EJ Iffi VIỆN ĐẠI HỌC MÔ HÀ NỘI KHOA CổNG NGHỆ SINH HỌC is ca ei KHOÁ LUẬN TÓT NGHIỆP ĐỀ TÀI A Thư viện Viện Đại học Mộ Hà Nội NGHIÊN cứu XÂY DỤNG quy trình TẤCH chiết POLYSACCHARIDE TÙ GIÁ THÉ TRỒNG.
' EJ Iffi VIỆN ĐẠI HỌC MÔ HÀ NỘI KHOA CổNG NGHỆ SINH HỌC is.ca.ei KHỐ LUẬN TĨT NGHIỆP ĐỀ TÀI: A Thư viện Viện Đại học Mộ Hà Nội NGHIÊN cứu XÂY DỤNG quy trình TẤCH chiết POLYSACCHARIDE TÙ GIÁ THÉ TRỒNG NẤM CORDYCEPS MILITARIS Giáo viên hướng dẫn : THS vũ DUY NHÀN Sinh viên thực tập : TRƯƠNG THUỲ TRANG Lóp : 13.01 - K20 HÀ NỘI - 2017 Ì1 rf VIỆN ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI KHOA CổNG NGHỆ SINH HỌC - KHOÃ LUẬN TỐT NGHIỆP ĐÊ TÀI: NGHIÊN CỨU XÂY DựNỈỒ QUY TRÌNH TÁCH CHIẾT POLYSACCHARIDE TÙ GIÁ THÉ TRỒNG NÁM CORDYCEPS MILITARIS Giáo viên hướng dẫn : THS vũ DUY NHÀN Sinh viên thực tập : TRUÔNG THUỲ TRANG Lóp : 13.01 - K20 HÀ NỘI - 2017 Khố luận Tốt Nghiệp 2017 LỊI CẢM ƠN Lời tơi xin bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sac tới ThS Vũ Duy Nhàn, người trực tiếp hướng dan, động viên giúp đỡ tơi suốt q trình thực tập nghiên cứu Tơi xincảm ơn ban lãnh đạo Viện Hố học - Vật liệu/ Viện Khoa học Công nghệ quăn anh chị Phịng Hố sinh, tạo điều kiện thuận lợi cho suốt thời gian thực tập làm đề tài Tôi xin chân thành câm ơn Ban Giám hiệu, Phòng Đào tạo Viện Đại học Mở Hà Nội, thầy cô tạo điều kiện suốt trình học tập trường thực luận văn Cuối tơi muốn gửi lời thân thương đen gia đình, bạn bè, tập thê lớp 13-01 Khoa Công Nghệ Sinh Học bên động viên, giúp đỡ q trình học tập hồn thành luận văn Thừ viện Viện Đại học Mớ Hà Nội Tôi xin chân thành cám on! Hà Nội, ngày 15 tháng năm 2017 Sinh viên Trương Thuỳ Trang Trương Thuỳ Trang - 1301 - CNSH Khoá luận Tốt Nghiệp 2017 MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i MỤC LỤC ii DANH MỤC HÌNH V DANH MỤC BẢNG vi DANH MỤC CÁC CHŨ CÁI VIÉT TÁT vii MỞ ĐẦU PHẦN 1: TÓNG QUAN VÈ TÀI LIỆU Giới thiệu nấm Cordyceps militaris 1.1 1.1.1 Đặc điếm nấm Cordyceps militarís 1.1.2 Thành phần hố học nấm Cordyceps militaris ì 1.2.1 Cordycepin 1.1.2.2 Adenosine 1.1.2 ^ffặ^jệH-Đại tlợc WỜ Hâ NỘÍ 1.1.2.4 Acid cordycepic 1.1.2.5 1.1.2.6 Sterol .9 1.1.2.7 Protein axit amin 1.1.2.8 Axit béo nguyên tố kim loại 10 1.1.3 Các ứng dụng lừ sinh khối nấm Cordyceps militaris 11 ỉ Cải thiện chức gan 11 1.1.3 1.1.3.2 Giãi độc thận 11 1.1.3.3 Giâm đường huyết 12 1.1.3.4 Chống rối loạn tình dục 12 1.3.5 Tăng sức bền, chong mệt mỏi 12 ỉ 1.1.3.6 1.2 Nucleotides Chống lão hoá 12 Giói thiệu Polysaccharide từ giá nấm Cordyceps militaris.13 1.2.1 Đặc điếm Polysaccharide giá thề nấm Cordyceps militaris 13 Trương Thuỳ Trang - 1301 - CNSH ii Khố luận Tốt Nghiệp 2017 1.2.2 Vai trị Polysaccharide nấm Cordyceps militaris 14 1.2.3 Tinh hình nghiên cứu tách chiết Polysaccharide từ Cordyceps militaris 16 1.2.3.1 Tinh hình nghiên cứu Polysaccharide từ Cordyceps militaris the giới 16 ỉ.2.3.2 Tinh hình nghiên cứu ni trồng Cordyceps militaris Việt Nam 20 PHẢN 2: VẬT LIỆU VÀ PHUONGPHÁP NGHIÊN CÚXJ 22 Nguyên liệu thiết bịnghiêncứu 22 2.1 2.1.1 Nguyên liệu 22 2.1.2 Thiết bị hoá chất 22 Phuong pháp nghiên cứu 24 2.2 2.2.1 Phương pháp tách chiết Polysaccharide từ giá thể trồng nấm Cordyceps militaris 24 2.2.1.1 KhầớAátphưotigpháp)'ftÌehọ.C Mù'.Hà.N.