chống lỗng xương từ nguồn tài nguyên thực vật số tỉnh phía Bắc Việt Nam”, mã số: KHCBHH.02/19-21 hỗ trợ kinh phí để giúp đỡ Tơi hồn thiện luận văn Hà Nội, 3/2021 Lê Đức Thiện iii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Kí hiệu 13 C-NMR H-NMR CC DEPT HSQC HPLC Tiếng Anh Carbon-13 Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy Proton Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy Column chromatography Distortionless Enhancement by Polarisation Transfer Heteronuclear Single-Quantum Coherence High-performance liquid chromatography Diễn giải Phổ cộng hưởng từ hạt nhân cacbon 13 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton Sắc kí cột Phở DEPT Phở tương tác dị hạt nhân qua liên kết Sắc ký lỏng áp suất cao iv DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng Số liệu phổ NMR hợp chất VL1 tài liệu tham khảo 39 Bảng Số liệu phổ NMR hợp chất VL2 tài liệu tham khảo 43 Bảng Số liệu phổ NMR hợp chất VL3 tài liệu tham khảo 46 Bảng Số liệu phổ NMR hợp chất VL4 hợp chất tham khảo .49 Bảng Số liệu phổ NMR hợp chất VL5 hợp chất tham khảo .52 Bảng Số liệu phổ NMR hợp chất VL6 hợp chất tham khảo .54 Bảng Số liệu phổ NMR hợp chất VL7 hợp chất tham khảo .58 Bảng Số liệu phổ NMR hợp chất VL8 hợp chất tham khảo .60 Bảng Số liệu phổ NMR hợp chất VL9 hợp chất tham khảo .63 Bảng 10 Kết đánh giá hoạt tính chống lỗng xương hợp chất VL1VL9 66 v DANH MỤC CÁC HÌNH Hình Hình ảnh Vót vàng nhạt Hình 2: Q trình tái mơ hình xương (bone remodeling) 27 Hình 3: Mẫu Vót vàng nhạt chụp nơi thu hái - Mê Linh, Vĩnh Phúc 31 Hình 4: Sơ đồ phân lập hợp chất từ Vót vàng nhạt .36 Hình 5: Cấu trúc hóa học hợp chất VL1 .38 Hình 6: Phổ 1H-NMR hợp chất VL1 40 Hình 7: Phổ 13C-NMR hợp chất VL1 41 Hình 8: Phổ DEPT hợp chất VL1 41 Hình 9: Phổ ESI-MS hợp chất VL1 .42 Hình 10: Cấu trúc hóa học hợp chất VL2 42 Hình 11: Phổ 1H-NMR hợp chất VL2 44 Hình 12: Phổ 13C-NMR hợp chất VL2 .45 Hình 13: Cấu trúc hóa học hợp chất VL3 45 Hình 14: Phổ 1H-NMR hợp chất VL3 48 Hình 15: Phổ 13C-NMR hợp chất VL3 .49 Hình 16: Cấu trúc hóa học hợp chất VL4 49 Hình 17: Phổ 1H-NMR hợp chất VL4 51 Hình 18: Phổ 13C-NMR hợp chất VL4 .51 Hình 19: Cấu trúc hóa học hợp chất VL5 52 Hình 20: Phổ 1H-NMR hợp chất VL5 53 Hình 21: Phổ 13C-NMR hợp chất VL5 .54 Hình 22: Cấu trúc hóa học hợp chất VL6 54 Hình 23: Phổ 1H-NMR hợp chất VL6 56 Hình 24: Phổ 13C-NMR hợp chất VL6 .57 Hình 25: Phổ HSQC hợp chất VL6 .57 Hình 26: Cấu trúc hóa học hợp