ỘÌ 24 2.2.1.2 Khảo sát điều kiện chiết 25 2.2.2 Xác định hàm lượng Polysaccharide theo phương pháp phenol sulfuric Michel Dubois, K A Gilles cs, 1956 25 2.2.3 Thu nhận polysaccharide phương pháp kết tủa 28 2.2.4 Phân tích nhóm chức Polysaccharide bang IR: 29 PHẦN 3: KÉT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 30 3.1 Nghiên cứu lựa chọn điều kiện tách chiết Polysaccharide 30 Nguyên cứu lựa chọn phương pháp tách chiết 30 3.1.1 3.1,2 Nghiên cứu lựa chọn tỷ lệ mẫu/dung môi 32 3.1.3 Nghiên cứu xác định nhiệt độ chiết 33 3.1.4 Nghiên cứu xác định thời gian chiết 34 3.2 Bước đầu xây dụng quy trình tách chiết 35 Trương Thuỳ Trang - 1301 - CNSH iii Khoá luận Tốt Nghiệp 2017 3.3 Bước dầu xác định nhóm chức polysaccharide tách chiết 41 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 44 Kct luận 44 Kiến nghị 44 TÀI LIỆU THAM KHẢO 45 Thư viện Viện Đại học Mớ Hà Nội Trương Thuỳ Trang - 1301 - CNSH iv Khoá luận Tốt Nghiệp 2017 DANH MỤC HÌNH Hình 1.1: Đơng trùng hạ thào Cordyceps militaris tự nhiên Hình 1.2: cấu trúc hoá học Cordycepin Hình 1.3: cấu trúc hố học adenosine Hình 1.4: cấu tạo hoá học so Nucleotides Hình 1.5: Cơng thức cấu tạo Polysaccharide 13 Hình 2.1: Cordyceps militaris ni cấy Viện Hố học-Vật liệu KH&CN quân 22 Hĩnh 2.2: Giá thể hột để tách chiết 22 Hình 2.3: Máy siêu âm 23 Hỉnh 2.4: Sơ đồ quy trình tách chiết Cordyceps polysaccharide 24 Hình 2.5: Mau đo đường chuẩn 27 Hình 2.6: Đồ thị đường chuẩn glucose (pg/ml) 27 Hình 2.7: Máy ép^ỊỊẶỘỊỆVịệỊTcĐ-ậỸtíỢC-MỚHằNỔỈ 29 Hình 2.8: Máy đo phơ hơng ngoại ỈR 29 Hình 3.1: Kết q khảo sát dung mơi chiết mẫu Cordyceps militaris 31 Hình 3.2: Kết khảo sát thay đồi tỳlệ mẫu/dung môi 32 Hình 3.3: Kết quà khảo sát nhiệt độ 33 Hình 3.4: Ket quà khảo sát thời gian 34 Hĩnh 3.5: Sơ đồ tách chiết polysaccharide 36 Hình 3.6: Phố hồng ngoại IR mầu CM-hs-CPS2 chuẩn theo kết nghiên cứu cùa Fengyao Wu 41 Hình 3.7: Pho hồng ngoại 1R cùa mẫu Pl 42 Hình 3.8: Pho hồng ngoại IR mẫu P2 42 Hình 3.9: Pho hồng ngoại ỈR mẫu P3 43 Trương Thuỳ Trang - 1301 - CNSH Khoá luận Tốt Nghiệp 2017 DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1: Phân loại khoa học Bang 1.2: Hàm lượng axit béo Cordyceps militaris 10 Bâng 1.3: Khá kháng khoi u so polysaccharide thu nhận từ số loại nam 15 Bảng 1.4: Hiện trạng kỹ thuật tách chiết Polysaccharides 19 Bàng ỉ: Thiết bị dùng thí nghiệm 23 Bàng 3.1: Hàm lượng polysaccharide từ Cordyceps militaris 40 Bảng 3.2: So sánlì phơ 1R mẫu .43 Thư viện Viện Đại học Mở Hà Nội Trương Thuỳ Trang - 1301 - CNSH vi Khoá luận Tốt Nghiệp 2017 DANH MỤC CÁC CHŨ CÁI VIẾT TẤT Chữ viết tắt Nội dung c Cordyceps Sp Species- loài Spp Species flural - nhiều loài ElOH Ethanol EPS Exopolysaccharide - polysaccharide ngoại bào SOD Chất chống oxy hoá P1 Polysaccharide thu sau chiết với nước nóng P2 Polysaccharide thu sau bổ sung NaOH 4% P3 Polysaccharide thu sau bổ sung cồn Thư viện Viện Đại học Mở Hà Nội Trương Thuỳ Trang - 1301 - CNSH vii MỞ ĐẦU Trong năm gần đây, nhiều loài nấm quan tâm đến nguồn nguyên liệu đề sản xuất thực phẩm chức phục vụ chăm sóc sức khoẻ người ngày tăng lên Ngoài chúng nhà nghiên cứu y dược học ý đa dạng hợp chất sinh học có mồi loại Đông trùng hạ thào dạng sản phẩm cộng sinh loài nam Cordyceps sisnensis (Berk.) Cordyceps miỉitaris (L Ex Fr).link lên ấu trùng cùa lồi trùng thuộc chi Hepialus Thường gặp ấu trùng loài bướm thuộc chi Thitarodes Hepialus armoricanus Là loại nấm dược liệu quý từ lâu the giới biết đến Sách y học cồ truyền Trung Quốc từ xa xưa coi Đông trùng hạ thào vị thuốc đổ bồi bố sức khoé người hồ trợ điều trị hàng loạt bệnh cài thiện chức phổi thận, chống ung thư điềụ hoà miễn dịch Ivà tác dụng hạ huyết áp Mặt khác nghiên cứu y học cồ truyền đại xác định Đông trùng hạ thảo khơng có tác dụng phụ với người Polysaccharide thành phần có hoạt tính sinh học Đơng trùng hạ thào, chứng minh chống ung thư, điều hồ miền dịch tác dụng chống oxy hố đáng lưu ý Chính gần phương pháp để tách chiết, tinh sạch, phân tích đánh giá cấu trúc Cordyceps polysaccharide từ sợi nấm giá Cordyceps militaris quan tâm nghiên cứu rộng rãi Khi ứng dụng đế sàn xuất sản phẩm thực phẩm chức từ nguồn nguyên liệu polysaccharide giãi phần việc chăm sóc sức khoẻ người Xuất phát từ thực tể đó, chúng tơi tiến hành nghiên cứu đề tài: “Nghiên cứu xây dựng quy trình tách chiết polysaccharide từ giá nấm Cordyceps Trương Thuỳ Trang - 1301 - CNSIỈ 0,66358pg/ml Tuy nhiên xử lý thống kê cho thấy hai mức khối lượng mẫu 15g 20g khơng có sai khác mức ý nghĩa a=0,00168 Khối lượng Polysaccharide có xu hướng giảm dần ta tăng khối lượng giá thể dịch chất ngày đặc, khó chiết ly thu dịch Chính vậy, tơi chọn tỷ lệ 1/20 tỷ lệ tối ưu cho lần thí nghiệm sau 3.1.3 Nghiên cứu xác định nhiệt độ chiết Tiến hành kháo sát chiết mẫu với thông số chiết cố định: phương pháp chiết: siêu âm, thời gian chiết: 90 phút; dung môi chiết: H2O, số lần chiết: Thông số kháo sát: nhiệt độ: 70°C, 80°C, 90°C, 100°C 100 90 80 70 60 50 4() ■ Hàm lượng (Mg/ml) 30 ■ Khối lượng (g) 20 10 90° Hình 3.3: Kết qua khảo sát nhiệt độ Nhận xét: Nhiệt độ dung mơi trích ly cao hàm lượng Polysaccharde thơ thu dược cao Khi nhiệt độ tăng phân tử dung môi chuyền động hồn độn giúp cho q trình di chuyến phần tứ dung mơi xâm nhập sâu vào bên nguyên liệu cần trích lý, Polysaccharide hồ tan vào dung mơi tạo thành dung dịch mixen (dịch chiết) Kết