chất VL7 58 Hình 27: Phổ 1H-NMR hợp chất VL7 59 Hình 28: Phổ 13C-NMR hợp chất VL7 .60 Hình 29: Cấu trúc hóa học hợp chất VL8 60 Hình 30: Phổ 1H-NMR hợp chất VL8 62 Hình 31: Phổ 13C-NMR hợp chất VL8 .63 Hình 32: Phổ HSQC hợp chất VL8 .63 Hình 33: Cấu trúc hóa học hợp chất VL9 63 Hình 34: Phổ 1H-NMR hợp chất VL9 65 Hình 35: Phổ 13C-NMR hợp chất VL9 .65 Hình 36: Cấu trúc hóa học hợp chất VL1- VL9 67 vi MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii Danh mục chữ viết tắt iii Danh mục bảng iv iv Danh mục hình v Mục lục Mở Đầu CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 TỔNG QUAN VỀ CHI VIBURNUM 1.1.1 Giới thiệu chung chi Viburnum .5 1.1.2 Giới thiệu chung Vót vàng nhạt (Viburnum lutescens Blume.) 1.1.3 Nghiên cứu thành phần hóa học chi Viburnum 1.1.4 Các nghiên cứu hoạt tính sinh học chi Viburnum .24 1.2 TỔNG QUAN VỀ LOÃNG XƯƠNG VÀ PHƯƠNG PHÁP ĐIỀU TRỊ .25 1.2.1 Các đặc tính bệnh loãng xương 25 1.2.2 Các phương pháp điều trị bệnh loãng xương 29 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 30 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU .30 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .31 2.2.1 Phương pháp phân lập hợp chất .31 2.2.2 Phương pháp xác định cấu trúc hoá học hợp chất 32 2.2.3 Phương pháp đánh giá hoạt tính lỗng xương (chống hủy xương) tế bào RAW264.7 33 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 35 3.1 XỬ LÝ MẪU VÀ QUY TRÌNH PHÂN LẬP CÁC HỢP CHẤT 35 3.1.1 Xử lý mẫu nghiên cứu 35 3.1.2 Quy trình phân lập hợp chất 35 3.2 THÔNG SỐ VẬT LÍ CỦA CÁC HỢP CHẤT ĐÃ PHÂN LẬP 36 3.2.1 Hợp chất VL1: Kaempferol-3-O-β-D-glucopyranoside 36 3.2.2 Hợp chất VL2: Kaempferol 3-O-rutinoside 37 3.2.3 Hợp chất VL3: Kaempferol 3-O-α-L- rhamnopyranosyl (1→6)-β-Dgalactopyranoside 37 3.2.4 Hợp chất VL4: Kaempferol-3-O-β-D-galactopyranoside 37 3.2.5 Hợp chất VL5: Quercetin 3-O-β-D-glucopyranoside 37 3.2.6 Hợp chất VL6: (7S,8S)-dihydrodehydrodiconiferyl alcohol 9-O-β-Dglucopyranoside .37 3.2.7 Hợp chất VL7: (7S,8S)-dihydrodehydrodiconiferyl alcohol 9՛-O-β-Dglucopyranoside .37 3.2.8 Hợp chất VL8: (7S, 8R)-5-methoxydihydrodehydrodiconiferyl alcohol 4O-β-D-glucopyranoside 38 3.3.9 Hợp chất VL9: (7S,8R)-4,9,9՛-trihydroxy-3,3՛,5-trimethoxy-4′,7-epoxy8,5՛-neolignan 9՛-O-β-D-glucopyranoside .38 3.3 ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG CHỐNG LOÃNG XƯƠNG IN VITRO CỦA CÁC HỢP CHẤT 38 3.4 XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC HÓA HỌC CÁC HỢP CHẤT 38 3.4.1 Hợp chất VL1: Kaempferol-3-O-β-D-glucopyranoside 38 3.4.2 Hợp chất VL2: Kaempferol 3-O-rutinoside 42 3.4.3 Hợp chất VL3: Kaempferol 3-O-α-L- rhamnopyranosyl (1→6)-β-Dgalactopyranoside 45 3.4.4 Hợp chất VL4: Kaempferol-3-O-β-D-galactopyranoside 49 3.4.5 Hợp chất VL5: Quercetin 3-O-β-D-glucopyranoside 52 3.4.6 Hợp chất VL6: (7S,8S)-dihydrodehydrodiconiferyl alcohol 9-O-β-Dglucopyranoside .54 3.4.7 Hợp chất VL7: (7S,8S)-dihydrodehydrodiconiferyl alcohol 9՛-O-β-Dglucopyranoside .58 3.4.8 Hợp chất VL8: (7S, 8R)-5 methoxydihydrodehydrodiconiferyl alcohol 4O-β-D-glucopyranoside 60 3.4.9 Hợp chất VL9: (7S,8R)-4,9,9՛-trihydroxy-3,3՛,5-trimethoxy-4′,7-epoxy8,5՛-neolignan 9՛-O-β-D-glucopyranoside .63 3.5 HOẠT TÍNH CHỐNG LỖNG XƯƠNG CỦA CÁC HỢP CHẤT ĐÃ PHÂN LẬP 66 CHƯƠNG 4: KẾT QUẢ .67 4.1 CÁC HỢP CHẤT ĐÃ ĐƯỢC XÁC ĐỊNH TỪ CÂY VÓT VÀNG NHẠT .67 4.2 KẾT QUẢ THỬ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA CÁC CHẤT ĐÃ XÁC ĐỊNH ĐƯỢC 68 Tài liệu tham khảo .69 Phụ lục 71 Phụ lục phổ hợp chất VL1 71 Phụ lục phổ hợp chất VL2 74 Phụ lục phổ hợp chất VL3 76 Phụ lục phổ hợp chất VL4 78 Phụ lục phổ hợp chất VL5 80 Phụ lục phổ hợp chất VL6 82 Phụ lục phổ hợp chất VL7 85 Phụ lục phổ hợp chất VL8 87 Phụ lục phổ hợp chất VL9 90 78 Phụ lục phổ hợp chất VL4 Phổ dãn 1H-NMR hợp chất VL4 79 Phổ dãn 13C-NMR hợp chất VL4 80 Phụ lục phổ hợp chất VL5 Phổ dãn 1H-NMR hợp chất VL5 81 Phổ dãn 13C-NMR hợp chất VL5 82 Phụ lục phổ hợp chất VL6 Phổ dãn 1H-NMR hợp chất VL6 83 Phổ dãn 13C-NMR hợp chất VL6 84 Phổ dãn HSQC hợp chất VL6 85 Phụ lục phổ hợp chất VL7 Phổ dãn 1H-NMR hợp chất VL7 86 Phổ dãn 13C-NMR hợp chất VL7 87 Phụ lục phổ hợp chất VL8 Phổ dãn 1H-NMR hợp chất VL8 88 Phổ dãn 13C-NMR hợp chất VL8 89 Phổ dãn HSQC hợp chất VL8 90 Phụ lục phổ hợp chất VL9 91 Phổ dãn 1H-NMR hợp chất VL9 92 Phổ dãn 13C-NMR hợp chất VL9 ... tài: ? ?Nghiên cứu tách chiết, xác định cấu trúc hoạt tính chống loãng xương số hợp chất tách từ Vót vàng nhạt? ?? với nội dung sau: - Phân lập số hợp chất từ Vót vàng nhạt (Viburnum lutescens Blume). .. VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ Lê Đức Thiện NGHIÊN CỨU TÁCH CHIẾT, XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC VÀ HOẠT TÍNH CHỐNG LỖNG XƯƠNG CỦA MỘT SỐ HỢP CHẤT TÁCH... 3.5 HOẠT TÍNH CHỐNG LOÃNG XƯƠNG CỦA CÁC HỢP CHẤT ĐÃ PHÂN LẬP 66 CHƯƠNG 4: KẾT QUẢ .67 4.1 CÁC HỢP CHẤT ĐÃ ĐƯỢC XÁC ĐỊNH TỪ CÂY VÓT VÀNG NHẠT .67 4.2 KẾT QUẢ THỬ HOẠT TÍNH