nhiệt độ 60°C hàm lượng Polysaccharide thu thấp 0,66086pg/ml cao 100°C 0,6664pg/ml Trong khối lượng đường có xu hướng ti lệ nghịch với hàm lượng lượng tích định q trình đun Polysaccharide hồ vào dung mơi gây khó khăn cho việc lọc Theo thí nghiệm Shu, 60°C với cơng suất 200W, hàm lượng Polysaccharide thu 35,42% Trong Yu cộng thu hàm lượng cao39,28% 80°C với công suất 180W 3.1.4 Nghiên cứu xác định thòi gian chiết Tiến hành chiết mẫu theo quy trình: cố dinh thơng số: phương pháp chiết: siêu âm, nhiệt độ chiết: 40°C, dung môi chiết: H2O, thời gian chiết: 60 phút 90 phút, 120 phút 0.674 1ÍX) 0.672 90 0.67 80 0.668 70 0.666 - 60 0.664 50 40 ■ Hàm lượng (pg/g) 30 ■ Khối lượng (g) 0.662 0.66 0.658 - 20 0.656 10 0.654 60 phút 90 phút 120 phút Hình 3.4: Kết khảo sát thời gian Nhận xét: Thời gian chiết bàng siêu âm có ánh hưởng nhiều đến lượng polysaccharide hồ tan dung mơi chiết Với thời gian trích ly lâu hàm lượng Polysaccharide thu tăng lên, 0,6606pl/ml 60 phút, 0,66358pg/ml 90 phút 0,6725pl/ml 120 phút Khối lượng Polysaccharide có xu hướng biến thiên nồng độ chất ngày tăng tăng thời gian thể tích dịch thu lại giâm Tuy nhiên chiết thời gian dài, dịch chiết lẫn nhiều tạp chất ảnh hưởng đến q trình phân tích làm giâm hàm lượng Polysaccharide Do vậy, lựa chọn thời gian chiết 120 phút để chiết polysaccharide khói mẫu 3.2 Bước đầu xây dựng quy trình tách chiết Từ nghiên cứu khảo sát lựa chọn phương pháp tách chiết điều kiện ảnh hướng đến hiệu suất tách chiết như: phương pháp chiết, nhiệt độ thời gian, tý lệ dung môi với tài liệu tham khảo tách chiết polysaccharide Quy trình tách chiết polysaccharide từ giá Cordyceps militaris sửa bổ sung theo sơ đồ sau: Thư viện Viện Đại học Mở Hà Nội Trương Thiiỳ Trang - 1301 - CNSIỈ 35 Hình 3.5: So' đồ tách chiết polysaccharide Trương Thuỳ Trang - 1301 - CNSIỈ 36 Cân 10g giá nấm Cordyceps militaris khơ (đã xay nhuyễn với kích thước hạt 0.5pm ) Được ngâm chiết với 200ml nước nóng 80°C 90phút Lọc lấy phần dịch tan bã tiếp tục bồ sung 2001Ĩ11 nước cất chiết lần 90 phút Tách riêng phần bã nấm dịch tan (phần dịch cúa hai lần chiết gộp lại) Đối với phần dịch tan: Cơ cạn tích cách đun 100°C đến 20ml, ly tâm thu dịch nối Bồ sung cồn 96° theo tỉ lệ 1:4 ủ qua đêm 4°c Ly tâm 50()()vòng/phút thu cặn polysaccharide (Pl) Đối với phần bã: Phần bã giá thu sau chiết nước nóng làm khô Bồ sung 100ml NaOH 4%và phần bã, ũ 55°c Lọc tách phần dịch bã nấm tiếp tục bố sung 100ml NaOH 4% ủ 55°c giờ, lọc tách tiếp lần Phần dịch lần chiết kiềm gộp lại tiến hành ly tâm 5000 vịng/phút loại bó cặn, trung hoà axit axetic đểlăngquađêm.jLfifrtỊy|^nạ^i^^ị$^|$a Phần dịch lọc ly tâm 5000 vòng/phút , loại bỏ cặn Bố sung lần tích cồn 96°c, để lắng qua đêm ly tâm thu kết tủa, làm khô 50°C đến trọng lượng khơng đổi Một số hình ảnh q trình tách chiết Đối với phần bã: Bố sung NaOH 4% vào phần bã ủ phần bã có chứa NaOH 4% 55°c Chiết sau bổ sung NaOH 4% Dịch sau trung hoà bàng CH3COOH Dịch cặn sau ly tâm Sau bổ sung cồn tý lệ 1:4 Ly tâm thu dịch cặn Đối với phần dịch: Dịch chiết lần Bố sung cồn ti lệ 1:4 Ly tâm thu dịch cặn Sau tách chiết đc phân doạn Polysaccharide: Bang 3.1: Hàm lượng polysaccharide từ Cordyceps niilitaris Polycacchairide Hàm Thể Khối thơ lượng tích lưọng (g) (pg/ml) (ml) (Mê) 0,24 0,4181 265 30,322 0,30322 5,7 0,085 180 15,246 0.15246 0,368 0,077 430 33,11 0,3311 Quả thể % Polysaccharide Dịch chiết nước nóng (Pl) Dịch chiết với NaOH (P2) Túa (P3) Nhận xét: Theo kết báng trên, tất cậ phân đoạn tách chiết có chứa Polysaccharide Ớ phân đoạn khác hàm lượng Polysaccharide tăng từ 0,077pg/ml đến 0,418Ipg/nil Trong Polysaccharide dạng khơng tan chiếm lượng lớn dịch kiềm, túa P2=5,7g hàm lượng polysaccharide chi chiếm có 0,15246% Tống phần trăm hàm lượng Polysaccharide giá thề Cordyceps militaris 0,78% Theo kết tách chiết polysaccharide từ thế, hàm lượng thu từ quà thề đạt giá trị cao hơn: đạt 1,018% với hàm lượng Pl, P2 P3 tương ứng là: 0,303%, 0,152%, 0,563% Nghiên cứu cùa Guanghao (2007) thu 0,1641g Polysaccharide tách chiết từ 20g Cordyceps militaris với hiệu suất 0,82% [16] Tôi kết luận với phương pháp chiết này, đảm bão hàm lượng polysaccharide chiết triệt đế hàm lượng polysaccharide thu tương đối tốt Trương Thuỳ Trang - 1301 - CNSH 40 3.3 Bước đầu xác định nhóm chức polysaccharide tách chiết Theo nghiên cứu Fengyao Wu đặc điểm cấu trúc hoạt động chống oxy hố polysaccharide có tên CM-hs-CPS2 [ 17| 4000 3500 3000 2500 2000 1500 1000 500 Wave iHiiiibciXơ) Figure IR spectrum of CM-hs-CPS2 Hình 3.6: Phổ hồng ngoại ĨR mẫu CM-hs-CPS2 chuẩn theo kết nghiên cứu Fengyao Wu [17] Trong phép đo phổ 1R CM-hs-CPS2 dải hấp thụ lớn (tại 3.396 cm-1), cho xuất nhóm hydroxyl (O-H) liên kết hydro phân tử Tại đinh 2.929 cm-1 cho đinh kéo dài cùa nhóm C-H, đỉnh nằm dải sóng từ 1.400 - 1.200 cm-1thể nhóm C-H mạch nhánh Tại dải sóng 1.651 1.541 cm-1 thể liên kết nhóm c - o nhóm N-H mạch nhánh, điều cho thấy có diện nhóm acetamido Hai dái hấp thụ gần 1.236 848 cm-1 liên kết nhóm s = o C-O-S tương ứng, tồn cúa nhóm -O-SƠ3, nhóm có đĩnh hấp thụ mạnh từ 1.200 đen 950 cm-1 có thề quy cho liên kết ether (C-O-C) hydroxyl có mặt vòng pyranose Đỉnh 761 cm"1 vòng đối xứng kéo dài pyranose, thể monosaccharide CM-hs-CPS2 pyranose Kết quà phân tích phổ hồng ngoại IR cùa mẫu Pl, P2, P3 sau tách chiết sau: Hình 3.7: Phổ hồng ngoại IR mẫu P1 Hình 3.8: Phố hồng ngoại IR mẫu P2 Hình 3.9: Phổ hồng ngoại IR mẫu P3 Bảng 3.2: So sánh phổ IR mẫu Nhóm chức Mẩu Pl (cm ') Mẩu P2 (em ') Mẩu P3 (em ') O-H 3392 3420 3417 C-H hư V 2930 ẹn í )ại họQặtíbớ Ha sọi 2938 c=o 1640 1648 1656 N-H 1415 1396 1565 s=o 1153 1161 1154 c-o-s 769 889 761 Kết phổ IR cho thấy Pl P2, P3 có nhóm đặc trưng pyranose liên kết bang liên kết a-glycosidic, loại polysaccharide có tính axit sulfate chứa nhóm acetamido KÉT LUẬN VÀ KIÉN NGHỊ Kết luận Từ sinh khối giá thề nấm Cordyceps militaris bước đầu kháo sát xác lập quy trình tách chiết polysaccharide thu nhận mẫu polysaccharides kí hiệu Pl, P2, P3 với tỳ lệ thu tương ứng 0,30322%, 0,15246%, 0,3311% Sừ dụng phương pháp phân tích hồng ngoại IR bước đau xác định có mặt số nhóm chức O-H, C-H, c=o, N-H, s=o, C-O-S mẫu polysaccharides phân lập Pl, P2, P3 Kiến nghị Các kết quâ nghiên cứu chi bước đầu nghiên cứu sơ hiệu suất tách chiết polysaccharide từ Cordyceps militaris Tuy nhiên cần phái có nghiên cứu tiếp theo: Tiếp tục njfei lìbẲỄ^tỔỈ^ ồátì M&hNiiAet tinh polysaccharide để làm tăng độ tinh khiết cùa sán phấm đáp ứng vào sàn xuất sán phấm chức có chứa polysaccharide Tiếp tục có nghiên cứu đánh giá hoạt tính sinh học kháng khuẩn, kháng khối u ba mẫu polysaccharides Pl, P2, P3 sừ dụng phương pháp phân tích khác đế đánh giá sâu cấu trúc phân tử P1, P2, P3 Trương Thuỳ Trang - 1301 - CNSIỈ 44 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt: Những thuốc vị thuốc Việt Nam Nhà xuất bán Y học 2006 Trần Thị Hồng Hà, Lê Hữu Cưòng, Trần Thị Như Hằng, Lưu Văn Chính, Lê Mai Hưong Phân lập cách polysaccharide từ nấm hầu thù lên men dịch đánh giá hoạt tính kháng u chúng Tạp chí khoa học cơng nghệ 50(3), 2012, 327-334 Trần Thị Hồng Hà, Lưu Văn Chính, Lê Hữu Cường, Trần Thị Như Hằng, Đỗ Hữu Nghị, Trưoiig Ngọc Hùng, Nguyễn Thị Nga, Lê Mai Hương Đánh giá hoạt tính sinh học cùa polysaccharide hợp chất cần tách chiết từ nấm hương (Lentimis edodes) Tạp chí sinh học, 35(4), 2013: 445-453 Tài liệu tiếng Anh Shonkor Kumar Das, Mina Masuda, Akihiko Sakurai, Mikio Sakakibara Medicinal uses of the mushroom Cordyceps militarist Current state and prospects Fitoterapia 81(2010) 961-968 Shi Zhong, Huijuan Pan, Leifa Fan, Guoying Lv, Yongzhi Wu, Binod Parmeswaran, Ashok Pandey and Carlos Ricardo Soccol Advances in Research of Polysaccharides in Cordyceps Species.Food Technol Biotechnol 47 (3) 304-312 (2009) Huang, S.Y Tsai, Y.L Lee, J.L Mau, Nonvolatile components of fruiting bodies and mycelia of militaris, Food Sci Technol 39 (2006) 577-583 L Wen, Y.L Tang, Q.F Yin, M Xia, Y.L Yang, Assays on nutrient and effective ingredients in different parts of Cordyceps militaris, China J Chin Mater Med 30 (2006) 659-661 (in Chinese) Trương Thuỳ Trang - 1301 - CNSIỈ 45 D Wang, M Xu, H.T Zhu, K.K Chen, Y.J Zhang, C.R Yang, Biotransformation of gentiopicroside by asexual my-celia of Cordyceps sinensis, Bioorg Med Chem Lett 17 (2007), 3195-3197 x.z Zhang, The artificial culture and its nutritive composition for Cordyceps militaris (L Fr) Link, Edible Fungi China, 22 (2003) 19-21 (in Chinese) 10 T.T Yu, H Qian, Effect of selenium on the chemical com- ponents of Cordyceps militaris, Food Sci Technol 40 (2006) 133- 135 (in Chinese) 11 Q Lu The selection of the optimum conditions for the pro-duction of polysaccharides by Cordyceps militaris and the bio-activity of the polysaccharides, MSc Thesis, Ocean Univer-sity of China, Qingdao, PR China (2000) (in Chinese) 12 Z.M Che, Y Wang, L.L Zhou Studies of the optimal technical conditions of polysaccharide isolation from Cordyceps militaris, Food Res Develop: 25,(2004) 78-79 (in Chinese).' f Ịft Xội 13 Y Shi, W.M Wu, S.T Liao, X.M Liu, N.X.Zou, Study of the extraction of Cordyceps militaris polysaccharide with the use of microwave, Guangdong Agric Sci 11 (2006) 41^42 (in Chinese) 14 Jeong Seok Kwon, Jong Seok Lee, Won Cheol Shin, Keun Eok Lee, and Eock Kee Hong Optimization of Culture Conditions and Medium Components for the Production of Mycelial polysaccharides with Cordyceps Biomass and Exo- militaris in Liquid Culture.Biotechnology and Bioprocess Engineering 2009, 14: 756-762 15 Hui Yan, Dongjie Zhu, Dabao Xu, Jie Wu and Xuyun Bian A study on Cordyceps militarispolysaccharide purification, compostion and activity analysis African Journal of Biotechnology Vol (22), pp 4004- 4009 Trương Thuỳ Trang - 1301 - CNSIỈ 46 16 Chen Xiao li, Wu guang hong, Gu qing xia, Huang zhuo lie Optimization of extraction process of polysaccharides from Fruiting body of Cordyceps militaris L Link by Orthogonal Test Medical Plant 2010, 1(7): 92-94 17 Fengyao Wu, Hui Yan, Xiaoning Ma, Junqing Jia, Guozheng Zhang, Xijie Guo and Zhongzheng Gui Stuctural characterization and antioxidant activity of purified polysaccharide from cultured Cordyceps militaris African Journal of Microbiology Research Vol 5(18), pp 27432751, 16 September, 2011 18 L Liu, J.Y An, F.x Jin Method of protein removal from Cordyceps polysaccharide, J Dalian Inst Light Ind 21 (2002) 33-37 (in Chinese) 19 Shih-Jeng Huang, Shu-Yao Tsai, Yu-Ling Lee, Jeng leun Mau Nonvolatile taste components of fruit bodies mycelia of Cordyceps militaris, 39(6) 577-583 20 Ohta Y Lee, J B Hayashi, K F ujita A., Park D K.Invivo anti influenza vius activity of animmun omociulatory acidicpolysaccharide isolated from Cordyceps militaris grow on germinated soybeans Journal of Agricutural and Food Chemistry, 55(25), 2007, 10194-10199 Trương Thuỳ Trang - 1301 - CNSIỈ 41 ... CNSIỈ militaris? ?? với mục tiêu sau: Xác lập quy trình tách chiết polysaccharide từ nguồn giá th? ?Cordyceps militaris nuôi trồng Nội dung nghiên cứu cần giải quy? ??t: - Nghiên cứu xây dựng quy trình tách. .. pháp nghiên cún 2.2 Quy trình tách chiết Polysaccharide thực theo sơ đồ sau: Hình 2.4: Sư đồ quy trình tách chiết Cordyceps polysaccharide 2.2.1 Phuong pháp tách chiết Polysaccharide từ giá thể trồng. .. Polysaccharide nấm Cordyceps militaris 14 1.2.3 Tinh hình nghiên cứu tách chiết Polysaccharide từ Cordyceps militaris 16 1.2.3.1 Tinh hình nghiên cứu Polysaccharide từ Cordyceps militaris